蛋白浓缩SOP
western blot SOP
Western Blot步骤一.实验步骤1. 组织块称重2. 利用液氮、研钵粉碎组织块3. 加入RIPA缓冲液（每克组织3 ml RIPA），PMSF（每克组织30μl，10 mg/ml PMSF），利用Polytron进一步匀浆（15,000转/分*1分钟）维持4℃4. 加入PMSF（每克组织30μl，10 mg/ml PMSF），冰上孵育30分钟5. 移入离心管4℃约20,000 g（约15,000转）15分钟6. 上清液为细胞裂解液可分装-20℃保存7. 进行Bradford比色法测定蛋白质浓度8. 取相同质量的细胞裂解液（体积*蛋白质浓度），并加等体积的2×电泳加样缓冲液9. 沸水浴中3分钟10. 上样11. 电泳（浓缩胶20mA，分离胶35mA）12. 电转膜仪转膜（100mA 40分钟）13. 膜用丽春红染色，胶用考马斯亮蓝染色14. Westernblot 试剂盒显色15. 分析比较记录western blot的实验步骤及注意事项的资料1. 把聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质电泳转移到硝酸纤维膜上。
1）转移缓冲液洗涤凝胶和硝酸纤维素膜，将硝酸纤维素膜铺在凝胶上，用5ml移液管在凝胶上来回滚动去除所有的气泡。
2）在凝胶/滤膜外再包一张3mm滤纸（预先用转移缓冲液浸湿），将凝胶夹在中间，保持湿润和没有气泡。
3）将此滤纸/凝胶/薄膜滤纸按照厂家建议方法放入电泳装置中，凝胶面向阴极。
4）将上述装置放入缓冲液槽中，并灌满转移缓冲液以淹没凝胶。
5）按照厂家所示接通电源开始电泳转移。
6）转移结束后，取出薄膜和凝胶，弃去凝胶。
2. 将薄膜漂在氨基黑中快速染色，直至分子量标准显现时取出，记录下标准位置。
3. 用100ml水洗涤纤维素膜，必要时可用脱色缓冲液。
4. 膜置印迹缓冲液中于37℃保温1小时。
5. 室温下，用PBS-Tween缓冲液洗涤薄膜。
6. 用封口机将薄膜封入塑料袋中，尽可能不留空气。
蛋白质的浓缩方法
蛋白质的浓缩方法目前蛋白浓缩方法基本主要有以下几种：1. 透析袋浓缩法利用透析袋浓缩蛋白质溶液是应用最广的一种。
将要浓缩的蛋白溶液放入透析袋（无透析袋可用玻璃纸代替），结扎，把高分子（6 000－12 000）聚合物如聚乙二醇（碳蜡）、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可。
也可将吸水剂配成30％－40％浓度的溶液，将装有蛋白液的透析袋放入即可。
吸水剂用过后，可放入温箱中烘干或自然干燥后，仍可再用。
主要用于更换蛋白质的缓冲液，有透析袋即可，不需要特殊的仪器。
2. 冷冻干燥浓缩法这是浓缩蛋白质的一种较好的办法，它既使蛋白质不易变性，又保持蛋白质中固有的成分。
它是在冰冻状态下直接升华去除水分。
具体做法是将蛋白液在低温下冰冻，然后移置干燥器内（干燥器内装有干燥剂，如NaOH、CaCl2和硅胶等）。
密闭，迅速抽空，并维持在抽空状态。
数小时后即可获得含有蛋白的干燥粉末。
干燥后的蛋白质保存方便，应用时可配成任意浓度使用。
也可采用冻干机进行冷冻干燥。
在冷冻状态下让扬品种的液体升华3. 吹干浓缩法将蛋白溶液装入透析袋内，放在电风扇下吹。
此法简单，但速度慢，且温度不能过高，最好不要超过15℃。
4. 超滤膜浓缩法此法是利用微孔纤维素膜通过高压将水分滤出，而蛋白质存留于膜上达到浓缩目的。
有两种方法进行浓缩：一种是用醋酸纤维素膜装入高压过滤器内，在不断搅拌之下过滤；另一种是将蛋白液装入透析袋内置于真空干燥器的通风口上，负压抽气，而使袋内液体渗出。
主要针对小体积蛋白质溶液（几ml）此法更不易引起变性，不过得有浓缩器，不是哪个实验室都有的。
5. 凝胶浓缩法选用孔径较小的凝胶，如SephadexG25或G50，将凝胶直接加入蛋白溶液中。
根据干胶的吸水量和蛋白液需浓缩的倍数而称取所需的干胶量。
放入冰箱内，凝胶粒子吸水后，通过离心除去。
6. 浓缩胶浓缩法浓缩胶是一种高分子网状结构的有机聚合物，具有很强的吸水性能。
每克干胶可吸水120ml～150ml。
功能性大豆浓缩蛋白的加工技术
一、功能性大豆浓缩蛋白的加工技术以低变性脱脂大豆粕为原料，采用独特的等电点洗涤方法去除其中的低聚糖等可溶性成分后，凝乳通过独特的屋里方式进行蛋白质变性，改性后的物料经过杀菌和闪蒸处理后进行喷雾干燥，产品即为功能性大豆浓缩蛋白。
经济技术指标：蛋白含量≥67% ，产品得率≥60%，氮溶解指数（NSI）≥70%，持水持油能力≥1:5:5，气味、色泽及外观：与国外同类产品相近。
二、大豆浓缩蛋白又称70％蛋白粉，原料以低温脱溶粕为佳，也可用高温浸出粕，但得率低、质量较差。
生产浓缩蛋白的方法主要有稀酸沉淀法和酒精洗涤法。
①稀酸沉淀法利用豆粕粉浸出液在等电点（pH4.3～4.5）状态，蛋白质溶解度最低的原理，用离心法将不溶性蛋白质、多糖与可溶性碳水化物、低分子蛋白质分开，然后中和浓缩并进行干燥脱水，即得浓缩蛋白粉。
此法可同时除去大豆的腥味。
稀酸沉淀法生产浓缩蛋白粉，蛋白质水溶性较好（PDI值高），但酸碱耗量较大。
同时排出大量含糖废水，造成后处理困难，产品的风味也不如酒精法。
②酒精洗涤法利用酒精浓度为60％～65％时可溶性蛋白质溶解度最低的原理，将酒精液与低温脱溶粕混合，洗涤粕中的可溶性糖类、灰分和醇溶蛋白质等。
再过滤分离出醇溶液，并回收酒精和糖，浆液则经干燥得浓缩蛋白粉。
此法生产的蛋白粉，色泽与风味较好，蛋白质损失少。
但由于蛋白质变性和产品中仍含有0.25％～1％的酒精，使食用价值受到一定限制。
此外还有湿热水洗法、酸浸醇洗法和膜分离法等。
其中膜分离法是用超滤膜脱糖获得浓缩蛋白，反渗透膜脱水回收水溶性低分子蛋白质与糖类，生产中不需要废水处理工程，产品氮溶指数（NS）高，因此是一种有前途的方法。
③大豆浓缩蛋白的用途可应用于代乳粉、蛋白浇注食品、碎肉、乳胶肉末、肉卷、调料、焙烤食品、婴儿食品、模拟肉等的生产，使用时应根据不同浓缩蛋白的功能特性选择。
三、新技术辽宁营口渤海天然食品有限公司最近完成了利用高、低温豆粕在一条生产线上连续提取大豆功能因子和浓缩蛋白生产新技术的研究和应用。
蛋白表达SOP
抗原表达SOP一、目的基因获取（一）总RNA的提取(以贴壁细胞为例)1、取直径6cm培养板，用微量移液器将培养液吸除干净，加入预冷的PBS溶液5ml洗涤细胞两次，温和震荡，移液器吸取去除PBS溶液。
2、向培养板中加入1mlTrizol Reagent，移液器淋洗培养皿底部,吹打混匀，室温无菌条件下消化5min，将液体转移至1.5ml EP管；3、向EP管中加入380μl三氯甲烷，温和颠倒离心管，充分混匀，室温下静置3min，4℃下12000rpm离心10min。
4、将上清转移到一新的离心管中，加入0.8倍体积的预冷异丙醇，颠倒混匀。
5、-20℃放置10min，拿出来后颠倒混匀数次。
6、4℃下12000rpm离心10min，管底的白色沉淀即为RNA。
7、吸除液体，加入75%乙醇（75%乙醇用DEPC水配置）1ml洗涤沉淀，4℃下12000rpm 离心10min。
8、离心后轻轻倒掉液体，12000rpm离心30s，将液体吸除干净，将离心管置于超净台上吹3min。
9、加入15μl 无RNA酶的水溶解RNA。
10、使用Nanodrop 2000检测RNA浓度及纯度：仪器使用溶解液空白调零后取2.5μl 待测RNA溶液于检测基座上，放下样品臂，使用电脑上的软件开始测定浓度及纯度。
11、将浓度过高的RNA进行适当比例的稀释，使其终浓度约为100ng/μl。
（二）反转录PCR1、取200ulPCR管，加入含1μg(10μl) RNA的溶液。
2、加入1μl oligo(dT)。
3、PCR仪上65℃保温5min后，迅速置冰上冷却。
4、依次加入4μl 5×buffer，2μl 10mM dNTPs，1μl RNA inhibitor和1μl 反转录酶，用移液枪混匀。
5、PCR仪上42℃保温60min，结束后80℃保温5min灭活反转录酶。
注意：提RNA所用试验物品均需经0.1%DEPC水处理后消毒、烤干。
06浓缩、沉淀SOP
浓缩、沉淀SOP1.适用范围本标准适用于中药提取生产中的浓缩、沉淀过程。
2.职责操作工：按本SOP进行浓缩、沉淀操作QA现场监控员；按照本SOP监督浓缩、沉淀的生产过程3.内容3.1.生产前准备与检查3.1.1.从器具存放间领取生产所需的工器具，检查须清洁、完好；同时填写生产车间工器具进出站记录。
3.1.2.检查生产指令及相关记录等须齐全，无与本批无关的指令及记录；无与本批无关的物料；操作间环境符合生产、安全要求。
3.1.3.检查各计量器具、浓缩、沉淀及使用的容器具和管道要求清洁完好，设备有“设备完好证”，计量器具有“检定合格证”，且在规定有效期内。
3.1.4.各项检查项目经QA现场监控员确认，符合规定后准许生产。
3.1.5.根据生产指令，车间工艺员、QA现场监控员和提取、浓缩岗位人员共同检查确认所需物料的品名、批号、数量、外观质量、盛装容器状况，均符合要求后，履行交接手续，在其盛装容器上挂《物料标志卡》。
3.2.浓缩3.2.1.浓缩前准备检查蒸汽管路中蒸汽压力是否大于等于0.2MPa以上，排尽蒸汽管路中的蒸汽凝结水。
3.2.2.二效浓缩3.2.2.1.开启进料阀进料至蒸发室中间视镜停止进料。
按《二效节能浓缩器使用、维护保养SOP》操作。
3.2.2.2.浓缩过程中不断进料保持蒸发室中液位的高度。
3.2.2.3.当液面突然跳动，真空度迅速降低时，表明进料已完成，关闭进料阀。
3.2.2.4.进料完毕后，继续浓缩至两蒸发室中料液不足一半时，将二效蒸发室中料液转入一效蒸发室；再浓缩至规定比重，出料。
3.2.3.外循环蒸发器浓缩3.2.3.1.开启进料阀进料至加热室视镜下沿位置停止进料。
按《WZ-500外循环蒸发器使用、维护保养SOP》或《WZ-1000外循环蒸发器使用、维护保养SOP》操作。
3.2.3.2.浓缩过程中不断加料保持加热室中液面高度。
受水器中收集的若是乙醇，在检查其浓度和体积后泵入稀乙醇周转罐；收集的若是水，则排入下水道。
蛋白质含量检测sop
蛋白质含量检测一.原理蛋白质含有两个以上的肽键，可发生双缩脲反应。
在碱性溶液中蛋白质与Cu2+形成紫色络合物，在540mm处有最大吸收。
且呈色强度在一定浓度范围内与肽键数量即与蛋白质含量成正比，可用比色法测定蛋白含量。
二.试验所需1.双缩脲试剂：取CuSO4·5H20(c.P.)1.5g和酒石酸钾钠(c.P.)6.0g以少量蒸馏水溶解，再加2.5mol／L NaOH溶液300ml，KI 1.0g，然后加水至1000ml。
棕色瓶中避光保存。
长期放置后若有暗红色沉淀出现，即不能使用。
2.标准蛋白质溶液：用标准的结晶牛血清清蛋白（BSA）或标准酪蛋白，配制成10g/L的标准蛋白溶液，可用BSA浓度1g/L的A280为0.66来校正其纯度。
如有需要，标准蛋白质还可预先用微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，计算出其纯度，再根据其纯度，称量配制成标准蛋白质溶液。
牛血清清蛋白用H2O 或0.9%NaCl配制，酪蛋白用0.05mol/L NaOH配制三.试验步骤1.取试管7支，编号，按下表操作：2.混匀，37℃水浴20分钟，冷却至室温，在分光光度计波长540nm 处，用空白管调零，读取各管吸光度值。
1～5为标准曲线管，测得吸光度后，以吸光度为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标绘制标准曲线。
以测定管的吸光度，在标准曲线上求得蛋白质浓度。
四.注意事项1．双缩脲试剂中，加入酒石酸钾钠，Cu2+形成稳定的络合铜离子，以防止CuSO4·5H20不稳定形成Cu(OH)2沉淀。
酒石酸钾钠与CuSO4·5H20之比不低于3∶1，加入KI作为抗氧化试剂。
2．双缩脲试剂要封闭贮存，防止吸收空气中的二氧化碳。
3．本法各种蛋白质的显色程度基本相同，重复性好，几乎不受温度影响，唯一缺点是灵敏度较低。
4．黄疸血清、严重溶血对本法有明显干扰。
5.对含脂肪高的样品溶液与双缩脲试剂混合后，若有雾状沉淀，需让其静置2h以上再离心，取其清液比色。
大豆浓缩蛋白工艺流程
大豆浓缩蛋白工艺流程
《大豆浓缩蛋白工艺流程》
大豆浓缩蛋白是一种高蛋白、低脂肪的营养食品，其工艺流程经过一系列的处理步骤才能最终制成成品。
下面将介绍大豆浓缩蛋白的工艺流程。
1. 清洗大豆
首先，将大豆进行清洗，去除杂质和杂草，保证原料的纯净度。
2. 研磨
接下来将清洗后的大豆进行研磨，破碎成豆浆状。
3. 脱脂
将豆浆通过离心机或其他分离设备进行脱脂，去除大豆中的脂肪成分，得到蛋白浆。
4. 清洗
将蛋白浆进行再次清洗，去除残余的脂肪和其他杂质。
5. 浓缩
将清洗后的蛋白浆进行浓缩处理，去除水分，从而得到浓缩的大豆蛋白。
6. 凝固
利用蛋白质的凝固性质，将浓缩的蛋白浆进行凝固、过滤，得到成品。
7. 干燥
对成品进行干燥处理，使其变成粉末状。
经过以上工艺流程，大豆浓缩蛋白最终制成。
大豆浓缩蛋白在工艺流程中需要精密的操作和严格的控制条件，确保产品的质量和安全。
通过以上流程，大豆浓缩蛋白可以被广泛应用于食品加工、保健品生产等领域，为人们提供了优质的蛋白营养补充。
蛋白浓缩方法
蛋白浓缩方法蛋白浓缩方法在生物学研究中，常常需要从混合物中提取单一的蛋白质。
蛋白浓缩是一种有效的方法，可以将目标蛋白质从复杂的混合物中分离出来。
以下是一些常用的蛋白浓缩方法：1. 盐析法盐析法是一种将目标蛋白质从混合物中分离出来的传统方法。
该方法利用了不同蛋白质在高盐浓度下溶解度的差异。
通过逐渐加入盐类，使得某些蛋白质逐渐沉淀并分离出来。
步骤：1）制备含有目标蛋白质的混合物；2）逐渐加入盐类（如氯化钠），同时搅拌样品；3）等待沉淀形成后，将上清液收集下来；4）重复以上步骤直到得到足够纯净的目标蛋白质。
2. 膜过滤法膜过滤法是一种利用半透性膜筛选出目标分子的方法。
该方法基于不同分子大小和形状之间的差异，通过选择合适的膜孔径和压力，将目标蛋白质从混合物中分离出来。
步骤：1）制备含有目标蛋白质的混合物；2）选择合适的膜孔径和压力，将混合物通过滤膜；3）收集通过滤膜的上清液，其中包含了目标蛋白质。
3. 离心浓缩法离心浓缩法是一种利用离心力将目标分子从大量液体中聚集在一起的方法。
该方法适用于大分子量蛋白质的浓缩。
步骤：1）制备含有目标蛋白质的混合物；2）使用超速离心机以高速旋转离心管，使得目标蛋白质在管底沉积；3）移除上清液，并重复以上步骤直到得到足够纯净的目标蛋白质。
4. 电泳法电泳法是一种利用电场将带电粒子分离的方法。
该方法适用于具有不同电荷、大小或形状的多种生物大分子。
步骤：1）制备含有目标蛋白质的混合物；2）将混合物加入凝胶电泳板，并施加电场；3）根据蛋白质的电荷和大小，目标蛋白质将在凝胶中移动并分离出来；4）收集目标蛋白质所在的凝胶区域，并进行进一步处理。
总结：以上四种方法都可以用来浓缩目标蛋白质，每种方法都有其优缺点。
选择最适合的方法取决于所需浓缩的蛋白质类型、样品量和实验条件等因素。
蛋白质操作规程(3篇)
第1篇一、目的为确保蛋白质实验的顺利进行，保证实验结果的准确性和安全性，特制定本操作规程。
二、适用范围本规程适用于蛋白质的提取、纯化、鉴定、分析等实验操作。
三、操作步骤1. 实验准备（1）实验前应仔细阅读实验方案，了解实验原理、目的、步骤及注意事项。
（2）准备实验所需试剂、仪器和设备，确保其处于正常工作状态。
（3）实验前应佩戴防护眼镜、手套和口罩，避免接触有害物质。
2. 蛋白质提取（1）取适量组织或细胞，用组织匀浆器或超声波破碎器破碎。
（2）加入适量裂解液，充分搅拌，使蛋白质溶解。
（3）低温离心，收集上清液，即为蛋白质粗提液。
3. 蛋白质纯化（1）根据蛋白质的性质，选择合适的纯化方法，如离子交换、凝胶过滤、亲和层析等。
（2）将蛋白质粗提液按照纯化方法进行操作，如加入缓冲液、平衡液、洗脱液等。
（3）收集纯化后的蛋白质，低温保存。
4. 蛋白质鉴定（1）采用SDS-PAGE电泳对蛋白质进行初步鉴定。
（2）通过Western blot技术检测蛋白质的特异性抗体。
（3）通过质谱分析等技术对蛋白质进行结构鉴定。
5. 蛋白质分析（1）采用紫外分光光度计测定蛋白质浓度。
（2）采用凝胶过滤色谱、动态光散射等技术研究蛋白质的分子量。
（3）通过酶活性、底物消耗等方法研究蛋白质的生物活性。
四、注意事项1. 实验过程中应严格遵守无菌操作原则，防止污染。
2. 实验操作应规范，避免人为误差。
3. 试剂、仪器和设备应定期校准、维护，确保实验结果的准确性。
4. 实验过程中产生的废弃物应按照相关规定进行处理。
5. 实验过程中应关注自身安全，防止化学品、生物制品等对人体的危害。
五、实验记录1. 实验记录应详细记录实验时间、试剂、仪器、操作步骤、实验结果等。
2. 实验记录应真实、准确、完整，便于实验结果的追溯和分析。
六、附则本规程由实验室负责解释和修订，自发布之日起实施。
第2篇一、前言蛋白质是生命活动的重要物质基础，广泛应用于生物学、医学、农业等领域。
白蛋白项目SOP
白蛋白项目SOP1. 检测目的在罗氏cobas c701生化分析仪上定量检测人血清的白蛋白，确保检测结果的准确性及重复性。
2. 检测方法溴甲酚绿比色法法3. 检测原理pH 4.1白蛋白BCG复合物白蛋白＋BCG当pH值达到4.1时白蛋白充分显示出阳离子特征，能与阴离子染料溴甲酚绿（BCG）相结合，形成蓝绿色复合物。
蓝绿色的颜色强度与白蛋白浓度成正比，可使用光度计来判定。
4. 样本要求4.1抽取患者静脉血3-5ml,加入一次性含分离胶的试管内，试管粘贴标注患者姓名、科别、床号等信息的条形码并送检。
4.2 标本采血后尽快送检，送检后放入离心机，离心转速3500转/分离心10分钟，或参阅cobas 前处理标准操作程序，分离出血清准备检测。
如因仪器或其它原因不能及时检测标本，可将标本置于2-8℃冰箱暂存，并尽快检测标本。
5. 仪器：罗氏cobas c701生化分析仪6．试剂：罗氏原装配套试剂，试剂无需任何处理，可直接使用6.1 试剂成分：R1:枸橼酸盐缓冲剂：95mmol/l，pH 4.1；防腐剂R3:枸橼酸盐缓冲剂：95mmol/l，pH 4.1；溴甲酚绿：0.66mmol/l；防腐剂6.2试剂存储及稳定ALB: 15-25°C下保存期限：见cobas c pack标签上的有效期机上稳定期：4周Nacl 稀释液9％:2-8°C下保存期限: 见cobas c pack标签上的有效期机上稳定期: 4周7. 校准程序7.1 校准材料：S1:H20，S2:C.f.a.s(罗氏多项生化校准品）7.2 校准模式：线性7.3 校准方法：2点校准7.4 校准频率：－试剂批次改变之后－如有需要，遵循质控步骤8. 质量控制程序8.1 质控材料：PRECINORM U (罗氏通用正常值质控品，复溶后使用)；PRECIPATH U (罗氏通用病理值质控品，复溶后使用)8.2 质控周期：每工作日一次，于每日标本检测前进行。
蛋白浓缩方法
请教：蛋白浓缩方法请教各位高手，我想将细胞培养上清中的蛋白浓缩10倍，但要确保最小的蛋白变性与蛋白丢失，应该采用什么方法比较好？请不吝赐教，谢谢！可以用：超虑；盐析；过离子柱等等，看你的试验条件定咯蛋白浓缩方法基本有：丙酮沉淀法；免疫沉淀法；三氯醋酸沉淀法；硫酸铵沉淀法；（低温）有机溶剂沉淀法；聚乙二醇沉淀法；超滤法；透析法；离子交换层析和冷冻干燥法……1，丙酮沉淀法；三氯醋酸沉淀法试验要求的仪器简单，但是常常导致蛋白质变性。
2，免疫沉淀法：得有特异性抗体！3，硫酸铵沉淀法：利用高浓度盐将蛋白质析出（盐析）选择硫酸按是因为：盐析有效性，pH范围广，溶解度高，溶液散热少，经济！4，（低温）有机溶剂沉淀法：强调低温（0-4度以下）是因为10度时蛋白会在有机溶剂中变性，可用乙醇，丙酮……注意：Mg2+离子，pH值5，聚乙二醇沉淀法：使用PEG时旨在个别情况下才会是蛋白质稍有变性！他溶解是散热低，形成沉淀的平衡时间短，通常达到30%时蛋白质就会达到最大量的沉淀！6，超滤法：主要针对小体积蛋白质溶液（几ml）此法更不易引起变性！不过得有浓缩器，不是哪个实验室都有的！7，透析法：主要用于更换蛋白质的缓冲液！的有透析袋！不需要特殊的仪器！8，离子交换层析：可用阴离子交换树脂进行浓缩！9，冷冻干燥法：在冷冻状态下让扬品种的液体升华具体你的实验应该是做一种分泌蛋白吧？浓缩后要干什么，需要活性蛋白么？实验室设备如何，导师经费如何？这些都要考虑！！我用的是硫酸铵沉淀法，物廉价美。
用4度饱和硫酸铵等体积加入收集的上清中，以30000g的速度离心30分钟，弃上清，加入你所需体积的缓冲液体，在震荡器上使沉淀溶解，再在10000g下离心10分钟取上清分装保存于-80度即可关于蛋白浓缩，我认为最好的方法是真空冷冻干燥法，此法简便，蛋白质几乎无变性。
lhydy wrote:请教各位高手，我想将细胞培养上清中的蛋白浓缩10倍，但要确保最小的蛋白变性与蛋白丢失，应该采用什么方法比较好？请不吝赐教，谢谢！不知你何种用途，最简单的浓缩我们常用蔗糖或PEG包埋。
蛋白质含量测定(Lowry法)SOP
蛋白质含量测定SOP（Lowry法）1．目的为规范蛋白质含量测定（Lowry法）的操作，特制定本SOP。
2．范围本SOP适用于微量蛋白质含量测定（Lowry法）的操作。
3．定义无4．职责4.1.QC负责本规程的起草、修订、培训及执行。
4.2.QA、QC组长、质量管理部经理负责本规程的审核。
4.3.质量总监负责批准本规程。
4.4.QA负责本规程执行的监督。
5．引用标准《中华人民共和国药典》2020年版三部。
6．材料6.1.仪器设备：紫外可见分光光度计：全波长；电子天平：千分之一；漩涡混合器。
6.2.蛋白标准品自中国药品检定研究院或其它检验机构购买的国家标准品（非人用）一支，按照说明书的要求配制蛋白储备液和蛋白标准液。
6.3.试剂与配制0.1mol/L酒石酸钾溶液：称定2.4g酒石酸钾，用水溶解并准确定容至100ml。
0.04mol/L硫酸铜溶液：称定1.0g硫酸铜，用水溶解并准确定容至100ml。
4%碳酸钠溶液：称定4.0g碳酸钠，用水溶解并准确定容至100ml。
0.2mol/L氢氧化钠溶液：称定0.8g氢氧化钠，用水溶解并准确定容至100ml。
碱性铜液（用时现配）：量取4%碳酸钠溶液、0.2mol/L氢氧化钠溶液各25ml，0.1mol/L 酒石酸钾溶液、0.04mol/L硫酸铜溶液各0.5ml，混匀。
酚试剂（1.0mol/L）：取适量酚试剂（2.0mol/L），用前2倍稀释（现用现配）。
6.4.使用器材微量移液器、容量瓶、试剂瓶、烧杯、量筒、试管、刻度吸管、玻璃棒等。
7．流程图无8．程序8.1.原理：蛋白质在碱性溶液中可形成铜-蛋白质复合物，此复合物加入酚试剂后，产生蓝色化合物，该蓝色化合物在650nm处的吸光度与蛋白质含量成正比，利用直线回归的方法，根据供试品的吸光度值，计算蛋白质含量。
8.2.标准曲线的测定精密量取100μg/ml标准蛋白质溶液0.0（零号管）、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml 置试管内，加水至1.0ml，加碱性铜液5ml，混匀，从第一管加入碱性铜液开始计时，于 20℃～28℃放置10分钟后，快速加入1mol/L酚试剂0.5ml，从第一管加入酚试剂开始计时, 在 20℃～28℃放置30分钟，于650nm波长测定吸光度。
蛋白浓缩的原理
蛋白浓缩的原理
蛋白浓缩是一种常用的实验技术，在分析和纯化蛋白质样品时经常使用。
蛋白浓缩的原理是通过去除样品中的溶剂来增加蛋白质的浓度。
蛋白浓缩通常使用离心、过滤或吸附剂等方法来实现。
其中，最常见的方法是使用离心技术。
离心是利用离心机以高速旋转离心管，通过离心力使重质蛋白和其他溶液成分沉积到管底。
具体操作中，用一管文件夹(如Amicon Ultra)将待浓缩的蛋白
质溶液加入至文件夹内，然后放入离心机中进行离心。
离心时，重质蛋白质会向文件夹中心聚集，而水分子和其他小分子则通过滤膜透过离心机，最终被离心机收集器收集。
离心结束后，蛋白质被留在文件夹中，实现蛋白浓缩。
除了离心方法，过滤技术也是常用的蛋白浓缩方法之一。
通过使用具有特定孔径的滤膜来筛选并去除小分子成分，从而实现蛋白质的浓缩。
过滤方法广泛应用于样品中存在大量小分子溶质的情况下。
另外，还可以利用吸附剂来实现蛋白浓缩。
吸附剂通常具有高亲和性，可以选择性地结合和吸附目标蛋白质，然后通过洗涤和洗脱的步骤来去除非目标物质，实现蛋白浓缩。
总结来说，蛋白浓缩的原理是通过去除样品中的溶剂来增加蛋白质的浓度。
离心、过滤和吸附剂等方法是常用的实现蛋白浓
缩的技术。
这些方法能够有效地去除不需要的成分，使蛋白质浓度提高，为后续的研究和分析提供方便。
蛋白浓缩
蛋白浓缩系统设计1工艺流程图1蛋白浓缩工艺流程示意图离心分离后的上清液在水泵的提升下，经自清洗过滤器预过滤后进入卷式超滤系统。
在卷式超滤膜的高效截留作用下，对血浆进行澄清，截留其中的蛋白等大分子营养物质。
透过的血浆进入透过液罐；浓缩的血浆进入浓缩液罐，经喷雾干燥后获得干粉。
供货范围包括超滤给料泵、循环泵、自清洗过滤器、超滤膜系统（包括支架、膜壳、膜组件及配套管路阀门）、膜清洗装置、配套电控系统，但不包括血浆蛋白的原料罐、透过液罐、浓缩液罐、浓缩液输送泵及配套管路。
电气接口由业主接至系统配电柜的主进线开关处。
2超滤膜系统的清洗根据我司类似项目的工程实践，蛋白浓缩系统采用错流过滤技术，以便充分发挥超滤膜的分离性能，延长膜的使用寿命。
本方案中，超滤膜系统的清洗采用以下两种方式：1．日常维护清洗每日或每班采用投加抗凝剂的软水或超滤透过液（可根据实际运行情况灵活调整）对系统进行维护清洗，清洗时间15～20min。
2．化学加强清洗定期对超滤膜进行化学加强清洗，以达到恢复膜通量的目的。
清洗周期约2-4周一次（根据膜污染情况而定），药液运行20～30min，再用投加抗凝剂的清水运行10～15min。
超滤膜的化学清洗采用循环清洗的方式，可减少软水与化学试剂用量和清洗废水的排放量，膜性能恢复效果更好。
3系统控制设计血浆蛋白超滤浓缩系统采用“PLC+触摸屏”的自动控制模式。
触摸屏的画面包括超滤浓缩系统的工艺流程图、各控制对象操作分图、控制设备故障报警窗口和各种控制参数实时值。
用各种颜色动态显示：各个工艺流程状况；设备的“运行”、“备用”、“停止”和“故障”状态。
对各类设备故障发出声光报警，记录故障发生时刻及报警解除时间。
触摸屏中设置4个控制旋钮，分别为“浓缩生产”、“维护清洗”、“化学清洗”和“系统停机”，用户可根据需要选择后，系统即自动运行。
图2触摸屏画面示意图本项目中的动力设备有：自清洗过滤器、超滤给料泵、循环泵和化学清洗泵，各设备的控制方案如下：Ø自清洗过滤器：直接启动，连续运行，定时反冲洗。
制药公司蛋白检验SOP
1.目的规定牛血清蛋白含量测定的操作程序，指导操作人员按本程序进行检测。
2.适用范围本程序适用于牛血清供试品蛋白测定全过程及结果判定，适用于QC操作人员进行初制和精制血清蛋白含量的检测。
3.职责3.1 质量控制部QA：负责本规程的起草。
3.2 质量管理部：检验人员负责本规程的操作。
4.定义无5.引用标准《中华人民共和国药典》2015版四部通则07316.材料及设备6.1 试剂6.1.1 双缩脲试液：取硫酸铜1.5g、酒石酸钾钠6.0g和碘化钾5.0g，加水500ml 使溶解，边搅拌边加入10%氢氧化钠溶液300ml，用水稀释至1000ml，混匀即得。
6.1.2 对照品溶液的制备：除另有规定外，取血清白蛋白（牛）对照品或蛋白质含量测定国家标准品，加水溶解并制成每1ml中含10mg的溶液。
6.1.3 供试品溶液的制备：照各品种项下规定的方法制备（蛋白质浓度应与对照品溶液基本一致）。
6.2 设备751分光光度计6.3 其它6.3.1 具塞试管6.3.2 纯化水资料整理6.3.3 1.0cm玻璃比色皿若干7 流程图无8内容8.1 精密量取对照品溶液0.0ml、0.2ml、0.4ml、 0.6ml、0.8 ml、1.0ml（对照品溶液取用量可在本法测定范围内进行适当调整），分别置具塞试管中，各加水至1.0 ml，8.2 分别加入双缩脲试液4.0ml ，立即混匀，室温放置30分钟8.3 照紫外可见分光光度法（通则0401），在540波长处测定吸光度；同时以0号管作为空白，8.4 以对照品溶液浓度与其相应的吸光度计算线性回归方程。
8.5 另精密量取供试品溶液适量，同法操作。
8.6．从线性回归方程计算供试品溶液中的蛋白质浓度，并乘以稀释倍数，即得。
9 注意事项9.1 严格按照GMP要求规范操作，以防止检定结果不成立。
9.1. 本法干扰物质主要有硫酸三羟甲基氨基甲烷缓冲液和某些氨基酸等。
9.2. 注意不得混淆不同名称和批号供试品9.3. 使用的计量器具应经过计量校验9.4 出现超标结果，应在试验记录中如实记录。
蛋白质溶液的浓缩方法(课件分享)
• 蛋白质的变性
2020-12-24
蛋白质溶液的浓缩方法（课件分享）
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蛋白质溶液的浓缩方法
• 蛋白质溶液的浓缩连接了蛋白质的提取和蛋白质的分离纯化，是获取高浓度或高活性 蛋白质的重要步骤。
2020-12-24
蛋白质溶液的浓缩方法（课件分享）
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1.3 等电点沉淀法
• 原理：两性电解质分子上的净电荷为零时溶解度最低。
• 适用范围：只适用于水化程度不大、在等电点时溶解度很低的蛋白质，如酪蛋白。对 于亲水性很强的蛋白质，在等电点附近仍然有很大的溶解度，用等电点法沉淀不完全。 等电点法常与盐析法、有机溶剂沉淀法或其他沉淀方法联合使用，以提高其沉淀能力。
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蛋白质溶液的浓缩方法（课件分享）
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1.6 非离子多聚物沉淀法 • 背景：非离子多聚物是六十年代发展起来的一类重要沉淀剂，最早 用于提纯免疫球蛋白、沉淀一些细菌和病毒，近年来逐渐广泛应用 于核酸和酶的分离提纯。
包括不同分子量的PEG（常用PEG-6000）、NPEO、葡聚糖、 右旋糖酐硫酸钠等。
蛋白质溶液的浓缩方法（课件分享）
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1.1 盐析法
• 盐类的选择：价格低； 溶解度好； 溶解过程中产热少； 盐溶液密度与沉淀的密度有明显差别。
一般来说：高价阴离子：PO43- > SO42- > Ac-和NO3-， 单价阳离子：NH4+ > K+和Na+， 高价阴离子的沉淀效果优于单价阳离子。
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• 注意事项：溶液的pH值应大于被浓缩物质的等电点，否则在凝胶 表面会产生阳离子交换，影响蛋白质的回收率。
中衡浓缩蛋白工艺计算
中衡浓缩蛋白工艺计算浓缩蛋白是一种常用的蛋白质处理方法，用于从蛋白质溶液中去除水分，提高蛋白质的浓度。
浓缩蛋白的工艺计算主要包括确定浓缩工艺参数、计算浓缩效率和收率以及估算成本等方面。
确定浓缩工艺参数的第一步是确定使用的蛋白质浓缩方法，常见的浓缩方法包括凝胶过滤、超滤和盐析等。
选择合适的蛋白质浓缩方法主要根据蛋白质的特性、目标浓度和需求量等因素进行考虑。
例如，对于大分子量的蛋白质，可以选择超滤法，而对于低分子量的蛋白质，可以选择盐析法。
确定浓缩工艺参数的第二步是确定浓缩操作的条件，包括初始蛋白质溶液的浓度和体积、浓缩膜的选择和使用条件、操作温度和压力等。
这些参数的选择需要综合考虑蛋白质的热稳定性、溶液的流变特性和浓缩效果等因素。
一般来说，初始蛋白质溶液的浓度较高、膜的孔径较小、操作温度较低以及较高的操作压力都有利于提高浓缩效果。
计算浓缩效率和收率是评估浓缩工艺性能的重要指标。
浓缩效率指的是蛋白质的浓缩倍数，通常是初始蛋白质浓度与浓缩后蛋白质浓度之比。
收率指的是浓缩后蛋白质的回收率，通常是浓缩后蛋白质质量与初始蛋白质质量之比。
浓缩效率和收率的计算需要根据实际操作条件和浓缩结果进行。
估算成本是确定浓缩蛋白工艺经济性的重要指标。
估算成本主要包括设备投资成本、能耗成本和操作成本等。
设备投资成本主要取决于所选用的浓缩方法和设备规模，能耗成本主要取决于操作过程中的能耗量，操作成本主要包括设备维护和运行人员的工资等。
通过对这些成本进行估算，可以评估浓缩蛋白工艺的经济可行性。
综上所述，中衡浓缩蛋白工艺计算主要包括确定浓缩工艺参数、计算浓缩效率和收率以及估算成本等方面。
确定浓缩工艺参数需要考虑蛋白质的特性和目标浓度等因素，计算浓缩效率和收率需要根据实际操作条件和浓缩结果进行，估算成本可以评估浓缩蛋白工艺的经济可行性。
这些计算对于优化蛋白质浓缩工艺、提高工艺效率和降低成本具有重要意义。
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蛋白浓缩SOP
一、浓缩管Millipore的Amicon-Ultra-15超滤管（MWCO10kD和3KD）
1、选择应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3的超滤管，
2、新买来的超滤是干燥的，使用前加入MilliQ水，水量完全过膜，冰浴或冰箱里预冷几分
钟。
然后将水倒出；若为旧柱子，则需将其中的乙醇倒出，用水清洗几次后加入水平侵泡，超滤管需要插在冰上预冷。
3、向超滤管中加入蛋白液，以不超过管顶的白线为准。
以3500-4000rpm,4℃离心99min.
4、前面几步用以浓缩蛋白，如果要换Buffer，在总蛋白液浓缩至1ml左右的时候，轻轻加
入新的Buffer（经0.22um超滤膜超滤），再浓缩至1ml左右，连续三次，最后一次的浓缩终体积根据需要的蛋白浓度而定，一般不多于500ul
5、倒出超滤管里的水，用milliQ水轻轻润洗几次，【若管底有可见的蛋白沉淀，可以先加
入水，然后用枪头吹打，注意不要碰到膜，吹打至沉淀悬起，然后倒掉，不可用自来水猛冲】然后加入0.2M的NaOH溶液，室温放置20min，期间平衡超滤管。
再离心10min。
倒出残留的NaOH溶液，将管芯浸入MilliQ水的烧杯中,放置几个小时。
6、向管芯中加满20%乙醇，放4度保存，直到下次使用。
一般来说，按照上述步骤和注意
事项，每根管用三四年不会坏。
二、PEG20000
将透析好的样品连同透析袋一起放在白色盒子中，用预冷的聚乙二醇20000固体包埋。
30min后将吸水后呈浆糊状的聚乙二醇去除，加入新的固体聚乙二醇。
每隔10min观察一次，一旦出现浑浊立即停止浓缩。
透析袋用完后，洗净，保存于20%乙醇中4°存放。
注意：浓缩过度后会有白色小颗粒或絮状晶体出现，由于透析袋使溶液成薄层状，透明度较高，不易发现小颗粒或絮状沉淀，要看仔细。
如果看不到，可根据自己估计的蛋白量留1-2ml 体积。
用透析液将透析袋表面的聚乙二醇洗掉，吸取其中的溶液分装后-20度保存。