疟原虫镜检操作规程
疟原虫镜检技术操作规范
疟原虫镜检技术操作规范疟原虫镜检是诊断疟疾、确定虫种及发现传染源的重要手段和方法，具有严格的操作程序和技术要求，为了统一方法、规范程序、提高血检质量，特制定本操作规范一、血片制作（一）所需器材载玻片玻片3张（1张作载玻片，1张作推片，1张作采血后滴于玻片备血用）采血针采用一次性采血针。
玻片盒存放50或100片玻片的木质或塑料盒。
皮肤消毒液棉签或酒精棉球75%的酒精、安尔碘、碘伏等皮肤表面消毒剂。
记号笔用于玻片上书写血检病人基本信息。
（二）操作步骤1、载玻片基本信息登记取1张载玻片，首先用目测法将载玻片从右（磨砂处为右）到左等分成6格，接着用记号笔在第1、2格即（磨砂处）写下血检病人基本信息：编号、姓名、制片日期结果（镜检结束后补写）。
载玻片上信息应与血检登记表中的项目对应。
如图12、采血采血部位为手指末端或耳垂，婴儿可从拇趾或足跟取血。
用消毒剂消毒取血部位皮肤后，以一次性采血针迅速刺入取血部位1～2mm深，约挤出1-2滴血，滴于玻片上（以备涂制厚薄血膜用）。
3、涂制血膜厚血膜：用推片的一角，取血一小滴（约4微升），置于平置的载玻片上，由里向外一个方向旋转约4圈，涂成直径0.8~1厘米大小圆形厚血膜。
厚血膜的厚度以一个油镜视野内可见到5～10个白细胞为宜。
薄血膜：以推片一端的中部取血一小滴（约1微升），使血滴与载玻片接触，血液沿推片边缘向两侧展开，将推片与载玻片保持25-30度，均匀而迅速适当地用力向前推成舌形薄血膜。
薄血膜厚度应以红细胞之间互相接触而不相互重叠为佳，（直观透过玻片能清晰看到报纸上的字）。
二、固定（一）所需器材1、甲醇2、器具玻璃棒、吸管（二）操作步骤薄血膜固定薄血膜晾干后，用玻璃棒沾取或用吸管吸取少量甲醇平铺于薄血膜上，起固定薄血膜作用，（注意不能固定厚血膜）。
三、染色〈一〉吉氏染染色法（一）所需器材1、吉氏染液（原液）2、器具染色用的盘子、染色缸、烧杯、吸管若干。
染色及冲洗用水蒸馏水、冷开水、自来水、pH7.2缓冲液。
血疟原虫检检查标准操作规程
血疟原虫(MP)厚血片检查法（手工法）标准操作规程1. 实验原理应用瑞氏染色法对制备好的厚血片进行染色后在显微镜下查找疟原虫。
2. 标本采集2.1标本采集前病人准备：间日疟及三日疟患者应在发作后数小时至10余小时采血；恶性疟患者，应在发作后20h左右采血。
2.2标本种类：全血或末梢血2.3标本要求：厚血片的溶血要及时。
3. 标本储存：厚血片的放置期限在夏季不超过48h，冬季不超过62h。
4. 标本运输：室温运输。
5. 标本拒收标准：细菌污染。
6. 操作步骤6.1 在洁净玻片上，滴患者血液2滴。
6.2 用推片角将血液由内向外转涂成直径约1cm、厚薄均匀的血膜，在室温中自然干燥。
6.3 在干燥的血膜上滴加蒸馏水数滴，完全覆盖血膜，溶血数分钟。
脱去血红蛋白的血膜呈浅灰色，倾去溶血液。
6.4 不必待干，进行瑞氏染色。
6.5 干后镜检。
7. 结果判断与分析：在油镜下观察20个视野或以上才能报告“未检出疟原虫”；发现虫体后还应在薄血片上进行分类鉴别。
8. 临床意义：本实验有利于提高疟原虫的阳性检出率。
9. 操作性能：快速简便、阳性检出率高、利于人群普查初筛10. 方法局限性10.1 易受溶血不完全的影响。
10.2 经验缺乏者易受其他杂物的影响。
10.3 存在主观判断的失误10.4 不易鉴别出疟原虫的种类。
11. 参考文献中国人民共和国卫生部医政司编.全国临床检验操作规程（第二版）.1997,85-86 12. 注意事项12.1 染色后，水洗时不要先倒去染液，应让清水流进染液，使沉渣冲走。
12.2 注意区别易与疟原虫混淆的其他杂物。
血疟原虫(MP)薄血片检查法（手工法）标准操作规程1. 实验原理应用瑞氏染色法对制备好的薄血片进行染色后在显微镜下查找疟原虫，并鉴别其形态种类。
2. 标本采集2.1 标本采集前病人准备：间日疟及三日疟患者应在发作后数小时至10余小时采血；恶性疟患者，应在发作后20h左右采血。
2.2 标本种类：全血或末梢血2.3 标本要求：薄血片的血膜厚度要适度均匀以利镜检。
疟原虫镜检技术操作规范
疟原虫镜检技术操作规范疟原虫镜检是诊断疟疾、确定虫种及发现传染源的重要手段和方法，具有严格的操作程序和技术要求，为了统一方法、规范程序、提高血检质量，特制定本操作规范。
一、血片制作（一）所需器材载玻片玻片3张（1张作载玻片，1张作推片，1张作采血后滴于玻片备血用）采血针采用一次性采血针。
玻片盒存放50或100片玻片的木质或塑料盒。
皮肤消毒液、棉签或酒精棉球75%的酒精、安尔碘、碘伏等皮肤表面消毒剂。
记号笔用于玻片上书写血检病人基本信息。
（二）操作步骤1、载玻片基本信息登记取1张载玻片，首先用目测法将载玻片从右（磨砂处为右）到左等分成6格，接着用记号笔在第1、2格即（磨砂处）写下血检病人基本信息：编号、姓名、制片日期结果（镜检结束后补写）。
载玻片上信息应与血检登记表中的项目对应。
如图12、采血采血部位为手指末端或耳垂，婴儿可从拇趾或足跟取血。
用消毒剂消毒取血部位皮肤后，以一次性采血针迅速刺入取血部位1～2mm 深，约挤出1-2滴血，滴于玻片上（以备涂制厚薄血膜用）。
3、涂制血膜用推片的左下角刮取玻片上的血液4～5μl，涂于载玻片的第三格（靠近磨砂侧），由里向外一个方向旋转2～4圈，涂成直径为0.8～1.2cm的圆形厚血膜；再用该角沾取血液1～1.5μl血置于载玻片的中心点即（第四格前缘中点）；接着用干棉球或卫生纸擦净推片角上的血渍；最后用推片的下缘置载玻片的中心点（1～1.5μl血液处），当血液在载玻片与推片之间向两侧扩展至约2cm宽时，使两玻片保持25°～35°角，从右向左迅速推成舌状薄血膜，即（薄血膜涂在第4格前缘至第6格中部）。
如（图1）、（图2）疟原虫镜检涂制血膜方法示意图2薄血膜厚度应以红细胞之间互相接触而不相互重叠为佳，（直观透过玻片能清晰看到报纸上的字）；厚血膜的厚度以一个油镜视野内可见到5～10个白细胞为宜。
二、固定（一）所需器材1、甲醇2、器具玻璃棒、吸管（二）操作步骤薄血膜固定薄血膜晾干后，用玻璃棒沾取或用吸管吸取少量甲醇平铺于薄血膜上，起固定薄血膜作用，（注意不能固定厚血膜）。
疟原虫实验室镜检-课件(1)
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以下照片在一般发热病人血片中是观察不到的
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寄生的红细胞
染色后，寄生的红细胞溶解，轮 廓消失，但有时尚留下一“影子” 或小点。
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实图
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混合感染
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谢谢!
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小于正常红细胞；裂殖子 较小，8～26个，通常8、 18个，排列不规则，疟 色素成团块状，黑褐色
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雌配子体（薄血膜）
间日疟
恶性疟
大于正常红细胞，圆形；核 小．致密，深红色，偏于一 侧，胞浆深蓝色；疟色素散 在
【2017年整理】厚、薄血膜法查疟原虫
厚、薄血膜法查疟原虫基本原理：疟原虫寄生于红细胞，经制片、染色后，显微镜下可以鉴别疟原虫的虫种和虫期。
试剂器材：75%酒精棉球、采血针、载玻片、甲醇、pH7.0~7.2 PBS缓冲液、姬氏染液（或瑞氏染液）、显微镜等。
操作方法：(1)采血：①采血时间在普查时，一般无法考虑采血时间。
在临床上，对现症病人一般可随时采血，但为了提高检出率，就应当考虑采血的适当时间。
对典型发作的间日疟及三日疟患者，应选择发作后数小时至10余小时采血为好。
此时疟原虫发育至环状体乃至大滋养体，虫体大，疟色素已形成，受染红细胞也出现变化，有利于疟原虫的检出。
恶性疟原虫大滋养体和裂殖体是在皮下、脂肪和内脏微血管中发育的，通常在外周血液中不易查到，配子体在环状体出现1周后方能见于外周血液，故在发作时采血。
②采血部位从患者耳垂或指尖（以左手无名指为宜）取血，婴儿通常从大姆趾第二趾骨腹面针刺采血。
③采血方法用75%乙醇棉球消毒取血部位皮肤，待干后用左手拇指和食指捏住采血部位，右手持针迅速刺入皮肤，待血液流出或轻轻挤出血滴，供制作涂片用，采血完毕用干棉球轻压伤口止血。
(2)制片：①薄血膜的制作取1滴血于1张洁净的载玻片上，选1张边缘平整、光滑的载玻片作推片，用左手拇指和中指夹持其两端，将推片的边缘中点与血滴接触，并与载玻片呈30o~45o夹角，待血滴沿推片边缘向两侧展开后，立即由右向左迅速推成薄血膜。
理想的薄血膜要求红细胞均匀地铺成一层，无裂痕，其末端凸出呈舌尖形。
注意：推片时用力和速度要均匀，不能中途停顿或重复推片，以免造成血膜断裂或厚薄不匀。
如取血量多，夹角宜小；取血量小，则夹角可大些。
②厚血膜的制作用推片的一角接触刺血点上的血滴，取血2滴，置载玻片上，并从里向外作旋转涂布，使成直径为0.8cm大小的圆形血膜，厚薄要均匀，然后平置桌上，待自然干燥。
③厚薄血膜同片制作用目测法将载玻片从右到左等分成6格，厚血膜涂在第3格中央，薄血膜涂在第4格前缘至第6格中部，第1、2格可用于贴标签，制作厚、薄血膜方法同上。
疟原虫检验技术(5)
疟原虫检验技术梁平县疾病预防控制中心何曦血涂片检查疟原虫是诊断和鉴定疟原虫种别的主要方法，也是疟疾流行病学调查的重要部分，血涂片制作和染色的好坏足心影响检查的结果，必须把握好“三关”，即制片、染色和镜检。
一、玻片清洁玻片清洁。
清洁的玻片无油脂，无划痕，无灰尘，玻片上有油迹，使厚血膜容易脱落，薄血膜涂布不均匀。
在用手指持玻片时，只能夹持玻片的两侧边缘，不要接触玻片的表面，以避免手指上的油污染污玻片。
1.新的载玻片先用热肥皂水洗涤，再用清水冲洗，然后用软而洁净的毛巾擦干待用。
2.使用过的载玻片的清洁方法有两种：①5%的肥皂水煮沸法：将洗衣肥皂削成小片，加水配成约5%的肥皂水，煮沸后将玻片一张一张地平放进肥皂水内，微火煮约一刻钟，然后灭火待肥皂水稍冷后，用清洁干毛巾擦净后待用。
②清洁液浸泡法：清洁液配制如下：重铬酸钾 80g浓硫酸 100ml水(清净水)1000ml配制时须先将重铬酸钾研细放入水中，慢慢加温到全部溶解为止，然后缓缓加入浓硫酸，待溶液冷却后倒入有盖的大口玻璃缸内。
清洁玻片时，将待洗的玻片逐张放入清洁中浸泡一两天后，取出清水冲洗至完全没有黄色为止。
浸泡前最好用二甲笨除去镜油，清洁液颜色变为墨绿色后即失去清洁作用，不能再用。
二、制片1.薄血膜涂制：(1)先用75%酒精棉球将耳垂消毒，待酒精干后用采血针迅速刺入耳垂近下端边缘处。
(2)用左手的拇指与食指以及右手的中指向相对的方向将耳垂轻轻挤压出血。
(3)取一张洁净的载玻片，将它的左1/3的表面接触耳垂上的血滴（不要将玻片接触耳垂上的皮肤），使一小滴血在玻片上。
血量1-1.5mm3 .1/4.火柴头大小。
(4)将推片臵于血溶之前与血液相接触，待血液沿推片边缘展开后，将推片与载玻片保持30角度，用力均匀迅速将推片由右向左推出而制成薄血膜。
涂制得较好的薄血膜只有一层血球，血球的分布排列比较均匀，血膜的末端突出如舌状。
若取的血滴太大，则涂制的血膜太宽太厚；若推时用力不均匀，则易成梯田状，若用力太大，则血膜两端过厚，若涂片上有油污，则血膜成多孔状。
疟原虫镜检操作流程
疟原虫镜检血片制作与染色操作流程
1．填写登记表在“疟疾发热病人血检登记本”上为患者编号并登记其相关信息。
2．清洁玻片
3．玻片编号
用目测法将玻片分成六等分，左侧第一和等二等份用于编号。
同一患者玻片上号码应与登记本上一致。
4．采血
5．涂制厚片
（1）血量: 4～5微升
（2）位臵：玻片第三等份中央的位臵
（3）血膜大小：0.8～1.0厘米
6．涂制薄血膜
（1）血量: 1～1.5微升
（2）位臵：玻片第四至第六等份的位臵。
涂制薄血膜的血应滴在玻片中央稍偏右的位臵
（3）血膜大小：2.0厘米(宽)×2.5厘米(长)
7．吉氏染色液配制
（1）2%的吉氏染色液配制方法98毫升蒸馏水加入2毫升吉氏原液，混匀后即为2%的吉氏染色液。
也可用1支试管，按1毫升蒸馏水加入1滴吉氏原液的比例稀释染液，混匀后用于染色。
（2）注意事项2%的吉氏染色液必须现配现用。
8．吉氏染色方法
（1）待厚血膜干燥
（2）甲醇固定薄血膜
（3）待甲醇挥发干净
（4）滴2%的吉氏染液覆盖厚薄血膜，染色30分钟。
（5）取出染好的血片，连同染液在清水中轻轻漂洗一遍，洗去表面吸附的杂质。
（6）放臵干燥处晾干。
血膜面朝上，注意不要放反了。
疟原虫检测血涂片镜检法
疟原⾍检测⾎涂⽚镜检法ICS11.020C62WS 中华⼈民共和国卫⽣⾏业标准WS/T 569—2017疟原⾍检测⾎涂⽚镜检法Microscopic examination of blood films for malaria parasites2017-08-01发布2018-02-01实施前⾔本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。
本标准起草单位：海南省疾病预防控制中⼼、江苏省寄⽣⾍病防治研究所、中国疾病预防控制中⼼寄⽣⾍病预防控制所、云南省寄⽣⾍病防治所、海南省农垦总局医院。
本标准主要起草⼈：王善青、⾼琪、汤林华、杨恒林、郑彬、胡锡敏、王光泽、李⾬春、刘莹、欧阳范献。
疟原⾍检测⾎涂⽚镜检法1 范围本标准规定了⾎涂⽚镜检法检测疟原⾍的技术规范。
本标准适⽤于各级疾病预防控制机构和医疗机构对疟原⾍的显微镜检测。
2 术语和定义下列术语和定义适⽤于本⽂件。
2.1疟原⾍Plasmodium spp疟原⾍是⼀类单细胞、寄⽣性的真核动物，是疟疾（malaria）的病原体。
寄⽣于⼈体的疟原⾍主要有恶性疟原⾍（Plasmodium falciparum）、间⽇疟原⾍（Plasmodium vivax）、三⽇疟原⾍（Plasmodium malariae）和卵形疟原⾍（Plasmodium ovale）等。
2.2⾎涂⽚ blood films将⾎液涂制于载玻⽚上制成的涂⽚。
供显微镜疟原⾍检查⽤的⾎涂⽚包括厚⾎膜涂⽚和薄⾎膜涂⽚两种。
3 仪器和器材3.1 ⽣物显微镜（100×油浸物镜、5×或10×⽬镜）。
3.2 计数器。
3.3 载玻⽚（⽆划痕⽆油污的洁净载玻⽚）。
3.4 推⽚。
3.5 ⾎⽚染⾊架。
3.6 ⾎⽚⼲燥架。
3.7 玻⽚盒。
3.8 染⾊盘和染⾊缸。
4 试剂和材料4.1 吉⽒染⾊原液。
4.2 pH7.2磷酸盐缓冲液（PBS）。
4.3 甲醇（分析纯）。
4.4 ⾹柏油或专⽤浸油（折射率≥1.5）。
疟原虫检测标准操作程序
疟原虫检测标准操作程序疟原虫检测操作程序1.目的与原理1.1 目的：检查血液中是否有疟原虫。
1.2 原理：瑞氏染色原理。
瑞氏染料中含有美蓝和XXX两种染料，前者为碱性，后者为酸性。
它们与细胞内的各种物质具有不同的亲和力，使其显现出不同的色调，以便于辨认。
根据瑞氏染色的酸碱物质染色性不同，可将疟原虫各期的形态进行清楚染色，便于观察。
高倍镜下一般可以观察到各种类型的疟原虫（如间日疟、三日疟、恶性疟），以及疟原虫的各期，如环状体（早期滋养体）、晚期滋养体、裂殖体、配子体等。
2.样本收集和贮存2.1 原始样本：全血。
2.2 标本类型：EDTA抗凝血2ml。
标本的采集应使用标准一次性采血管，充分混匀，勿震荡。
2.3 保存条件：EDTA抗凝血尽快即时检测。
2.4 病人要求：必须在发烧时采血。
3.试剂3.1 瑞氏染液：3.1.1 试剂成分：瑞氏染料1.0g、无水甲醇500ml、甘油10ml。
3.1.2 配制方法：将瑞氏染料称量好后，放在乳钵中加少量无水甲醇匀速研磨至溶解。
将研磨好的染液倾倒入试剂储存瓶中，倒入无水甲醇继续研磨，反复多次，直至乳钵中无瑞氏染料沉淀为止。
配制好的染液放在37℃24小时后方可使用，放在阴凉干燥处，避光保存。
3.2 磷酸盐缓冲液PH6.4：3.2.1 脱水Na2HPO4 1份：处理方法将Na2HPO4于蒸发皿上干燥（火燃烘烤）成粉末称量。
3.2.2 无水KH2PO4 2.6份：将脱水Na2HPO4 1份和无水KH2PO4 2.6份充分混合，边研磨边混匀。
3.2.3 将上述粉末1g加溶解于500ml去离子水中，混合均匀，方可使用。
3.3 器材：载玻片、加样枪、吸头、推片器。
4.仪器显微镜OLYMPUS型号：CX21.4.1 开机前检查4.1.1 OLYMPUS显微镜：检查显微镜光路系统，目镜、物镜镜头正常，聚光器、光圈、螺旋、微螺旋调节正常。
4.2 日常维护：每日清理纤维镜表面，保持显微镜光圈、聚光器干净整洁。
疟原虫的镜检技术-制片染色
利用特异性抗体对疟原虫进行染色， 提高疟原虫的染色效果和特异性。
人工智能在疟原虫镜检中的应用
图像识别与分类
利用人工智能技术对显微镜下的疟原虫图像进行自动识别、分类和计数，提高镜 检的准确性和效率。
数据挖掘与分析
通过人工智能技术对疟原虫镜检数据进行分析和挖掘，发现数据间的关联和规律 ，为疟疾防控提供科学依据。
固定涂片时要选用适当的 固定剂，避免涂片脱落。
染色时要选用适当的染色 剂，按照染色剂的要求进 行操作，确保染色效果良 好。
镜检时要仔细观察疟原虫 的结构特征，避免误诊和 漏诊。
冲洗时要彻底去除多余的 染料和杂质，避免干扰观 察。
03
疟原虫镜检制片染色技 术
疟原虫镜检制片染色技术的原理
原理概述
疟原虫镜检制片染色技术是一种 用于检测疟原虫的病理学方法。 通过制备血液涂片，并对其进行 染色，可以观察到疟原虫的存在
疟原虫镜检技术的应用场景
在疟疾流行地区，疟原虫镜检技 术常用于对疑似疟疾患者进行快
速诊断，以指导治疗和防控。
在实验室研究中，疟原虫镜检技 术可用于研究疟原虫的生物学特 性、药物敏感性以及疫苗开发等
方面。
在公共卫生领域，该技术也可用 于监测和评估疟疾的流行趋势和
传播风险。
02
制片染色技术
制片染色技术的原理
疟原虫的镜检技术-制 片染色
目 录
• 疟原虫镜检技术简介 • 制片染色技术 • 疟原虫镜检制片染色技术 • 疟原虫镜检制片染色技术的发展趋势
01
疟原虫镜检技术简介
疟原虫镜检技术的定义
01
疟原虫镜检技术是指通过显微镜 观察疟原虫在人体内的形态、结 构和生长过程，从而对疟疾进行 诊断和研究的实验技术。
疟原虫镜检技术
•
甘油
3ml
•
纯甲醇
97 ml
• 将瑞氏染剂粉置于研钵内，加入甘油
充分研磨后，然后加入少量甲醇碾磨后倒 入有玻塞瓶中，再分次用甲醇冲洗碾钵中 的瑞氏染粉甘油液，倒入瓶中，直至洗完。 充分摇匀，一般放置一二星期后，再过滤
应用（保存时间愈久，染色力愈佳）。
• 急用时，放置24小时后过滤也可使用。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
（2）缓冲液的配制
PH M/15 Na2HPO4 M/15 KH2PO4
(ml)
( ml)
DW (ml)
6.8
49
51
900
7.0
63
37
900
7.1
68
32
900
7.2
73
27
900
7.4
81
19
900
• 加缓冲液的PH可用试纸或0.02%酚红液测定。
• 亦可用PH7.0中性蒸馏水稀释染剂
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
可用井水、河水、泉水或雨水。为了使血膜着色较好。
• （1）两种贮备液的配制：
• 贮备液I • •
1/15M磷酸氢二钠（Na2HPO4）溶液
Na2HPO4 9.5 g 蒸馏水 1000 ml
• 贮备液Ⅱ 1/15M磷酸二氢钾 （KH2PO4 ）溶液
•
KH2PO4 9.07 g
•
蒸馏水 1000 ml
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
一、显微镜镜检用于疟疾诊断
• 显微镜镜检仍是目前广泛应用的疟疾诊断
技术(金标准）
• 主要优点
- 特异高 - 能区分虫种 - 能分期 - 能计数 - 1小时内能完成诊断程序
疟原虫镜检技术
细胞计数(国际标准) 。
白细胞疟原虫计数法
●例如 计数200 WBC中有35个疟原虫，在不知患
者白细胞数的情况下，以每微升血8 000个白细 胞计数, 由此计算出每微升血液疟原虫密度为： 35（计数的疟原虫数）÷200（计数的白细胞）x 8000（每微升血白细胞数） =1400 / μl 答：该患者的疟原虫密度为1400 / μl。
2. 原虫细胞浆呈条带状或方形
3. 成熟裂殖体呈菊花状 4. 裂殖子数通常为6-12个 5. 齐氏点（西门氏点）较少见
卵形疟原虫形态特征
1. 被寄生红细胞正常大小或略涨大，边 缘呈彗星状也称齿轮状 2. 疟原虫通常呈椭圆形 3. 薛氏点与间日疟相似
4. 裂殖子数通常为6-12
● 四种人体疟原虫都有双核和多重感染现象
red cell
A typical Plasmodium malariae presentation
Female patient, arrived from Brazil two weeks previously. Flu like symptoms since arrival.
● 间日疟原虫分布于我国大部分地区, 中部 地区病例较多 ● 病程良性, 有复发
三日疟 P.malariae
●遍及热带和亚热带地区，特别是东、西非洲，呈片状、 块状分布 ●三日疟在我国非常少见，只在南方有散在报告
卵形疟 （蛋形疟） P.ovale
● 主要分布非洲。缅甸、东南亚有散在报告 ● 在我国卵形疟消灭
P. ovale
(P.m.)
(P.o.)
恶性疟 P.falciparum
● 分布热带、亚热带地区，是非洲的重要疾病 ● 我国流行区域为云南省和海南省 ● 四种疟原虫中致病力最强，无免疫力者 感染 后出现急性症状,不及时治疗可危及生命（脑 型疟）
疟原虫的镜检技术-制片染色
注意：蛋白质和氨基酸都是两性电解质，要求染 液的pH值7.0-7.2较好。 染液偏酸时，所带的正电荷增加，易于伊红结合， 使红细胞和疟原虫的核染成鲜红色，而淋巴细胞 和原虫的胞浆着色较差；反之，当染液偏碱时， 红细胞和嗜伊红白细胞的颗粒等被染成紫蓝色， 不易观察。
姬氏染液的染色方法
血片干燥后,先用甲醇或无水酒精固定薄血膜（瑞氏不需固定）, 再用清水对厚血膜溶脱血红蛋白(新制作的也可直接染色)，然后 再进行染色。 成批血片染色：将已用甲醇固定薄血膜的血片插入染色缸，倒入 3%姬氏染液稀释液（3毫升姬氏原液加缓冲液或蒸馏水97毫升， 混匀）浸没血片，同时对厚薄血膜染色30-40min（根据当地实际 情况，酌情增减染色时间），然后用清水轻轻将染液漂洗干净， 将血片标本（血膜面朝下）插于晾干板上晾干，包装，镜检。 单张血片染色：将处理好的血膜，加姬氏母液2-3滴，加缓冲液 或蒸馏水1ml，混合均匀，染色15-20分钟左右，然后用清水轻轻 将片上的染液冲洗干净，晾干镜检。（勿直接倾倒掉玻片上的染 液，防止渣滓附着在玻片上冲不掉影响镜检） 较理想的染色结果是红细胞为淡红或淡紫红色，疟原虫的胞质呈 蓝色，核为紫红色，疟色素为棕褐色。
染液的种类
疟原虫的染色，目前临床上应用最广泛的是瑞氏 （Wright stain）和姬氏染液（Giemsa stain）。 这些染液中的主要染剂都包含美蓝、伊红和由美 蓝氧化所成的天青，所以称多色性染剂。 我们主要用姬氏染液，它具有方便，染色效果稳 定，便于长期保存的优点。瑞氏染色，染色时间 短，但染色效果不如姬氏稳定，主要在门诊量大 的门诊实验室使用。
染液的染色原理
是染料与被染物的阴阳离子互相吸附而结合的一 种化学反应。 红、白细胞和疟原虫所含蛋白质的氨基酸电离出 的阴阳离子与酸碱染料伊红、美蓝有色集团所带 的阴阳离子相互结合便被染上不同的颜色。 疟原虫和白细胞的胞浆被染成蓝色，红细胞、疟 原虫和白细胞核被染成紫红色。
疟原虫镜检技术培训手册
目录第一章疟原虫生活史一、概述二、人体内发育三、蚊体内的发育第二章疟原虫镜下形态一、薄血膜中疟原虫形态二、厚血膜中疟原虫形态第三章显微镜使用及维护一、显微镜的构造二、显微镜使用三、使用注意事项四、显微镜的维护保养第四章血片制作与染色一、血片制作二、血膜的染色第五章疟原虫镜检技术一、血液二、血液中各种正常细胞形态三、薄血膜镜检四、厚血膜镜检五、杂质与疟原虫的鉴别六、疟原虫计数附录：疟原虫图谱第一章疟原虫生活史一、概述疟原虫是疟疾的病原体。
疟原虫为单细胞真核生物，属原生动物亚界顶端复合物门、孢子纲、真球虫目、疟原虫科、疟原虫属。
人体疟原虫有4种：间日疟原虫（Plasmodium vivax）、恶性疟原虫(P.falciparum)、三日疟原虫(P.malariae)和卵形疟原虫(P.ovale)，依次引起间日疟、恶性疟、三日疟和卵形疟。
在我国间日疟较常见，恶性疟次之，但对人体危害较间日疟严重，三日疟偶尔发现，卵形疟已无病例报告。
4种人体疟原虫的生物学特征见表1-1。
疟原虫的发育和繁殖，必须通过脊椎动物与昆虫媒介两个宿主，人体疟原虫的宿主是人和按蚊。
疟原虫在人体分别寄生于肝实质细胞和血液中的红细胞内，在蚊体内则寄生于蚊胃，最后积聚于唾腺。
4种人体疟原虫的生活史基本相同，包括在人体内的红细胞外期和红细胞内期以及在蚊体内的配子生殖和孢子增殖两个阶段。
二、人体内发育疟原虫在人体内的发育分成肝细胞内的发育和红细胞内的发育两个阶段。
（一）红细胞外期按蚊吸人血时，按蚊唾腺中的子孢子随唾液进入人体的末梢血液中，在30分钟内，随血流进入肝脏，在肝实质细胞内发育，进行裂体增殖，此时期称红细胞外期（简称红外期）或肝细胞期（简称肝期），此时期的疟原虫称肝期裂殖体。
成熟肝期裂殖体直径为45～60 m，内含数以万计的肝期裂殖子。
肝期裂殖体成熟致使肝细胞破裂，肝期裂殖子释入血液。
不同种疟原虫的此期所需时间不同，从6～12天不等。
疟原虫镜检规章制度
疟原虫镜检规章制度第一章总则第一条为规范疟原虫镜检工作，提高疟疾诊断准确率，保障患者健康，特制定本规章制度。
第二条本规章制度适用于医疗机构、检验检测机构开展疟原虫镜检工作。
第三条疟原虫镜检应遵守相关法律法规和相关标准，确保检测结果准确可靠。
第四条医疗机构和检验检测机构应建立健全疟原虫镜检管理制度，保证检测人员熟练掌握检测技术。
第五条疟原虫镜检工作应当严格遵守检验检测质量管理规范，确保检测结果准确。
第六条医疗机构和检验检测机构应当配备专业的技术人员从事疟原虫镜检工作。
第七条疟原虫镜检工作应当遵循“安全、准确、迅速”的原则，保证检测工作质量和效率。
第八条医疗机构和检验检测机构应当建立健全疟原虫镜检的质量控制和质量保证体系，确保检测结果可靠。
第二章疟原虫镜检设备和耗材第九条医疗机构和检验检测机构应当购置标准符合要求的疟原虫镜检设备，并定期维护和保养设备。
第十条医疗机构和检验检测机构应当使用符合要求的疟原虫镜检耗材，保证检测过程的质量和准确性。
第十一条疟原虫镜检设备和耗材应当定期检测和校准，确保检测结果准确可靠。
第三章疟原虫镜检人员第十二条从事疟原虫镜检工作的人员应具有相应的专业技能和执业资格，熟练掌握检测技术。
第十三条疟原虫镜检人员应当遵守相关法律法规和相关标准，保证检测结果的准确性和可靠性。
第十四条疟原虫镜检人员应当接受规范的培训，不断提升自身的专业水平和技能。
第十五条疟原虫镜检人员应当定期进行健康体检，确保身体健康，保障检测工作的顺利进行。
第四章疟原虫镜检流程第十六条疟原虫镜检工作应当遵循严格的操作流程，确保检测过程准确无误。
第十七条疟原虫镜检工作应当按照标准操作规程进行，规范操作步骤，确保检测结果的可靠性。
第十八条疟原虫镜检的检测和分析过程应当记录详细，以备查证。
第十九条疟原虫镜检工作完成后应及时整理和归档相关资料，保证检测结果能够有效利用。
第五章疟原虫镜检质量控制第二十条医疗机构和检验检测机构应当建立健全疟原虫镜检的质量控制和质量保证体系，加强对检测工作的监督和管理。
疟原虫的镜检技术
正确使用显微镜步骤
01
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将载玻片放在载物台上， 用压片夹固定。
转动转换器，将低倍物镜 对准通光孔。
调节光圈和反光镜，使视 野亮度适宜。
转动粗准焦螺旋，使镜筒 缓缓下降，直到物镜接近 载玻片。
一只眼注视目镜内，同时 逆时针方向转动粗准焦螺 旋，使镜筒缓缓上升，直 到看清物像为止。再略微 转动细准焦螺旋，使看到 的物像更加清晰。
结果判断失误
应结合临床症状和其他检查结果进 行综合判断，避免误诊或漏诊。
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镜检技术在疟疾防控中应用前景
提高镜检技术准确性和效率
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改进显微镜设备
采用高分辨率、高对比度 的显微镜，提高疟原虫检 测的准确性。
优化镜检流程
建立标准化的镜检操作流 程，减少人为因素对结果 的影响，提高检测效率。
05
常见误区及问题解决方法
涂片制作中常见问题
涂片过厚或过薄
染色时间不足或过长
应掌握适当的涂片厚度，过厚会影响 观察，过薄则可能漏检。
应严格控制染色时间，确保疟原虫着 色清晰。
血液未充分干燥
涂片后应等待血液完全干燥，否则在 染色过程中可能导致颜色不均匀。
观察过程中常见问题
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Hale Waihona Puke 0103显微镜使用不当
100%
流行病学调查
通过对人群进行疟原虫检测，可 以了解疟疾的分布情况、流行趋 势和传播途径等信息，为制定防 治策略提供依据。
80%
药物疗效评价
在治疗过程中进行疟原虫检测， 可以观察药物的疗效和患者的恢 复情况，及时调整治疗方案。
02
镜检技术原理及方法
疟疾镜检程序
疟疾防治镜检程序各级医院、卫生院等医疗机构临床诊断为疟疾、疑似疟疾、不明原因的发热病人应进行疟原虫血片镜检，及时发现疟疾病人，并以带虫发病率评价流行动态和评价消除疟疾工作的真实性。
镜检工作程序：1.采血对象：临床诊断为疟疾、疑似疟疾和不明原因的发热病人(简称三热病人)。
2.化验单：临床医师开具化验单，嘱咐患者到化验室血检。
3.记：镜检人员对血检对象按照登记本要求进行登记。
4.血消毒部位：用75％乙醇对采血部位消毒，采血部位多在手指末端，也可在耳垂采血。
5.血方法：消毒部位待干后，以左手拇指和食指夹住被检者手指尖稍下方或轻轻捻转耳垂边缘，右手持一次性消毒针，迅速刺入取血部位1～2mm，然后用左手大拇指，食指和右手中指协同挤出血滴。
6.血膜制作：取清洗过的玻片2张，1张做载片，1张做推片，要求推片的一侧边缘光滑，用右手大拇指和食指夹持推片中部，用推片的左下角刮取血液4～5μL，再用该端中部刮取血液1～1.5μL.将左下角的血液涂于载片的中央偏右，由里向外划圈涂成直径为0.8cm的圆形厚血膜（厚血膜的厚度以一个油镜视野内可见到5～10个白细胞为宜）。
用干棉球抹净角上的血渍，然后将推片下缘平抵载玻片的中线，当血液在载玻片与推片之间向两侧扩展至约2cm宽时，使两玻片保持25°角，从右向左迅速向前推成舌状薄血膜。
推制时速度要均匀，血滴大小，推片与载片之间夹角大小以及推片速度快慢等都可影响血膜的厚薄。
制成的薄血膜应在玻片上形成一层平铺的血细胞，细胞之间相互接触而不相互重叠。
（1）厚薄血膜的位置形状和大小将玻片划成三等分，厚血膜应位于靠右侧处，薄血膜从中间起至左格中部止。
右端空格供记录姓名、编号或贴标签。
（2）厚血膜血量为5立方毫米左右（一小滴），自内向外回转扩大，涂成直径0.8-1.0厘米大小，厚薄均匀血膜。
（3）薄血膜薄血膜血量只需1.5-1.0立方毫米左右（约半颗粒大小），涂成舌状，长约3厘米，宽约2厘米。
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疟原虫镜检操作规程
1.标本采集
1.1标本采集前病人的准备：间日疟及三日疟患者应在发作后数小时至10余小时采血；恶性疟患者，应在发作后20小时左右采血。
1.2标本种类：全血或末梢血。
1.3标本要求：厚血片溶血要及时。
2．标本运送：室温运送。
3．标本拒收标准：被细菌污染。
4．操作步骤
4.1 薄血片法：
4.1.1在洁净玻片上，滴血液标本1滴，以常法推制成薄片。
4.1.2 血膜完全干燥后即可用瑞氏法染色，干后用油镜镜检。
4.2厚血片法：
4.2.1在洁净玻片上，滴血液标本2滴。
4.2.2用推片将血液由内向外转涂成直径约1cm、厚薄均匀的血膜，在室温中自然干燥。
4.2.3 在干燥的血膜上滴加蒸馏水数滴，完全覆盖血膜，溶血约5分钟后倾去溶血液。
4.2.4 不必待干，进行瑞氏染色，干后镜检。
5．结果判断
在油镜下观察，薄片须至少100个视野，厚血片至少20个视野，才能报告“未见疟原虫”；发现虫体后还应在薄血片上进行分类鉴别。
疟原虫胶体金法简易操作步骤
原理
基于双抗体夹心法工作原理，检测时，滴加5μL全血样本于试剂卡加样孔处，随之滴加4滴裂解液，裂解后的样本在毛细管效应下向上层析。
如样本中含有恶性疟原虫特异性乳酸脱氢酶（pflDH）和疟原虫乳酸脱氢酶（panLDH），将于胶体金标记物panLDH单克隆抗体反应形成复合物，在层析作用下前移，被预先固定在硝酸纤维膜上检测区的pflDH/panLDH单克隆抗体捕获，在检测区内形成1条/2条红色反应线，此时为阳性结果，如样本中无pflDH/panLDH抗原，在检测区内无红色反应线，此时为阴性反应。
步骤
1.无菌采集患者EDTA-2K抗凝静脉血2ml。
1.沿锡箔袋切口，撕开锡箔纸，取出疟原虫抗原检测卡，用铅笔或水写笔编号
并做好登记。
2.吸取5μL全血样本垂直滴加于加样孔A区，同时滴加4滴裂解液于加样孔B
区。
3.15分钟内观察显示结果，超过30分钟无临床意义。
结果。