外植体消毒方法
最新植物组培外植体消毒详解
精品文档植物组培外植体消毒详解外植体的消毒植物组织培养用的外植体大部分取自田间，表面上附着大量的微生物，这是组织培养的一大障碍。
因此在材料接种培养前必须要消毒处理，消毒一方面要求把材料表面上的各种微生物杀灭，同时又不能损伤或只轻微损伤组织材料而不影响其生长。
因此，外植体的消毒处理是植物组织培养工作中的重要一环。
(1)常用的消毒剂常用的消毒剂如下表所示。
理想的消毒剂应具有消毒效果好，易被无菌水冲洗掉或能自行分解，对材料损伤小，对人体及其他生物无害，来源广泛，价格低廉。
常用消毒剂的使用方法及效果①酒精酒精是最常用的表面消毒剂，以70%~75% 酒精杀菌效果最好，95% 或无水酒精会使菌体表面蛋白质快速脱水凝固，形成一层干燥膜，阻止了酒精的继续渗入，杀菌效果大大降低。
酒精具有较强的穿透力，使菌体蛋白质变性，杀菌效果好。
同时它还具有较强的湿润作用，可排除材料上的空气，利于其他消毒剂的渗入。
但酒精对植物材料的杀伤作用也很大，浸泡时间过长，植物材料的生长将会受到影响，甚至被酒精杀死，使用时应严格控制时间。
但酒精不能彻底消毒，一般不单独使用，多与其他消毒剂配合使用。
②升汞又称氯化汞，Hg2+ 可以与带负电荷的蛋白质结合，使蛋白质变性，从而杀死菌体。
升汞的消毒效果极佳，但易在植物材料上残留，消毒后需用无菌水反复多次冲洗。
升汞对环境危害大，对人畜的毒性极强，使用后应做好回收工作。
③次氯酸钠次氯酸钠是一种较好的消毒剂，它可以释放出活性氯离子，从而杀死菌体。
其消毒能力很强，不易残留，对环境无害。
但次氯酸钠溶液碱性很强，对植物材料也有一定的破坏作用。
④漂白粉漂白粉的有效成分是次氯酸钙[Ca(ClO)2] ，消毒效果很好，对环境无害。
它易吸潮散失有效氯而失效，故要密封保藏。
⑤过氧化氢也称双氧水，消毒效果好，易清除，又不会损伤外植体，常用于叶片的消毒。
⑥新洁尔灭精品文档这是一种广普表面活性消毒剂，对绝大多数植物外植体伤害很小，杀菌效果好。
外植体消毒液,外植体消毒试剂
外植体消毒液，外植体消毒剂外植体的消毒液，外植体的消毒试剂：植物组织培养用的外植体大部分取自田间，表面上附着大量的微生物，这是组织培养的一大障碍。
因此在材料接种培养前必须要消毒处理，消毒一方面要求把材料表面上的各种微生物杀灭，同时又不能损伤或只轻微损伤组织材料而不影响其生长。
因此，外植体的消毒处理是植物组织培养工作中的重要一环。
（1）常用的消毒剂常用的消毒剂如下表所示。
理想的消毒剂应具有消毒效果好，易被无菌水冲洗掉或能自行分解，对材料损伤小，对人体及其他生物无害，来源广泛，价格低廉。
常用消毒剂的使用方法及效果①酒精酒精是最常用的表面消毒剂，以70%~75%酒精杀菌效果最好，95%或无水酒精会使菌体表面蛋白质快速脱水凝固，形成一层干燥膜，阻止了酒精的继续渗入，杀菌效果大大降低。
酒精具有较强的穿透力，使菌体蛋白质变性，杀菌效果好。
同时它还具有较强的湿润作用，可排除材料上的空气，利于其他消毒剂的渗入。
但酒精对植物材料的杀伤作用也很大，浸泡时间过长，植物材料的生长将会受到影响，甚至被酒精杀死，使用时应严格控制时间。
但酒精不能彻底消毒，一般不单独使用，多与其他消毒剂配合使用。
②升汞又称氯化汞，Hg2+可以与带负电荷的蛋白质结合，使蛋白质变性，从而杀死菌体。
升汞的消毒效果极佳，但易在植物材料上残留，消毒后需用无菌水反复多次冲洗。
升汞对环境危害大，对人畜的毒性极强，使用后应做好回收工作。
③次氯酸钠次氯酸钠是一种较好的消毒剂，它可以释放出活性氯离子，从而杀死菌体。
其消毒能力很强，不易残留，对环境无害。
但次氯酸钠溶液碱性很强，对植物材料也有一定的破坏作用。
④漂白粉漂白粉的有效成分是次氯酸钙[Ca(ClO)2]，消毒效果很好，对环境无害。
它易吸潮散失有效氯而失效，故要密封保藏。
⑤过氧化氢也称双氧水，消毒效果好，易清除，又不会损伤外植体，常用于叶片的消毒。
⑥新洁尔灭这是一种广普表面活性消毒剂，对绝大多数植物外植体伤害很小，杀菌效果好。
最新植物组培外植体消毒详解
植物组培外植体消毒详解外植体的消毒植物组织培养用的外植体大部分取自田间，表面上附着大量的微生物，这是组织培养的一大障碍。
因此在材料接种培养前必须要消毒处理，消毒一方面要求把材料表面上的各种微生物杀灭，同时又不能损伤或只轻微损伤组织材料而不影响其生长。
因此，外植体的消毒处理是植物组织培养工作中的重要一环。
（1）常用的消毒剂常用的消毒剂如下表所示。
理想的消毒剂应具有消毒效果好，易被无菌水冲洗掉或能自行分解，对材料损伤小，对人体及其他生物无害，来源广泛，价格低廉。
常用消毒剂的使用方法及效果①酒精酒精是最常用的表面消毒剂，以70%~75%酒精杀菌效果最好，95%或无水酒精会使菌体表面蛋白质快速脱水凝固，形成一层干燥膜，阻止了酒精的继续渗入，杀菌效果大大降低。
酒精具有较强的穿透力，使菌体蛋白质变性，杀菌效果好。
同时它还具有较强的湿润作用，可排除材料上的空气，利于其他消毒剂的渗入。
但酒精对植物材料的杀伤作用也很大，浸泡时间过长，植物材料的生长将会受到影响，甚至被酒精杀死，使用时应严格控制时间。
但酒精不能彻底消毒，一般不单独使用，多与其他消毒剂配合使用。
②升汞又称氯化汞，Hg2+可以与带负电荷的蛋白质结合，使蛋白质变性，从而杀死菌体。
升汞的消毒效果极佳，但易在植物材料上残留，消毒后需用无菌水反复多次冲洗。
升汞对环境危害大，对人畜的毒性极强，使用后应做好回收工作。
③次氯酸钠次氯酸钠是一种较好的消毒剂，它可以释放出活性氯离子，从而杀死菌体。
其消毒能力很强，不易残留，对环境无害。
但次氯酸钠溶液碱性很强，对植物材料也有一定的破坏作用。
④漂白粉漂白粉的有效成分是次氯酸钙[Ca(ClO)2]，消毒效果很好，对环境无害。
它易吸潮散失有效氯而失效，故要密封保藏。
⑤过氧化氢也称双氧水，消毒效果好，易清除，又不会损伤外植体，常用于叶片的消毒。
⑥新洁尔灭这是一种广普表面活性消毒剂，对绝大多数植物外植体伤害很小，杀菌效果好。
（2）消毒方法①茎尖、茎段及叶片等的消毒消毒前先对植物组织进行修整，去掉不需要的部分，然后用自来水冲洗。
大叶藻组织培养中外植体消毒方法的研究
大叶藻组织培养中外植体消毒方法的研究作者：刘延岭，李晓捷，崔翠菊，等来源：《农学学报》 2013年第3期（1中国海洋大学水产学院，山东青岛266100；2山东东方海洋科技股份有限公司，山东烟台264003）摘要：为探寻大叶藻组织培养中外植体的最佳消毒方法，采用75%乙醇、1.5%碘化钾、4%次氯酸钠和10%双氧水这4 种消毒剂以及不同的处理时间组合，对大叶藻种子和幼苗进行消毒试验。
结果表明，最有效的外植体消毒方法为：对大叶藻幼苗，先用无菌水冲洗3~4 次，再以75%乙醇处理20 s，然后再用无菌水冲洗3~4 次，可以达到较好的消毒效果。
对大叶藻种子，先以75%乙醇处理10 min，再以1.5%碘化钾处理10 min，然后用无菌海水冲洗3~4次，这样消毒效果最佳，且不影响种子的发芽率。
关键词：大叶藻；组织培养；消毒方法；消毒剂中图分类号：S917.3 文献标志码：A 论文编号：2013-00050 引言大叶藻(Zostera marina)是大叶藻科(Zosteraceae)大叶藻属(Zostera)的一种沉水性海洋高等植物，是重要的海草资源，广泛分布在近海生态系统中，在海洋生态环境保护中起着重要的作用，近年来逐渐成为国内外学者研究的热点之一[1-2]。
目前，作为研究材料的大叶藻要去海边采集，因此受到时间、地域和天气状况等的限制，给深入研究大叶藻带来很大的不便。
近年来，国内外研究者将组织培养技术广泛应用于植物繁殖，所以，利用这种技术对大叶藻进行室内繁殖不失为一种可行的方法。
通过组织培养试验，找到大叶藻的最适组织培养条件，探索影响大叶藻生活的限制性环境因子，可以为进一步研究大叶藻的耐盐机制、生物技术育种、遗传转化等奠定基础。
但组织培养首先遇到的问题就是很难获得无菌的外植体。
在营养丰富的培养基中，外植体携带的微生物迅速生长，从而影响藻体组织。
在海水生藻类的研究中，王萍等[3]使用不同消毒剂对海带成熟孢子体组织块进行除菌实验，研究表明0.01%HgC12除菌效果好于1.5%KI，但对海带的组织块有一定的毒害作用，所以综合考虑采用1.5%KI 作为消毒剂。
外植体材料的预处理、消毒及接种
外植体材料的预处理、消毒及接种（一）对采来的植物材料进行适当的预处理。
除去不需要的部分，将所需部分切割至适当大小，置自来水龙头下流水冲洗几分钟至几小时，主要视植物材料清洁程度而定。
这在污染严重时特别有用。
（二）用洗衣粉水（1~2角匙洗衣粉/100ml水）等浸洗上述植物材料约5min，再用自来水冲净洗衣粉水。
这是进一步减少污染的处理。
同时配制消毒液：50%次氯酸钠溶液。
（三）将接种用具、无菌水等从80℃烘箱中或直接从高压灭菌器中取出，置于超净工作台上。
打开超净工作台中的紫外灯，在进行紫外线灭菌处理至少30min后关掉紫外灯。
（四）操作人员洗手擦干，换上洁净工作服，戴上帽子以免头发散落以及带来污染。
坐到超净台前，并将装有经湿热灭菌培养基的培养瓶、配好的消毒液、洗净沥干的植物材料置于超净工作台上，用70%酒精棉球擦手与器具外壁，即可对经上述预处理的植物材料进行表面灭菌处理，自此以后各步均须在超净工作台上操作。
（五）具体首先将经上述预处理、沥干水的植物材料放入广口瓶或烧杯，向其中倒入新鲜配制、浓度一定并且加有一定量（通常为灭菌剂消毒液的0.5%，或每100mL消毒液滴加10~15滴）Tween-80（土温-80）等表面活性剂的消毒液适量（液面高度超出植物材料至少0.5cm），开始计算灭菌时间。
也可在使用上述灭菌剂之前，先将植物材料浸于70%乙醇灭菌10~30秒。
（六）在持续灭菌时间内定时用玻璃棒轻轻搅动，以促进植物材料各部分与消毒液充分接触，驱除气泡，使灭菌彻底。
在灭菌时间结束前1min时，即可开始用玻璃棒等轻轻压住植物材料将消毒液慢慢倒入废物缸，注意勿使植物材料滑出。
接着立即倒入适量无菌水，轻搅植物材料以清洗去除灭菌剂残留。
一般表面灭菌时间的计算是从倒入消毒液开始，到倒入无菌水为止。
无菌水的清洗时间每次约3min；清洗5次。
（七）倒出、沥去最后一次清洗用水，开始进行植物材料的切割及接种。
逐一取出经上述灭菌处理的植物材料，置于下面垫有经灭菌处理的培养皿（或小白瓷碟）的无菌纱布或滤纸上，左手拿小镊子，右手拿解剖刀，切除各切段或切块上被灭菌剂毒坏的部分。
实验二 外植体消毒和接种
实验三的准备工作
• 另外，任一组帮忙配：配YEB培养基 500mL(固体)
• 配方：牛肉浸膏 5.0 g/L
•
酵母浸膏 1.0 g/L
•
蛋白胨 5.0 g/L
•
蔗糖 5.0 g/L
•
MgSO4.7H2O 0.002 mol/L
•
pH7.0
• 分装至菌种培养瓶
实验三的准备工作
• 每组需另准备： • 无菌水 8瓶 • 空瓶 2个，其中一个
重新消毒后才能使用。 • 6、不要用手直接接触无菌的物品。
在超静工作台上接种植物材料
注意坐姿？不要说话？ 无菌操作？ 避免交叉感染？
标签格式(例)
材料名称:烟草(叶)，其它（待定） 培养基名称:例如：MS+NAA2mg/L+6-BA1mg/L 接种日期:2010.4.26 姓名:xxx
其它图案标志等少用，如三角形，脸谱， 卡通图
动等进行增效。
不同外植体的消毒方法：
• 茎尖，叶片及茎段等的消毒：取材—自来水冲洗（肥 皂水）---75%EtOH浸泡10-30秒---无菌水冲洗----2%或 10% NaClO或0.1%HgCl2浸泡10-15 min—无菌水冲洗34次----接种。（升汞浓度与消毒时间的关系）
• 种子消毒，与此类同。 • 根及地下部器官的消毒： • 根（来自土壤，水冲洗充分）---0.1%升汞或NaClO浸
• 颜色 • 质地 ➢ 诱导率(%)=形成愈伤组织的材料数/接种总材料数×100
如污染严重或没有诱导出愈伤组织,则需重做实验!
请大家“给力”，精心呵护你的“宝贝”（被培养材料）
其它实验内容
• 为第三周发根农杆菌遗传转化作准备
实验三,毛状根的诱导和培养 的准备工作
外植体消毒方法比较
外植体消毒方法比较组培实验室是生命科学及相关学科实验室建设中必备的实验室。
组培实验室的消毒是实验室日常管理工作的重要环节，直接关系着组培实验的成功与否和组培幼苗的质量高低。
组培实验室的消毒一般又可分为环境消毒、培养基消毒和外植体的消毒。
培养基的消毒主要是在高压灭菌锅中进行，在此不再赘述。
环境消毒和外植体的消毒则有多种方法，这些方法各有优劣，使用不当时还会对人体产生伤害，为此，笔者特对这些典型方法进行分析比较，为组培实验室的科学管理提供一些参考。
1 组培实验室的环境消毒保持组培实验室的空气清洁度是减少组培污染的重要条件，用于实验室消毒的常规消毒方法包括紫外线照射法、甲醛熏蒸法、新洁尔灭(苯扎溴铵溶液)法等，比较新的方法有中草药消毒法。
1.1 紫外线照射法紫外线是波长在10-400 nm之间辐射光的总称，能引起细菌、病毒等微生物遗传物质的结构发生变化，从而影响DNA复制、RNA转录和蛋白质的翻译，导致病菌或病毒死亡。
此外，紫外线辐射所产生的臭氧和各种自由基可损伤蛋白质和酶分子，导致功能改变。
紫外线消毒具有广谱性，可杀灭细菌、病毒、真菌、支原体等各种微生物。
紫外消毒具有较高的杀菌效率，且由于未使用化学药剂，消毒过程中不会产生对人体和环境有害的副产物。
该技术运行维护简单，费用较低。
采用室内悬吊式紫外线消毒时，室内安装紫外消毒灯的数量为每平方不少于1. 5 W，照射时间不少于30 min。
但需要指出的是，过量的紫外线照射对人体有一定的危害乃至致癌作用。
紫外线作用于中枢神经系统，可出现头痛、头晕、体温升高等症状。
过量辐射会诱发皮肤癌。
紫外辐射对眼睛的损伤特别明显，严重时可能诱发白内障。
因此，当组培实验室在用紫外消毒期间，工作人员不要呆在正消毒的空间内，切忌用眼睛注视紫外灯。
特别的，如超净工作台内的紫外灯打开消毒时，应避免将手长时间暴漏于紫外灯下。
一般在接种室用紫外线消毒后，不要立即进入接种室，此时室内充满高浓度的臭氧，会对人体，尤其是呼吸系统造成伤害。
外植体消毒的一般步骤
外植体消毒的一般步骤在植物组织培养中，外植体消毒是非常重要的一步，它关系到实验的成败。
以下是外植体消毒的一般步骤：1.剪取外植体在消毒前，需要选取健康、无病虫害的外植体。
剪取时要保证无菌操作，避免污染。
一般选取植物的新鲜、幼嫩的部分作为外植体。
2.清洗外植体剪取后的外植体需要用无菌水或酒精进行清洗。
要多次清洗，以去除表面的杂质和细菌。
在清洗时，应注意不要损伤外植体。
3.切除两端为了防止两端感染，在外植体两端用火焰消毒或75%酒精浸泡2-3分钟。
然后切除两端，减小接触面积，避免污染。
4.浸泡在酒精中将外植体完全浸泡在75%酒精中，取出后用无菌水冲洗。
这样可使外植体表面的细菌和病毒失去活性，提高消毒效果。
5.取出并用无菌水冲洗将外植体从酒精中取出，用无菌水冲洗干净。
在冲洗时，要确保每个外植体都冲洗到位，以避免残留物影响培养效果。
6.消毒剂处理在外植体上涂抹一层消毒剂，进行进一步的杀菌处理。
涂抹时要适量，避免过度使用导致外植体损伤。
7.无菌水冲洗用无菌水冲洗外植体，重复多次，确保外植体表面没有消毒剂残留。
在冲洗时，要注意更换无菌水，以确保冲洗效果。
8.滤纸吸干表面水分在外植体表面用滤纸吸干水分，确保外植体保持干燥。
这一步可以有效避免培养过程中出现水分过多导致霉变的情况。
9.接种到培养基中将外植体轻轻插入培养基中，注意不要损坏外植体和培养基。
接种时需要保证无菌操作，避免带入新的污染源。
以上就是外植体消毒的一般步骤，希望能对你有所帮助。
在进行实验时，一定要注意无菌操作，确保每个步骤都符合要求，以获得良好的实验效果。
植物组织培养实务--外植体的选择与消毒
植物组织培养实务--外植体的选择与消毒1、外植体的选择外植体是指植物组织培养中的各种接种材料。
从理论上讲，植物细胞都具有全能性，能够再生新植株，任何器官、任何组织、单个细胞和原生质体都可以作为外植体。
但实际上，不同品种、不同器官之间的分化能力有巨大差异，培养的难易程度不同。
为保证植物组织培养获得成功，选择合适的外植体是非常重要的。
（1）选择优良的种质及母株无论是离体培养繁殖种苗，还是进行生物技术研究，培养材料的选择都要从主要的植物入手，选取性状优良的种质、特殊的基因型和生长健壮的无病虫害植株。
尤其是进行离体快繁，只有选取优良的种质和基因型，离体快繁出来的种苗才有意义，才能转化成商品；生长健壮无病虫害的植株及器官或组织代谢旺盛，再生能力强，培养后容易成功。
（2）选择适当的时期组织培养选择材料时，要注意植物的生长季节和生长发育阶段，对大多数植物而言，应在其开始生长或生长旺季采样，此时材料内源激素含量高，容易分化，不仅成活率高，而且生长速度快，增殖率高。
若在生长末期或已进入休眠期时采样，则外植体可能对诱导反应迟钝或无反应。
花药培养应在花粉发育到单核靠边期取材，这时比较容易形成愈伤组织。
百合在春夏季采集的鳞茎、片，在不加生长素的培养基中，可自由地生长、分化；而其他季节则不能。
叶子花的腋芽培养，如果在1月至翌年2月间采集，则腋芽萌发非常迟缓；而在3-8月间采集，萌发的数目多，萌发速度快。
（3）选取适宜的大小培养材料的大小根据植物种类、器官和目的来确定。
通常情况下，快速繁殖时叶片、花瓣等面积为5mm2，其他培养材料的大小为0.5~1.0cm。
如果是胚胎培养或脱毒培养的材料，则应更小。
材料太大，不易彻底消毒，污染率高；材料太小，多形成愈伤组织，甚至难以成活。
（4）外植体来源要丰富为了建立一个高效而稳定的植物组织离体培养体系，往往需要反复实验，并要求实验结果具有可重复性。
因此，就需要外植体材料丰富并容易获得。
（5）外植体要易于消毒在选择外植体时，应尽量选择带杂菌少的器官或组织，降低初代培养时的污染率。
将植物组织培养流程
附录一
植物组织培养流程及相应图片
1、配制培养基并进行高温蒸汽灭菌20min；
2、接种工具以及超净工作台灭菌：接种工具用高温蒸汽灭菌，超
净工作台用紫外灯灭菌30min；
3、外植体消毒：首先用流水冲洗外植体，用酒精灭菌30s，再用
0.1%升汞消毒10min，最后用无菌蒸馏水冲洗4-5次；
4、用75%酒精对手进行灭菌消毒；
5、接种：用剪刀剪取1cm2左右的叶片或者1cm长的茎段，迅速
放入三角瓶中，并立即封口；
6、将接种的三角瓶放入组培室中进行培养，大约2周后（时间根
据培养条件不同而不同）长出愈伤组织，如图1、2；
图1 西瓜茎段愈伤组织图2 烟草叶片愈伤组织7、长出愈伤组织后，即可进行继代和分化培养，具体流程与接种
一致，只是将外植体换成愈伤组织，并注意无菌条件的控制，如图3、4；
图3 西瓜愈伤分化 图4烟草愈伤分化 8、 将继代分化的愈伤组织放入适宜的条件下进行光照培养，诱导
出芽和根，如图5、6
图5 西瓜诱导发芽 图6西瓜诱导发芽生根
9、 将诱导出根和芽的植株进行练苗； 10、 练苗后的植株移栽到自然条件下，让其自然生长繁殖，最终达
到植物组织培养的目的。
植物组培外植体消毒详解
植物组培外植体消毒详解Modified by JACK on the afternoon of December 26, 2020植物组培外植体消毒详解外植体的消毒植物组织培养用的外植体大部分取自田间，表面上附着大量的微生物，这是组织培养的一大障碍。
因此在材料接种培养前必须要消毒处理，消毒一方面要求把材料表面上的各种微生物杀灭，同时又不能损伤或只轻微损伤组织材料而不影响其生长。
因此，外植体的消毒处理是植物组织培养工作中的重要一环。
（1）常用的消毒剂常用的消毒剂如下表所示。
理想的消毒剂应具有消毒效果好，易被无菌水冲洗掉或能自行分解，对材料损伤小，对人体及其他生物无害，来源广泛，价格低廉。
常用消毒剂的使用方法及效果①酒精酒精是最常用的表面消毒剂，以70%~75%酒精杀菌效果最好，95%或无水酒精会使菌体表面蛋白质快速脱水凝固，形成一层干燥膜，阻止了酒精的继续渗入，杀菌效果大大降低。
酒精具有较强的穿透力，使菌体蛋白质变性，杀菌效果好。
同时它还具有较强的湿润作用，可排除材料上的空气，利于其他消毒剂的渗入。
但酒精对植物材料的杀伤作用也很大，浸泡时间过长，植物材料的生长将会受到影响，甚至被酒精杀死，使用时应严格控制时间。
但酒精不能彻底消毒，一般不单独使用，多与其他消毒剂配合使用。
②升汞又称氯化汞，Hg2+可以与带负电荷的蛋白质结合，使蛋白质变性，从而杀死菌体。
升汞的消毒效果极佳，但易在植物材料上残留，消毒后需用无菌水反复多次冲洗。
升汞对环境危害大，对人畜的毒性极强，使用后应做好回收工作。
③次氯酸钠次氯酸钠是一种较好的消毒剂，它可以释放出活性氯离子，从而杀死菌体。
其消毒能力很强，不易残留，对环境无害。
但次氯酸钠溶液碱性很强，对植物材料也有一定的破坏作用。
④漂白粉漂白粉的有效成分是次氯酸钙[Ca(ClO)2]，消毒效果很好，对环境无害。
它易吸潮散失有效氯而失效，故要密封保藏。
⑤过氧化氢也称双氧水，消毒效果好，易清除，又不会损伤外植体，常用于叶片的消毒。
外植体灭菌的一般流程
外植体灭菌的一般流程
外植体消毒一般程序有自来水冲洗，酒精浸泡，消毒剂消毒，无菌水冲洗等。
外植体消毒程序较多，首先需要用自来水冲洗30min以上，然后用70%～75%酒精浸泡30秒，再然后使用消毒剂表面消毒外植体3-10min，最后使用无菌水冲洗3～10次。
外植体表面消毒和灭菌时需要注意：
1、外植体取回后要及时修整、表面清洗和流水冲洗。
2、根据外植体种类、取材时间和老嫩程度综合确定灭菌方案。
3、严格掌握酒精灭菌时间。
4、灭菌液要浸没材料，随时轻轻摇动，表面灭菌后要尽快切取所需外植体接入培养基中，以减少外植体在空气中的暴露时间，避免风干和褐化。
外植体消毒需要严格按照消毒程序清洗，以免造成不良影响。
外植体表面消毒
外植体表面消毒
1)取健康，无病害的植株三株，每株剪取5mm-10mm茎尖，根尖，嫩叶先取
一株实验
无菌水冲洗3次—70%H2O2中浸泡10min—无菌水冲洗3次
c:自来水冲洗—75%乙醇浸泡1min—无菌水冲洗3次—2%NaOCl 25-30min—无菌水冲洗3次
3)将消毒后的外植体放入MS培养基中进行培养，记录（外植体形态，长菌）
4)每一表面消毒方案，设置以下三种对照检验，记录
a:不做消毒的外植体直接接种，做对照组检验表面消毒效果
b:空白培养基对照
c:最后一次淋洗的无菌水取0.1ml涂布到培养基上，做对照组检验表面消毒效果操作不规范未取到或超过1ml
对外植体伤害相对较小的方案
培养基消毒，采用先配好分装，最后灭菌的方式，若MS培养基需要加激素等，则等灭菌完用过滤注射器注入
操作设备：超净台（对外植体消毒过程），高压灭菌锅（器皿，用具，培养基杀菌），恒温培养箱（培养观察）
前期准备步骤：1用具灭菌2配制培养基MS，无菌水3消毒剂配制
用具：镊子，培养皿，锥形瓶，剪刀，量筒，烧杯，玻棒，（封口膜，手套，口罩），酒精灯，脱脂棉，滤纸。
植物外植体消毒过程的模块化处理
擦 拭好 的材料 置于流 水 中 １ ５ ｍ ｉ ｎ 一 ３ ０ ｍ ｉ ｎ ， 污染 严重 的材料 可延长至 １ ｈ 。水流 不 可 过 大过 急 ， 材 料在 容 器 中 能够 不停 随 水流 翻 转即 可。 内生菌严 重 的材料 可冲洗 １ ２ ｈ以上 。
１ ． ２外 植体 消毒
对 其 效果进 行 了研 究。 １ ． ３ ． ２ 固体培 养
预 培 养结 束后 ， 将 外植体 接 种 于 固体 培 养基 中于 正 常光 照
下培 养。
２ 模块 组合 实例操 作
将各模 块 编 号 Ａ — Ｉ 列 于表 １ ， 操 作 顺序 为 Ａ至 Ｉ 。大 多参 考 文献 中 外植体 的清洗 消 毒 的方法 为 ： ｃ Ｅ — Ｇ Ｆ Ｇ Ｉ ， 标记 为 参 照
在 植物 组 织 培养 研 究 中 ， 有 效无 菌外 植 体 的获 得 是最 为关
键的一步 ， 如果 处 理 ， 会 造 成培 养物 的污 染和 褐 化 ， 导致 整 个 试 验 的失 败 。而不 同的外 植 体 需要 不 同 的处 理手 段 、流程 与时间 ， 对 于初 学 者来 说 并 不太 容 易把 握 。该 研 究利 用最 为 常 见 的试 剂及 器 材 ， 将外 植 体 消毒 的 不 同步骤 模 块化 和 标准 化 并
方法。 表 １外 植体 消 毒 过程 的模 块 编 号 Ａ Ｂ Ｃ Ｄ Ｅ Ｆ Ｇ Ｈ ｌ
１外植体消毒过程的模块与操作标准
１ １外 植体 清洗 泡 于 含有 Ｏ ． １ ％１ ％餐洗 净 的纯 净 水 中５ ｍ ｉ ｎ 一 １ ５ ｍ ｉ ｎ 。整 个材 料要 完全 处于洗 涤 剂溶 液 中 ， 水温 要
１ ｍ ｉ ｎ 一 ５ ｍ ｉ ｎ 。从 该步开 始在 超净 工作 台上进 行 ， 时 间不可随 意
外植体采集,处理和灭菌的操作流程
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外植体消毒
1 、材料：油菜、番茄、芝麻等种子或其他培养材料。
2 、仪器：超净工作台，含 MS 培养基的培养瓶，镊子，培养皿，酒精灯，接种器械（解剖刀、剪子、镊子等）。
3 、试剂： 70% 酒精， 95% 酒精， 0.1% 升汞或漂白粉、无菌水等。
方法步骤
1 、用水和肥皂洗净双手，穿上灭过菌的专用实验服、帽子与鞋子，进入接种室。
2 、打开超净工作台和无菌操作室的紫外灯，照射 20 分钟。
3 、上工作台后，用酒精棉球擦拭双手，然后用 70% 酒精喷雾降尘，并擦拭工作台面。
4 、先用酒精棉球擦拭接种工具，再将镊子和剪子蘸 95% 酒精在酒精灯火焰上灼烧，放置冷却。
5 、修整接种材料，除去不用的部分，然后进行外植体消毒：
（1）水洗，滤纸吸干。
（2） 70% 酒精中浸泡约 30-60 秒（注意：酒精穿透力很强，时间不宜过长，以免损伤材料组织细胞）。
（3）在 0.1% 升汞中浸泡 10 分钟；或在 10% 漂白粉上清夜中泡10-15 分钟；
（4）无菌水冲洗 3-5 次。
6 、接种：将种子或其他培养材料放到培养基上。
（1）先解开包口纸，将试管或培养瓶拿成斜角，使瓶口在酒精灯火
焰上方灼烧数秒钟。
（2）用灼烧过的冷却的镊子取外植体材料转接到试管或培养瓶中，轻轻插入或放在培养基表面。
（3）接种完毕后，将瓶口在火焰上转动灼烧，封口。
（4）操作期间应经常用 70% 酒精擦拭工作台和双手；接种器械应反复在 95% 酒精中浸泡和火焰上灼烧灭菌。
注意：双手不能离开工作台，不能说话、走动或咳嗽等。
7 、接种结束后，清理和关闭超净工作台，并用 70% 酒精擦拭工作台面。
（学习的目的是增长知识，提高能力，相信一分耕耘一分收获，努力就一定可以获得应有的回报）。