马立克氏病

注：本版本在2010年5月被OIE世界代表大会采用马立克氏病概要马立克氏病（MD)是由疱疹病毒引起的家禽的一种淋巴瘤性和神经性疾病，可通过临床症状和宏观或微观的病变进行诊断。

鸡可以被MDV持续感染而不出现临床症状。

MDV的感染可通过病毒分离及抗原或抗体演示方法检测。

MD可通过接种疫苗进行防治，包括各种类型的单价或多价活病毒疫苗。

疫苗在卵期或在孵化时注射。

在鸡群中，MD发生在3~4周或更大日龄的鸡中，并且通常大多发生在12~30周龄。

观察到的临床症状主要是腿和翅膀的瘫痪，伴随外周神经的肿大，但有时看不见涉及神经的病变，特别是在成年鸡中。

高致病性的MDV毒株也许可引起1~2周雏鸡死亡率增加，特别是雏鸡缺乏母源抗体时。

根据MDV株系不同，淋巴瘤可发生在不同部位，特别是在卵巢、肝脏、脾脏、肾脏、肺、心脏、前胃以及皮肤。

与禽白血病病毒引起的肿瘤由统一的细胞群组成不同，MDV导致的神经侵润和淋巴瘤由各种不同类型的淋巴细胞组成。

禽反转录病毒也可以引起与MDV类似的肿瘤，例如禽白血病病毒（ALV）、网状内皮组织增生病毒（REV），但MD与这些肿瘤的差异显著。

传播媒介的鉴定：自然条件下，大多数鸡在生命的第一周可被MDV感染，并且终身带毒，但通常不出现临床症状。

MDV感染经常通过接种上皮活细胞（live buffy coat cells)到单层培养的鸡肾细胞或鸭胚成纤维细胞上进行检测,两天内可见特异性的病毒噬斑形成。

MDV 有两种血清型分别被定义为是1型和2型，火鸡疱疹相关病毒（HVT）代表第三种血清型。

血清型2包含自然无毒力的病毒株，其中一些可用来研制疫苗。

在受病毒感染鸡的羽毛末梢利用PCR和放射性免疫沉淀反应实验可分别检测到MDV的基因组DNA以及病毒抗原（见下文）。

血清学实验：感染1~2周内可出现针对MDV的特异性抗体，通常可以用琼脂凝胶免疫扩散实验、间接荧光抗体实验，有时也可以应用酶联免疫吸附试验等其他免疫血清学方法进行检测。

疫苗要求：MD的预防可通过对鸡胚或1日龄的鸡进行免疫。

免疫时使用活毒苗。

HVT （3型)是一种广泛应用的疫苗，即可以非细胞形式存在又可以细胞形式（湿法）存在。

2型也可以被利用，特别是与HVT一起组成二价苗。

血清型1和血清型2疫苗仅有细胞形式可利用。

由1型和3型组成二价苗或由1型、2型和3型组成的三价苗均可应用。

二价苗和三价苗已经被抵抗不容易被单价苗控制的MDV强毒株。

接种疫苗大大减少了临床疾病，但不能阻止MDV持续性的病毒感染。

家禽可终生带有疫苗毒并持续排毒，那将造成MDV随处存在。

A.介绍马立克氏病（MD)是由腺病毒引起的一种家禽（鸡）的疾病。

鸡通过吸入来自鸡舍的感染性粉尘而被感染，接下来有一个复杂的感染周期，病毒从受感染鸡的羽囊中排出。

MD发生在3~4周龄或更大的鸡中，最常见发生在12~30周龄。

MD与几种不同的病理综合症相关，其中淋巴增殖综合症最普遍并且是最具有实际意义。

在MD的典型病例中，以涉及神经的疾病为主要特征，死亡率很少超过10~15%,潜伏期为数星期或几个月。

急性型中经常在内脏有淋巴瘤形成，这种类型不普遍，在鸡群中发病率为10~30%，爆发时可高达70%以上。

死亡率可在数周内急剧上升，然后停止，或者在接下来的几个月内维持一个稳定的、缓慢的降速。

目前，伴随广泛的内脏淋巴瘤的急性型MD最普遍。

在其传统形式中，MD最典型的临床症状是翅膀和腿的局部或全部瘫痪。

急性型中，病鸡通常极度萎靡，一些可能在不出现临床症状的情况下死亡。

以血管源性水肿为特征涉及头部病症的非肿瘤性疾病在由更致病的毒株引起的MD中越来越常见。

在传统形式中，典型的发现是一侧或更多外周神经肿大。

其中在尸检中最有影响且最容易发现的是臂神经纵、坐骨神经纵、腹腔神经纵、腹部迷走神经纵和肋间神经。

受感染的神经通常是其正常粗细的2~3倍，正常的神经横纹及光泽消失，神经可能出现灰色或淡黄色，有时出现水肿。

淋巴瘤有时可在MD的经典形式中出现，但通常作为卵巢中小的，软的，灰色肿瘤，有时也可在肺、肾、心、肝等其他组织。

有虹膜睫状体炎引起的灰眼病使病鸡不能跟据光线强弱调整虹膜，在更大(16~18周)鸡中常见引起瞳孔扭曲，并且有可能是唯一呈现的标志。

在急性型中，典型的发现是涉及肝脏、生殖器、脾脏、肾脏、肺、前胃和心脏的广泛分布的弥散性淋巴瘤。

有时淋巴瘤也出现在与毛囊周围的皮肤，甚至在骨骼肌。

受感染的鸡经常出现像传统型一样的外周神经肿大。

幼龄鸡感染后肝脏肿胀程度较弱，而成年鸡通常肿大明显，并且有同鸡白血病大体相同的外观表现，这一点尤其需要区分。

感染MDV的成年鸡通常缺乏神经病变。

在MD的传统和急性型中都以淋巴细胞增殖发病，它在有些情况是进行性的，而在其它情况下是退行性的。

外周神经可能出现增生、发炎或者微小渗透性改变，据此分别命名为A型、B型和C型。

A型损伤包括由淋巴细胞增生引起的细胞侵润，有大中小型的淋巴细胞，巨噬细胞，似乎是肿瘤性质。

B型损伤以内神经炎性的水肿为特征，细胞侵润以小型淋巴细胞和血浆细胞为主，雪旺细胞增生，好像是炎症。

C型损伤包含以小型淋巴细胞为主的轻微扩散，经常在不表现表观损伤和临床症状的鸡中见到。

它被视作一种退化的炎性损伤。

脱髓鞘经常出现在A型和B型损伤的神经中，并且造成临床瘫痪。

内脏和其他组织的肿瘤与A型损伤出现在神经中的淋巴细胞增生在细胞学上也相似。

通常淋巴瘤细胞是混合型，小型和中型淋巴细胞经常占优势，但是有时大型淋巴细胞和成淋巴细胞也可占优势，特别是在成年鸡的MD急性型中。

正像在苏木精和伊红染色的切片，或者在May–Grünwald–Giemsa染色的淋巴瘤涂片中看到的，MD淋巴瘤中不同群体的淋巴细胞是与禽白血病相区分的重要特征。

禽白血病中的淋巴细胞侵润有一致的成淋巴细胞组成。

另一个重要的同点是，在禽白血病中，（gross lymphomas）总淋巴瘤发生在法氏囊，并且肿瘤有滤泡内起源和扩散模式。

在MD，尽管法氏囊有时涉及淋巴细胞增生，肿瘤不明显，缺乏弥散性，限制在滤泡内。

外周神经损伤不是禽白血病的一个特征，因为他们也存在于MD。

最大的困难来自区分禽白血病和有时发生在成年鸡的MD形式，在这些形式中肿瘤是成淋巴细胞伴随明显的肝脏肿大和神经损伤缺乏。

如果对几只感染的鸡进行剖检，经常可根据总体损伤和组织病理学进行诊断。

但是仍需有其他专业技术进行验证。

一种Meq生化标记的表达已经被用于区分MD肿瘤、MDV的潜伏感染和逆转录病毒诱导的肿瘤(Schat & Nair, 2008)。

这个过程可能需要特殊试剂和装置，在没有这些设备的实验室这些实验不能进行。

其他技术，例如通过免疫荧光检测表达在MD 肿瘤细胞表面的活化T细胞抗原、B细胞抗原或者是白血病肿瘤细胞上的IgM,可以给出一个推测的诊断，但是对MD肿瘤细胞没有特异性。

由特定REV（网状内皮组织增生病毒）毒株引起的神经损伤和淋巴细胞增生无论是表观还是微观上都与MD的相似。

尽管REV在鸡群中不普遍，但仍需牢记它可能是引起淋巴瘤的一种原因；在鸡群中它的鉴别依靠病毒血清学实验。

REV也可引起火鸡、鸭、鹌鹑等其它物种的肿瘤性疾病。

另一种命名为LPDV的反转录病毒也可引起火鸡的淋巴细胞增生性疾病。

尽管鸡群的REV血清检测可能呈阳性，肿瘤性疾病却很少发生。

用于鉴别诊断MD、禽白血病、网状内皮组织增生的主要特征被列于表 1.外周神经病变（Peripheral neuropathy)是一种很容易与MDV引起的神经病变（neurological lession)相混淆。

这种情况不是很普遍，但其发生率很可能在欧洲国家的鸡群中正在增加(Bacon et al., 2001)。

就目前所知，研究MDV 或者类似的火鸡疱疹病毒（HVT ）对研究者的健康没有危害。

表1 鉴别马立克氏病、禽白血病、网状内皮组织增生病的游泳特征*REV 也可引起几种不同的综合症状。

法氏囊淋巴细胞瘤综合症更可能发生在野生型，在这里进行描述。

B.诊断技术1.试剂鉴别病毒分离鸡群感染的MDV 可以通过分离受感染鸡组织中的病毒进行检测。

但是，MDV 自然的普遍必须考虑进去，MD 的诊断应当结合MDV 分离或者通过PCR 方法检测病毒基因组以及临床症状。

检测常用的细胞来源是来自肝素处理的血液样本的白细胞单元，或者是悬浮的淋巴细胞及脾细胞。

当这些样本在野外收集时，建议再冷的条件下运往实验室。

因为MDV 是高度细胞结合病毒，这些细胞悬浮液包含或病毒很重要。

细胞悬浮液接种于培养的单层鸡肾细胞或鸭的成纤维细胞（鸡成纤维细胞对于初始MDV 分离缺乏敏感性）。

2型及3型病毒比起鸡肾细胞更容易在CEF 上进行分离。

通常0.2ml 包含106到107活细胞悬浮液被接种于传代的培养在塑料细胞培养皿（直径60mm)的单层细胞。

实验组和对照组都培养在38.5。

特征 马立克氏病 禽白血病禽网状内皮组织增生年龄任何年龄，通常6周或更大 16周以下不发生 16周以下不发生 症状经常瘫痪 无特异性 无特异性 发生率 在没有免疫的鸡群中经常大于5%，免疫的鸡很少发生很少大于5% 很少发生 可见损伤涉及神经症状 经常缺乏 不经常 法氏囊 弥散性炎症或萎缩结节肿瘤 结节肿瘤 皮肤、肌肉、前胃肿瘤，灰眼 可能发生通常缺乏 通常缺乏 微观病变涉及神经 有无 很少 肝脏肿瘤 经常出现在血管周围局炤性或弥散性 局炤性脾脏肿瘤弥散性 经常是局炤性 局炤性或弥散性 法氏囊滤泡内瘤兼或滤泡萎缩 滤泡内瘤 滤泡内瘤 中枢神经系统有 无 无 皮肤及与毛囊淋巴细胞增生有 无 无 肿瘤细胞学 多形性淋巴细胞，包括大中小淋巴细胞，网状组织细胞。

很少仅有淋巴细胞淋巴细胞 淋巴细胞 肿瘤细胞中的淋巴细胞类型 T 细胞 B 细胞 B 细胞C恒温、CO2浓度为5%的细胞培养箱中。

此外，密封的培养容器可能会用到。

培养基每隔两天换一次。

细胞病变的区域、病毒噬斑可在3-5天内出现，在大约7-10能被计数。

此外，一个缺乏应用的用于诊断MDV的病料来源是羽毛小囊，在那里非细胞结合性的MDV可被采集到。

大约5mm长羽毛根以及切碎的皮肤中包含的羽毛根，被悬浮于SPAGE/EDTA缓冲液中，用来萃取和收集非细胞结合的MDV (Calnek et al., 1970)。

缓冲液的配制方法如下：0.2180葡萄糖（7.462g）；0.0038M磷酸二氢钾（0.052g)；0.0072M磷酸氢二钾（0.125g)；0.0049M L-谷氨酸（0.83g); 1.0%牛蛋白粉（1.00g）；0.2%EDTA（0.200g)；和超纯水（100ml)。

缓冲液需通过过滤灭菌，应调节PH大约为6.5。

悬浮液经过过超声破碎，然后用0.45 um 滤膜进行过滤，滤液接种到培养24小时去除培养基的鸡肾细胞。