大鼠膝关节软骨不同染色方法的差异

合集下载

三种染色方法观察骨骺损伤后骨桥形成过程的组织形态学特征

三种染色方法观察骨骺损伤后骨桥形成过程的组织形态学特征潘源城;张信照;陈顺有【摘要】背景:国内外的研究表明,多种染色法联合应用有利于探究骨与软骨组织疾病的形态学表现.目前对于多种染色法探究骨骺损伤后骨桥形成过程的组织形态学表现研究较少.目的:通过苏木精-伊红染色、番红O-固绿染色、Masson染色3种染色方法观察骨骺损伤后骨桥形成过程的组织形态表现.方法:SD大鼠40只由福建中医药大学实验动物中心提供,实验方案经福建中医药大学动物实验伦理委员会批准.随机将40只SD大鼠分为2组:对照组不做处理;模型组建立胫骨近端骨骺损伤模型.分别于造模后1,7,28 d拍摄X射线片和7,28 d行MRI扫描;于造模后1,7,14,28 d麻醉大鼠后取胫骨损伤区组织,行苏木精-伊红染色、番红O-固绿染色、Masson染色,观察术后不同时间点生长板损伤区的组织形态表现.结果与结论:①X射线片显示:造模后1 d,胫骨干骺端骨骺损伤,软骨膜周围生长板间隙增宽;第7天,骨骺损伤处骨膜反应明显;第28天,骨膜反应消失,干骺端与生长板间隙关系基本恢复正常;MRI显示:造模后第28天MRI T2WI示骺板模糊,并可见一黑色线条形低信号影,提示骨桥形成;②造模后第1天,3种染色均可显示入侵的血管,Masson染色更为清晰;第7天:苏木精-伊红染色较番红固绿染色及Masson染色显示了损伤区软骨细胞的形态变化更加明显;第14天,番红O-固绿染色生长板与骨桥对比鲜明,Masson染色可观察到骨桥内尚未骨化的纤维血管组织;第28天,苏木精-伊红染色软骨细胞的周期性形态变化较明显,番红O-固绿染色骨桥和生长板形态分明,可清晰的表现损伤区生长板的压缩性改变;③结果说明,3种染色方法的联合应用能够全面、客观地探究骨骺损伤后骨桥形成过程的组织形态学表现.【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2019(023)023【总页数】5页(P3649-3653)【关键词】染色方法;骨骺损伤;骨桥;骨膜;组织学;苏木精-伊红染色;翻红O-固绿染色;Masson染色【作者】潘源城;张信照;陈顺有【作者单位】厦门大学附属福州第二医院小儿骨科,福建省福州市 350007;厦门大学附属福州第二医院小儿骨科,福建省福州市 350007;厦门大学附属福州第二医院小儿骨科,福建省福州市 350007【正文语种】中文【中图分类】R446;R3180 引言 Introduction生长板是长骨内最薄弱的区域，也是最容易受损的区域，损伤的生长板常被骨组织修复而导致肢体的骨生长障碍和成角畸形[1-2]。

不同方法提取SD大鼠膝关节软骨组织的总RNA.

中国组织工程研究第18卷第51期 2014–12–10出版Chinese Journal of Tissue Engineering Research December 10, 2014 Vol.18, No.51ISSN 2095-4344 CN 21-1581/R CODEN: ZLKHAH8201www.CRTER.org孙志涛，男，1978年生，安徽省淮南市人，汉族，2013年广州中医药大学毕业，博士，主要从事脊柱、髋膝关节退行性变研究。

doi:10.3969/j.issn.2095-4344. 2014.51.001 []中图分类号:R318 文献标识码:A 文章编号:2095-4344 (2014)51-08201-05 稿件接受：2014-10-29Sun Zhi-tao, M.D., Shenzhen Hospital of Traditional Chinese Medicine, Shenzhen 518000, Guangdong Province, ChinaAccepted: 2014-10-29不同方法提取SD 大鼠膝关节软骨组织的总RNA孙志涛1，牛维2，何升华1，林定坤2 (1深圳市中医院，广东省深圳市 518000；2广东省中医院骨三科，广东省广州市 510120)文章亮点：1 目前文献报道的软骨RNA 提取有多钟方法，常见的有Rneasy Lipid Tissue Kit 、RNAout 试剂盒和经典Trizol 法，国内文献报道多为经典Trizol 法。

作者在实验中发现该方法提取的RNA 并不能满足后续实验的需要，为了解决这个瓶颈，作者尝试了各种方法。

2 比较目前文献报道的常见3种不同方法提取的软骨组织RNA ，结果显示Rneasy Lipid Tissue Kit 法获得的总RNA 纯度高、完整性和稳定性好，并能成功反转录合成双链cDNA 。

关键词：组织构建；软骨组织构建；软骨；RNA 提取；大鼠；国家自然科学基金主题词：软骨；RNA ；大鼠基金资助：国家自然科学基金项目(81173285)摘要背景：目前文献报道的软骨RNA 提取有多钟方法，国内文献报道多为经典Trizol 法，在实验中发现该方法提取的RNA 并不能满足后续实验的需要。

不同脱钙液对兔膝关节组织切片染色的影响

不同脱钙液对兔膝关节组织切片染色的影响英永;王韶艳;王凤乾;胡建廷;李艳;屈卉锦;李莉;邱波【摘要】To investigate the effect of different decalcifying fluid on thecolor of articular joint tissue section of rabbit knee, to aid at the histological evaluation of hyaline cartilage and distribution of fibrocartilage polysaccharide. Prepare New Zealand rabbits,after the fully fixation of the whole rabbit knee joints in 10% neutral formalin, the tissues were washed with running water,then decalcified with 4 different decalcifying solutions (10% HNO3 decalcifying solutions,3% HNO3 decalcifying solutions, modified AF decalcifying solutions and modified 30% hydrochloric acid). The tissue sections were stained with hematox-ylin-eosin (HE),alcian blue and safranin-O.and observed under a microscope to evaluate the morphology of chondrocytes and the cartilage matrix. Results:?The effects of HE staining: first is 3% HNO3 decalcifying solutions group,next is modified 30% hydrochloric acid group,once again is 10% HNO3 decalcifying solutions and modified AF decalcifying solutions group. ?The effect of alcian blue and safranin-0 staining in 3% HNO3 decalcifying solutions group and modified AF decalcifying solutions group were better than other groups.%探讨不同脱钙液对新西兰大白兔膝关节切片染色效果的影响,为膝关节关节软骨及基质多糖的观察奠定试验基础.取正常新西兰大白兔膝关节,10％中性福尔马林溶液充分固定,流水冲洗后,分别浸入10％硝酸脱钙液、3％硝酸脱钙液、改良AF硝酸脱钙液及改良30％盐酸脱钙液中进行充分脱钙后,流水冲洗,制作石蜡切片,苏木精-伊红(HE)、奥尔辛蓝及沙红O染色,显微镜检观察并评价其效果.结果表明:①HE染色效果,3％硝酸组＞30％盐酸组＞10％硝酸组及改良AF硝酸组;②奥尔辛蓝及沙红O染色效果,3％硝酸组及改良AF硝酸组优于其他各组.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2012(039)002【总页数】4页(P221-224)【关键词】膝关节;脱钙液;染色【作者】英永;王韶艳;王凤乾;胡建廷;李艳;屈卉锦;李莉;邱波【作者单位】山东省医药工业研究所药物安全性评价中心山东省化学药物重点实验室,山东济南250033;山东省医药工业研究所药物安全性评价中心山东省化学药物重点实验室,山东济南250033;山东省医药工业研究所药物安全性评价中心山东省化学药物重点实验室,山东济南250033;山东省医药工业研究所药物安全性评价中心山东省化学药物重点实验室,山东济南250033;山东省医药工业研究所药物安全性评价中心山东省化学药物重点实验室,山东济南250033;山东省医药工业研究所药物安全性评价中心山东省化学药物重点实验室,山东济南250033;山东省医药工业研究所药物安全性评价中心山东省化学药物重点实验室,山东济南250033;山东省医药工业研究所药物安全性评价中心山东省化学药物重点实验室,山东济南250033【正文语种】中文【中图分类】S852.16骨组织是一种坚硬的结缔组织，基质是有机成分和无机盐紧密结合，使骨组织十分坚硬，使制作得骨组织切片的难度增加。

软骨染色液（甲苯胺蓝法）染色步骤及注意事项

软骨染色液（甲苯胺蓝法）染色步骤及注意事项软骨染色液(甲苯胺蓝法)染色步骤及注意事项货号：G2543规格：100ml保存：室温，避光，12个月。

产品说明：甲苯胺蓝(Toluidine Blue O)是一种常用的人工合成染料,属于醌亚胺染料类。

这类染料主要含有胺基和醌型苯环两个发色团，从而成色原显色。

甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用,组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。

甲苯胺蓝不仅含有两个发色团，还含有两个助色团，能促使染料产生电离成盐类,帮助发色团对组织产生染色力,使切片上的组织细胞着色，可染细胞核使之呈蓝色；肥大细胞胞质内含有肝素和组织胺等异色性物质遇到甲苯胺蓝可呈异染性紫红色。

甲苯胺蓝染色液(甲苯胺蓝法)呈强碱性，更利于组织细胞的着色。

操作说明：（仅供参考）1、常规脱钙，包埋，固定。

2、石蜡切片入二甲苯2次。

3、系列乙醇各1min。

自来水洗2min。

4、入Toluidine Blue O Stain浸染30min。

根据不同组织，染色时间不完全相同。

5、自来水洗2min，滤纸吸干水分。

6、丙酮分化至软骨细胞呈紫蓝色清楚可见。

7、逐级乙醇脱水。

8、二甲苯透明，中性树胶封固。

染色结果：软骨、成骨细胞呈紫红色；背景呈淡蓝色。

注意事项：1、第一次使用本试剂时建议先取1-2个样品做预实验。

2、针对于胃粘膜组织、软骨组织等较难着色组织的染色，浸染于甲苯胺蓝染色液的时间应相应延长。

3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

相关试剂：G3661甲苯胺蓝染色液(1%,磷酸盐法)G3662甲苯胺蓝染色液(0.5%,磷酸盐法)G3665甲苯胺蓝染色液(0.5%,硼酸盐法)。

三种TRACP染色法检测CIA大鼠关节切片中破骨细胞的比较

-260-临床与实验病理学杂志J Clio Exp Pathni2426Nov；36(1))网络出版时间：2426-2-732：27网络出版地址：https：//7ks.c/di.4eOVcms/Ve/W/34.1473.R.26261123.0947.023.ht/i 三种TRACP染色法检测CIA大鼠关节切片中破骨细胞的比较徐慧慧，刘红，李艳，潘静华，王少君，曹金凤,赵宏艳迈新二□技术交流关键词:TRACP染色;破骨细胞;关节炎;组织切片中图分类号:R36-.6文献标志码：B文章编号202)-7309(2222)1)-266-43dol：14.13315//c/dk/cep.2424.1-.023破骨细胞属于组织特异性的多核巨噬细胞，来源于骨髓造血单核巨噬细胞系，在类风湿关节炎(rUeumaOid arOU/s, RA-及其继发的骨质疏松症的发生、发展中起重要作用。

抗酒石酸酸性磷酸酶(OOmO-resis/ot acid phosyhaWse, TRACP)是破骨细胞分化成熟的标志物，也与破骨细胞骨吸收功能密切相关4-°应用TRACP染色检测破骨细胞分化及观察破骨细胞活性是实验室常用技术之一,TRACP染色方法较多，多采用酸性磷酸酶试剂盒检测。

本课题组前期进行体外培养的破骨细胞采用该试剂盒染色，破骨细胞质呈紫红色，染色清晰,染色效果理想4]°但组织切片采用该方法则背景偏黄，对比度不高，体积较小的破骨细胞及其前体难以辨认。

本实验以RA的经典模型——胶原诱导性关节炎(col/yeu induceX arthri/s,CIN)大鼠关节石蜡切片为观察对接受日期：2027-09-2基金项目：国家自然科学基金(8273845)、中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金(ZZ202001-作者单位：中国中医科学院医学实验中心/中医药防治重大疾病基础研究北京市重点实验室，北京100790作者简介:徐慧慧，女,博士研究生。

骨化三醇对大鼠骨性关节炎关节软骨及软骨下骨的影响

论著作者单位:750004 银川,宁夏医科大学在读硕士(杨勇、吴世栋、张小钰),附属医院骨三科(金群华)通讯作者:金群华,Email:jinqunhua@骨化三醇对大鼠骨性关节炎关节软骨及软骨下骨的影响杨勇吴世栋张小钰金群华中图分类号:R31 文献标识码:A 文章编号:1006 7108(2009)05 0333 05摘要:目的观察骨化三醇对大鼠前交叉韧带切断术后膝关节软骨及软骨下骨的影响,探讨软骨下骨在骨性关节炎发病中的作用。

方法取SD 大鼠64只分成4组,前交叉韧带切断组(ACLT 组)、前交叉韧带切断+骨化三醇给药组(AC LT+cal 组)、假手术组(sham 组)、假手术+骨化三醇给药组(sham +cal 组),给药组术后第2天给骨化三醇0 1 g kg -1 d -1灌胃,ACLT 组和sham 组给予安慰剂灌胃,持续2周。

每组分别于术后2周和10周取材,胫骨近端切片后,行HE 、AB PAS 染色、MMP 13免疫组化及骨形态计量学分析。

结果 HE 、AB PAS 染色、MMP 13免疫组化及骨形态计量学参数测量显示,2周时ACLT 组与sham 组相比早期有软骨下骨量减少,AC LT +cal 组较ACLT 组软骨下骨量增多(P <0 05)。

10周时ACLT 组软骨明显退变性改变、软骨下骨增生及MMP 13表达增强,ACLT +cal 组软骨退变及软骨下骨增生均较ACLT 组减轻(P <0 01),MMP 13表达较ACLT 组降低(P <0 05)。

结论软骨下骨在骨性关节炎病变进展中发挥重要作用,骨代谢调节剂骨化三醇可减缓OA 进展中软骨下骨硬化,对关节软骨有一定保护作用。

关键词:骨性关节炎;骨化三醇;软骨下骨;骨组织形态计量学The effect of calcitriol on articular cartilage and subchondral bone changes in rat anterior cruciate ligam ent transactionY ANG Yong ,WU Shidon g ,Z HANG Xiaoyu ,et al .De p a rtment o f Ortherp ea dics ,The AffiliatedHospital of Ningxia Medical Unive rsity ,Yinchuan 750004,ChinaAbstract :Objective To observe calcitiol on cartilage and subchondral bone in the rat anterior cruciate ligament transaction model,and assess the role of subchondral bone in the etiology of osteoarthriti s (OA).Method Sixty four rats were divided into four groups:anterior cruciate ligament transacttion(ACLT ),ACLT+calcitiol(ACLT+cal),sham and sham+cal.After operation,rats in group ACLT+caland group sham+cal received calcitriol 0 1 g kg intragastric administrationally every day for the followi ng 2weeks.The rats were sacrificed at 2weeks and 10weeks postsurgery,and the tibil plates were harvested which were studied in both pathohis tolog ical and bone histomorphometric analysis.At the same ti me Coimmunostaini ng for matrix metalloproteinase13(MMP 13)was performed to investigate the progression of cartilage degradetion.Result At 2weeks postsurgery,The bone volum in ACLT group is less than Sham group,and the bone volum is more in ACLT+cal group than in AC LT group(P <0 05).At 10weeks postsurgery ,degeneration of articular cartilage in AC LT group got worse significantly,and the subchondral bone were hyperostosis.In ACLT+cal group,not only the hyperostosis of subcondral bone are less than in ACLT group,the Mankin score of cartilage are lower as well(P <0 01).MMP 13expressions were significantly higher In AC LT+cal group than those in ACLT+cal group (P <0 05).Conclusion Subchondral bone plays an i mportant role in the pathogenesis of OA.Calcitoil could be used to aggregate the subcond ral bone hyperostosis in the presession of OA.It could also protect the Articular Cartilage partially.Key words :Os teoarthritis;Calci triol;Subcond ral bone;Histomorphometry骨性关节炎(osteoarthritis,OA)是中老年最常见的疾病之一,严重影响老年患者生活质量。

软骨细胞特殊染色技术的比较与应用

软骨细胞特殊染色技术的比较与应用于斐;曾晖;于红燕;雷鸣;袁昊;肖德明【摘要】Objective To compare the advantages and values of several special staining methods of chondrocytes . Methods Twelve 7-day old healthy C57BL/6J mice were killed to obtain the cartilage tissue of the knee joint in order to isolate the chondrycytes .Type II collagen was used to assess the chondrocytes .Then the chondrocyte climbing slices were prepared.The materials were fixed, and HE staining, Safranin O-fast green staining, SA-β-gal staining and immunohistochemical staining of Type II collagen were performed and compared .Results HE staining showed clear morphology of the chondrocytes .The cell nuclei were stained blue and the cytoplasm was pink .Safranin O-fast green staining showed that the nuclei were pink and the cytoplasm green .SA-β-gal staining showed that the aging cells were green while the young cells werecolorless .Immunohistochemical staining of type II collagen showed the distribution of type II collagen and they were stained brown while the cell nuclei were blue .Conclusions HE staining and safranin O-fast green staining can provide more information than the other staining techniques .SA-β-gal staining is useful in the analysis of aging chondrocytes .Immunohistochemical of type II collagen can be used to study type II collagen .%目的：探讨多种特殊染色技术在软骨细胞中的染色规律及其应用价值。

维药买朱尼对骨性关节炎Caspase-3的调节作用

１材料与方法１１实验材料．
ＯＡ模型：胺酮经腹腔注射，醉后纵行切开右膝部氯麻
１１１实验动物：洁级雄性１龄Ｓ（ｐｇｅａｌ）．．清月ＤＳｒａ —Ｄｗｅａ￣ｙ
大鼠３０只，重：０ ±１ｇ由上海中医药大学动物中心提体１００．供。１１２维药买朱尼药物组成ｉ旦杏仁、／ｏ、月浑．．巴Ｑ／ｚ阿ｈａ
１２１分组与造模：应性饲养１周后，始实验。将大，适开鼠随机分为３组，每组１０只。依次为正常组、Ａ模型组、Ｏ
补肾通络方组
凋亡的角度探讨维药买朱尼对骨性关节炎的作用机理。
ａ — ａｐｓ３Ｐ２５’ｓＣＣＲｔｃｓａｅＡｃＴＳＡＴＡＴＣＡＴＣｇＡｇＴＣ３’
性和丢失，骨赘形成为特征的关节疾病，以继发于创伤及可
性关节炎、形性关节炎等影响关节软骨或造成关节负重畸
供。
鼠重莆换算出服药量为（鼠剂量（ｒｋ）ｘ人剂量）大ｍ，ｓ＝ｗ／
ｌ．ｌｇｋ／。自造模第２周开始灌药，日２次，续４０３ｍ／ｇｄｊ每连；Ａ模型组自造模第２开始灌服等量０９Ｏ周．％生理盐水：正常组随意放养，做处理。１２３取材：预４周后，颈处死动物。无菌条件下，．．干拉矢状位切取右膝股骨远端和胫骨近端软骨，行电镜、进免疫组

三种染色方式下四种核酸染料的灵敏度比较

三种染色方式下四种核酸染料的灵敏度比较【摘要】目的探讨补镁对高脂高糖膳食诱导大鼠肥胖模型形成的影响及作用机制。

使用染胶法、染样品法及后染法比较溴化乙锭（EB）与3种新型核酸染料GoldViewna II、GoldView及DNA Green染色DNA 的灵敏度。

方法在琼脂糖凝胶电泳中，分别在3种染色方式下使用4种核酸染料对凝胶中的DNA进行染色，观察并分析电泳结果。

结果核酸染料比较结果：GoldViewna II的灵敏度最高，DNA Green的灵敏度与EB相当，GoldView的灵敏度略低于EB。

染色方式比较结果：使用染胶法的灵敏度最高，后染法次之，染样品法最低。

结论三种新型核酸染料完全可以替代EB，用于琼脂糖凝胶电泳DNA染色。

使用新型核酸染料建议采用染胶法染色DNA。

【关键词】琼脂糖凝胶电泳核酸染料溴化乙锭Abstract：Objective To compare the sensitivity of ethidium bromide(EB)and three types of new nucleic acid dye:GoldViewna II,GoldView and DNA Green staining DNA by three staining methods:prestaining gel method,prestaining sample method and poststaining method.Methods Four nucleic acid dyes were used to stain DNA respectively by three staining menthods in agarose gel electrophoresis and the results were observed and analyzed.Results The comparative result of nucleic acid dye:thesensitivity of GoldViewna II is highest of all;the sensitivities of DNA Green and EB are in the same degree;the sensitivity of GoldView is less than EB.The comparative result of staining method:The sensitivity of staining DNA by prestaining gel method is highest of the three and poststaining method is higher than prestaining sample method.Conclusion These three types of new nucleic acid dye can substitute for EB as a general dye to stain DNA in agarose gel electrophoresis.It is recommended to use Prestaining gel method when using new type of nucleic acid dye.Key words:agarose gel electhophoresis; nucleic acid dye; Ethidium bromide溴化乙锭（EB）曾是琼脂糖凝胶电泳中使用最为普遍的核酸染料，被广泛应用于观察、检测核酸，具有操作简单、快速及灵敏度高等特点［1］。

脂肪干细胞与富血小板血浆治疗大鼠膝骨关节炎疗效比较

浙江临床医学2021年5月第23卷第5期• 653••实验研究•脂肪干细胞与富血小板血浆治疗大鼠膝骨关节炎疗效比较楼袁美严佳民邱天文杨锦荧单乐天【摘要】目的比较富血小板血浆（P R P)和脂肪千细胞（A D S C s)对膝骨关节炎（K O A)大鼠模型关节疼痛和软骨修复的作用。

方法随机选取4只雄性SD大鼠，心内采血分离制备P R P并取其腹股沟脂肪组织培养收集ADSCs。

选取雄性SD大鼠32只，随机分为空白组、KOA模型组、P R P组、ADSCs组，每组各8只，除空白组外均以碘乙酸注射膝关节腔建立大鼠KOA模型。

P R P组、ADSCs组分别用l x l〇6个/m l浓度的PR P和l x1〇6个/ml浓度的ADSCs对大鼠双侧膝关节采纳注射干预，注射1次/周，共8周，定时察看大鼠的生理行为，评估疼痛指标，8周后取膝关节进行组织病理学染色并进行O A RSI评分。

结果压痛实验结果表明，造模后第8周，模型组压痛阈值比空白组明显降低（P<0.01)，用药干预后的P R P组和ADSCs组压痛阈值与模型组相比有所提高（P<0.01)，PR P组压痛阈值与ADSCs组相比有所提高(P<0.05)。

热痛结果表明，造模后第8周，模型组热痛阈值比正常组明显降低（P<0.01)，用药干预后的PR P组和ADSCs组压痛阈值比模型组提高（P<0.01)。

PR P组和ADSCs组热痛阈值差异无统计学意义（P>0.05)。

病理学结果表示，与空白组比较，KOA模型组大鼠膝关节软骨表面明显存在残缺，损害处软骨细胞显著缺失，软骨面明显变薄，软骨下骨出现纤维化退行性变；P R P组、ADSCs组均可改善KOA模型大鼠关节软骨损害，镜下可观察到大量的软骨细胞，软骨表面平整。

其中ADSCs组软骨仍有少量软骨细胞丢失，软骨层轻度变薄，仍可见少量肥大软骨细胞，软骨下骨有少量纤维化退变；P R P组软骨基本复原，软骨面增厚。

大鼠半月板纤维软骨细胞的分离、培养与鉴定

大鼠半月板纤维软骨细胞的分离、培养与鉴定杨军英;林金艳;韩菲【摘要】探讨体外大鼠半月板纤维软骨细胞分离培养与鉴定的实验方法,观察不同代次间细胞的形态学特征.手术分离大鼠双膝内外侧半月板,采用胰酶和Ⅱ型胶原酶消化法提取细胞,甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫荧光法鉴定细胞,低糖DMEM完全培养液常规培养.结果表明,原代半月板细胞形态呈多角形,轮廓清晰,8～10 d可铺满瓶底;传代后的1～3代细胞,其贴壁及增殖能力加强,生长状态良好;传至4～5代尤其是第5代之后,细胞表型不稳定,密度稀疏,形态以长梭形为主且不规则,清晰度下降,传代周期延长;细胞鉴定结果呈阳性.双酶消化和低糖DMEM完全培养液常规培养可以获得具有良好生物学特性的半月板细胞,第4代之前的半月板细胞可以为运动损伤的组织工程学研究提供种子细胞.【期刊名称】《西北师范大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2018(054)005【总页数】5页(P68-72)【关键词】半月板;纤维软骨细胞;体外培养;鉴定【作者】杨军英;林金艳;韩菲【作者单位】河南师范大学体育学院,河南新乡 453007;河南师范大学体育学院,河南新乡 453007;河南师范大学体育学院,河南新乡 453007【正文语种】中文【中图分类】R329半月板作为膝关节的重要结构部分，具有稳定膝关节、维持运动协调，吸收震荡、承载及分散负荷，润滑关节、增加关节接触面等功能.半月板承受着至少50% 的膝关节压力，是膝关节运动损伤中比较常见的损伤部位.半月板损伤可分为退变性和创伤性2种，前者是长期磨损累积而致，发病人群多见于中老年人；后者常见于膝关节运动的急剧转变而使半月板被动运动后的撕裂损伤，属运动损伤范畴，多见于专业运动员及体育爱好人群.运动损伤是常见且易导致机体长时间功能障碍的疾病，而半月板的血供特点决定了其在损伤后，尤其是中央游离缘非血供区损伤后，几乎不具备愈合能力[1].故半月板的损伤是导致膝关节功能紊乱的最常见原因之一，因此,半月板损伤的修复治疗一直以来都是运动医学研究的热点和难题.组织工程技术修复半月板损伤，主要包括半月板种子细胞、半月板支架材料和细胞因子研究这3部分,其中半月板种子细胞包括半月板纤维软骨细胞、间充质干细胞和多能纤维细胞等.该技术尽可能地保留半月板的形态和功能，克服了半月板部分切除术的局限性和术后出现的功能缺陷以及并发症等问题[2-3]，在临床上取得了一些令人欣喜的进步.叶川等[4]研究发现胚半月板细胞的优化获取方法；Kang等[5]分离兔半月板纤维软骨细胞并用于同种异体组织工程半月板修复.但目前使用的种子细胞面临分化[6]、表型改变[7]、诱导和调控复杂、癌变潜能等问题[8].本研究通过分离培养半月板细胞，分析其生物学特征变化，为体外探究半月板损伤的机制和细胞治疗中种子细胞(半月板纤维软骨细胞)的优选提供理论和实践基础.1 材料与方法1.1 材料1.1.1 实验动物 6周龄健康SD大鼠，体重280±20 g,由河南省干细胞和生物治疗研究中心提供.1.1.2 主要试剂及设备Ⅱ型胶原酶、胰蛋白酶(Gibco),Rabbit Anti-Collagen Ⅱ、FITC-羊抗兔 IgG(武汉博士德生物技术有限公司),甲苯胺蓝染色剂(Sigma),二甲基亚砜(Genview),胎牛血清，低糖DMEM(Gibco)等.CO2细胞培养箱、低温冷冻离心机(Thermo)、倒置相差荧光显微镜(Nikon)、200目铜网(Sigma)、超净工作台(Heal Force)等.1.2 实验方法1.2.1 半月板细胞的分离、培养麻醉并处死42 d龄SD大鼠后，无菌条件下打开膝关节，剥离双膝内外侧半月板.于超净工作台完成以下操作：PBS 缓冲液冲洗3次，眼科剪将组织剪碎约1 mm3大小，在37 ℃ 水浴下，先用0.25%胰蛋白酶预消化1 h，再用20倍组织块体积的0.2% Ⅱ型胶原酶震荡消化 8～10 h，加入培养液终止消化，800 r·min-1离心 5 min，收集细胞，加入含体积分数0.10的FBS,105 U·L-1的青霉素钠、105 g·L-1链霉素的DMEM培养液重悬细胞.台盼蓝染色，血细胞计数板计数后，单细胞悬液以1×106个·mL-1 接种于 25 cm2 培养瓶，置于37 ℃,5% CO2 、饱和湿度的细胞培养箱中培养.隔日换液1次，用倒置相差显微镜观察细胞形态变化和生长情况.当细胞铺满瓶底(80%～90%融合)时，用含0.1% EDTA的0.25% 胰蛋白酶消化，含10% FBS的DMEM培养液终止消化，将细胞悬液按1∶2 比例传代、培养.1.2.2 形态学观察倒置相差显微镜下观察各代细胞的形态，分析细胞生长状况及规律.1.2.3 甲苯胺蓝染色第3代半月板细胞爬片48 h，PBS 冲洗 3 次，4% 多聚甲醛固定30 min，1%甲苯胺蓝染色2 h，爬片用无水乙醇迅速漂洗2次，干燥后中性树胶封片.1.2.4 Ⅱ型胶原免疫荧光染色将第3代半月板细胞接种于 96 孔细胞培养板，常规培养 48 h 后，PBS 冲洗，4% 多聚甲醛固定1 h，0.5% Trixton X-100 清洗，山羊血清室温封闭 1 h.按照说明书进行以下操作：加入Rabbit Anti-CollagenⅡ 抗体4 ℃ 过夜，加入FITC-羊抗兔IgG，于37 ℃ 恒温箱避光孵育 1 h，PBS 清洗后进行 DAPI 复染.镜下观察并拍照.2 结果2.1 形态学观察原代半月板细胞呈小圆球形，悬浮状态.经台盼蓝染色计算，分离提取的细胞存活率高于 90%.原代半月板纤维软骨细胞贴壁较慢，接种后 6～10 h开始贴壁，48 h 后可完全贴壁.分裂增殖速率也较缓慢，8～10 d 可将 25 cm2 培养瓶铺满.贴壁后的细胞逐渐增大、伸长并形成突起，形态以多角形为主；胞核为椭圆形或圆形，位于胞体的中心.在第 1～3 次的传代后，细胞贴壁时间缩短、增殖速度加快，一般可在 4～6 h 贴壁，5～6 d 铺满培养瓶.传至 3 代后，细胞增殖速度减慢，细胞体积变大、形态逐渐变为长梭形；传至第5代后，细胞活力和增殖能力下降、形态不规则、相邻细胞间胞质连接松散、胞浆和胞膜不清晰.各代细胞形态见图 1.A.原代；B.第1代；C.第2代；D.第3代；E.第5代；F.第7代图1 培养的半月板细胞(10×20, 标尺=100 μm)Fig 1The cultured meniscus cells2.2 甲苯胺蓝染色结果细胞爬片经甲苯胺蓝染色后，细胞质呈淡蓝色，细胞核呈深蓝色，核仁清晰，细胞周围有少量异染颗粒.3代以内的半月板细胞的甲苯胺蓝染色明显，随着细胞传代次数的增加，染色逐渐变浅，软骨细胞特征逐渐减弱，结果见图 2.A.第1代；B.第3代；C.第5代图2 半月板细胞的甲苯胺蓝染色(10×20, 标尺=50 μm)Fig 2Toluidine blue staining of meniscus cells2.3 Ⅱ型胶原免疫荧光染色结果细胞贴壁牢固后，经Ⅱ型胶原染色和DAPI复染.倒置相差荧光显微镜下观察可见，胞质经 FITC 染色后在蓝光激发下呈清晰绿色，为阳性结果，胞核区域未着色，即Ⅱ型胶原于细胞质中表达.细胞核经 DAPI染色后，在UV滤光片下呈蓝色.Ⅱ型胶原免疫荧光染色可见,3代以内的半月板细胞，阳性反应明显；随着传代次数的增加，尤以5代后的半月板细胞，胞浆内绿色荧光明显减弱、阳性率降低(图3).A.第1代；B.第3代；C.第5代；A1B1C1.光镜下半月板细胞；A2B2C2.Ⅱ型胶原免疫荧光染色；A3B3C3.DAPI复染；A4B4C4.A2B2C2和A3B3C3叠加图图3 半月板细胞的Ⅱ型胶原免疫荧光染色(10×20,标尺=50 μm)Fig 3Collagen typeⅡimmunofluorescence staining of meniscus cells3 讨论半月板修复的方法因损伤类型而异，早在 1885 年，Annadale 首次报道半月板开放式全切手术可缓解患者症状、改善膝关节功能[9]；Kessler 等认为针对半月板无血区域撕裂损伤，若修补后愈合效果不佳，则部分切除术是其常见的治疗方法[10]；而有学者表明半月板全切或部分切除手术会不可避免地导致半月板撕裂等手术风险，研究显示该手术风险的高低与患者年龄相关(年龄≤40岁的患者风险升高)，此外可采用同种异体半月板或假体进行移植修复，该方法在取得一定疗效的同时也存在排斥反应及移植体回缩等弊端[11-12].鉴于半月板切除移植重建的效果并不理想，且随着组织工程技术的发展推进，利用组织工程技术再造半月板成为国内外不少学者研究的热点[13].Zellner 等研究表明,自体 MSCs 和半月板细胞在动物模型中具有改善半月板愈合的功能[14]；Kim等研究发现载有纤维软骨细胞及 TYR 交联的水凝胶具有修复半月板的潜在价值[15].原代培养的半月板细胞是研究半月板损伤机制的最好载体，也是目前种子细胞最佳和应用最广泛的细胞来源[16].但半月板主要由纤维软骨细胞和大量基质构成，随着年龄增长，细胞成分含量减少，而胶原纤维含量则逐渐增加，其获取存在一定难度[17].本研究采用机械分离与酶消化相结合的方法，获得了活性大于95%的组织细胞，而且步骤简单，降低污染机会，减少半月板纤维软骨细胞的损伤，并且获取的细胞数量多、纯度高.已有研究发现，体外单层培养系统中半月板纤维软骨细胞随着传代的进行变为纤维细胞的表型，表现出去分化的现象[7,18].本研究结果显示，原代半月板纤维软骨细胞贴壁和分裂增殖速率较慢.传代后，细胞的贴壁能力和增殖速率大大增强，这可能与细胞受到机械性和化学性的损伤、原代细胞接种时的密度较稀疏及生存环境的改变有关.当细胞传至 5 代后呈现明显的增殖速率下降及衰老现象.细胞形态也由规则、大小均一的多角形变成以长梭形为主.这种变化与文献[8,19]的报道基本一致，可能是因为随着体外培养时间的延长及传代次数的增加，半月板合成基质相关基因表达下降，出现“去分化”现象[7].体外单层分离培养的第 5 代前的半月板细胞基本维持其表型和生物学特性.软骨细胞一般通过测定聚集蛋白聚糖和Ⅱ型胶原蛋白的表达进行鉴定.本研究对分离和培养的(5代以内)半月板纤维软骨细胞进行甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫荧光染色，实验结果均为阳性.表明其保留稳定的半月板纤维软骨细胞表型，具有良好的生物学活性及功能.4 结束语采用胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶联合消化半月板组织、低糖 DMEM 完全培养液常规培养的方法，可获取纯度及活性程度均较高的半月板纤维软骨细胞.第4代之前的半月板纤维软骨细胞能够保持良好的生物学特性，可以为半月板运动损伤的组织工程学研究提供种子细胞.参考文献:【相关文献】[1] ARNOCZKY S P,WARREN R F.Microvasculature of the human meniscus[J].The American Journal of Sports Medicine,1982,10(2):90.[2] MAJEED H,KARUPPIAH S,SIGAMONEY K V,et al.All-inside meniscal repairsurgery:factors affecting the outcome[J].Journal of Orthopaedics &Traumatology,2015,16(3):245.[3] TENGROOTENHUYSEN M,MEERMANS G,PITTOORS K,et al.Long-term outcome after meniscal repair[J].Knee Surgery Sports Traumatology Arthroscopy,2011,19(2):236.[4] 叶川,尹培荣,向阳,等.人胚半月板细胞的优化获取及生物学特性研究[J].贵州医药,2004，28(12):1075.[5] KANG S W,SON S M,LEE E S,et al.Regeneration of whole meniscus using meniscal cells and polymer scaffolds in a rabbit total meniscectomy model[J].Journal of Biomedical Materials Research A,2006,77A(4):659.[6] MINEGISHI Y,HOSOKAWA K,TSUMAKI N.Time-lapse observation of the dedifferentiation process in mouse chondrocytes using chondrocyte-specificreporters[J].Osteoarthritis and Cartilage,2013,21(12):1968.[7] TAN G K,DINNES D L,MYERS P T,et al.Effects of biomimetic surfaces and oxygen tension on redifferentiation of passaged human fibrochondrocytes in 2D and 3D cultures[J].Biomaterials,2011,32(24):5600.[8] 付维力,李箭,李棋,等.兔半月板纤维软骨细胞的体外去分化研究[J].中国运动医学杂志,2015,34(1):31.[9] SHIRAMIZU K,VIZESI F,BRUCE W,et al.Tibiofemoral contact areas and pressures in six high flexion knees[J].International Orthopaedics,2009,33(2):403.[10] KESSLER M W,SGAGLIONE N A.All-arthroscopic meniscus repair of avascular and biologically at-risk meniscal tears[J].Instructional Course Lectures,2011,60:439.[11] NLYES F R,BARBER-WESTIN S D,CHEN R C.Repair of complex and avascular meniscal tears and meniscal transplantation[J].Instructional Course Lectures,2011,60:415.[12] JIANG D,LUO X,AO Y F,et al.Risk of total/subtotal meniscectomy for respective medial and lateral meniscus injury:correlation with tear type,duration of complaint,age,gender and ACL rupture in 6034 Asian patients[J].BMC Surgery,2017,17(1):127.[13] 魏小康,赵金忠.半月板损伤治疗研究进展[J].国际骨科学杂志,2012,33(2):114.[14] ZELLNER J,PATTAPPA G,KOCH M,et al.Autologous mesenchymal stem cells or meniscal cells:what is the best cell source for regenerative meniscus treatment in an early osteoarthritis situation[J].Stem cell Research and Therapy,2017,8(1):225.[15] KIM S H,AN Y H,KIM H D,et al.Enzyme-mediated tissue adhesive hydrogels for meniscus repair[J].International Journal of Biological Macromolecules,2018，110(4)：479.[16] BAKER B M,NATHAN A S,HUFFMAN G R,et al.Tissue engineering with meniscus cells derived from surgical debris[J].Osteoarthritis and Cartilage,2009,17(3):336.[17] HUANG H,ZHANG X,HU X,et al.A functional biphasic biomaterial homing mesenchymal stem cells for invivo cartilage regeneration[J].Biomaterials,2014,35(36):9608.[18] WU L,GONZALEZ S,SHAH S,et al.Extracellular matrix domain formation as an indicator of chondrocyte dedifferentiation and hypertrophy[J].Tissue Engineering PartC,2014,20(2):160.[19] 张海宁,王英振,王湘达,等.成体半月板细胞体外分区培养研究[J].青岛大学医学院学报,2007，43(1):17.。

关节炎大鼠膝关节病理检测指标和解读

样本：大鼠完整膝关节（骨性关节炎模型）切片要求：具有完成膝关节，包括：软骨、软骨下骨、滑膜组织主要染色方法包括：HE染色、番红-固绿染色、免疫荧光（CXII）1.滑膜组织肉眼观察：正常：滑膜组织平滑闪亮、质薄柔顺，呈透明淡红色模型组：滑膜组织充血、水肿严重、滑膜明显增厚、质地粗糙，呈现黄色HE染色观察：正常：滑膜组织、滑膜内膜及滑膜内膜下层细胞排列整齐；模型组：滑膜组织炎症细胞浸润，纤维组织增生、滑膜细胞增生，排列紊乱，滑膜组织周边可见少量毛细血管增生。

滑膜组织HE染色例图：1.滑膜组织2.毛细血管增生（染成鲜红色的部分）评估方法：滑膜细胞（FLS）增生程度：0，无滑膜细胞增生；1，FLS轻度增生；2，FLS中度增生；3，FLS重度增生。

血管增生程度：0，无血管增生；1，血管轻度增生；2，血管中度增生；3，血管重度增生。

纤维组织增生程度：0，无纤维组织增生；1，纤维组织轻度增生；2，纤维组织中度增生；3，纤维组织重度增生。

淋巴细胞浸润程度：0，无淋巴细胞；1，淋巴细胞轻度浸润；2，淋巴细胞中度浸润；3，淋巴细胞重度浸润。

有无浆细胞浸润：有浆细胞浸润（+）；无浆细胞浸润（-）。

a)炎症细胞浸润评估方法和原理炎症细胞特点：细胞核较大，核质比大，HE 染色后，细胞核被染成鲜明的蓝色，胞浆染成粉红色至桃红色，胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。

在400倍放大情况下，可以明显看到以蓝色为主的点状的炎症细胞（中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞）其他细胞则体积较大，细胞质较多成粉红色，细胞核较小，成蓝色或深蓝色判断是否具有炎症及炎症的强弱：（1）炎症细胞浸润的区域面积大的大小（2）高倍镜视野下平均炎症细胞的数量量化评估方法：通过HE染色来评价是否有炎症反应以及炎症反应的强弱，通常有两种方法：炎症细胞浸润区域的面积大小和高倍视野下平均炎症细胞的数量。

1）H&E染色，在400倍下，是可以观察到明显的炎症细胞的，故可知道你的材料是否对皮下组织产生炎症反应；2）HE的结果通常用炎症细胞浸润区域的面积大小和高倍视野下平均炎症细胞的数量来评价，并通过统计数据，做出柱状图来进行统计学比较。

大鼠膝关节不稳定性OA模型的软骨及软骨下骨改变（可编辑）

大鼠膝关节不稳定性OA模型的软骨及软骨下骨改变宁夏医科大学学报第31卷 3期JournalofNingxiaMedicalUniversity288?? 2009年6月文章编号：1674-6309 2009 03-0288―04论著 ??大鼠膝关节不稳定性 OA模型的软骨及软骨下骨改变杨勇，吴世栋，张小钰，金群华1．宁夏医科大学，银川 750004； 2．宁夏医科大学附属医院骨三科，银川 750004摘要：目的通过建立大鼠膝关节前交叉韧带切断骨性关节炎 OA 动物模型，探讨该模型中软骨及软骨下骨病理变化。

方法取SD大鼠3O只随机分成3组术后2、6周和 10周组。

每只大鼠右膝行前交叉韧带切断，造成膝关节不稳定动物模型，对侧为假手术侧。

分别将每组动物于术后2、6和1O周处死，取胫骨近段，比较各组骨关节大体形态及病理变化。

光镜下观察指标有改良的Mankin评分、骨组织形态计量学参数。

免疫组化法观察MMP―l3在软骨细胞中的表达。

结果在造模后2、6周和1O周软骨退变呈进行性发展。

Man―kin评分增高、MMP―l3表达逐渐增强，与假手术侧相比有统计学意义 P 0．01 。

软骨下骨形态计量学分析显示，造模后早期软骨下骨骨量轻度减低 P 0．05 ，之后骨量逐渐增加 P 0．01 。

结论大鼠的前交叉韧带切断能够造成动物膝关节 OA样改变，表现出软骨下骨吸收、骨重建的变化特点。

关键词：骨性关节炎；动物模型；软骨下骨；基质金属蛋白酶13中图分类号：R684 文献标识码：A动物模型是研究骨性关节炎 osteoarthritis，OA 病理机1．3 取材及标本处理分别于术后2、6、10周将动物断颈制、治疗及预防的重要手段之一。

目前 OA的动物造模方处死，取膝关节上下各 2cm区域的组织，去除皮肤，置于法有多种，目的是最大程度地模仿人类 OA的病理生理过 4％多聚甲醛液中，4℃下固定24h，固定后标本剔除周围软程。

本实验通过建立大鼠膝关节不稳定OA动物模型，并组织及韧带，PBS 充分浸洗，流水冲洗2h，15％的EDTA液观察其软骨及软骨下骨的病变特征，以期进一步了解 OA加微波脱钙 2周，流水冲洗24h，只留胫骨部分，将其沿冠的病理过程及发病机制。

软骨染色液(番红O法)

软骨染色液(番红O法)简介：软骨组织由软骨细胞和软骨基质组成，软骨组织及其周围的软骨膜构成软骨。

软骨根据基质内所含纤维素成分不同分为透明软骨、弹性软骨、纤维软骨。

软骨染色方法有很多种，例如甲苯胺蓝法、阿利新蓝法、番红O法等。

软骨染色液(番红O法)染色原理在于嗜碱性的软骨与碱性染料番红O结合呈现红色，番红O是一种结合多阴离子的阳离子染料，其显示软骨是基于阳离子染料与多糖中阴离子基团(硫酸软骨素或硫酸角质素)结合。

番红O着色与阴离子的浓度近似成正比关系，间接反映基质中蛋白多糖的含量和分布。

当软骨受到损伤时，软骨中的糖蛋白会释放出来，使基质成分分布不均匀，从而导致番红O淡染或不着色。

通过图像分析软件可对番红O染色的软骨基质进行定量分析，番红O分化很关键，分化过度易导致切片不着色，分化不足易导致切片着色过深。

组成：编号名称DB00712×100mlStorage试剂(A): Safranin O stain 100ml RT 避光试剂(B): Safranin分化液100ml RT使用说明书1份自备材料：1、10%福尔马林固定液2、脱钙液3、蒸馏水4、系列乙醇操作步骤(仅供参考)：1、标本的处理：福尔马林固定、脱钙、石蜡切片。

2、常规脱蜡至水。

3、蒸馏水洗。

4、入Safranin O stain内浸染，蒸馏水洗。

5、用Safranin分化液洗涤切片，蒸馏水洗。

6、分别用95%乙醇、无水乙醇脱水。

7、二甲苯透明，光学树脂封固。

染色结果：软骨基质红色注意事项：1、切片在Safranin O stain中染色不宜过长，否则易导致背景的深红色不易分化掉。

2、切片分化时间应恰当，以背景呈绿色为宜。

3、Safranin O stain染色后，不宜在低浓度乙醇脱水，否则易褪色。

4、95%乙醇脱水时间不宜过长。

5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：12个月有效。

相关：编号名称DC0032Masson三色染色液TC0713葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)。

大鼠膝关节软骨不同染色方法的差异

Correspondence to: Wei Jian-ping, Chief physician, Department of Pathology, Second Affiliated Hospital of Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, Shanxi Province, China wjp123555@
doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.24.004
高改霞，卫小春，李凯，卫建平. 大鼠膝关节软骨不同染色方法的差异[J].中国组织工程研究与临床康复，2010，
14(24):4385-4389.
[ ]
摘要背景：国内外学者对关节软骨对软骨进行了大量研究，需要用不同的染色方法对研究结果进行分析，但将多种染色方法同时应用于软骨研究及探讨染色机制的较少。目的：探讨不同染色方法对大鼠膝关节软骨染色的优缺点。方法：取正常大鼠膝关节软骨，行苏木精-伊红、番红 O、阿尔辛蓝、甲苯胺蓝、番红-阿尔辛蓝、番红-固绿染色，观察软骨结构。结果与结论：苏木精-伊红、番红 O、甲苯胺蓝染色均可观察到潮线，分别为蓝色、红色和蓝色，番红 O 和甲苯胺蓝染色强度朝潮线方向增强，番红 O 染色对潮线的观察优于其他染色方法。苏木精-伊红染色关节软骨 4 层结构清晰，软骨细胞呈柱状排列，基质呈均匀呈嗜碱性染色。番红 O 染色显示 4 层结构层次清楚，基质深层染色最红。阿尔辛蓝染色显示，pH 1.0 时软骨细胞周边部分被阿尔辛蓝强烈染色，pH 2.5 时阿尔辛蓝染色较深。甲苯胺蓝染色显示组织结构层欠清，胞核染色清晰，胞浆几乎不着色，基质呈淡蓝紫色。番红-阿尔辛蓝染色显示软骨表面及基质呈不均一的红色，深层颜色较深，软骨细胞周围蓝染；番红-固绿染色显示软骨基质呈均匀的红色，软骨下骨呈绿色，软骨组织与骨组织分对比鲜明。提示上述各种方法均可观察到软骨的四层结构，但以番红 O 染色显示软骨各层和潮线结构最佳；苏木精-伊红染色观察软骨细胞形态变化较其他方法清楚。关键词：关节软骨；染色方法；优缺点；大鼠；膝关节；软骨组织工程

两种方法建立大鼠骨性关节炎模型中软骨细胞变化比较

两种方法建立大鼠骨性关节炎模型中软骨细胞变化比较刘军; 李旭升; 甄平; 李玉娟; 周胜虎; 王伟; 何晓乐【期刊名称】《《科学技术与工程》》【年(卷),期】2019(019)025【总页数】7页(P98-104)【关键词】肿瘤坏死因子-α; 骨性关节炎; 细胞凋亡; 炎症因子; 动物模型【作者】刘军; 李旭升; 甄平; 李玉娟; 周胜虎; 王伟; 何晓乐【作者单位】中国人民解放军联勤保障部队940医院(原兰州总医院)全军骨科中心兰州730050; 中国人民解放军联勤保障部队940医院(原兰州总医院)手麻科兰州730050; 空军军医大学西京医院老年病科西安710032【正文语种】中文【中图分类】R684.3骨关节炎(osteoarthritis, OA)是一种慢性进行性骨关节病，具有关节软骨退变和关节周围骨质增生的病理特征。

骨关节炎容易引起老年人疼痛和残疾，严重影响其日常工作和生活。

目前全球骨性关节炎的总患病率为14.8%～16.2%，在大于50岁的人群中发病率可达到49.1%～51.3%，随着OA的不断进展，最终致残率可达到52.5%～53.6%。

其中，体质量、运动方式、创伤及骨质疏松等均是OA的高危因素，但其发病机制至今尚不明确。

为解决骨关节炎的致残问题，中外学者致力于对OA进行分子生物学研究及机制探讨，有学者发现连续软骨细胞凋亡，滑膜炎和骨质破坏导致OA进行性加重[1]，在 OA发病期间，血清和关节液的炎症介质显著增加，并且炎症因子的浸润在关节软骨的整个降解过程中持续[2]。

为更好地探寻OA发病机制及防治方法，建立动物骨性关节炎模型具有重要的指导意义。

目前应用最为广泛的为关节内手术法构建所需模型，其特点是稳定性好，建模可在短时间内完成，但创伤性滑膜炎症极易影响软骨及滑膜的正常代谢。

关节腔内注射药物同为经典的建模方法，其优点为方便易操作，缺点为对注射药物的合理选择和剂量要求较高。

本研究通过不同方法建立大鼠骨性关节炎模型，并检测软骨细胞各指标的变化。

单染与复染在观察SIRT1基因敲除小鼠骨关节炎切片中的差异比较

单染与复染在观察SIRT1基因敲除小鼠骨关节炎切片中的差异比较于红燕;杨占东;杨琪;于斐【摘要】Objective To establish osteoarthritis model of the knee joint in mice on the basis of knocking out SIRT1 gene and to observe the differences in the morphology of the cartilage tissue using single staining and compound staining. Methods The knee joint specimens were divided into two groups: SIRT1 -/ - control group ( group A, n=6 ) and SIRT1 -/ - osteoarthritis model group ( group B, n=6 ) . The knee anterior cruciate ligament was traversed, and the ipsilateral medial meniscus was cut to establish an osteoarthritis model of knee joint. HE staining, safranin O-fast green staining, safranin O-alcian blue staining, safranin O staining, fast green staining, alcian blue staining were used to observe the morphological changes in the articular cartilage of the knee. Results Safranin O-fast green staining and safranin O-alcian blue staining showed better results in observation of the morphology of chondrocytes, the structure of cartilage layers, the presence of type II collagen, tide line and the changes of subchondral bone. While the safranin O staining and alcian blue staining had certain advantages in the observation of the defects of cartilage tissue. Conclusions Compared with the single staining, the compound staining used in this study have obvious advantages in obtaining useful information of the cartilage structure in the observation of morphology of cartilage tissues in SIRT1 gene knock-out mice.%目的通过SIRT1基因敲除建立相关小鼠膝关节骨关节炎模型,在此基础上观察各种不同单独染色或复合染色技术在观察软骨组织切片形态学中的差异.方法将小鼠膝关节组织标本分为2组:SIRT1-/-小鼠假手术组(n=6,A组),SIRT1-/-小鼠骨关节炎模型组(n=6,B组).通过前交叉韧带横断加内侧半月板切除术建立膝关节骨关节炎模型,行HE染色、番红O-固绿染色、番红O-阿利新蓝染色、番红O染色、固绿染色、阿利新蓝染色,6种单独染色或复合染色方式观察膝关节软骨组织形态学变化.结果番红O-固绿染色、番红O-阿利新蓝染色在观察软骨细胞的细胞形态、软骨分层结构的情况、II型胶原纤维的显示、潮线及软骨下骨的改变中,效果更好;而番红O染色、阿利新蓝染色在观察软骨组织缺失方面有一定的优势.结论在观察SIRT1基因敲除小鼠膝关节骨关节炎软骨组织切片中,与单独染色相比,复合染色在获得软骨结构的各种信息方面优势更加明显.【期刊名称】《中国比较医学杂志》【年(卷),期】2017(027)010【总页数】6页(P34-39)【关键词】SIRT1基因;基因敲除;小鼠动物模型;骨关节炎;单独染色;复合染色【作者】于红燕;杨占东;杨琪;于斐【作者单位】滨州市滨城区市立医院,山东滨州 256600;滨州市滨城区市立医院,山东滨州 256600;空军总医院,北京 100142;北京大学深圳医院,广东深圳 518036【正文语种】中文【中图分类】R-33骨关节炎(osteoarthritis,OA)是一种以关节软骨的退变丢失为基础的多因素慢性疾病，在50岁以上人群中的发病率极高，仅次于心血管疾病居第二位[1]，容易造成患者的生活质量降低，严重者可导致残疾，给国家和家庭带来了沉重的负担。

膝骨关节炎不同证型软骨细胞在t-RNA中的表达

膝骨关节炎不同证型软骨细胞在t-RNA中的表达郑素明;关俊辉【摘要】目的:研究膝骨关节炎不同证型软骨细胞在t-RNA中的表达情况.方法:选取股骨头坏死患者30例,按照脾肾两虚型以及肝肾亏虚型进行辨证分型和分组(各15例).以实验室培养不同证型的软骨细胞作为研究方法,并对不同证型软骨细胞中t-RNA的表现形式进行观察,通过染色观察后,对软骨组织的表达形式进行研究分析.结果:肝肾亏虚型组中MMP-1/-13RNA在目标基因的表达方面均明显低于睥肾两虚型组,这表明在基因表达方面两种证型之间存在明显的差异.软骨组织细胞的外在形态由t-RNA的转录情况决定,在递变性的不同证型研究中,软骨组织的退化主要的原因取决于软骨组织中t-RNA的转录效果.结论:治疗膝骨关节炎的临床症状,并改善患者的生活质量,应当从神经递质以及细胞增生激素来进行局部控制,并以此来抑制或者促进t-RNA的转录,只有如此才能够有效地控制关节组织的退化进度.在改善人体的基本环境后,对人体的组织成长基本情况会有优化作用.在现代临床治疗膝骨关节炎的临床治疗中,应当从人体软骨组织入手,并以此来作为研究的根本,从细胞核中m-RNA和t-RNA的转录作为研究的根本进行临床试验的研究分析,必然可以在临床检验研究中得出更直接的证据.【期刊名称】《实用中西医结合临床》【年(卷),期】2016(016)002【总页数】3页(P28-30)【关键词】膝骨关节更;软骨细胞;t-RNA;基因表达【作者】郑素明;关俊辉【作者单位】广州中医药大学第三附属医院广东广州510240;广东省广州市中医医院广州510130【正文语种】中文【中图分类】R684.3膝骨关节炎（Knee Osteoarthritis，KOA）属于一种慢性炎症性骨科疾病，致病机理较多，其中包括了工作环境、遗传以及体内抗原特性，对人体的日常生活会产生较大的影响[1]。

KOA的主要并发症状就有关节肿胀、压痛等，并出现伴随性关节疼痛，且软骨组织细胞会逐渐退化，进而引起人体的骨质畸形[2]。