呼吸道九联检操作规程-SOP
呼吸道九联检简要操作规程
呼吸道九联检简要操作规程一采血要求1. 静脉血，指尖血（儿童）2. 拒收溶血标本。
脂血标本不影响检测。
二所需实验仪器和设备1. 荧光显微镜2. 洗盒，湿盒3. 摇床4. 15微升和150微升量程的移液器5. 1000毫升量筒，1000毫升玻璃容器三准备工作：提前30分钟取出试剂盒恢复至室温，同时将试剂②中的成分加入1L蒸馏水，摇匀直至完全融化。
四试验步骤：25ul血清+25 ul PBS溶液↓混匀取混合后的液体30ul↓加150ul吸附剂[⑦]↓混匀，静置1分钟离心4000转10-15分钟↓在载玻片上每孔加15ul上清液↓放入湿盒37度温育60分钟↓用PBS洗液冲洗载玻片后，浸泡在PBS洗液中并放在摇床上摇动10分钟，再用蒸馏水冲洗↓自然晾干或吹干，每孔加入15ul结合物[⑤]↓放入湿盒37度温育30分钟↓用PBS洗液冲洗载玻片，浸泡在PBS洗液中并放在摇床上摇动10分钟，再用蒸馏水冲洗自然晾干或吹干↓加封闭介质盖上盖玻片观察结果注意事项：1，加样时，移液器不要触碰离心管底部的沉淀和九联检包被孔2，实验结束后，九联检片子最好在2-3小时内观察，第二天观察不影响结果判断。
若需保存，需冷冻避光。
3，结果判断第2,5,6,7,8,9包被孔的阳性细胞为荧光均匀分布在包被细胞上，并且为明显的绿色；阳性细胞数占3%以上时，报阳性，其余阴性。
4，PBS常温放置一星期不影响实验结果，但要保证在此期间不被污染5.若实验室没有摇床，洗涤过程中中间换一次PBS，同样能达到洗涤效果，而不需要震摇郑州安图绿科生物有限公司。
呼吸道九联检技术手册
一、呼吸道感染概述呼吸道感染是指病原体感染人体的鼻腔、咽喉、气管和支气管等呼吸系统。
分为上呼吸道感染和下呼吸道感染，上呼吸道感染常见的是急性上呼吸道感染（acute upper respir tract infection），指鼻腔、咽或喉部急性炎症的概称，是呼吸道最常见的一种传染病。
常见病因为病毒，少数由细菌引起。
患者不分年龄、性别、职业和地区。
不仅具有较强的传染性，而且可引起严重并发症。
下呼吸道感染是最常见的感染性疾患，包括急性气管——支气管炎、慢性支气管炎、肺炎、支气管扩张等，由病毒、细菌、支原体、衣原体、军团菌等微生物引起，其防治应遵循预防为主、准确诊断、及时治疗的原则，治疗时必须明确引起感染的病原体以选择有效的抗生素。
二、非典型呼吸道病原体已报道的非典型呼吸道病原体有很多，最常见的有嗜肺军团菌、肺炎支原体、肺炎衣原体、Q热立克次体、腺病毒、呼吸道合胞病毒、流感病毒、副流感病毒等。
嗜肺军团菌嗜肺军团菌(Legionella pneumophila,LP)是一种兼性细胞内致病菌，有鞭毛，革兰氏阴性，军团菌科军团菌属多形态性的短小球杆菌。
其不抗酸，无孢子，无荚膜，类似于杆菌。
不能分解明胶、糖类或是尿素，同时，不可参加酵解反应。
嗜肺军团菌无色，也非自身荧光，氧化酶与过氧化氢酶测试阳性，β-内酰胺酶阳性。
专性需氧，在自然界可长期存活，如在蒸馏水中可存活100d以上，污水中可存活一年，对热和一般消毒剂敏感。
菌落特征为灰白色，有光泽，湿润，圆形，凸起，并有特殊臭味，革兰氏染色不明显，多用镀银法或Giemsa法染色。
广泛分布于天然淡水环境或人工水域中，在阿米巴体内寄生，亦可感染人巨噬细胞，在其胞内繁殖和杀死人巨噬细胞，是引起军团菌病（军团菌肺炎）的重要病原体。
军团菌病在国内外时有爆发流行，中央空调冷凝塔水系统是引起军团菌病的主要传染源，病死率较高。
目前已知军团菌有48个种70多个血清型，其中嗜肺军团菌有15个血清型，血清型-1是引起社区获得性肺炎和院内感染性肺炎的重要病原体。
呼吸道九联检SOP
呼吸道九联检操作程序一、呼吸道感染概述呼吸道感染是指病原体感染人体的鼻腔、咽喉、气管和支气管等呼吸系统。
分为上呼吸道感染和下呼吸道感染，上呼吸道感染常见的是急性上呼吸道感染（acute upper respir tract infection），指鼻腔、咽或喉部急性炎症的概称，是呼吸道最常见的一种传染病。
常见病因为病毒，少数由细菌引起。
患者不分年龄、性别、职业和地区。
不仅具有较强的传染性，而且可引起严重并发症。
下呼吸道感染是最常见的感染性疾患，包括急性气管——支气管炎、慢性支气管炎、肺炎、支气管扩张等，由病毒、细菌、支原体、衣原体、军团菌等微生物引起，其防治应遵循预防为主、准确诊断、及时治疗的原则，治疗时必须明确引起感染的病原体以选择有效的抗生素。
二、免疫荧光法介绍免疫荧光技术（Immunofluorescence technique ）又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。
它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。
很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。
Coons等于1941年首次采用荧光素进行标记而获得成功。
这种以荧光物质标记抗体而进行抗原定位的技术称为荧光抗体技术（fluorescent antibody technique）。
用荧光抗体示踪或检查相应抗原的方法称荧光抗体法；用已知的荧光抗原标记物示踪或检查相应抗体的方法称荧光抗原法。
这两种方法总称免疫荧光技术，因为荧光色素不但能与抗体球蛋白结合，用于检测或定位各种抗原，也可以与其他蛋白质结合，用于检测或定位抗体，但是在实际工作中荧光抗原技术很少应用，所以人们习惯称为荧光抗体技术，或称为免疫荧光技术。
用免疫荧光技术显示和检查细胞或组织内抗原或半抗原物质等方法称为免疫荧光细胞（或组织）化学技术。
荧光免疫法按反应体系及定量方法不同，还可进一步分做若干种。
呼吸道九联检-
肺炎链球菌是社区获得性呼吸道感染的常见致病菌 近年来随着检测手段的提高，非典型病原体亦是社区获得性呼吸道感染的 常见致病菌之一
我国CAP病原学构成-流调1
2003年11月-2005年3月份，595例，22个城市，33家医院
He Lixian,Beijie,et.al.2005.Unpublished data
在养老院获得的肺炎
数据来源： 《各国社区获得性肺炎指南对非典型病原体的重视情况》 《肺炎的诊断与治疗研究进展》 《重视非典型病原体在CAP致病中的作用》 《要重视非典型病原体在小儿呼吸道疾病中的致病作用》等
呼吸道病原菌合并感染的分析
More than one pathogen was identified in 27 (34%) patients in whom an etiological diagnosis was established. It is concluded that RTI is caused by a broad spectrumof etiological agents, a considerable number of patients having evidence of infection with more than one pathogen. :685–689 One or more viral agents were identified in 369 (45.9%) cases; of which 3.3% were mixed infections. -------Pediatric Infectious Disease Journal Single infections were noted in 48 (74%) whereas mixed infections occurred in 17 (26%) of 65 infected infants. pp. 322-329 -------PEDIATRICS Vol. 68 No. 3 September 1981, ------Eur J Clin Microbiol Infect Dis (1998) 17
呼吸道标本细菌学检验操作规程SOP
呼吸道标本细菌学检验操作规程（一）目的：规范呼吸道标本细菌学检验,确保检验结果准确可靠。
（二）适用范围及操作人员：呼吸道标本培养和涂片检检查；检验科工作人员。
（三）支持性文件：《WST805-2022临床微生物检验基本技术标准》、《下呼吸道感染细菌培养操作指南》、《全国临床检验操作规程》。
（四）标本类型：痰、咽拭、支气管肺泡灌洗吸出液、支气管冲洗液或刷子、肺穿刺液等。
（五）标本采集时间：尽量在抗生素使用前采集。
（六）标本采集方法:1、咳痰：适用于肺部感染患者,特别是重病监护室(ICU)及住院的社区获得性肺炎(CAP)、慢性阻塞性肺疾病急性加重(AECOPD)、肺脓肿(咳痰非最适标本)、可疑细菌性病原体引起的肺部感染患者。
咳痰前,患者用无菌生理盐水漱口;指导患者咳出深部痰,勿留取唾液和鼻咽腔分泌物。
2、气管吸出物：仅当气管插管的患者出现肺炎症状时(如发热或浸润),可采集气管吸出物标本。
从气管中吸痰，用无菌容器留取送检。
3、支气管肺泡灌洗液：利用纤维支气管镜向小支气管和肺泡中注入无菌生理盐水灌洗,在40mL～80mL回收的灌洗液中包含约1mL支气管末梢和肺泡中的分泌物;弃去前段可能污染的部分,收集其余部分后立即送检。
4、保护毛刷标本：将纤维支气管镜插入亚段支气管可疑感染部位,经支气管镜刷检孔推出双层套管中的毛刷(远端填塞聚乙二醇),刷取脓性分泌物,采样后将毛刷回收入双层套管并退出纤维支气管镜,用无菌剪刀剪断毛刷,置于含lmL生理盐水的无菌容器中(仅供需氧培养),快速送检。
5、气管穿刺法在环甲膜下穿刺抽取痰液，收集标本，适用于厌氧菌培养。
6、棉拭采集法用无菌棉拭子轻轻擦拭病人鼻咽部黏膜，留取标本，置无菌试管内送检。
（七）标本拒收标准：1、申请单姓名、科别、床号与标本的标签不符。
2、痰标本呈水样或唾液样。
3、痰涂片白细胞<10／低倍视野，上皮细胞>25／低倍视野。
4、标本容器溢漏，无瓶盖。
5、痰标本留取放置时间太长，超过2小时。
微生物检验九项呼吸道感染病原体IgM抗体检测操作规范
九项呼吸道感染病原体IgM抗体检测操作规范
一、实验目的：检测九项呼吸道感染病原体IgM抗体
二、实验原理：间接免疫荧光法（IFA）是基于待测样本中抗体与吸
附在载玻片上的抗原发生反应。
样本中存在的特异性抗体和抗原反应，未与抗原结合的免疫球蛋白在洗涤步骤中除去。
在下一步中，抗原-抗体复合物与荧光标记素标记的抗人球蛋白反应。
用荧光显微镜观察结果。
三、实验材料：1、试剂：磷酸缓冲液、吸附剂（羊抗人IgG）、结
合物（异硫氰酸荧光素）、封闭介质（甘油缓冲液）。
2、器料：载玻片（前九孔含有抗原，第十孔为质控孔）、盖玻片、37℃恒温箱、3000rpm离心机、荧光显微镜、湿盒。
四、实验步骤：1、配制PBS溶液：1瓶PBS加1L水溶解。
2、稀释血清样本：按1:1比例稀释血清样本，即15微升血清加入15微升PBS溶液中。
3、将30微升稀释后的血清样本加入150微升吸附剂，彻底混匀，离心3000rpm离心15分钟。
4、在载玻片上每孔加入15微升吸附剂处理后的血清（离心后的上清液）。
5、将载玻片放入湿盒，37℃温育60分钟。
6、用pbs溶液缓慢冲洗载玻片后，再用蒸馏水冲洗1-2次，置孵育箱内干燥。
待载玻片完全干燥后，每孔加入抗人IgMFITC结合物15微升。
7、将载玻片放入湿盒，37℃温育30分钟。
8、用PBS溶液缓慢冲洗载玻片后，再用蒸馏水冲洗1-2次，置孵育箱内干燥。
9、加适量封闭介质，盖上盖玻片。
10、尽快用荧光显微镜在100倍下观察结果。
五、实验结果：。
呼吸道九联检SOP
呼吸道九联检操作程序一、呼吸道感染概述呼吸道感染是指病原体感染人体的鼻腔、咽喉、气管和支气管等呼吸系统。
分为上呼吸道感染和下呼吸道感染，上呼吸道感染常见的是急性上呼吸道感染（acute upper respir tract infection），指鼻腔、咽或喉部急性炎症的概称，是呼吸道最常见的一种传染病。
常见病因为病毒，少数由细菌引起。
患者不分年龄、性别、职业和地区。
不仅具有较强的传染性，而且可引起严重并发症。
下呼吸道感染是最常见的感染性疾患，包括急性气管——支气管炎、慢性支气管炎、肺炎、支气管扩张等，由病毒、细菌、支原体、衣原体、军团菌等微生物引起，其防治应遵循预防为主、准确诊断、及时治疗的原则，治疗时必须明确引起感染的病原体以选择有效的抗生素。
二、免疫荧光法介绍免疫荧光技术（Immunofluorescence technique ）又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。
它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。
很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。
Coons等于1941年首次采用荧光素进行标记而获得成功。
这种以荧光物质标记抗体而进行抗原定位的技术称为荧光抗体技术（fluorescent antibody technique）。
用荧光抗体示踪或检查相应抗原的方法称荧光抗体法；用已知的荧光抗原标记物示踪或检查相应抗体的方法称荧光抗原法。
这两种方法总称免疫荧光技术，因为荧光色素不但能与抗体球蛋白结合，用于检测或定位各种抗原，也可以与其他蛋白质结合，用于检测或定位抗体，但是在实际工作中荧光抗原技术很少应用，所以人们习惯称为荧光抗体技术，或称为免疫荧光技术。
用免疫荧光技术显示和检查细胞或组织内抗原或半抗原物质等方法称为免疫荧光细胞（或组织）化学技术。
荧光免疫法按反应体系及定量方法不同，还可进一步分做若干种。
呼吸道九联检SOP
呼吸道九联检操作程序一、呼吸道感染概述呼吸道感染是指病原体感染人体的鼻腔、咽喉、气管和支气管等呼吸系统。
分为上呼吸道感染和下呼吸道感染，上呼吸道感染常见的是急性上呼吸道感染（acute upper respir tract infection），指鼻腔、咽或喉部急性炎症的概称，是呼吸道最常见的一种传染病。
常见病因为病毒，少数由细菌引起。
患者不分年龄、性别、职业和地区。
不仅具有较强的传染性，而且可引起严重并发症。
下呼吸道感染是最常见的感染性疾患，包括急性气管——支气管炎、慢性支气管炎、肺炎、支气管扩张等，由病毒、细菌、支原体、衣原体、军团菌等微生物引起，其防治应遵循预防为主、准确诊断、及时治疗的原则，治疗时必须明确引起感染的病原体以选择有效的抗生素。
二、免疫荧光法介绍免疫荧光技术（Immunofluorescence technique ）又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。
它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。
很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。
Coons等于1941年首次采用荧光素进行标记而获得成功。
这种以荧光物质标记抗体而进行抗原定位的技术称为荧光抗体技术（fluorescent antibody technique）。
用荧光抗体示踪或检查相应抗原的方法称荧光抗体法；用已知的荧光抗原标记物示踪或检查相应抗体的方法称荧光抗原法。
这两种方法总称免疫荧光技术，因为荧光色素不但能与抗体球蛋白结合，用于检测或定位各种抗原，也可以与其他蛋白质结合，用于检测或定位抗体，但是在实际工作中荧光抗原技术很少应用，所以人们习惯称为荧光抗体技术，或称为免疫荧光技术。
用免疫荧光技术显示和检查细胞或组织内抗原或半抗原物质等方法称为免疫荧光细胞（或组织）化学技术。
荧光免疫法按反应体系及定量方法不同，还可进一步分做若干种。
呼吸道九联检操作规程-SOP
广州市医院检验科免疫室（SOP）文件撰写人：审核人：批准人：批准日期：2011年8月8日启用日期：2011年8月8日二零一一年八月八日制文件编号: HDHY-MYJY-P001-2011版序：第 2 版第 1 次修订生效日期: 2011年8月8日责任科室: 免疫室页码: 第1页共 1页批准页根据《临床检验操作规程》(2006年,第三版)，九项呼吸道病原体IgM抗体检测试剂盒使用说明书；免疫检验有关试剂盒、质控品的使用操作说明书；《消毒技术规范》以及医院内部有关管理制度、生物安全制度的规定和要求，临床免疫检验操作规程文件NO.2版经实际运行，现予以批准通过，于 2011年 8月8日起生效并开始实施。
免疫室和检验科有关工作人员必须认真学习，严格遵照执行。
（NO.2版依据检验技术和我科工作发展及管理工作的需求进行的补充完善和改进另行通知）。
任何个人不得更改，实际工作中如发现不妥之处，请按程序以文字形式向审核人汇报；在未经批准人同意/批准新文件之前，仍执行此文。
2011年8月8日编写人修改内容及修改人批准人生效日期文件编号: HDHY-MYJY-P003-2011版序：第 2 版第 1 次修订生效日期: 2011年8月8日责任科室: 免疫室页码: 第1页共 2页呼吸道九联检操作规程1.项目中英文名称：九项呼吸道感染病原体IgM抗体检测试剂盒（间接免疫荧光法）2.实验原理与方法：2.1 原理：间接免疫荧光法（IFA）是基于待测样本中的抗体与吸附在载玻片上的抗原发生的反应。
样本中存在的特异性抗体和抗原反应，未与抗原结合的免疫球蛋白在洗涤步骤中除去。
在下一步骤中，抗原-抗体复合物与荧光素标记的抗人球蛋白反应。
用免疫荧光显微镜观察结果。
2.2 方法：间接免疫荧光法3.标本的要求：需由专业人员无菌静脉穿刺采集血液。
使用消毒或无菌技术能保持样本的完整性。
血清样本采集后如不在8小时内检测应2~8 ºC冷藏，如7天内不检测，则应冷冻（-20ºC）保存。
呼吸道九联检 (1)
3，实验片子最好在48小时内观察，若需保存，需避光 放置在2-8摄氏度下不超过7天.
4，结果判定，对结果荧光细胞数占3%以上时，报阳 性，其余阴性。
临床应用
一：儿童 儿童呼吸道感染的入院筛查项目
九项呼吸道感染病体IgM抗体检 测试剂盒临床应用
安图生物：客户服务部
研究背景
➢上呼吸道感染
鼻腔、咽、喉部 ----- 常见病因病毒，少数为细菌 ；
➢下呼吸道感染(最常见的感染性疾患)
气管、支气管、肺部----由病毒、细菌、支原体、 衣原体、军团菌等微生物引起。
以社区获得性肺炎(CAP)多见
研究背景
研究背景
国内CAP的混合感染
共入组665例病人，其中完成非典型病原体检测的为610例 刘又宁等．中华结核和呼吸杂志，2006;29(l):3-8．
研究背景
➢在CAP病原学中，非典型病原体占3％-40 ％ ➢大多数研究显示
肺炎支原体感染发病率居首位，占2％-30％ 肺炎衣原体占6％-22％ 军团菌属散发感染的病原体，发病率约为2％-15％ 混合感染占15％-38％
图表 2肺炎支原体（2孔）阴\阳
第5、6、7、8、9孔：国外荧光显微镜：荧光形态符合标准，亮 度明亮，荧光细胞比例超过3%即400倍镜下，每个视野中约5个 阳性细胞；国内荧光显微镜下：荧光形态符合标准，亮度较亮， 荧光比例超过1%，即400倍镜下，每个视野中约2-3个阳性细胞
附注：荧光形态为胞核、胞浆或胞膜混合荧光模式
➢5-15岁青年易被感染，尤其是人群聚集处 ➢多起病缓慢，潜伏期30天左右 ➢临床多出现流感样的症状，发热一般低于38度， 数天至数周后出现持续性干咳，若不及时治疗会持 续数月 ➢阳性率一般在1-5%左右
呼吸道九联检sop
呼吸道九联检操作程序一、呼吸道感染概述呼吸道感染是指病原体感染人体的鼻腔、咽喉、气管和支气管等呼吸系统。
分为上呼吸道感染和下呼吸道感染，上呼吸道感染常见的是急性上呼吸道感染（acute upper respir tract infection），指鼻腔、咽或喉部急性炎症的概称，是呼吸道最常见的一种传染病。
常见病因为病毒，少数由细菌引起。
患者不分年龄、性别、职业和地区。
不仅具有较强的传染性，而且可引起严重并发症。
下呼吸道感染是最常见的感染性疾患，包括急性气管——支气管炎、慢性支气管炎、肺炎、支气管扩张等，由病毒、细菌、支原体、衣原体、军团菌等微生物引起，其防治应遵循预防为主、准确诊断、及时治疗的原则，治疗时必须明确引起感染的病原体以选择有效的抗生素。
一、免疫荧光法介绍免疫荧光技术（Immunofluorescence technique）又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。
它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。
很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。
Coons等于1941年首次采用荧光素进行标记而获得成功。
这种以荧光物质标记抗体而进行抗原定位的技术称为荧光抗体技术（fluorescent antibody technique）。
用荧光抗体示踪或检查相应抗原的方法称荧光抗体法；用已知的荧光抗原标记物示踪或检查相应抗体的方法称荧光抗原法。
这两种方法总称免疫荧光技术，因为荧光色素不但能与抗体球蛋白结合，用于检测或定位各种抗原，也可以与其他蛋白质结合，用于检测或定位抗体，但是在实际工作中荧光抗原技术很少应用，所以人们习惯称为荧光抗体技术，或称为免疫荧光技术。
用免疫荧光技术显示和检查细胞或组织内抗原或半抗原物质等方法称为免疫荧光细胞（或组织）化学技术。
荧光免疫法按反应体系及定量方法不同，还可进一步分做若干种。
呼吸道九联检课件
演讲人
目录
01. 呼吸道九联检介绍 02. 呼吸道九联检内容 03. 呼吸道九联检应用
呼吸道九联检介绍
九联检项目
血常规检查：检查血液 中的红细胞、白细胞、
血小板等指标
尿常规检查：检查尿液 中的蛋白质、葡萄糖、
尿胆原等指标
便常规检查：检查粪便 中的细菌、寄生虫、红
细胞等指标
生化全套检查：检查肝 功能、肾功能、血糖、
02
呼吸道九联 检可以检测 出多种呼吸 道病原体， 包括病毒、 细菌和真菌
03
呼吸道九联 检有助于早 期诊断和治 疗呼吸道感 染性疾病
04
呼吸道九联 检可以减少 抗生素滥用， 降低医疗费 用，提高治 疗效果
呼吸道九联检内容
病原体检测
04
呼吸道九联检的临
床意义是什么？
03
呼吸道九联检的检
测结果如何解读？
断
应用范围：适 用于呼吸道疾 病的早期诊断
和治疗
治疗方案制定
确定病因：根据九联
01 检结果，确定呼吸道
疾病的病因
制定方案：根据药物
03 选择和病情，制定具
体的治疗方案
选择药物：根据病因，
02 选择合适的药物进行
治疗
监测病情：在治疗过
04 程中，定期监测病情，
调 04
01
评估指标：包括症状、体征、 实验室检查等
02
评估方法：根据评估指标进行 综合分析，判断病情严重程度
03
评估结果：根据评估结果，制 定相应的治疗方案和预后预测
04
预后预测：根据评估结果，预 测疾病的发展趋势和预后情况
谢谢
02
呼吸道九联检的检
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广州市医院检验科
免疫室（SOP）文件
撰写人：
审核人：
批准人：
批准日期： 2011年 8月8日启用日期： 2011年 8月8日
二零一一年八月八日制
文件编号: HDHY-MYJY-P004-2011
版序：第 2 版第 1 次修订
生效日期: 2011年8月8日
责任科室: 免疫室页码: 第2页共 2页
* 简明操作程序（将风干改成晾干）
编写人修改内容及修改人批准人生效日期
广州市胸科医院
检验科操作标准程序文件文件编号: HDHY-MYJY-P007-2011版序：第 2 版第 1 次修订
生效日期: 2011年8月8日
责任科室: 免疫室页码: 第1页共 2页
* 有效性判断
每一次试验都应设立阳性和阴性对照，以确认试验和试剂盒的有效性。
观察到的荧光模式应为：
阳性对照：腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒或副流感病毒对阳性质控的1-15%细胞出现苹果绿细胞核、胞浆或胞膜荧光（在副流感病毒和呼吸道合胞病毒中能同时观察到着色的合胞）；军团菌、衣原体或立克次体中所有的细菌呈现出苹果绿荧光；支原体对阳性质控在细胞外围呈现苹果绿色荧光。
阴性对照：军团菌、肺炎衣原体和立克次体无荧光，支原体、腺病毒、甲型和乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的细胞呈现红色。
* 样本结果判断
阳性结果：可以观察到腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒或副流感病毒对阳性血清的1-15%细胞的细胞核、胞浆或胞膜出现苹果绿色荧光（在副流感病毒和呼吸道合胞病毒中能同时观察到着色的合胞）；军团菌、衣原体或立克次体中所有的细菌呈现出苹果绿色荧光；支原体对阳性血清在细胞外围呈现苹果绿色荧光。
阴性结果：可观察到军团菌、肺炎衣原体和立克次体无荧光，支原体、腺病毒、甲型和乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的细胞呈现红色。
【检验结果的解释】
1.每一批产品在放行前都要经过更加严格的内部质量控制（Q.C.）的检验。
质控品可溯源到经过内部确认的参
考血清盘。
2. 如果所有细胞或第10孔出现荧光表明存在抗核或抗细胞抗体，不能判为阳性，应用其他方法进行检测。
当
质控孔中无荧光时一定要查明病因。
3. 由于非军团菌感染的病人中经常出现交叉抗体，军团菌阳性结果需结合临床症状综合评价。
建议做较高稀释
度的检测来提高阳性预测值。
4. 与说明书中所列结果不同不能判为阳性。
5. 在初次感染和再次感染的过程中，IgG和IgM抗体有不同的表现方式：初次感染时，几乎在所有的情况下IgM
和IgG均出现（IgM早于IgG出现）；而再次感染时可能不出现IgM，因此IgG的检测是唯一有用的诊断方法。
在许多疾病中病人的一生都可能存在高滴度的IgG，而IgM一般情况下仅在感染后2—3个月存在于血清中，因此是近期感染的一个有效标志物。
6. 九种病原体IgM抗体阴性及阳性结果的荧光染色图谱：
阳性结果图谱：
编写人修改内容及修改人批准人生效日期
广州市胸科医院
检验科操作标准程序文件
文件编号: HDHY-MYJY-P008-2011
版序：第 2 版第 1 次修订
生效日期: 2011年8月8日
责任科室: 免疫室页码: 第2页共 2页阴性结果图谱：
【检验方法的局限性】
1.本试剂盒用于检测人血清。
2. 建议用户仔细阅读和理解说明书，严格按照程序进行操作才能获得可靠的检测结果。
特别是样本和试剂的正确吸取以及仔细的洗板、温育的时间控制对获得准确结果都很重要。
3. 样本的检测结果应与临床评价以及其他诊断方法结合使用。
4. 本检测不能指出感染部位，不能单独使用。
5.抗体水平无显著上升时不能排除感染的可能性。
6.在感染早期采集的样本可能检测不到IgG，在这种情况下建议采用IgM检测，或者在14-21天后采集第二个血清样本，并与原标本同时检测来确定是否发生血清转换。
7.婴儿的IgG检测结果要作谨慎解释，因为出生前母体的IgG被动的传递给了胎儿。
对6个月以下的婴儿IgM 检测是更为有用感染标志物。
8.单一样本抗体检测结果不能帮助作出近期感染的诊断。
应采集双份样本（急性期和康复期）同时检测来观察血清转化或抗体水平的明显升高。
9.对患有自身免疫性疾病病人的血清，用IFA检测时，支原体、腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒，会在细胞上发生非特异性反应，这些血清不能用本方法评价。
质控孔用于检测这种现象。
在嗜肺军团菌和Q热立克次体中，有时血清会含有与卵抗原反应的抗体，所以使用卵黄囊固定抗原会出现非特异性荧光。
当出现这种情况时，该血清就不能用IFA进行分析了。
10. 未对本检测在疗效随访方面的性能做过评估。
11. 除了肺炎外，未对本技术在肺炎衣原体引起的其他疾病方面的性能作过评估。
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广州市医院
检验科操作标准程序文件
文件编号: HDHY-MYJY-P015-2011
版序：第 2 版第 1 次修订
生效日期: 2011年8月8日责任科室: 免疫室页码: 第1页共 2页
17. 标签符号：
体外诊断用医疗器械
使用有效期
8ºC
2ºC
储存条件2-8ºC
可用于检测的次数（规格）
批号
目录号
使用说明书
每个载玻片上反应孔的数量
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