提取蛋白的常规方法
提取蛋白质的具体步骤
提取蛋白质的具体步骤全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：提取蛋白质是生物科学研究中非常重要的一个步骤，它能够帮助研究人员深入了解蛋白质的结构和功能。
下面将为您介绍一些常用的提取蛋白质的具体步骤，希望能对您有所帮助。
1. 选择样本：在进行蛋白质提取前，首先需要选择合适的样本。
样本可以是动植物组织、微生物、细胞等。
在选择样本时，需要考虑到所需提取的蛋白质种类和含量。
2. 细胞破碎：将样本破碎是提取蛋白质的第一步。
通过机械或化学方法破碎细胞壁，释放出蛋白质。
常用的方法包括超声波破碎、研钵研磨、高压破碎等。
3. 细胞裂解：将破碎后的细胞溶液进行裂解是提取蛋白质的下一步。
裂解可使蛋白质从细胞内释放出来。
常用的裂解方法包括离心、温度变化、酸碱处理等。
4. 蛋白质沉淀：裂解后的细胞溶液含有大量的蛋白质和其他杂质，需要进行沉淀分离。
常用的方法包括盐析、醇沉、酸沉淀等。
5. 蛋白质纯化：通过进一步的分离和纯化步骤，可以得到纯度较高的蛋白质。
常用的方法包括柱层析、凝胶电泳、亲和纯化等。
6. 蛋白质鉴定：最后一步是对提取得到的蛋白质进行鉴定和分析。
常用的鉴定方法包括质谱分析、Western blotting等。
以上就是提取蛋白质的具体步骤。
通过这些步骤，研究人员可以有效地提取并纯化蛋白质，为后续的实验和研究提供重要的支持。
希望以上内容对您有所帮助，谢谢！第二篇示例：蛋白质是生物体中重要的基本分子，具有多种生物学功能，包括结构支持、酶催化、信号传导等。
提取蛋白质是生物学研究中常用的实验方法之一。
下面我将介绍提取蛋白质的具体步骤。
1. 样品的制备首先要准备待提取的生物样品，可以是细胞、组织或者生物体。
样品的制备包括收集、洗涤、离心等步骤，确保样品的纯度和完整性。
2. 细胞破碎对于细胞样品，需要先将细胞破碎以释放蛋白质。
常用的细胞破碎方法包括超声波破碎、高压破碎、冻融破碎等，选择适合样品的方法进行破碎。
3. 蛋白质溶解破碎后的细胞溶液需要进行蛋白质溶解，这可以通过添加盐溶液、表面活性剂或有机溶剂等方法来实现。
分离提纯蛋白质的方法
分离提纯蛋白质的方法
蛋白质是营养中很重要的一类物质，它们可以参与营养的过程，也可以参与多种有机反应，因此，提纯蛋白质是很有必要的。
提纯蛋白质的方法一般有硅胶沉淀法、沉淀抽提法、膜分离法等。
一、硅胶沉淀法
硅胶沉淀法是一种常用的提纯蛋白质的方法，它可以将大分子质量，体积小的分子排除在外，只提取蛋白质，这种方法的优点是操作简单，实验时间短，并且耗材成本也较低。
操作时，将样品稀释到所需的浓度，将稀释液中加入适量的硅胶，冷却混匀，经过适当的时间，硅胶就会沉淀在液体中，沉淀物吸附在硅胶上，把沉淀后的液体收集起来，经过一定的漂洗操作，就可以得到纯的蛋白质。
二、沉淀抽提法
沉淀抽提法是一种常用的提取蛋白质的方法，它可以对样品中的蛋白质进行极限沉淀，然后通过抽提的方式分离蛋白质和其他组分。
操作时，将样品加入硫酸钾溶液，然后搅拌均匀，再添加一定量的酒精，使大分子量的蛋白质极限沉淀，抽提上层液体，将抽提的液体经过一定的处理，利用蒸馏抽提的方法，就可以提取出纯净的蛋白质。
三、膜分离法
膜分离法是一种利用滤膜的选择性孔径对物质的分离。
蛋白提取方法
蛋白提取方法蛋白是生物体内一种重要的有机化合物，具有多种生物学功能。
在生物医学研究、食品工业、药物研发等领域，蛋白的提取和纯化是非常重要的工作。
本文将介绍几种常见的蛋白提取方法，希望能对相关领域的研究人员有所帮助。
1. 细胞裂解法。
细胞裂解法是一种常见的蛋白提取方法，它通过破坏细胞膜，释放细胞内的蛋白质。
通常采用机械方法（如超声波破碎、高压破碎）或化学方法（如洗涤剂裂解）来实现细胞裂解。
这种方法操作简单，提取效率较高，适用于大多数类型的细胞。
2. 亲和层析法。
亲和层析法是一种通过蛋白与特定配体之间的亲和作用来实现蛋白提取的方法。
常用的亲和层析配体包括金属离子、抗体、亲和标记物等。
通过将这些配体固定在固定相上，再将混合蛋白溶液通过柱子进行层析，从而实现对目标蛋白的选择性提取。
这种方法对蛋白的纯化效果较好，但成本较高。
3. 凝胶过滤法。
凝胶过滤法是一种通过分子大小差异实现蛋白提取的方法。
通常采用多孔性凝胶作为固定相，将混合蛋白溶液通过凝胶柱进行层析，从而实现对蛋白的分离和提取。
这种方法操作简单，对蛋白的形态和功能影响较小，适用于对蛋白分子大小要求较高的应用场景。
4. 盐析法。
盐析法是一种通过蛋白与盐溶液中离子相互作用的差异实现蛋白提取的方法。
在盐浓度逐渐增大的过程中，蛋白质的溶解度会发生变化，从而实现对蛋白的分离和提取。
这种方法操作简单，成本较低，适用于对蛋白的选择性提取要求不高的场景。
5. 超滤法。
超滤法是一种通过膜的孔径大小选择性分离蛋白的方法。
通常采用超滤膜将混合蛋白溶液进行过滤，从而实现对蛋白的提取。
这种方法操作简单，对蛋白的分离效果较好，但需要注意膜的选择和操作条件的控制。
总结。
蛋白提取是生物医学研究、食品工业、药物研发等领域中的重要工作。
本文介绍了几种常见的蛋白提取方法，包括细胞裂解法、亲和层析法、凝胶过滤法、盐析法和超滤法。
每种方法都有其特点和适用场景，研究人员可以根据具体的实验要求选择合适的方法进行蛋白提取工作。
蛋白提取方法
蛋白提取方法蛋白质是生物体内一种非常重要的有机物质，它参与了许多生物体内的生命活动。
蛋白质的提取是生物化学和分子生物学研究中的一个非常重要的步骤，因此蛋白提取方法的选择和优化对于科研工作至关重要。
在蛋白提取的过程中，要克服细胞壁的障碍，破坏细胞膜，使蛋白质从细胞内释放出来。
本文将介绍几种常见的蛋白提取方法，希望能对相关研究工作有所帮助。
1. 直接破碎法。
直接破碎法是一种较为常见的蛋白提取方法，它适用于细胞壁较薄、易破碎的样品。
首先，将待提取的样品加入破碎缓冲液中，再通过高速离心或超声波破碎等方式使细胞破碎，释放出蛋白质。
这种方法操作简单，但需要注意的是破碎缓冲液的选择和破碎条件的控制，以避免蛋白质的降解和失活。
2. 化学溶解法。
化学溶解法是利用化学试剂破坏细胞膜和蛋白质的非共价键，将蛋白质从细胞内释放出来的方法。
常用的化学试剂包括SDS（十二烷基硫酸钠）、尿素、甲醇等。
这种方法操作简便，但需要注意的是化学试剂的浓度和作用时间的控制，以避免对蛋白质的影响。
3. 超声波法。
超声波法是利用超声波的机械作用和热效应破坏细胞膜，将蛋白质释放出来的方法。
超声波破碎不需要添加化学试剂，对蛋白质的影响较小，因此在保持蛋白质活性方面具有一定优势。
但需要注意的是超声波功率和破碎时间的控制，以避免对蛋白质的热性变性和氧化损伤。
4. 离心法。
离心法是利用不同蛋白质在离心过程中的沉降系数差异，将蛋白质分离提取的方法。
通过连续离心，可将蛋白质从细胞内提取出来。
这种方法操作简单，但需要注意的是离心条件的选择和沉淀物的重新悬浮，以避免蛋白质的丢失和沉淀物的污染。
5. 亲和层析法。
亲和层析法是利用蛋白质与特定配体之间的亲和作用，将蛋白质从混合物中选择性提取出来的方法。
通过在层析柱中填充亲和配体，可实现对特定蛋白质的纯化和提取。
这种方法操作复杂，但对蛋白质的选择性较好，适用于对蛋白质纯度要求较高的研究工作。
综上所述，蛋白提取是生物化学和分子生物学研究中的一个重要环节，选择合适的蛋白提取方法对于科研工作至关重要。
提取蛋白的方法
提取蛋白的方法
以下是 8 条关于提取蛋白的方法：
1. 沉淀法呀！就像那细沙在水中慢慢沉淀一样。
比如说，在做豆腐的时候，不就是通过一些物质让豆浆里的蛋白质沉淀下来嘛！这可是个很常用的法子哟！
2. 离心法呢！这不就像把东西使劲甩出去找到我们要的那个部分嘛。
你看，提取血液中的某种蛋白就经常用这个办法呀！
3. 层析法哇！这就如同在一个复杂的迷宫里准确找到我们要的宝贝蛋白。
比如说，从一堆混杂的物质里分离出特定的蛋白质，用这个准没错啦！
4. 电泳法嘿！可以想象成让蛋白们在特定的赛道上赛跑，然后我们就把目标蛋白给揪出来啦。
像检测一些蛋白的存在不就常用它嘛！
5. 亲和层析法呀！就好像蛋白们之间有独特的吸引力，我们利用这一点就能把要的蛋白抓住了呢。
比如提取和某种抗体结合的蛋白，这办法好用得很嘞！
6. 超滤法呢！类似用一个很精细的滤网把小分子筛掉留下蛋白质。
在浓缩蛋白溶液的时候不是常常会用到嘛！
7. 盐析法哇！就如同给蛋白的世界来点特别的调味，让它们乖乖地显现出来。
很多蛋白质的初步提取都离不开它呀！
8. 酸沉淀法哟！感觉像是给蛋白的环境来个小挑战，让它们沉淀下来等着我们去获取。
像从某些植物里提取蛋白就可能会用到呢！
我觉得提取蛋白的方法好多呀，每一种都有它独特的魅力和用途，关键是要根据具体情况选择最合适的那个！。
提取蛋白的常规方法
1、原料的选择早年为了研究的方便，尽量寻找含某种蛋白质丰富的器官从中提取蛋白质。
但至目前经常遇到的多是含量低的器官或组织且量也很小，如下丘脑、松果体、细胞膜或内膜等原材料，- 105 - 蛋白质提取与制备Protein Extraction and Preparation因而对提取要求更复杂一些。
原料的选择主要依据实验目的定。
从工业生产角度考虑，注意选含量高、来源丰富及成本低的原料。
尽量要新鲜原料。
但有时这几方面不同时具备。
含量丰富但来源困难，或含量来源均理想，但分离纯化操作繁琐，反而不如含量略低些易于获得纯品者。
一般要注意种属的关系，如鲣的心肌细胞色素C 较马的易结晶，马的血红蛋白较牛的易结晶。
要事前调查制备的难易情况。
若利用蛋白质的活性，对原料的种属应几乎无影响。
如利用胰蛋白酶水解蛋白质的活性，用猪或牛胰脏均可。
但若研究蛋白质自身的性质及结构时，原料的来源种属必须一定。
研究由于病态引起的特殊蛋白质（本斯.琼斯氏蛋白、贫血血红蛋白）时，不但使用种属一定的原料，而且要取自同一个体的原料。
可能时尽量用全年均可采到的原料。
对动物生理状态间的差异（如饥饿时脂肪和糖类相对减少），采收期及产地等因素也要注意。
2、前处理a、细胞的破碎材料选定通常要进行处理。
要剔除结缔组织及脂肪组织。
如不能立即进行实验，则应冷冻保存。
除了提取及胞细外成分，对细胞内及多细胞生物组织中的蛋白质的分离提取均须先将细胞破碎，使其充分释放到溶液中。
不同生物体或同一生物体不同的组织，其细胞破坏难易不一，使用方法也不完全相同。
如动物胰、肝、脑组织一般较柔软，作普通匀浆器磨研即可，肌肉及心组织较韧，需预先绞碎再制成匀桨。
⑴机械方法主要通过机械切力的作用使组织细胞破坏。
常用器械有：①高速组织捣碎机（转速可达10000rpm，具高速转动的锋利的刀片），宜用于动物内脏组织的破碎；②玻璃匀浆器（用两个磨砂面相互摩擦，将细胞磨碎），适用于少量材料，也可用不锈钢或硬质塑料等，两面间隔只有十分之几毫米，对细胞破碎程度较高速捣碎机高，机械切力对分子破坏较小。
蛋白质的提取的两种常用方法
蛋白质的提取的两种常用方法ztwpierr…大部分蛋白质都可溶于水、稀盐、稀酸或碱溶液，少数与脂类结合的蛋白质则溶于乙醇、丙酮、丁醇等有机溶剂中，因些，可采用不同溶剂提取分离和纯化蛋白质及酶。
（一）水溶液提取法稀盐和缓冲系统的水溶液对蛋白质稳定性好、溶解度大、是提取蛋白质最常用的溶剂，通常用量是原材料体积的1-5倍，提取时需要均匀的搅拌，以利于蛋白质的溶解。
提取的温度要视有效成份性质而定。
一方面，多数蛋白质的溶解度随着温度的升高而增大，因此，温度高利于溶解，缩短提取时间。
但另一方面，温度升高会使蛋白质变性失活，因此，基于这一点考虑提取蛋白质和酶时一般采用低温（5度以下）操作。
为了避免蛋白质提以过程中的降解，可加入蛋白水解酶抑制剂（如二异丙基氟磷酸，碘乙酸等）。
下面着重讨论提取液的pH值和盐浓度的选择。
1、pH值蛋白质，酶是具有等电点的两性电解质，提取液的pH值应选择在偏离等电点两侧的pH 范围内。
用稀酸或稀碱提取时，应防止过酸或过碱而引起蛋白质可解离基团发生变化，从而导致蛋白质构象的不可逆变化，一般来说，碱性蛋白质用偏酸性的提取液提取，而酸性蛋白质用偏碱性的提取液。
2、盐浓度稀浓度可促进蛋白质的溶，称为盐溶作用。
同时稀盐溶液因盐离子与蛋白质部分结合，具有保护蛋白质不易变性的优点，因此在提取液中加入少量NaCl等中性盐，一般以0.15摩尔。
升浓度为宜。
缓冲液常采用0.02-0.05M磷酸盐和碳酸盐等渗盐溶液。
（二）有机溶剂提取法一些和脂质结合比较牢固或分子中非极性侧链较多的蛋白质和酶，不溶于水、稀盐溶液、稀酸或稀碱中，可用乙醇、丙酮和丁醇等有机溶剂，它们具的一定的亲水性，还有较强的亲脂性、是理想的提脂蛋白的提取液。
但必须在低温下操作。
丁醇提取法对提取一些与脂质结合紧密的蛋白质和酶特别优越，一是因为丁醇亲脂性强，特别是溶解磷脂的能力强；二是丁醇兼具亲水性，在溶解度范围内（度为10%，40度为6.6%）不会引起酶的变性失活。
不同组织的蛋白提取方法99
不同组织的蛋白提取方法2017-07-18不同组织的蛋白提取方法一、植物组织蛋白质提取方法1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。
2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4小时）。
3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清夜，样品制备完成。
蛋白质提取液：300ml1、1Mtris-HCl（PH8）45ml2、甘油（Glycerol）75ml3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone6g这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！或者用三氯醋酸―丙酮沉淀法，离子浓度小的1、在液氮中研磨叶片2、加入样品体积3-204℃8000rpm以上13、的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm以上14、上样前加入裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15℃8000r pm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在4℃待用。
5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。
药品：提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中（终体积为5ml），使用前再加入1M的'DTT65ul/ml。
二、组织：肠黏膜应用TRIPURE提取蛋白质步骤：含蛋白质上清液中加入异丙醇：（1.5ml每1mlTRIPURE用量）倒转混匀，置室温10min离心：12000g，10min，4度，弃上清加入0.3M盐酸胍/95％乙醇：（2ml每1mlTRIPURE用量）振荡，置室温20min离心：7500g，5min，4度，弃上清重复0.3M盐酸胍/95％乙醇步2次沉淀中加入100％乙醇2ml充分振荡混匀，置室温20min离心：7500g，5min，4度，弃上清吹干沉淀1％SDS溶解沉淀离心：10000g，10min，4度取上清-20度保存（或可直接用于BLOT存在的问题：加入1％SDS4度离心后又多了白色沉定，SDS左右。
蛋白质提取的方法和原理
蛋白质提取的方法和原理
1、蛋白质提取方法
1.1 热处理法
热处理是一种简单而有效的蛋白质提取方法，通过高温高压或烧
焦来破坏细胞壁和细胞膜，并释放出蛋白质。
如热溶液法、微波法、
热压法等。
1.2 酸碱法
酸碱法是一种常用的蛋白质提取方法，通过改变蛋白质的电荷性质，使其带有正负电荷，从而在特定的pH下沉淀出来。
如硫酸钾法、
亚硫酸盐法、三氯乙酸法等。
1.3 有机溶剂法
有机溶剂法是一种常见的蛋白质提取方法，常用有机溶剂如甲醇、丙酮、氯仿等，通过溶解细胞膜并使蛋白质溶于有机溶剂中，经离心
分离得到蛋白质。
如甲醇法、氯仿法、醋酸纤维素膜法等。
1.4 冻融法
冻融法是一种新兴的蛋白质提取方法，通过冻结细胞后迅速回温，使细胞壁破裂并释放出蛋白质。
该方法不需要使用有机溶剂或酸碱处理，可避免蛋白质的降解和失活。
2、蛋白质提取的原理
蛋白质提取的原理是利用特定的化学物质或物理条件，破坏细胞
膜和细胞壁，从而释放出蛋白质。
蛋白质在细胞内可以存在于细胞膜、细胞壁、细胞质或细胞核中，提取蛋白质需要根据不同的生物学样品
及其组分情况采用不同的方法。
其中，热处理法是利用高温高压或烧焦等方式破坏细胞壁和细胞膜，从而释放出蛋白质；酸碱法是通过改变蛋白质的电荷性质，在特
定的pH值下使其沉淀出来；有机溶剂法是利用有机溶剂溶解细胞膜，
并使蛋白质溶于有机溶剂中；冻融法则是通过冻结细胞后迅速回温，
使细胞壁破裂并释放出蛋白质。
在蛋白质提取过程中，需要注意避免蛋白质的降解和失活，以及
尽量减少对蛋白质的污染。
蛋白质提取方法
方法一：碱溶酸沉法利用蛋白质可溶于稀碱，当pH接近等电点时沉淀析出的原理，先用碱性溶液来溶解蛋白质，分离出澄清溶液，再将溶液的pH降到蛋白质的等电点使蛋白质沉淀析出，接下来分离沉淀下来的蛋白质。
碱溶酸沉法是目前操作最成熟、应用最多的蛋白质提取方法，常用的碱是氢氧化钠溶液。
碱溶酸沉法具有操作简便、易于控制、成本低廉的优点，缺点是提取操作时间长，蛋白质提取率低，易导致蛋自质变性，对某些原料提取出的蛋白质色泽深等碱溶酸沉法提取蛋白质的影响因素包括碱液浓度、碱液用量、提取温度和提取时间等提取时需要辅助适当的搅拌，以利于蛋白质的溶出。
方法二：盐溶酸沉法盐溶酸沉法的原理是蛋白质可溶于低浓度的盐溶液中，调整溶液pH至蛋白质等电点时，蛋白质则沉淀析出。
浓度较低的中性盐溶液有促进蛋白质溶解、保护蛋白质活性的作用;浓度高则会导致蛋白质发生盐析作用。
常用的盐溶液是氯化钠溶液和六偏磷酸钠溶液。
和传统的碱溶酸沉法相比，盐溶酸沉法的蛋白质提取率较高，蛋白质变性差，但纯度低。
方法三：水酶法该方法适用于提取油脂含量较高的植物蛋白，在获得高品质油脂的同时得到高质量的蛋白质。
在高油植物种子中，油脂存在于细胞内，常与蛋白质或碳水化合物等大分子结合在一起，形成脂多糖或脂蛋白等复合体，必须将油料组织的细胞结构和油脂复合体破坏，才能提出里面的油脂和蛋白质。
水酶法以机械和酶解为手段，来降解细胞壁，分离出蛋白质。
操作时先借助研磨、粉碎等辅助操作将种子组织破碎，再采用对细胞壁以及对脂多糖、脂蛋白等复合体有降解作用的酶(如纤维素酶、半纤维素酶、蛋白酶等)来进行处理，使细胞壁断裂，脂多糖、脂蛋白等复合体破坏，从而使蛋白质和油脂容易从细胞中释放出来，再经离心处理即可将蛋白质与油脂分离，得到蛋白质[381。
水酶法的特点是可同时提取油脂和蛋白质，反应条件温和，蛋白质不易变性，提取率高;缺点是酶的成本较高，用量大。
水酶法操作的关键是酶的选择，根据原料细胞结构和化学成分选取恰当的酶，才能保证提取的高效率。
植物提取蛋白质的方法
植物提取蛋白质的方法植物提取蛋白质是一项关键的实验技术，它可以用于分离纯化和研究各种不同的植物蛋白质。
在这篇文章中，我将介绍一些常见的植物提取蛋白质的方法。
一、机械法提取蛋白质机械法提取蛋白质是最常见的提取方法之一。
机械方法能够充分破碎植物细胞壁，释放细胞液中的蛋白质。
这一方法相对简单，并且适用于大多数植物材料。
首先，将植物样品切碎，例如使用搅拌器或切割机。
然后，将样品置于高速搅拌器中，加入一定量的提取缓冲液。
提取缓冲液的选择会因不同植物而异，常见的包括Tris-HCl缓冲液、PBS缓冲液等。
随后，搅拌样品，使其充分混合，一般搅拌时间为30分钟到1小时。
搅拌完成后，使用离心机将混合液离心，离心时间和速度会因样品的不同而有所变化。
离心完成后，上清液中富含蛋白质，可以用于进一步的分离纯化。
二、化学法提取蛋白质化学法提取蛋白质是一种革命性的方法，它可以应用于很多不同类型的植物材料。
化学法提取蛋白质通常使用表面活性剂来破坏细胞膜，从而释放蛋白质。
一个常用的化学法是使用Tween-20。
首先，将植物样品切碎，然后将样品与一定量的提取缓冲液一起加入离心管中。
提取缓冲液中含有Tween-20等表面活性剂，作用是破坏细胞膜结构。
然后，使用离心机将混合液离心，离心时间和速度的选择会因样品的不同而有所不同。
离心完成后，上清液中富含蛋白质，可以用于进一步的分离纯化。
化学法提取蛋白质相比机械法来说，可以更彻底地破坏细胞膜，更有效地释放蛋白质。
但是，使用化学方法也要注意表面活性剂的种类和浓度，过高的浓度可能会使得蛋白质变性。
三、酶解法提取蛋白质酶解法提取蛋白质是一种选择性高、过程温和的方法。
它利用酶的特异性作用，选择性地降解植物组织中的细胞壁，从而释放蛋白质。
酶解法的步骤较为简单。
首先，将植物样品切碎，然后加入适量的酶解缓冲液和适当浓度的酶。
酶解缓冲液的选择会因不同酶而异，常见的包括PBS缓冲液和Tris-HCl缓冲液等。
蛋白提取方法
蛋白质提取的方法总汇 2005-4-15 23:00:00 来源：生命经1、植物组织蛋白质提取方法1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。
2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4小时）。
3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清夜，样品制备完成。
蛋白质提取液：300ml1、1Mtris-HCl（PH8） 45ml2、甘油（Glycerol）75ml3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！2、植物组织蛋白质提取方法三氯醋酸—丙酮沉淀法1、在液氮中研磨叶片2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心（4℃8000rpm以上1小时）弃上清。
3、加入等体积的冰浴丙酮（含0.07%的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm以上1小时），然后真空干燥沉淀，备用。
4、上样前加入裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在4℃待用。
5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。
药品：提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中（终体积为5ml），使用前再加入1M的DTT65ul/ml。
这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！3、组织：肠黏膜目的：WESTERN BLOT检测凋亡相关蛋白的表达应用TRIPURE提取蛋白质步骤：含蛋白质上清液中加入异丙醇：（1.5ml每1mlTRIPURE用量）倒转混匀，置室温10min离心：12000 g，10min，4度，弃上清加入0.3M盐酸胍/95％乙醇：（2ml每1mlTRIPURE用量）振荡，置室温20min离心： 7500g，5 min，4度，弃上清重复0.3M盐酸胍/95％乙醇步2次沉淀中加入100％乙醇 2ml充分振荡混匀，置室温20 min离心： 7500g，5min，4度，弃上清吹干沉淀1％SDS溶解沉淀离心：10000g，10min，4度取上清-20度保存（或可直接用于WESTERN BLOT）存在的问题：加入1％SDS后沉淀不溶解，还是很大的一块，4度离心后又多了白色沉定，SDS结晶？测浓度，含量才1mg/ml左右。
提取蛋白质的4种方法
提取蛋白质的4种方法
1. 离子交换：离子交换是最常用的蛋白质提取方法，它使用含有
有机硫酸盐的磷酸盐溶液来提取pH4-9之间的膜蛋白。
它使用有机硫
酸盐作为极性试剂，使蛋白质从其离子溶液中沉淀出来并固定到树脂上，从而被提取。
2. 垂直层析：垂直层析是蛋白质提取的另一种方法，它使用流动
相来垂直运动横穿膜，从而把低浓度的蛋白质从其结晶盐溶液中提取
出来。
它是一种有效的后处理方法，能有效地改善提取的蛋白质的细节、稳定性和纯度。
3. 高通量流精密：高通量流精密设备可以将流体和分散体相分离，包括沉淀物和蛋白质。
它使用高压水流将杂质和悬浮物从蛋白质溶液
中清除，然后用不同的层析方法将蛋白质从其分散体中提取出来。
4. 柱单柱层析：柱单柱层析是另一种蛋白质提取技术，它使用多
种不同的树脂来分离蛋白质从其离子溶液中。
它将溶液通过固定式柱，并使用柱中所含的不同类型的树脂来把具有不同电荷性质的蛋白质从
溶液中提取出来。
蛋白提取方法
蛋白提取方法蛋白质是生物体内非常重要的一类大分子有机化合物，它们在生命体内扮演着极其重要的角色。
蛋白质的提取是生物化学和生物技术中的一个重要环节，对于研究蛋白质的结构和功能具有非常重要的意义。
本文将介绍一些常用的蛋白提取方法，希望能够对相关领域的研究者有所帮助。
1. 细胞破碎法。
细胞破碎法是蛋白质提取的常用方法之一。
其原理是通过机械、化学或生物学方法破坏细胞膜，释放细胞内的蛋白质。
通常采用超声波破碎、高压破碎或冻融破碎等方法进行细胞破碎。
这种方法提取的蛋白质纯度较高，适用于大多数细胞类型。
2. 溶液抽提法。
溶液抽提法是利用有机溶剂或其混合物与细胞内的蛋白质发生亲和作用，从而将蛋白质从细胞中提取出来。
这种方法操作简单，但需要注意有机溶剂对蛋白质的特异性，以及对蛋白质的影响。
常用的有机溶剂包括醇类、酚类和酮类等。
3. 离心法。
离心法是利用不同蛋白质在离心力作用下沉降速度不同的原理，通过超速离心将蛋白质分离提取出来。
这种方法适用于提取大量蛋白质，但需要注意离心条件的选择和操作技巧。
4. 亲和层析法。
亲和层析法是利用蛋白质与特定配体之间的特异性结合来实现蛋白质的纯化和提取。
这种方法操作简单，且提取的蛋白质纯度较高，适用于对蛋白质纯度要求较高的实验。
5. 膜分离法。
膜分离法是利用蛋白质在膜上的分配系数不同，通过膜的渗透分离来实现蛋白质的提取。
这种方法操作简单，但需要注意膜的选择和渗透条件的控制。
总结。
蛋白质提取是生物化学和生物技术中的重要环节，不同的提取方法适用于不同的实验要求。
在实际操作中，需要根据实验的具体要求选择合适的蛋白提取方法，并注意操作技巧，以获得高质量的蛋白样品。
希望本文介绍的蛋白提取方法能够对相关领域的研究者有所帮助。
血清中蛋白提取方法
血清中蛋白提取方法血清中蛋白提取方法引言：血清中蛋白质的提取是生物化学和生物医学研究中非常重要的步骤之一。
血清中蕴含着丰富的信息，包括生物标志物、生长因子和激素等，这些成分对于研究疾病的发生机制以及诊断和治疗具有重要意义。
本文将介绍一些常用的血清中蛋白提取方法，帮助读者更好地理解和掌握这一技术。
一、盐析法盐析法是一种常用的分离和富集蛋白质的方法。
该方法通过在高盐浓度下使蛋白质发生沉淀，实现了与其他杂质的分离。
具体步骤如下：1. 准备工作：在试管中加入一定量的样品血清，并加入适量的盐溶液（如氯化铵溶液）。
2. 混匀：用试管摇床等设备将样品充分混匀，使盐溶液与血清充分接触。
3. 沉淀：将试管置于低温环境（如冰浴或低温离心机中）进行沉淀。
此时，沉淀的是蛋白质，而其他大部分成分仍溶于上清液中。
4. 离心：使用高速离心机将试管进行离心，离心速度和时间可根据样品的具体情况进行调整。
5. 分离：将上清液倒入新的试管中，留下的沉淀即为富含蛋白质的组分。
二、电泳方法电泳方法是一种常用的蛋白质分离和富集技术。
通过在电场的作用下，根据蛋白质的大小和电荷差异将其分离。
以下是一种常见的电泳方法：1. 准备样品：将一定量的血清样品进行处理，如去除脂肪和其他杂质。
2. 电泳凝胶：制备聚丙烯酰胺凝胶，并根据需要选择合适的凝胶浓度和孔径大小。
3. 样品加载：将样品血清溶液加载到凝胶孔中。
4. 电泳操作：将电泳装置连接到电源，并设定适当的电场强度和时间。
5. 分析和分离：在电泳运行后，通过染色或质谱等方法对蛋白带进行观察和分析，以确定所需蛋白质的位置。
三、亲和层析法亲和层析法是一种基于蛋白质与特定配体的亲和作用进行分离和富集的方法。
以下是该方法的一般步骤：1. 准备亲和层析柱：将具有亲和性的配体固定在柱子内部。
2. 样品准备：将血清样品进行前处理，如去除异物和杂质。
3. 样品加载：将经处理的血清样品加载到亲和层析柱中。
4. 洗脱：通过更改溶液条件或引入特定的试剂，洗脱所需的蛋白质。
提取蛋白的常规方法
1、原料的选择早年为了研究的方便，尽量寻找含某种蛋白质丰富的器官从中提取蛋白质。
但至目前经常遇到的多是含量低的器官或组织且量也很小，如下丘脑、松果体、细胞膜或内膜等原材料，- 105 - 蛋白质提取与制备Protein Extraction and Preparation因而对提取要求更复杂一些。
原料的选择主要依据实验目的定。
从工业生产角度考虑，注意选含量高、来源丰富及成本低的原料。
尽量要新鲜原料。
但有时这几方面不同时具备。
含量丰富但来源困难，或含量来源均理想，但分离纯化操作繁琐，反而不如含量略低些易于获得纯品者。
一般要注意种属的关系，如鲣的心肌细胞色素C 较马的易结晶，马的血红蛋白较牛的易结晶。
要事前调查制备的难易情况。
若利用蛋白质的活性，对原料的种属应几乎无影响。
如利用胰蛋白酶水解蛋白质的活性，用猪或牛胰脏均可。
但若研究蛋白质自身的性质及结构时，原料的来源种属必须一定。
研究由于病态引起的特殊蛋白质（本斯.琼斯氏蛋白、贫血血红蛋白）时，不但使用种属一定的原料，而且要取自同一个体的原料。
可能时尽量用全年均可采到的原料。
对动物生理状态间的差异（如饥饿时脂肪和糖类相对减少），采收期及产地等因素也要注意。
2、前处理a、细胞的破碎材料选定通常要进行处理。
要剔除结缔组织及脂肪组织。
如不能立即进行实验，则应冷冻保存。
除了提取及胞细外成分，对细胞内及多细胞生物组织中的蛋白质的分离提取均须先将细胞破碎，使其充分释放到溶液中。
不同生物体或同一生物体不同的组织，其细胞破坏难易不一，使用方法也不完全相同。
如动物胰、肝、脑组织一般较柔软，作普通匀浆器磨研即可，肌肉及心组织较韧，需预先绞碎再制成匀桨。
⑴机械方法主要通过机械切力的作用使组织细胞破坏。
常用器械有：①高速组织捣碎机（转速可达10000rpm，具高速转动的锋利的刀片），宜用于动物内脏组织的破碎；②玻璃匀浆器（用两个磨砂面相互摩擦，将细胞磨碎），适用于少量材料，也可用不锈钢或硬质塑料等，两面间隔只有十分之几毫米，对细胞破碎程度较高速捣碎机高，机械切力对分子破坏较小。
不同组织的蛋白提取方法
不同组织的蛋白提取方法一、植物组织蛋白质提取方法1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。
2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4小时）。
3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清夜，样品制备完成。
蛋白质提取液：300ml1、1Mtris-HCl（PH8）45ml2、甘油（Glycerol）75ml3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！或者用三氯醋酸—丙酮沉淀法，这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！1、在液氮中研磨叶片2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心（4℃8000rpm 以上1小时）弃上清。
3、加入等体积的冰浴丙酮（含0.07%的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm 以上1小时），然后真空干燥沉淀，备用。
4、上样前加入裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在4℃待用。
5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。
药品：提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中（终体积为5ml），使用前再加入1M的DTT65ul/ml。
二、组织：肠黏膜应用TRIPURE提取蛋白质步骤：含蛋白质上清液中加入异丙醇：（1.5ml每1mlTRIPURE用量）倒转混匀，置室温10min离心：12000g，10min，4度，弃上清加入0.3M盐酸胍/95％乙醇：（2ml每1mlTRIPURE用量）振荡，置室温20min离心：7500g，5min，4度，弃上清重复0.3M盐酸胍/95％乙醇步2次沉淀中加入100％乙醇2ml充分振荡混匀，置室温20min离心：7500g，5min，4度，弃上清吹干沉淀1％SDS溶解沉淀离心：10000g，10min，4度取上清-20度保存（或可直接用于WESTERN BLOT）存在的问题：加入1％SDS后沉淀不溶解，还是很大的一块，4度离心后又多了白色沉定，SDS结晶？测浓度，含量才1mg/ml左右。
提取蛋白质的常用方法
提取蛋白质的常用方法
1. 溶解法：将细胞（或组织）用一种溶解剂处理，使膜和细胞器溶解析出蛋白质，如高盐溶解法、Triton X-100 溶解法、尿素溶解法等。
2. 离心法：利用超高速离心分离细胞器或亚细胞结构，然后用溶解剂提取其中的蛋白质。
3. 凝胶过滤法：将样品通过分子筛就可以使分子量较小的蛋白质通过，大分子则被滞留。
4. 电泳法：根据蛋白质的电性差异，在电场中移动并分离。
5. 免疫沉淀法：利用特异性抗体结合目标蛋白，再沉淀出来。
6. 层析法：将混合蛋白质物质分离出来，如离子交换层析、凝胶过滤层析、亲和层析等。
7. 磁珠法：利用磁性珠子表面的特定化合物与蛋白质结合，然后用磁场吸附和分离蛋白质。
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1、原料的选择早年为了研究的方便，尽量寻找含某种蛋白质丰富的器官从中提取蛋白质。
但至目前经常遇到的多是含量低的器官或组织且量也很小，如下丘脑、松果体、细胞膜或内膜等原材料，- 105 - 蛋白质提取与制备Protein Extraction and Preparation因而对提取要求更复杂一些。
原料的选择主要依据实验目的定。
从工业生产角度考虑，注意选含量高、来源丰富及成本低的原料。
尽量要新鲜原料。
但有时这几方面不同时具备。
含量丰富但来源困难，或含量来源均理想，但分离纯化操作繁琐，反而不如含量略低些易于获得纯品者。
一般要注意种属的关系，如鲣的心肌细胞色素C 较马的易结晶，马的血红蛋白较牛的易结晶。
要事前调查制备的难易情况。
若利用蛋白质的活性，对原料的种属应几乎无影响。
如利用胰蛋白酶水解蛋白质的活性，用猪或牛胰脏均可。
但若研究蛋白质自身的性质及结构时，原料的来源种属必须一定。
研究由于病态引起的特殊蛋白质（本斯.琼斯氏蛋白、贫血血红蛋白）时，不但使用种属一定的原料，而且要取自同一个体的原料。
可能时尽量用全年均可采到的原料。
对动物生理状态间的差异（如饥饿时脂肪和糖类相对减少），采收期及产地等因素也要注意。
2、前处理a、细胞的破碎材料选定通常要进行处理。
要剔除结缔组织及脂肪组织。
如不能立即进行实验，则应冷冻保存。
除了提取及胞细外成分，对细胞内及多细胞生物组织中的蛋白质的分离提取均须先将细胞破碎，使其充分释放到溶液中。
不同生物体或同一生物体不同的组织，其细胞破坏难易不一，使用方法也不完全相同。
如动物胰、肝、脑组织一般较柔软，作普通匀浆器磨研即可，肌肉及心组织较韧，需预先绞碎再制成匀桨。
⑴机械方法主要通过机械切力的作用使组织细胞破坏。
常用器械有：①高速组织捣碎机（转速可达10000rpm，具高速转动的锋利的刀片），宜用于动物内脏组织的破碎；②玻璃匀浆器（用两个磨砂面相互摩擦，将细胞磨碎），适用于少量材料，也可用不锈钢或硬质塑料等，两面间隔只有十分之几毫米，对细胞破碎程度较高速捣碎机高，机械切力对分子破坏较小。
小量的也可用乳钵与适当的缓冲剂磨碎提取，也可加氧化铝、石英砂及玻璃粉磨细。
但在磨细时局部往往生热导致变性或pH 显着变化，尤其用玻璃粉和氧化铝时。
磨细剂的吸附也可导致损失。
⑵物理方法主要通过各种物理因素的作用，使组织细胞破碎的方法。
Ⅰ反复冻融法于冷藏库或干冰反复于零下15～20℃使之冻固，然后缓慢地融解，如此反复操作，使大部分细胞及细胞内颗粒破坏。
由于渗透压的变化，使结合水冻结产生组织的变性，冰片将细胞膜破碎，使蛋白质可溶化，成为粘稠的浓溶液，但脂蛋白冻结变性。
Ⅱ冷热变替法将材料投入沸水中，于90℃左右维持数分钟，立即置于冰浴中使之迅速冷却，绝大部分细胞被破坏。
Ⅲ超声波法暴露于9～10 千周声波或10～500 千周超声波所产生的机械振动，只要有设备该法方便且效果也好，但一次处理量较小。
应用超声波处理时应注意避免溶液中气泡的存在。
处理一些超声波敏感的蛋白质酶时宜慎重。
Ⅳ加压破碎法加一定气压或水压也可使细胞破碎。
⑶化学及生物化学方法Ⅰ有机溶媒法粉碎后的新鲜材料在0℃以下加入5～10 倍量的丙酮，迅速搅拌均匀，可破碎细胞膜，破坏蛋白质与脂质的结合。
蛋白质一般不变性，被脱脂和脱水成为干燥粉末。
用少量乙醚洗，- 106 - 蛋白质提取与制备Protein Extraction and Preparation经滤纸干燥，如脱氢酶等可保存数月不失去活性。
Ⅱ自溶法将待破碎的鲜材料在一定pH 和适当的温度下，利用自身的蛋白酶将细胞破坏，使细胞内含物释放出来。
比较稳定，变性较难，蛋白质不被分解而可溶化。
利用该法可从胰脏制取羧肽酶。
自体融解时需要时间，需加少量甲苯、氯仿等。
应防止细菌污染。
于温室30℃左右较早溶化。
自体融解过程中PH 显着变化，随时要调节pH。
自溶温度选在0～4℃，因自溶时间较长，不易控制，所以制备活性蛋白质时较少用。
Ⅲ酶法与前述的自体融法同理，用胰蛋白酶等蛋白酶除去变性蛋白质。
但值得提出的是溶菌酶处理时，它能水解构成枯草菌等菌体膜的多糖类。
能溶解菌的酶分布很广。
尤其卵白中含量高，而多易结晶化。
1g 菌体加1～10mg 溶菌酶，～内完全溶菌。
于生理食盐水或蔗糖溶液中溶菌，虽失去细胞膜，但原形质没有脱出。
除溶菌酶外，蜗牛酶及纤维素酶也常被选为破坏细菌及植物细胞用。
表面活性剂处理较常用的有十二烷基磺酸钠、氯化十二烷基吡淀及去氧胆酸钠等。
此外一些细胞膜较脆弱的细胞，可把它们置于水或低渗缓冲剂中透析将细胞胀破。
b、细胞器的分离制备某一种生物大分子需要采用细胞中某一部分的材料，或者为了纯化某一特定细胞器上的生物大分子，防止其他细胞组分的干扰，细胞破碎后常将细胞内各组分先行分离，对于制备一些难度较大需求纯度较高的生物大分子是有利的。
尤其近年来分子生物学、分子遗传学、遗传工程等学科和技术的发展，对分布在各种细胞器上的核酸和蛋白质的研究工作日益增多，分离各种细胞器上的各类核酸和特异性蛋白质已成为生物大分子制备工作重要内容之一。
各类生物大分子在细胞内的分布是不同的。
DNA 几乎全部集中在细胞核内。
RNA 则大部分分布于细胞质。
各种酶在细胞内分布也有一定位置。
因此制备细胞器上的生物大分子时，预先须对整个细胞结构和各类生物大分子在细胞内分布匹有所了解。
以肝细胞为例整理如表1表1 蛋白质、酶及核酸在肝细胞内分布情况细胞器名称主要蛋白质及酶类核酸类细胞核精蛋白、组蛋白、核酸合成酶系RNA占总量10%左右DNA 几乎全部粒线体电子传递、氯化磷酸化、三羧酸循环、脂肪酸氧化、氨基酸氧化、脲合成等酶系RNA 占总量5%左右DNA 微量内质网（微粒体）蛋白质合成酶系、羟化酶系RNA占总量50%左右溶酶体水解酶系（包括核酸酶、磷酸脂酶、组织蛋白酶及糖苷及糖苷酶等）高尔基氏体糖苷转移酶、粘多糖及类固醇合成酶系细胞膜载体与受体蛋白、特异抗蛋、ATP 酶、环化腺苷酶、5’-核苷酸酶、琥珀酸脱氢酶、葡萄糖-6-磷酸酶等细胞液嘧啶和嘌呤代谢、氨基酸合成酶系、可溶性蛋白类RNA（主要为tRNA）占总量30%- 107 - 蛋白质提取与制备Protein Extraction and Preparation细胞器的分离一般采用差速离心法。
细胞经过破碎后，在适当介质中进行差速离心。
利用细胞各组分质量大小不同，沉降于离心管内不同区域，分离后即得所需组分。
细胞器的分离制备、介质的选择十分重要。
最早使用的介质是生理盐水。
因它容易使亚细胞颗粒发生聚集作用结成块状，沉淀分离效果不理想，现一般改用蔗糖、Ficoll（一种蔗糖多聚物）或葡萄糖-聚乙二醇等高分子溶液。
水溶液提取：大部分蛋白质均溶于水、稀盐、稀碱或稀酸溶液中。
因此蛋白质的提取一般以水为主。
稀盐溶液和缓冲溶液对蛋白质稳定性好、溶度大，也是提取蛋白质的最常用溶剂。
盐溶液提取：以盐溶液及缓冲液提取蛋白质进常注意下面几个因素。
盐浓度等渗盐溶液尤以～L 磷酸盐缓冲液和碳酸盐缓冲液常用。
L 氯化钠溶液应用也较多。
如6-磷酸葡萄糖脱氢酶用L 碳酸氢钠液提取等。
有时为了螯合某些金属离子和解离酶分子与其他杂质的静电结合，也常使用枸橼酸钠缓冲液和焦磷酸钠缓冲液。
有些蛋白质在低盐浓度下浓度低，如脱氧核糖核蛋白质需用1mol/L 以上氯化钠液提取。
总之，只要能溶解在水溶液中而与细胞颗粒结合不太紧密的蛋白质和酶，细胞破碎后选择适当的盐浓度及PH，一般是不难提取的。
只有某些与细胞颗粒上的脂类物质结合较紧的，需采用有机溶剂或加入表面活性剂处理等方法提取。
PH 值：蛋白质提取液的PH 值首先应保证在蛋白质稳定的范围内，即选择在偏离等电点两侧。
如碱性蛋白质则选在偏酸一侧，酸性蛋白质选择偏碱一侧，以增大蛋白质的溶解度，提高提取效果。
如细胞色素C 属碱性蛋白质，常用稀酸提取，肌肉甘油醛-3-磷酸脱氢酶属酸性蛋白质，用稀碱提取。
某些蛋白质或酶与其分物质结合常以离子键形式存在，选择PH3～6 范围对于分离提取是有利的。
温度：多数酶的提取温度在5℃以下。
少数对温度耐受性较高的蛋白质和酶，可适当提高温度，使杂蛋白变性分离且也有利于提取和进一步纯化。
如胃蛋白酶等及许多多肽激素类，选择37～50℃条件下提取，效果比低温提取更好。
此外提取酶时加入底物或辅酶，改变酶分子表面电荷分布，也能促进提取效果。
有机溶剂提取：有机溶剂提取用于提取蛋白质的实例至今是不多的。
但一些和脂结合较牢或分子中非极性侧链较多的蛋白质，不溶于水、稀盐或稀碱液中，可用不同比例的有机溶剂提取。
从一些粒线体（Mitochondria)及微粒体（Microsome)等含多量脂质物质中提取蛋白质时，采用Morton 的丁醇法效果较好。
因丁醇使蛋白质的变性较少，亲脂性强，易透入细胞内部，与水也能溶解10%，因此具有脂质与水之间的表面活性作用，可占据蛋白质与脂质的结合点，也阻碍蛋白质与脂质的再结合，使蛋白质在水中溶解能力大大增加。
丁醇提取法的pH 及温度选择范围较广（pH3～10，温度-2℃至40℃）。
国内用该法曾成功地提取了琥珀酸脱氢酶。
- 108 - 蛋白质提取与制备Protein Extraction and Preparation丁醇法对提取碱性磷酸脂酶效果也是十分显着的。
胰岛素既能溶于稀酸、稀碱又能溶于酸性乙醇或酸性丙酮中。
以60—70%的酸性乙醇提取效果最好，一方面可抑制蛋白质水解酶对胰岛素的破坏，同时也达到大量除去杂蛋白的目的。
表面活性剂的利用：对于某些与脂质结合的蛋白质和酶，也有采用表面活性剂如胆酸盐及十二烷基磺酸钠等处理。
表面活性剂有阴离子型（如脂肪酸盐、烷基苯磺酸盐及胆酸盐等），阳离子型（如氧化苄烷基二甲基铵等）及非离子型（Triton X-100 、Tirton X-114、吐温60 及吐温80）等。
非离子型表面活性剂比离子型温和，不易引起酶失活，使用较多。
对于膜结构上的脂蛋白和结构，己广泛采用胆酸盐处理，两者形成复合物，并带上净电荷，由于电荷再排斥作用使膜破裂。
近年来研究膜蛋白使用表面活性剂的稀溶液提取时，较喜欢用非离子型表面活性剂。
对提取物的保护：在各种细胞中普遍存在着蛋白水解酶，提取时要注意防止由它引起的水解。
前面所讲的降低提取温度其目的之一也是防止蛋白水解酶的水解。
多数蛋白水解酶的最适PH 在3～5 或更高些，因在较低PH 条件下可降低蛋白质水解酶引起的破坏程度。
低pH可使许多酶的酶原在提取过程中不致激活而保留在酶原状态，不表现水解活力。
加蛋白质水解酶的抑制剂也同样起保护作用，如以丝氨酸为活性中心的酶加二异丙基氟磷酸，以巯基为中心的酶加对氯汞苯甲酸等。
提取溶液中加有机溶剂时也能产生相类似的作用。
蛋白水解酶的性质变化很大，上述条件均视具体对象而变化。