HPLC操作规程和注意事项

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简述安捷伦高效液相色谱仪的操作流程和注意事项

简述安捷伦高效液相色谱仪的操作流程和注意事项
安捷伦高效液相色谱仪（Agilent HPLC）是一种常用的分析仪器，广泛应用于化学、生物、环境等领域。

其操作流程和注意事项如下：
操作流程：
1. 准备样品溶液：根据分析目的选择适当的溶剂，将样品溶解或稀释至所需浓度。

2. 准备色谱柱：根据分析需求选择合适的色谱柱，并按照柱床规定的要求进行预处理，如洗涤、调pH等。

3. 连接系统：将色谱柱安装在仪器上，连接好进样器、泵、检测器和废液收集器等组件，确保连接紧密无漏。

4. 设置方法参数：根据分析需求，设置泵的流速、进样器的进样量、检测器的波长和灵敏度等方法参数。

5. 系统平衡：启动泵和检测器，运行空白试验，确保色谱柱和系统内部达到平衡状态。

6. 样品进样：将样品进样器插入样品瓶中，抽取足够的样品并注入进样器，按下进样按钮进行进样。

7. 进行分离：启动泵，使流动相通过柱床，样品分离过程中不断采集检测器的信号。

8. 数据处理：分析和处理检测器输出的信号，得出对应的峰面积、峰高度等结果，进行数据分析和解释。

注意事项：
- 严格按照使用手册和方法要求操作仪器，遵循操作规程，避免误操作和事故发生。

- 确保色谱柱、进样器及连接部分的密封性良好，防止泄漏和污染。

- 选择适当的溶剂和流动相，避免与柱材和样品相互作用，影响分析结果。

- 定期检查和维护仪器，如泵的排气、封头的更换、泄漏点的处理等，确保仪器正常运行。

- 样品处理过程中，注意避免光线、温度和湿度的影响，尽量保持稳定的分析环境。

- 使用仪器前，需提前熟悉相关方法和仪器操作，做好实验前的准备工作。

液相色谱操作规程

液相色谱操作规程液相色谱操作规程液相色谱（HPLC）是一种常用的分离和分析技术，广泛应用于制药、化学、食品、环境等领域。

为了确保实验结果的准确性和实验室安全，以下是液相色谱操作的一般规程，供参考。

1. 实验前准备- 检查液相色谱仪的状态，确保仪器正常运行。

检查流动相、样品、色谱柱等试剂和设备的有效性和存放条件。

- 清洗和准备色谱柱。

按照柱内包装说明进行操作，如需更换柱，要将原柱溶液彻底洗净，并严格按照规程存储。

2. 样品准备- 准备样品溶液，注意选用适合的溶剂，并控制样品的浓度在色谱柱适用范围内。

- 对于固体样品，要将其溶解在适当的溶剂中，使用滤膜过滤以除去杂质。

3. 仪器启动和操作- 打开液相色谱仪，确保仪器连接正常并处于待机状态。

- 打开软件，设置操作参数，如流速、检测波长、温度等，并校准仪器。

- 检查进样器和检测器的运行情况，确保它们的正常工作。

- 启动柱温箱并设置温度。

4. 进样和分离- 使用适当的方式进样，如自动进样器或手动进样器，并确保进样量适当。

- 设置适当的流速和柱温，开始分离实验。

- 注意记录实时的色谱图和数据。

5. 后处理和结果解释- 完成分离后，关闭液相色谱仪。

- 分析数据，包括峰面积、保留时间和峰高等，与标准曲线或其他样品对照进行比较。

- 解释和记录实验结果。

6. 清洗和保养- 分离结束后，进行色谱柱的清洗和保养。

根据柱的材质和要求，选择适当的清洗方法和溶剂，彻底清洗柱内的杂质，避免污染或损坏柱。

- 清洗完毕后，根据柱的要求存储或封存，以确保柱的使用寿命。

7. 实验室安全- 在实验过程中，注意个人防护措施，戴上实验手套、护目镜等。

尽量避免将试剂接触皮肤和眼睛，如不慎溅到眼睛或皮肤上应立即用大量清水冲洗。

- 坚持实验室清洁和卫生，在实验后及时清理实验台面、器材和废弃物，保持良好的工作环境。

液相色谱是一项繁琐的实验技术，需要严格遵守操作规程和实验室安全要求。

以上规程仅供参考，具体操作还需根据实验目的、仪器型号和试剂要求进行调整。

HPLC仪器操作规程.

HPLC仪器操作规程一.每个月该做的事情.我们是按照月份的变化来保存我们的每天检测结果的,如4月份的检测结果,就想建立个文件夹来专门保存,到了5月份,就想建立个文件夹来专门保存5月的检测结果.那我们就要建立个文件夹来专门对应.点开图标D-2000 Elite Administration.lnk,出现下图,点击图标后,出现下图在应用程序明里面填上你想建立的文件夹名,如:图里现在建立的文件夹名即为200907,再在驱动器里指定你想存储的位置,如,图里指定位置为D 盘下.建立好后,选点创建.然后关闭就可以了.二. 我们每天该做的事情.首先我们打开电脑,然后开仪器(开启的顺序是organizer>L2130>L2200>L2300>L2400,然后选点图标D-2000 Elite.lnk 出现下图点图标,出现连机状态,直接点 ,等画面出现为下图,表明连机成功.确认即可. 点图标,将泵开启.然后点图标,下图所示:点,再点,出现提示框这时,将排液阀打开(即在L2130上的一个白色的凸起旋钮,逆时针旋转90度,然后选择是, 泵开始排液,A B C D 四个管路一个个选点过去,每个管路排液2-5分钟.目前我们4个管路的液体分别为,A 是甲醇,B 是水,C 是乙腈,D 是流动相(未加入乙腈. 排液结束后,点关闭净化,将排液阀顺时针方向旋转关紧. 点,出现下图在里面,我们把流速设定为1ML/MIN,C为10%,D为90%.完成后,点.关闭窗口.再点图标,出现这个图标的意思是,我要选择我今天做的样品的结果存储在哪个文件夹下面,比如,现在是3月份, 我选择2009.03这个文件夹做为我的存储地方.双击即可.再点,出现下图目前里面有两个样品表,但每天的样品量是不同的,这就需要我们根据每天新的样品情况来编辑样品表.随便打开一个样品表,比如20090329-2,出现下图上面就是一个我们比较标准的一个进样表,前面3行,即无论是什么情况,都应该是有的,不允许改变.下面,就根据我们样品实际情况一一加入.注意:我们最后有个冲洗柱子的方法,不是每个进样表都需要有的,柱冲洗的方法需要被用到的时候是,我们每天这批样品检测结束后,没有样品需要被检测了,实验结束时候,才需要把这个柱冲洗的方法加入.设定结束后,我们将,起个我们当天的名字保存,如我们今天是2009年3月30日,我们就可以起20090330,如果我们当天不止一批样品,我们可以起成20090330-1,等下批可以起成20090330-2,等等.关闭窗口.将我们实验须检测的样品,一一放入我们编辑的对应位置.点,出现图,我们就可以选择一个我们刚刚编辑好的样品表打开了,比如,200090329-2是我们刚刚编辑好的,我就选择打开出现下图等白色基线走成一条直线,我们就可以进样了,这个时间基本需要45分钟-1小时左右,有时候可能半小时就行,线走直了后,我们还需要确认一个很重要的工作是,看看仪器的压力,就在上图显示,我们要确认我们的压力在6.5-8MPa 之间,如果超过或者少于都是不对的,要停下来检查,看看是不是流动相用完了,瓶子放错了,管路堵了等等.或电话联系工程师咨询.如果一切没问题,点,就可以开始检测了. 如果我们的检测需要过夜,那我们在点后,检测面会出现,点开,出现图选取使用静止,确认就可以.这样这个样品表被执行完后,可以自我关机.需要注意的是,这个自我关机,仅是关闭了泵,关闭了灯,关了柱温箱的加热,仪器的电源是并没有被关闭的.。

HPLC安全操作规程

液相色谱仪操作规程
1.检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道连接是否正常。

2.接通电源，依次开启高压输液泵和检测器的电源开关，待泵和检测器自检完成后，打开计算机，打开色谱工作站。

3. 参数设定：设定检测波长、流速和响应时间（一般分析可设置为1.0）。

4.用经过滤和超声的纯甲醇或纯乙腈冲洗管路，待基线稳定后即可更换成分析用流动相。

注意：使用的流动相需经过滤和超声，且更换流动相后，必须先打开放空阀，用大于3mL/min的流量,排尽系统管路中的气泡，然后关闭放空阀，调回流速，用流动相平衡色谱柱。

之后每更换一次流动相均需先按此上述操作进行排气工作。

5. 查看基线，待其走稳，即可进样分析。

注意：样品最好用流动相稀释到所需浓度，且经0.45μm的滤膜过滤后再进样分析，以免损坏仪器。

6. 待样品分析完毕，用纯甲醇或纯乙腈清洗仪器管路和色谱柱。

注意：如果流动相中含有缓冲盐，则先用含10%有机相溶剂作流动相清洗系统，同时用纯水清洗进样阀和泵头，最后用纯有机溶剂清洗系统管路和色谱柱。

7. 关机：先关闭色谱工作站，再关闭检测器和泵的电源开关。

HPLC 操作规程

HPLC操作规程1.溶剂：所用溶剂甲醇，乙腈，超声10 min，去除气泡。

水需要用0.45um水系滤膜过滤，再超声10 min，去除气泡。

溶剂中加入0.5%0的TFA。

2.样品准备：样品最好用梯度程序中初始的溶剂配比溶解，用0.45um滤器过滤后使用。

用纯甲醇也可以。

3.开机：打开A泵，B泵，和检测器，选择REMOTE状态，然后再打开电脑上的工作站界面。

（如果先打开工作站界面，再打开检测器，会造成谱图上横坐标显示的时间是真实时间的两倍。

如果这样，就关闭工作站界面再打开，即可）4.打开工作站界面HPLC LC 600 PLUS WorkStation先平衡: 运行开机平衡梯度程序，约30min。

第一次使用前柱子是100%甲醇，需要平衡到你要运行的梯度程序初始的溶剂比例，如MeOH/H2O=30/70。

5.设置梯度程序，统一保存在D盘HPLC data文件夹里，新建个人文件夹。

泵参数设置，不需要设置；梯度程序，需要设置并保存自己的梯度程序；检测器设置，更改波长数值，点击Set。

6.进样：进样阀右边在上，注射进样品，然后扳下进样阀，右边朝下，完成进样。

仪器自动按照设定的梯度程序运行。

7.数据采集：打开工作站界面左上角文件下谱图处理。

数据统一保存在D盘HPLC data文件夹里，新建个人文件夹。

8.冲柱子：测试完成后准备关机时，用纯甲醇8 ml/min，冲洗10min，平衡柱子，冲洗流路，最后柱子和流路里要充满有机溶剂。

9.关机：没有特殊要求注意事项：1.在使用含盐的流动相后，需用HPLC级的水冲洗管路和样池，然后再用甲醇（或5-10%甲醇水溶液）冲洗管路和样池。

这样可以避免堵塞液路，样池损坏，以及样池中零部件上微生物的生长。

避免无机盐对泵头的磨损，延长柱塞杆及密封圈的使用寿命。

2.保存的数据结果中不能保存method，所以对自己的化合物成熟的色谱条件要另外保存。

柱子使用说明1.新柱子活化新柱子用甲醇/乙腈/水封存，在运输过程中，柱子填料会变干。

高效液相色谱仪的操作流程和注意事项

高效液相色谱仪的操作流程和注意事项引言：高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种重要的分析仪器，广泛应用于化学、生物、医药等领域。

掌握正确的操作流程和注意事项，对保证分析的准确性和结果的可靠性至关重要。

下面将详细介绍高效液相色谱仪的操作流程和注意事项。

一、仪器准备在开始操作高效液相色谱仪之前，需要进行一些准备工作。

首先，检查仪器是否正常工作，例如电源是否正常接通，各个模块是否连接牢固等。

其次，确保色谱柱处于良好的工作状态，即没有泄漏和堵塞等问题。

最后，根据需要，选择合适的检测器，并校准相应的参数。

二、样品准备和进样样品的准备是操作高效液相色谱仪的关键一步。

首先，根据样品的性质选择合适的溶剂体系，并将样品完全溶解。

其次，为了提高分析的准确性，通常需要对样品进行预处理，例如磷酸酯酶的样品需要经过脱磷酸处理。

最后，将样品装入进样瓶中，根据仪器的要求设定进样量。

三、流动相的选择和准备流动相是高效液相色谱仪中的关键因素之一。

在选择流动相时，需要考虑样品的性质以及分析的目的。

常见的流动相包括有机溶剂、水以及它们的混合溶液。

在选择后，需要准备流动相，并进行除气处理以去除气泡。

此外，还要注意流动相的质量，例如pH值、浓度等。

四、色谱条件的设置色谱条件是操作高效液相色谱仪的关键之一。

根据分析的目的和样品的性质，需要设置合适的参数，例如流速、温度、梯度等。

在设置前，需要根据样品性质选择合适的色谱柱，并设定相应的温度以优化分离效果。

此外，还需要根据检测器的要求设定相应的参数。

五、数据采集和结果分析在操作高效液相色谱仪时，需要进行数据采集和结果分析。

首先，确保数据采集系统正常工作，并根据仪器的要求进行设定。

其次，启动数据采集并进行监控，及时记录实验过程中的各项指标。

最后，对采集的数据进行处理和分析，例如峰面积的计算、峰形的分析等。

注意事项：1. 严格按照操作流程进行操作，避免任意更改设置。

HPLC使用操作和注意事项

HPLC使用操作和注意事项HPLC（高效液相色谱法）是一种常用的分析技术，广泛应用于化学、生物和环境等领域。

在进行HPLC分析时，操作和注意事项非常重要，可以确保数据的准确性和可靠性。

以下是HPLC使用操作和注意事项：1.仪器准备和检查-在进行HPLC分析之前，确保仪器处于正常工作状态，并进行必要的检查和校准。

-检查并确保溶剂瓶、移液器、混匀器、色谱柱等零件的完整性和安装正确。

2.样品准备-样品应根据需要进行稀释或提纯。

-样品应避免与空气接触，以防止氧化或降解。

-对于固态样品，可以使用溶剂进行提取。

-对于液态样品，应尽量使用无色或低吸光度的溶剂。

-样品必须先过滤，以去除悬浮物和杂质。

3.HPLC系统设置-根据试验要求设置合适的流速、温度和检测方式。

-设置正确的进样量和进样方式，确保准确和稳定的进样。

-检查色谱柱的状态，确保它处于正常工作条件。

4.溶剂和试剂准备-使用HPLC级别的纯溶剂和试剂，以确保分析结果的准确性。

-为了避免测定结果的误差，必须使用纯化的水和有机溶剂。

-按照仪器的要求准备缓冲液。

5.进样与洗脱-采用适当的进样模式，如体积进样或峰进样。

-进样体积应根据样品浓度和检测灵敏度进行优化。

-洗脱条件是决定分析分离效果和峰形的关键因素，应根据实验要求进行优化。

6.数据分析-分析HPLC数据时，应先进行标定，确定峰的保留时间和相对峰面积。

-根据标定峰的结果，进行峰识别和定量分析。

-结果应进行统计分析，并计算相对标准偏差以评估数据的可靠性。

除了上述操作，使用HPLC时还需要注意以下事项：1.安全操作-使用HPLC时，应遵守实验室的安全规定，佩戴个人防护装备，如手套和安全眼镜。

-与高压液体及其设备一起操作时，必须特别小心。

2.色谱柱保养-定期进行色谱柱的保养和洗脱，以确保其性能和寿命。

-使用适当的保护柱，避免杂质和有害物质进入色谱柱。

3.仪器保养-定期清洗和保养仪器零件，如移液器和混匀器。

-定期更换空气过滤器和溶剂瓶，以防止污染。

高效液相色谱仪操作规程

高效液相色谱仪操作规程高效液相色谱仪（HPLC）是一种重要的分析仪器，广泛应用于化学、生命科学、环境监测等领域。

为了保证色谱仪的正常运行和准确分析结果，需要遵守以下操作规程：1. 准备工作a. 首先，确保色谱仪及其附件的电源已接通，并确认仪器处于正常工作状态。

b. 检查溶剂桶内的溶剂是否充足并无杂质，并确认管路连接正常。

c. 检查流动相液位是否正常，并调整泵的流速和梯度程序参数。

2. 样品制备和准备a. 样品应充分溶解并过滤净化，以避免样品中的杂质对色谱分离产生干扰。

b. 选择合适的进样方式（自动或手动），并根据进样方式调整进样器的参数。

3. 进样器操作a. 将样品注射器插入进样口，并注意不要损坏色谱柱。

b. 设置进样体积和进样速度等参数，并进行一次空白进样以清洗进样器。

4. 色谱柱准备a. 定期检查色谱柱是否损坏，并根据需要更换。

b. 根据实验需要选择合适的色谱柱，并注意记录色谱柱的批号和使用次数。

5. 柱温控制a. 根据分析需要选择合适的柱温，并使用温度控制系统保持恒定。

b. 注意避免温度突变和波动，以保证分析结果的准确性和重复性。

6. 检测器操作a. 根据需要选择合适的检测器，如紫外-可见光检测器（UV-Vis）、荧光检测器、电导检测器等。

b. 设置检测器的参数，如波长、增益和灵敏度，并进行基线校准。

7. 数据采集与处理a. 启动数据采集系统，并设置采集参数，如采样率、数据类型和运行时间等。

b. 对采集到的数据进行处理和分析，如峰识别、定量分析和峰面积计算。

8. 清洗和维护a. 实验结束后，关闭色谱柱和进样器的阀门，并用溶剂清洗色谱柱和进样器，以防止堵塞和降低杂质残留。

b. 清洗完成后，注意关闭色谱仪的电源，并按照要求对色谱柱和进样器进行维护和保养。

总结：高效液相色谱仪的操作规程包括准备工作、样品制备、进样器操作、色谱柱准备、柱温控制、检测器操作、数据采集与处理以及清洗与维护等。

遵守这些规程可以确保色谱仪的正常运行和准确分析结果，提高实验效率。

HPLC操作规程和注意事项

word格式-可编辑-感谢下载支持HPLC操作规程1.所需的流动相，应该用合适的0.45μm滤膜过滤。

2.样品溶液和标准溶液，也应该用合适的0.45μm滤膜过滤，滤膜也分为水相和有机相。

3.开机顺序：开泵，开检测器，进入色谱工作站。

4.泵的启动：用流动相冲洗滤器，再把滤器浸入流动相中，启动泵。

打开泵的排放阀，用专用注射器从阀口抽出流动相约20ml，设置高流速（9ml/min)或用冲洗键PURGE 进行排气，观查出口处流动相呈连续液流后，将流速逐步回零或停止（STOP）冲洗，关闭排放阀。

5 .将流速调节至分析用流速，对色谱柱进行平衡，同时观察压力指示应稳定，用干燥滤纸片的边缘检查柱管各连接处应无渗漏，初始平衡时间，一般约需30分钟。

平衡的标志是泵压不波动和基线平直，说明已经平稳。

6. 检测器的开启：开启电源，选择光源（氘或钨）灯，选定检测波长，待预热15分钟方可用于分析测试。

7.压力表无压力显示或压力波动时不能进行分析，应检查泵中气泡是否已排除，各连结处有无漏液，排除故障后方能进行操作。

如压力升高，甚至自动停泵，应检查柱端有无污染堵塞，如有堵塞，应该用相应的溶剂清洗。

如果清洗不了，可小心卸下开柱的进口螺帽，挖出被污染填冲剂后，补入同类填充剂，仔细安装好，再进行操作。

8.分析完毕后，先关检测器和色谱工作站，再用适当经过滤和脱气的溶剂清洗色谱系统，正相柱一般用正己烷，反相柱如使用过含盐流动相，则先用水然后用甲醇冲洗，再用分析流速冲洗，各冲洗溶剂一般冲洗30-60分钟，特殊情况应延长冲洗时间，粗的柱子流速控制在0.5ml/min以下,细柱控制在0.5ml/min以下。

9. 关机顺序：退出化学工作站，接着关检测器，最后关泵。

开机顺序刚好和关机顺序相反。

HPLC使用注意事项1.含水流动相最好在实验前配制，尤其是夏天使用缓冲溶液作为流动相不要过夜，最好加入叠氮化钠，防止细菌生长。

2.气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。

高效液相色谱HPLC操作流程及注意事项

高效液相色谱HPLC操作流程及注意事项高效液相色谱HPLC使用前期准备工作：1. 始终保持高效液相色谱仪器包括内在系统的清洁。

2. 室内温度始终保持恒定，因为室温的变化对高效液相色谱检测器有影响。

3. 所有溶液、试剂、样品、标准溶液、注射剂等都应事先准备好。

4. 最好提前准备好备用电源防止停电。

高效液相色谱HPLC操作流程：1．将已经过滤并脱气的流动相注入储液罐；2. 用流动相冲洗金属过滤器，然后将过滤器浸入储液罐的流动相中；3. 将储液罐放置在一定的高度，以避免由于搬运和其他操作人员的移动而造成不必要的跌落。

4. 然后按以下顺序依次启动高效液相色谱仪：泵→检测器→高效液相色谱软件→按预先计划的方法设置软件参数，如分析时间、检测波长、流速等。

5. 启动泵，运行5分钟，主要是为了排除系统中的气泡，结束后关闭所有排气阀；6. 然后按照预先计划的速度，以固定的速率，如1mL/min左右，运行流动相，走基线，直到基线平稳，就可以在计算机软件上进行监视；7. 基线平稳后，在软件中设置样品的运行参数，如流速和分析时间等。

分析时间会因样品、流速、柱长等因素变化。

8. 参数设置完毕后，将固定体积的样品溶液注入进样阀，然后在软件中启动注入命令，进样器中的样品溶液就随流动相进入色谱柱；9. 通过软件监视各项读数，当检测器检测到样品所有峰值，停止运行并设置新的进样。

在下一个样品分析前，建议留出5-10分钟，待流动相通过色谱柱，以便清洗之前样品的残留物；确认基线稳定后，进行下一次注射。

10. 分析结束后，先关闭检测器，然后关闭泵，最后关闭软件。

高效液相色谱HPLC分析注意事项：1. 用0.2μm滤纸过滤溶剂或流动相，并进行超声脱气。

2. 启动时应采用色谱级水清洗色谱柱，有助于延长色谱柱的使用寿命、检测器的稳定运行，确保检测结果的准确性。

以上由迪信泰检测平台（Biotech-Pack-Analytical）整理编辑。

迪信泰检测平台以液相/气相为依托，组建高效液相色谱(HPLC)、液质联用(LC-MS)、气质联用(GC-MS)等技术平台，致力于为各科研院所，高校，药企，生物工程类企业提供高效、准确、高性价比的小分子化合物检测技术服务。

高效液相色谱（HPLC）操作规程

高效液相色谱（HPLC）操作规程一操作1.准备工作⑴流动相的准备应根据实验选择合适的流动相，所有流动相原则上应选择HPLC级别，水应选择超纯水，并应保持新鲜。

所有流动相在进行实验前应经过相应的脱气处理，脱气时间应根据流动相的量相应增加，但一般超声脱气不应少于20min。

在实验过程中应保证足够的流动相，流动相的量与流速、洗脱时间等有关，应根据具体情况进行准备。

⑵样品的准备对于待测的样品，在进样之前应经过滤膜过滤，根据样品的不同选择不同种类、不同直径的滤膜。

2. 排气打开purge阀，键入stop→prime，直到无气泡停止stop。

B泵同样操作。

关闭purge阀。

3. 开机打开电脑主机和显示器，点击Galaxie，进入工作站。

选择系统，点击Agilent HPLC.点击overview，可观察仪器各部分状态。

打开泵及检测器的电源。

二分析方法建立1.进入工作站系统界面。

点击数据，文件→新建→方法，出现视窗，点击前进即可。

键入方法名和相应描述→点击ok后出现方法文档。

2.210的设定点击控制→210图标→Elution。

选择流动相A和B的种类。

Compressibility、Pressure Constant以及Refill Time属于内置参数无需设定。

设置A、B流动相的比例，通过改变B的比例设定。

如需梯度洗脱，则根据方法对Equilibrium Time 和Hold Time进行设定。

点击Misscellaneous。

Start Mode选择Inject Trigger on Pump A。

End of Sequence 选择Leave Pump on。

210设定结束。

3.325的设定点击325图标，选择Signal。

其中Detector Bunch Rate建议设置成2（10Hz），Noise Monitor Length建议设定成64，Response Time建议设定0.5。

根据方法设定相应波长。

hplc操作规程

hplc操作规程HPLC（高效液相色谱）是一种高效、准确、灵敏的分析技术，广泛应用于化学、生物、药物等领域。

为了确保HPLC分析的准确性和可靠性，有必要制定一份详细的HPLC操作规程。

以下是一个HPLC操作规程的示例，共计1200字。

HPLC操作规程1. 实验前准备工作(1) 确保仪器处于正常工作状态。

检查HPLC系统的压力、流速、温度等参数，确保所有泵、检测器和采样器都能正常工作。

(2) 根据实验的需求，准备好HPLC色谱柱和色谱柱保护柱。

(3) 检查溶液的pH值、浓度等参数，确保样品溶液的配制准确无误。

2. 样品制备(1) 根据实验需求，准确称取适量的样品，并将其溶解于适量的溶剂中。

(2) 需要注意的是，溶解样品时要完全溶解，避免残留物对HPLC柱造成损害。

(3) 使用过滤器或离心机去除样品中的杂质和固体颗粒。

3. 系统平衡(1) 打开HPLC系统的所有阀门，确保流路畅通。

(2) 开始系统平衡前，关闭检测器和采样器，以避免样品流入检测器和采样器。

(3) 启动系统，调整流速至实验所需的流速。

通常流速为0.2-2 mL/min。

(4) 进行15-30分钟的系统平衡，确保系统稳定。

4. 校正和质量控制(1) 定期校正流速、温度和检测器灵敏度等参数，确保实验结果的准确性。

(2) 进行质量控制，包括运行标准曲线、检测器灵敏度和峰面积的稳定性等测试，以确保分析结果的可靠性。

5. 样品注射(1) 将样品以合适的方式注入采样环或自动采样器中。

(2) 确保注射量适当，一般不超过色谱柱的容量的10%。

(3) 使用空白样品作为对照，进行注射前和注射后的检测，以排除注射器、柱等可能引起的峰偏移或异常的情况。

6. 数据采集和分析(1) 设置合适的检测波长和积分时间，以获得准确的检测结果。

(2) 在实验过程中定期检查系统的稳定性和峰形。

(3) 根据实验要求，对分析结果进行计算和解释，包括峰高、峰面积、保留时间等指标。

(4) 记录得到的数据和结果，保存实验记录和报告。

高效液相色谱仪操作规程

高效液相色谱仪操作规程高效液相色谱仪（High-performance liquid chromatography, HPLC）是一种对样品进行分离、检测的仪器。

对于化学、生物等领域的研究者来说，熟练掌握HPLC 的操作规程非常重要。

本文将详细介绍高效液相色谱仪的操作流程和注意事项。

设备准备在操作HPLC仪器之前，需要先对设备进行准备。

首先，需要检查仪器周围的环境是否清洁整洁。

注意检查废液罐、洗涤液罐的液位，以免在后续的使用中发生意外。

其次，需要准备好各种试剂和标准品，确保它们的适用性和相应的浓度范围。

需要使用高纯度的溶剂，在使用之前应先过滤，去除其中的杂质，保证后续操作的准确性和稳定性。

最后，对仪器进行预热操作。

通常情况下，需要对色谱柱和检测器进行预热，保证它们的温度稳定。

样品的制备样品的制备是至关重要的一步。

通常情况下，为了提高样品的净化程度和浓度，需要使用不同的制备方法，如提取、稀释、过滤等。

在进行样品制备时，需要注意以下几点：1.确认样品是否熔点低于所用的溶剂的沸点；2.确认样品是否需要进行提取或加强洗涤效果；3.对于样品的稀释和过滤操作，需要注意其可能带来的影响。

色谱柱的选择选择合适的色谱柱对于操作效果的影响很大，需要充分考虑实验的目的和测试要求进行选择。

选择色谱柱时，应注意以下几点：1.选择合适的材料和孔径；2.确认所选柱是否能够满足测量要求；3.确认所选柱的分离效应是否满足实验要求。

操作流程1.开机操作：根据仪器所得操作指南进行开机操作。

2.准备工作：将所需样品移至自动进样器，调整电量，并确认流速和溶剂比例是否正确。

3.洗涤操作：洗涤色谱柱，将废液排出废液罐中。

4.样品进样：按照操作指南将样品注入样品进样器中。

5.柱温控制：调节色谱柱的温度以控制柱的温度稳定。

6.流速控制：根据样品要求调节流速。

7.数据收集操作：实时收集并记录数据，如果需要，可以修改柱温、流速等操作参数。

8.数据处理：对数据进行处理和分析。

HPLC标准操作规程

HPLC标准操作规程1HPLC日常维护规则：1. 流动相过滤头，在线过滤器的滤片定期拆下清洗（用水超声清洗，不超过15min）(一个月)2. 进样阀每天清洗，使用注射器吸取任意比例的甲醇水，向进针孔注入以上溶液，并不断扳动进样阀（若流动相中含有盐溶液，则先用水清洗后，再用任意比例的甲醇水清洗）3. 清洗柱塞杆：使用含有盐溶液的流动相以后需清洗柱塞杆。

用滤纸（或其它易吸水的东西）接在泵头下面，用注射器向泵头后面的孔中注入清水4. 清洗单向阀：若单向阀堵塞，则将其拆下来，黑色滤片朝上，进出口单向阀各放在一个烧杯中，用水超声清洗，不超过15min1HPLC操作规程1)开机，先开组织器上开关，再开下边检测器与泵的开关；计算机上打开软件D-2000Elite,进行联机操作。

即初始化→确定2)点击模块的详细信息进行净化操作（打开排液阀），每个管路都要净化每隔2min手动设定泵的流速5ml/min，流动相平衡仪器3)建立新的应用程序，新的方法文件，新的样品表，完成以上工作后，点击样品采集进入增图接口，待基线平衡后可以开始进样进行测试4)进样时，进样阀需在Load状态下才可插入进样针，注入样品，然后快速将进样阀扳回injiect位置5)所有样品测试完毕后，在【模块的详细信息】中手动关掉检测灯，在进行仪器的清洗6)仪器清洗完毕后，关闭仪器时，先关泵再切断仪器点击确定关闭程序，关计算机，仪器从下到上依次关闭，最终切断电源7)将进样阀扳至Load状态，盖好盖子2色谱柱保存色谱柱保存在有机溶剂中，主要是100％甲醇或高浓度的甲醇水中，拆下柱子，必须将柱子堵头盖上，拧紧，不能让柱子里干燥。

色谱柱中不可用100％水冲洗最高为5%的甲醇水3开机前滤头清洗步骤所有滤头都放在甲醇中，使用之前的处理步骤：1.放入甲醇相中的可直接放置；2.放入水相中的滤头先用纯水冲洗干净，再放在干净纯水中进行purge操作，purge完后放入水相或缓冲盐中在进行purge；的测定条件4AFB1a)色谱柱：C(250mm×4.6mm,5µm)18b)流动相：甲醇+水=55+45c)流速：0.8ml/mind) 检测波长：Ex:365nm Em:435nme) 进样体积：10µlf) 连接柱后衍生装置g) 柱温：室温h) 出峰时间：保留时间12.5min5 FumB 1的测定条件a) 色谱柱：C 18 (250mm ×4.6mm,5µm)b) 流动相：甲醇/NaH 2PO 4(0.1mol/L)c) 柱温：室温d) 检测波长：Ex:335nm Em:440nme) 流速：1.0ml/minf) 进样体积：20µlg) 出峰时间：20~22min6 液相使用规律：1. 四个管路ABCD,A 管习惯放在甲醇中：B 管放入水相中，C 管放入乙腈，D 管放入缓冲盐，每天试验完成后，四个管路及滤头放在甲醇中不保存，存放滤头的甲醇每15天更换一次2. 每次进样前，都要等上次样品完全跑完，基线跑平（即每分钟内上下波动不超过0.1）后在进下一针样品3. 流路顺序：过滤头→在线脱气机（四进四出）→比例阀→进口单向阀→出口单向阀→副泵头→排液阀→在线过滤器→混合器→进入色谱柱→检测器→出检测器进废液瓶。

实验心得记录HPLC操作流程及注意事项(二)

引言：
HPLC（高效液相色谱法）是一种广泛应用于分离和定量分析的仪器。

本文将详细记录我在进行HPLC操作时的一些心得体会，并总结了一些操作流程和注意事项，旨在帮助其他操作者提高实验效果和减少操作错误。

概述：
正文内容：
1.样品处理
1.1.样品的准备
1.2.样品的溶解
1.3.样品的过滤
1.4.样品的稀释
1.5.样品的保存
2.仪器设定
2.1.流速设定
2.2.柱温设定
2.3.检测器设置
2.4.分离柱的选择
2.5.分析方法的选择
3.色谱条件的调整
3.1.流动相的组成
3.2.流动相的pH调整
3.3.柱温的优化
3.4.柱压的控制
3.5.检测波长的选择
4.峰形和峰分离的优化
4.1.注射量的控制
4.2.色谱柱的选择
4.3.峰的分离度优化
4.4.峰的形状调整
4.5.退峰效果的改善
5.数据处理和结果分析
5.1.校正曲线的绘制
5.2.峰面积的计算
5.3.峰的重复性和稳定性评估5.4.数据的统计分析
5.5.结果的解释和报告撰写总结：
本文以HPLC操作流程和注意事项为主题，从样品处理、仪器设定、色谱条件调整、峰形和峰分离优化以及数据处理和结果分析五个大点进行了详细阐述。

通过正确的操作流程和注意事项的遵守，可以提高HPLC实验结果的准确性和可信度。

希望本文对于其他操作者在HPLC实验中的操作指导有所帮助。

HPLC的使用操作和需要注意的事项

HPLC（高效液相色谱法）使用操作和注意事项HPLC的流程简图：流程流程：如右图所示，溶剂贮器（1）中的流动相被泵（2）吸入，经〔3〕梯度控制器按一写的梯度进行混后然后输出，经（4）测其压力和流量，导入（5进样阀（器）经（6）保护柱、（7）分离柱后到（8）检测器检测，由（10）数据处理设备处理数据或（11）记录仪记录色谱图，（12）馏分收集器收集馏分，（13）为废液。

.一．操作步骤1．排空状态：将吸液头让在已经超声的甲醇中，旋松排空阀让机器以高流速排走机器或输液管的气泡，3—5分钟后关闭排空阀，排空结束。

2．冲洗状态：以适当流速冲洗机器核色谱柱大约20分钟;同时开启检测器，让检测器处于预热和自检状态。

3．联机状态：打开联机电脑让色谱工作站和HPLC机器相连设定吸收波长，适当流速，查看系统压力是否正常。

4．用已经配好的流动相换下甲醇开始走基线，此过程大约20分钟5．当基线平稳，开始进样准备。

6．进样前用进样液清洗六通阀2-3次。

7．样品打入机器开始谱图。

8．谱图完成清洗机器和关闭电脑：用甲醇做流动相以适当流速开始冲洗机器大约15分钟，确定甲醇已经充满机器管道。

同时用甲醇清洗六通阀若干次。

退出色谱工作站和关闭电脑。

9．整理数据填写结果。

二．注意事项1、进样前样品处理及注意事项（1）须用专用平头液相专用注射器进样（禁用气相尖头进样针）；（2）进样试液应无颗粒、浑浊和乳化，使用前先用超声波溶解后，须用0.45um 的过滤膜过滤；（3）部分装取样时，取样体积一般小于定管的50%，完全装液相取样体积取必须是定量环的5 倍以上2、操作中注意事项：1)．流动相均需色谱纯度，水用20M的去离子水。

脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。

2) 柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。

3）所有过柱子的液体均需严格的过滤。

4) 压力不能太大，最好不要超过150kgf/cm2 .5) 因为缓冲试剂遇有机溶剂，会结晶，有损色谱柱，所以，每次由有机相变流动相或流动相变有机相均需用蒸馏水清洗。

高效液相色谱法操作规程与注意事项

高效液相色谱法操作规程与注意事项1.程序1.1.仪器及性能要求：所用的仪器为高效液相色谱仪，由泵系统，进样系统，色谱柱，检测器和色谱数据处理系统组成。

1.1.1.泵系统：HPLC泵系统通过高压力管和设备从溶剂瓶中吸取计量的流动相到柱子中。

现行的泵系统有一元或多元计算机控制的计量泵组成，这些泵可以按照梯度洗脱的要求改变流动相的比例或者是按等度洗脱的要求混合流动相。

1.1.2.进样系统：化合物被溶解在流动相或合适的溶剂中，可以通过手动进样器或定量环，或自动进样器转移到流动相中。

自动进样器由可存放进样瓶的卡盘组成，进样瓶的顶部有一个可以刺入的隔膜，进样针通过这个隔膜将样品转移到一个定量环中然后输送到色谱系统中。

1.1.3.色谱柱：最常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶。

反相色谱系统使用非极性填充剂，以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶（如氰基键合硅胶和氨基键合硅胶）也有使用。

正相色谱系统使用极性填充剂，常用的填充剂有硅胶等。

离子交换色谱系统使用离子交换填充剂量；分子排阻色谱系统凝胶或系统高分子多孔微球等；对映异构体的分离通常使用手性柱。

除另有规定外，柱温为室温。

1.1.4.检测器：常用的检测器包括紫外分光检测器，示差折光检测器，二极管阵列检测器。

固定波长检测器在单一波长下运行，典型的波长是254nm，通过低压力的汞灯发射。

可变波长的检测器包含持续的能源，例如氘灯或高压力氙灯，通过单色器或干涉过滤器产生一定波长的单色光。

1.2.系统适用性试验1.2.1.为了确定最终运行系统的有效性，应当进行系统适用性试验。

整个系统可以用以下指标来评价：信噪比、理论塔板数，分离度，重复性，拖尾因子，其指标及计算方法应在相关分析方法中予以规定，如果没有专门的规定，按以下方法进行计算：信噪比：用于评价色谱系统检测微量物质的能力，美国药典的计算公式：S/N=2H/h，H为峰顶到基线的距离，h为基线中噪声峰最大值与最小值的差，该段基线需取≥5倍半峰高宽的距离，如果有可能，目标峰两侧取相等的距离（如图1）。

高效液相色谱法操作规程与注意事项

⾼效液相⾊谱法操作规程与注意事项⾼效液相⾊谱法操作规程与注意事项1.程序1.1.仪器及性能要求：所⽤的仪器为⾼效液相⾊谱仪，由泵系统，进样系统，⾊谱柱，检测器和⾊谱数据处理系统组成。

1.1.1.泵系统：HPLC泵系统通过⾼压⼒管和设备从溶剂瓶中吸取计量的流动相到柱⼦中。

现⾏的泵系统有⼀元或多元计算机控制的计量泵组成，这些泵可以按照梯度洗脱的要求改变流动相的⽐例或者是按等度洗脱的要求混合流动相。

1.1.2.进样系统：化合物被溶解在流动相或合适的溶剂中，可以通过⼿动进样器或定量环，或⾃动进样器转移到流动相中。

⾃动进样器由可存放进样瓶的卡盘组成，进样瓶的顶部有⼀个可以刺⼊的隔膜，进样针通过这个隔膜将样品转移到⼀个定量环中然后输送到⾊谱系统中。

1.1.3.⾊谱柱：最常⽤的⾊谱柱填充剂为化学键合硅胶。

反相⾊谱系统使⽤⾮极性填充剂，以⼗⼋烷基硅烷键合硅胶最为常⽤，⾟基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶（如氰基键合硅胶和氨基键合硅胶）也有使⽤。

正相⾊谱系统使⽤极性填充剂，常⽤的填充剂有硅胶等。

离⼦交换⾊谱系统使⽤离⼦交换填充剂量；分⼦排阻⾊谱系统凝胶或系统⾼分⼦多孔微球等；对映异构体的分离通常使⽤⼿性柱。

除另有规定外，柱温为室温。

1.1.4.检测器：常⽤的检测器包括紫外分光检测器，⽰差折光检测器，⼆极管阵列检测器。

固定波长检测器在单⼀波长下运⾏，典型的波长是254nm，通过低压⼒的汞灯发射。

可变波长的检测器包含持续的能源，例如氘灯或⾼压⼒氙灯，通过单⾊器或⼲涉过滤器产⽣⼀定波长的单⾊光。

1.2.系统适⽤性试验1.2.1.为了确定最终运⾏系统的有效性，应当进⾏系统适⽤性试验。

整个系统可以⽤以下指标来评价：信噪⽐、理论塔板数，分离度，重复性，拖尾因⼦，其指标及计算⽅法应在相关分析⽅法中予以规定，如果没有专门的规定，按以下⽅法进⾏计算：信噪⽐：⽤于评价⾊谱系统检测微量物质的能⼒，美国药典的计算公式：S/N=2H/h，H为峰顶到基线的距离，h为基线中噪声峰最⼤值与最⼩值的差，该段基线需取≥5倍半峰⾼宽的距离，如果有可能，⽬标峰两侧取相等的距离（如图1）。

HPLC操作规程和注意事项

HPLC操作规程和注意事项一、操作规程1.准备工作(1)检查设备：检查HPLC仪器的仪表、进样系统、柱室、检测器等是否正常工作。

(2)准备试剂：准备好所需的试剂和溶剂，并按照操作要求进行配制。

(3)准备样品：根据需要分析的样品性质，选择适当的提取和前处理方法，准备好待测样品。

2.仪器操作(1)打开电源：首先接通HPLC仪器的电源，并预热一段时间，确保仪器达到稳定状态。

(2)装填柱子：按照操作说明将柱子正确装填到柱室中，并连接好进样系统和检测器。

(3)刷洗柱子：用纯溶剂将柱子刷洗，至少连续通过10倍柱子体积的溶液，以去除表面的杂质。

(4)进样：按照分析方法中的要求，设置好进样量和进样方式，确保样品能够均匀地进入柱子。

3.参数设置(1) 流速：根据分析方法的要求，设置适当的流速，一般应在0.5-2.0 mL/min之间。

(2)梯度程序：如果需要进行梯度洗脱，按照分析方法中的梯度程序设置好梯度条件和比例。

(3)柱温：根据样品性质和柱子的要求，设置适当的温度，一般应在室温到60℃之间。

4.检测和记录结果(1)检测器选择：根据分析物的性质，选择合适的检测器进行检测，如紫外检测器、荧光检测器等。

(2)检测条件：根据需要测量的物质，设置合适的检测波长、增益和灵敏度等参数。

(3)记录数据：及时记录分析结果和数据，包括进样量、保留时间、峰面积等，以备后续分析和比对。

二、注意事项1.安全操作(1)使用个人防护装备，如实验手套、安全眼镜和实验服。

(2)注意化学品的毒性和腐蚀性，避免接触皮肤和吸入有害气体。

(3)注意防火和爆炸，禁止在实验室中吸烟，并保持实验区域通风良好。

2.样品制备(1)样品的准备应尽量避免污染和氧化，以保证结果的准确性。

(2)样品的提取和前处理方法需根据样品特性和分析要求进行优化，确保提取效率和分析结果的可靠性。

(3)样品的溶解度要适宜，过高或过低的浓度都会影响分析结果。

3.仪器维护(1)定期检查和校准仪器，保证仪器的正常工作和准确性。

HPLC操作注意事项

HPLC（高效液相色谱）操作注意事项
换上新的流动相：停流——换上新流动相——阀门转到冲洗端——4mL/min流速，变化率10min（实现流速前再确认一下是否转到冲洗端）——冲洗20min——停流——阀门转到过柱端——设定流速（总流量为1mL/min），变化率为5min。

缓冲盐会在高有机相浓度的溶液中析出，导致管路堵塞，损伤仪器。

因此使用缓冲盐时有机溶液的含量应小于80%。

三．柱压上限
建立的液相方法其柱压上限应小于3800psi
四．流动相的使用
任何流动相必须用0.22um滤膜抽滤两遍。

其pH值及流动相的选择必须在色谱柱允许范围内。

五．样品的处理
样品进样前必须过0.22um的滤膜。

其pH值，分子量大小，在流动相中的溶解性及纯度必须符合要求。

六.色谱柱的清洗
色谱柱使用前以及使用后都必须用10%甲醇水，流速1mL/min冲洗45min。

七.仪器关机步骤
进样完以后，关闭检测器及柱温箱——将流动相换为甲醇和水——用10%甲醇水，流速1mL/min清洗色谱柱45min——用100%甲醇（HILIC 极性柱用90%甲醇水），流速1mL/min保存色谱柱45min——停流——拆下色谱柱——关闭脱气机，二元溶剂管理器及电脑。