蛋白浓缩SOP

蛋白浓缩SOP

一、浓缩管Millipore的Amicon-Ultra-15超滤管（MWCO10kD和3KD）

1、选择应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3的超滤管，

2、新买来的超滤是干燥的，使用前加入MilliQ水，水量完全过膜，冰浴或冰箱里预冷几分

钟。然后将水倒出；若为旧柱子，则需将其中的乙醇倒出，用水清洗几次后加入水平侵泡，超滤管需要插在冰上预冷。

3、向超滤管中加入蛋白液，以不超过管顶的白线为准。以3500-4000rpm,4℃离心99min.

4、前面几步用以浓缩蛋白，如果要换Buffer，在总蛋白液浓缩至1ml左右的时候，轻轻加

入新的Buffer（经0.22um超滤膜超滤），再浓缩至1ml左右，连续三次，最后一次的浓缩终体积根据需要的蛋白浓度而定，一般不多于500ul

5、倒出超滤管里的水，用milliQ水轻轻润洗几次，【若管底有可见的蛋白沉淀，可以先加

入水，然后用枪头吹打，注意不要碰到膜，吹打至沉淀悬起，然后倒掉，不可用自来水猛冲】然后加入0.2M的NaOH溶液，室温放置20min，期间平衡超滤管。再离心10min。

倒出残留的NaOH溶液，将管芯浸入MilliQ水的烧杯中,放置几个小时。

6、向管芯中加满20%乙醇，放4度保存，直到下次使用。一般来说，按照上述步骤和注意

事项，每根管用三四年不会坏。

二、PEG20000

将透析好的样品连同透析袋一起放在白色盒子中，用预冷的聚乙二醇20000固体包埋。30min后将吸水后呈浆糊状的聚乙二醇去除，加入新的固体聚乙二醇。每隔10min观察一次，一旦出现浑浊立即停止浓缩。透析袋用完后，洗净，保存于20%乙醇中4°存放。

注意：浓缩过度后会有白色小颗粒或絮状晶体出现，由于透析袋使溶液成薄层状，透明度较高，不易发现小颗粒或絮状沉淀，要看仔细。如果看不到，可根据自己估计的蛋白量留1-2ml 体积。用透析液将透析袋表面的聚乙二醇洗掉，吸取其中的溶液分装后-20度保存。