(必备)第五代HIV抗体试剂临床应用
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n 无症状期：可从急性期进入此期，或无明显的急性期症状而直接 进入此期。持续时间一般为6～8年。
n 艾滋病期：为感染HIV后的最终阶段。患者CD4+T淋巴细胞计数多 <200个/μl，HIV血浆病毒载量明显升高。此期主要临床表现为 HIV相关症状、体征及各种机会性感染和肿瘤。
初筛常用检测方法
u 酶联免疫吸附试验（ELISA） u 化学发光或免疫荧光试验（CIA/IFA） u 快速检测（RT）及其它试验
临床表现与分期
n 急性期：通常发生在初次感染后2～4周。部分感染者出现HIV病毒 血症和免疫系统急性伤的临床表现。大多患者临床症状轻微，持 续1～3周后缓解。临床表现以发热最常见，可伴有咽痛、盗汗、 恶心、呕吐、腹泻、皮疹、关节疼痛、淋巴结肿大及神经系统症 状。此期在血液中可检出RNA和p24抗原，而HIV抗体则在感染后2 周左右出现。
第五代HIV抗体试剂临床应用
宋淑静
HIV抗体检测技术的发展
试剂 第一代 第二代 第三代
第四代
Yea 19 19 19 19 20
Gerne 85 87 91 97 15
ratio 1st 2nd 3rd 4th 5th
n
特点
病毒裂解粗提物作为包被抗原
比较灵敏，但特异性较差。只能检测lgG
重组蛋白和合成肽段作为抗原。
HIV抗体检测
实验开始前准备工作 n 酶标板、稀释液等需要一定的室温平衡时间，所以
一定要在上机前提前从冰箱中取出
HIV抗体检测
加样环节 n 仪器加样：要选择一次性吸头，不要用钢针加样；
样本离心时间要充分，离心后要观察是否还有凝块， 及时处理，以免引起加样误差导致的假阴性。 n 手工加样
HIV抗体检测
第五代 在第四代Leabharlann Baidu势基础上，进一步区分是抗体还是抗原阳性。
Future Microbiol. 2009, 4(8):963-82.
HIV感染进程及相关标志物
艾滋病实验室检测依据
n 所有艾滋病检测实验室按照《全国艾滋病检测工作 管理办法（2006年）》、《全国艾滋病检测技术规 范（2015年修订版）》和《艾滋病和艾滋病病毒感 染诊断标准WS293-2019》要求开展检测工作。
n 样品可采用血清、血浆、全血、滤纸干血斑、口 腔黏膜渗出液和尿液。
生物安全
n HIV病毒属第二类病原微生物，是高致病性病原微生 物，所以相关检测应在符合Ⅱ级生物安全实验室进 行。要做好实验人员的个人防护，要经常对试验区 域进行消毒处理，一旦发生职业暴露应按照相关流 程进行处理。
窗口期
n 从HIV感染人体到感染者血清中的HIV抗体、抗原或核 酸等感染标志物能被检测出之前的时期。感染者体内 的HIV数量会在这时达到一个峰值，传染性极强。急性 感染期也出现在这段时间。但在各感染期都可能会传 播艾滋病毒。窗口期内的血液已有感染性，现有检测 技术检测HIV抗体、抗原和核酸的窗口期分别为感染后 的3周、2周和1周左右。
温育条件 n 如果加样后温育时采用水浴法，注意水面不要没过
酶标板，酶标板不能叠放，以免温度不均，放置酶 标板前应将温度提前调至实验所需温度，以免温育 时间不够，封板用的膜不能反复使用。
HIV抗体检测
洗板问题 n 洗板时洗板次数、浸泡时间及洗液量要完全按照说
明书要求设定，另外，要经常通一下洗板机的吸液 孔，以防被洗液中的结晶或是标本中的纤维蛋白丝 堵塞，确保洗板时所有洗液孔和吸液孔工作状态正 常，否则由于洗板不干净可能造成假阳性结果。
断该批临床样品检测的可信性。室内质控品可以购 买或实验室自行制备。每次试验必须包含质控品， 出现失控时，必须重新试验。 u 绘制质控图
质量控制规则
u 警告（12S）:当外部质控品的S/CO值超出×±2S范 围时，系统处于告警状态，应予注意，是否可以继 续检测需要进一步观察。
u 失控（13S）:当外部质控品的S/CO值超出×±3S范 围时，系统处于失控状态，本次实验结果不能接受 ，可能是系统误差、随机误差或外部质控品稳定性 下降所致。
开展HIV抗体检测需具备条件
n 经省级卫生行政部门批准 n 具有专门的实验室，并且要把清洁区和污染区分开 n 具有2名以上检验人员，且必须经过国家级或省级培
训合格 n 具备必须的仪器设备，如酶标仪(发光仪）、洗板机、
冰箱、移液器等
试剂和样品
n 必须是经国家食品药品监督管理总局注册批准、 在有效期内的试剂。推荐使用临床质量评估敏感 性和特异性高的方法及试剂。
室间质评
n 质量控制是临床检验的最重要的环节，所以除了每天 做好室内质控外，还要参加卫生部临床检验中心以及 CDC的室间质量评价活动
快速检测试剂
n 与ELISA和发光法相比，快速法所需时间短，一般半小 时内即可报告结果，快速检测试剂敏感性和特异性均 低于酶联免疫试验试剂，仅用于某些特定条件下。对 于酶联免疫试验中吸光度值较低的感染者可能用快速 条很难判断结果，容易漏检。另外由于其特异性低于 酶联免疫试验，所以临床检测中也存在快速检测阳性， 而酶联免疫试验阴性的结果，造成了受检者不必要的 恐慌。
质量控制
u 试剂盒内部对照 试剂盒内部提供的阳性和阴性对照，用于判断每次 实验的有效性，不能作为室内质控品使用，每一次 检测临床样本时，必须有试剂盒内部对照，而且只 能在同批号的试剂盒中使用，如内部对照结果无效 ，必须重新试验。
质量控制
u 室内质控品(外部对照) u 质控品定值必须为弱阳性。外部质控品的作用是判
灵敏度和特异性提高。只能检测IgG
重组蛋白和合成肽段作为抗原，同时，酶标同样的抗原，“双抗 原夹心”
灵敏度和特异性进一步提高。可同时检测IgG和IgM
在第三代试剂基础上，增加了针对检测p24抗原的单克隆抗体，增 加了感染早期（即HIV血清转换期）的检测灵敏度。同时检测IgM、 IgG抗体和p24抗原
HIV抗体检测
试剂盒本身的问题 n 最好选用经国家药品监督管理局批准或注册， 以及中国药品生物制品检定所批批检合格，国 家艾滋病预防与控制中心参比实验室评估质量 优良的试剂。 n 要注意所用试剂盒的效期，一定要使用有效期 内的产品。 n 在效期内的试剂盒要注意批号，因为不同批号 的试剂盒中有一些试剂是不能混用的。
n 艾滋病期：为感染HIV后的最终阶段。患者CD4+T淋巴细胞计数多 <200个/μl，HIV血浆病毒载量明显升高。此期主要临床表现为 HIV相关症状、体征及各种机会性感染和肿瘤。
初筛常用检测方法
u 酶联免疫吸附试验（ELISA） u 化学发光或免疫荧光试验（CIA/IFA） u 快速检测（RT）及其它试验
临床表现与分期
n 急性期：通常发生在初次感染后2～4周。部分感染者出现HIV病毒 血症和免疫系统急性伤的临床表现。大多患者临床症状轻微，持 续1～3周后缓解。临床表现以发热最常见，可伴有咽痛、盗汗、 恶心、呕吐、腹泻、皮疹、关节疼痛、淋巴结肿大及神经系统症 状。此期在血液中可检出RNA和p24抗原，而HIV抗体则在感染后2 周左右出现。
第五代HIV抗体试剂临床应用
宋淑静
HIV抗体检测技术的发展
试剂 第一代 第二代 第三代
第四代
Yea 19 19 19 19 20
Gerne 85 87 91 97 15
ratio 1st 2nd 3rd 4th 5th
n
特点
病毒裂解粗提物作为包被抗原
比较灵敏，但特异性较差。只能检测lgG
重组蛋白和合成肽段作为抗原。
HIV抗体检测
实验开始前准备工作 n 酶标板、稀释液等需要一定的室温平衡时间，所以
一定要在上机前提前从冰箱中取出
HIV抗体检测
加样环节 n 仪器加样：要选择一次性吸头，不要用钢针加样；
样本离心时间要充分，离心后要观察是否还有凝块， 及时处理，以免引起加样误差导致的假阴性。 n 手工加样
HIV抗体检测
第五代 在第四代Leabharlann Baidu势基础上，进一步区分是抗体还是抗原阳性。
Future Microbiol. 2009, 4(8):963-82.
HIV感染进程及相关标志物
艾滋病实验室检测依据
n 所有艾滋病检测实验室按照《全国艾滋病检测工作 管理办法（2006年）》、《全国艾滋病检测技术规 范（2015年修订版）》和《艾滋病和艾滋病病毒感 染诊断标准WS293-2019》要求开展检测工作。
n 样品可采用血清、血浆、全血、滤纸干血斑、口 腔黏膜渗出液和尿液。
生物安全
n HIV病毒属第二类病原微生物，是高致病性病原微生 物，所以相关检测应在符合Ⅱ级生物安全实验室进 行。要做好实验人员的个人防护，要经常对试验区 域进行消毒处理，一旦发生职业暴露应按照相关流 程进行处理。
窗口期
n 从HIV感染人体到感染者血清中的HIV抗体、抗原或核 酸等感染标志物能被检测出之前的时期。感染者体内 的HIV数量会在这时达到一个峰值，传染性极强。急性 感染期也出现在这段时间。但在各感染期都可能会传 播艾滋病毒。窗口期内的血液已有感染性，现有检测 技术检测HIV抗体、抗原和核酸的窗口期分别为感染后 的3周、2周和1周左右。
温育条件 n 如果加样后温育时采用水浴法，注意水面不要没过
酶标板，酶标板不能叠放，以免温度不均，放置酶 标板前应将温度提前调至实验所需温度，以免温育 时间不够，封板用的膜不能反复使用。
HIV抗体检测
洗板问题 n 洗板时洗板次数、浸泡时间及洗液量要完全按照说
明书要求设定，另外，要经常通一下洗板机的吸液 孔，以防被洗液中的结晶或是标本中的纤维蛋白丝 堵塞，确保洗板时所有洗液孔和吸液孔工作状态正 常，否则由于洗板不干净可能造成假阳性结果。
断该批临床样品检测的可信性。室内质控品可以购 买或实验室自行制备。每次试验必须包含质控品， 出现失控时，必须重新试验。 u 绘制质控图
质量控制规则
u 警告（12S）:当外部质控品的S/CO值超出×±2S范 围时，系统处于告警状态，应予注意，是否可以继 续检测需要进一步观察。
u 失控（13S）:当外部质控品的S/CO值超出×±3S范 围时，系统处于失控状态，本次实验结果不能接受 ，可能是系统误差、随机误差或外部质控品稳定性 下降所致。
开展HIV抗体检测需具备条件
n 经省级卫生行政部门批准 n 具有专门的实验室，并且要把清洁区和污染区分开 n 具有2名以上检验人员，且必须经过国家级或省级培
训合格 n 具备必须的仪器设备，如酶标仪(发光仪）、洗板机、
冰箱、移液器等
试剂和样品
n 必须是经国家食品药品监督管理总局注册批准、 在有效期内的试剂。推荐使用临床质量评估敏感 性和特异性高的方法及试剂。
室间质评
n 质量控制是临床检验的最重要的环节，所以除了每天 做好室内质控外，还要参加卫生部临床检验中心以及 CDC的室间质量评价活动
快速检测试剂
n 与ELISA和发光法相比，快速法所需时间短，一般半小 时内即可报告结果，快速检测试剂敏感性和特异性均 低于酶联免疫试验试剂，仅用于某些特定条件下。对 于酶联免疫试验中吸光度值较低的感染者可能用快速 条很难判断结果，容易漏检。另外由于其特异性低于 酶联免疫试验，所以临床检测中也存在快速检测阳性， 而酶联免疫试验阴性的结果，造成了受检者不必要的 恐慌。
质量控制
u 试剂盒内部对照 试剂盒内部提供的阳性和阴性对照，用于判断每次 实验的有效性，不能作为室内质控品使用，每一次 检测临床样本时，必须有试剂盒内部对照，而且只 能在同批号的试剂盒中使用，如内部对照结果无效 ，必须重新试验。
质量控制
u 室内质控品(外部对照) u 质控品定值必须为弱阳性。外部质控品的作用是判
灵敏度和特异性提高。只能检测IgG
重组蛋白和合成肽段作为抗原，同时，酶标同样的抗原，“双抗 原夹心”
灵敏度和特异性进一步提高。可同时检测IgG和IgM
在第三代试剂基础上，增加了针对检测p24抗原的单克隆抗体，增 加了感染早期（即HIV血清转换期）的检测灵敏度。同时检测IgM、 IgG抗体和p24抗原
HIV抗体检测
试剂盒本身的问题 n 最好选用经国家药品监督管理局批准或注册， 以及中国药品生物制品检定所批批检合格，国 家艾滋病预防与控制中心参比实验室评估质量 优良的试剂。 n 要注意所用试剂盒的效期，一定要使用有效期 内的产品。 n 在效期内的试剂盒要注意批号，因为不同批号 的试剂盒中有一些试剂是不能混用的。