沙棘黄酮对酪氨酸酶活力抑制作用的

Inhibition effect of seabuckthorn flavonoids on tyrosinase activity
SUN Wen-kai, GAO Cui-ping, YUAN Huai-bo*, HE Ming
(College of Biotechnology and Food Engineering, Hefei University of Technology, Hefei 230009)
沙棘(Hippophae rhamnoides Linn.)为胡颓子科 沙棘属，是一种落叶性灌木。沙棘为药食同源植 物，沙棘的根、茎、叶、花、果，特别是沙棘果 实含有丰富的营养物质和生物活性物质[1-2]。实验 证实沙棘总黄酮具有直接清除超氧阴离子[O 2-]及 自由基[-OH]的作用，其清除作用较VE强[3]。
提取物与应用
食品科技
FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY 2012年 第 37卷 第 5期
沙棘黄酮对酪氨酸酶活力 抑制作用的研究
孙文凯，高翠平，袁怀波*，何 明 (合肥工业大学生物与食品工程学院，合肥 230009)
摘要 ： 研究沙棘黄酮对酪氨酸酶活性的抑制作用 。 实验测定了沙棘黄酮分别在温度 、 pH 、 时 间 、 底物浓度 、 酶液加入量等因素条件下对酪氨酸酶活力的影响 。 结果显示 ， 沙棘黄酮对酪 氨酸酶活性的抑制率随着时间的延长 ， 底物浓度的增加 ， 酶量的增加而增强 ， 而且在 35 ℃ 及 pH7.1时沙棘黄酮对酪氨酸酶活力的抑制作用最强可达到47.45%。说明沙棘黄酮对酪氨酸酶的活 性具有较强的抑制作用。 关键词：沙棘黄酮；酪氨酸酶；抑制 中图分类号： TS 201.2+5 文献标志码： A 文章编号：1005-9989(2012)05-0190-04
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食品科技
2012年 第 37卷 第 5期 FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY
提取物与应用
性标志 [7]。由黑色素形成的原因可知，抑制黑色 素的形成关键是抑制酪氨酸酶的活性。目前常用 美白化妆品及治疗色斑、黑色素瘤等色素沉积性 疾病的药物主要作用靶点是酪氨酸酶、黑素细胞 和黑素的转运代谢，其中抑制酪氨酸酶活性是研 究的重点[8-10]。目前已发现的酪氨酸酶的抑制剂有 氢醌、熊果苷、Vc、Vc衍生物、曲酸等，但是能 用于化妆品的却并不多，氢醌等含有较多细胞毒 性，Vc易氧化，曲酸对皮肤有刺激作用，因此对 天然产物类抑制剂成为近年来的热点 [11]。任冰如 等对24种植物体的提取物对酪氨酸酶活性的研究 发现，仅蛇床子、繁缕、绞股蓝等少数具有抑制 作用，其抑制率也较低 [12]。另有研究表明，多种 黄酮类提取物对酪氨酸酶具有较好的抑制作用， 但是黄酮类种质资源的开发研究和抑制条件的选 择，仍需进一步研究 1 材料与方法 1.1 材料与仪器 沙棘果渣：内蒙古珂维璐集团公司；左旋多 巴：连华科技公司；纯酪氨酸酶：武汉远城科技 发展有限公司；其他试剂：分析纯或化学纯。 KA-1000台式离心机：上海安亭科学仪器 厂；752紫外可见分光光度计：上海光谱仪器有限 公司；THZ-92A恒温水浴锅：上海浦东物理光学 仪器厂；RE52CS旋转蒸发器：上海亚荣生化仪器 厂；SHB-3循环水式多用真空泵：郑州长城科工 贸有限公司。 1.2 实验方法 1.2.1 沙棘黄酮的制备方法[15] 称取一定量的沙棘 果渣粉(利用粉碎机粉碎得到)，以80%乙醇作为提 取剂，料液比为1:40，水浴温度60 ℃，提取2次， 每次提取2 h减压抽滤，得到沙棘黄酮粗提物的醇 溶液200 mL。然后将浓缩液加水稀释后加于处理 好的大孔吸附树脂柱上，先以水洗脱至无色，再 以50%乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩干燥，得沙 棘总黄酮，冷藏保存备用。 1.2.2 沙棘黄酮标准曲线的制作 黄酮的标准品为 芦丁：中国药品生物制品检定所。采用紫外可见 分光光度法，参考文献[16]中的方法。 1.2.3 粗酪氨酸酶液的制备[17] 分别称取一定量去 皮土豆(-20 ℃冷冻过夜)，按比例1:1(w/v)加入缓冲 液，然后研磨制备成匀浆，过滤，滤液冷冻离心 15 min，取上清液，冰浴保存。
Abstract: To study the inhibitory effect of seabuckthorn flavonoids on the activity of tyrosinase under the conditions of different factors. It evaluate the rate of inhibition under the conditions of the temperature, the pH, the time and the consentration of the bottom and the enzyme. Results showed that seabuckthorn flavonoids can inhibit the activity of tyrosinase and with the increase of the concentration of seabuckthorn flavonoids and enzyme and the extension of the time the inhibition of enzymatic got stronger. Moreover under 35 ℃, pH7.1 the inhibition of seabuckthorn flavonoids on tyrosinase activity achieved to 47.45%. This test provided seabuckthorn flavonoids had good prospect used on the functional foods and cosmetic. Key words: seabuckthorn flavonoids; tyrosinase; inhibit
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
酪氨酸酶(EC.1.14.18.1)又称为多酚氧化酶， 广泛存在于哺乳动物、植物和微生物体内 [4]，是 一种活性中心含有双核金属铜的氧化还原酶。属 需氧氧化酶，是目前已知的生物体中参与黑色素 (Melanin)合成的关键酶[5-6]，不仅决定黑色素合成 的速率和产量，还是黑色素细胞分化成熟的特征
*通讯作者 收稿日期：2011-07-16 作者简介：孙文凯(1986—)，男，硕士研究生，主要从事食品科学方面的研究工作。