乙肝核心抗体检测作业指导书
乙肝病毒核心抗体诊断操作规程
乙肝病毒核心抗体诊断操作规程
一、操作步骤：
1、将试剂盒从冰箱中取出至室温中平衡30分钟后使用。
2、将标本对应微孔按顺序编号。
3、每孔加入待测标本50微升（待测标本用生理
盐水1：30稀释，检测结果为临床意义，请用户自行选择），设阴、阳性对照各两孔，每孔加入阴性对照（或阳性对照）各1滴，并设空白对照1孔。
4、每孔加入酶结合物1滴，（空白对照孔除外）
充分混匀，封板，置37度孵育30分钟。
5、手工洗板：弃去孔内液体，洗涤液注满各孔，
静置5秒，甩干，重复5次后拍干。
洗板机洗板：选择洗涤5次程序后拍干。
6、每孔加显色剂A液、B液各1滴，充分混匀，
封板，置37度孵育15分钟。
乙肝病毒核酸检测(金豪)作业指导书
HBV-DNA检测（PCR）作业指导书1. 目的：规范本中心对乙型肝炎病毒DNA定量检测的方法细则。
2. 范围：乙型肝炎病毒DNA定量检测。
3. 职责：3.1 检测人员：负责按照本检测细则对被检样品进行检测。
3.2 复核人员：负责对检测操作是否规范以及检测结果是否准确进行复核。
3.3 科室负责人：负责对科室综合管理和检测报告的签发。
4. 方法：实时荧光PCR法5. 仪器：博日FQD-48(M4)荧光定量PCR仪6. 试剂与材料6.1 试剂来源：北京华大吉比爱生物技术有限公司，试剂有效期为12个月。
6.2 材料：PCR所使用的吸管、试管、加样枪头以及微量离心管都应一次性使用。
特别是微量离心管和试管都应为无菌。
6.3 可调移液器（0.5～10ul、10～200ul、100~1000ul）应该用重量法效正后再使用。
7．操作步骤7.1 样本要求：7.1.1、血清：1600rpm20分钟分离全血取血清；7.1.2、血浆：EDTA抗凝剂，1600rpm20分钟，分离血浆。
7.2样本处理7.2.1、待测血清/血浆及对照个100ul，分别加至1.5ml离心管中；7.2.2、再加100ul浓缩液，振荡混匀，13000rmp10分钟，弃上清液；7.2.3、然后加入10ul内参对照品，50ul核酸提取液；7.2.4、100℃干浴或沸水浴10分钟，13000rmp离心10分钟，吸取上清液备用。
7.3扩增试剂准备7.3.1、核酸反应液振荡混匀，2000rpm10秒；7.3.2每管加入反应液25ul；(样本数+1管阴性对照+1管强阳性对照+1管弱阳性对照+4管工作标准品)7.3.3加样：加入处理过的样品个5ul，盖紧管盖，2000rpm10秒。
7.4 PCR 扩增反应程序如下：仪器检测通道选择：HBV发光荧光基团为FAM,淬灭荧光基团为TAMAR荧光素,参考荧光基团为Rox荧光基团。
8. 结果判断：分析软件自动结合,4个定量校准品制定标准曲线，并计算各样品的结果。
乙肝核心抗体实训报告
一、实训目的通过本次实训，了解乙肝核心抗体的检测原理、操作步骤、结果分析及其临床意义，提高对乙型肝炎病毒（HBV）感染及其相关检测技术的认识。
二、实训内容1. 乙肝核心抗体检测原理乙肝核心抗体（HBcAb）是针对HBV核心抗原（HBcAg）的特异性抗体，包括IgM和IgG两种类型。
检测HBcAb可以帮助判断个体是否曾感染过HBV，以及HBV感染的阶段。
2. 乙肝核心抗体检测操作步骤（1）样本采集：采集受检者血清。
（2）加样：将血清样本按照说明书要求加入酶联免疫吸附试验（ELISA）板孔中。
（3）洗涤：使用洗涤液清洗板孔，去除未结合的抗原抗体复合物。
（4）加酶联抗体：加入针对HBcAb的酶联抗体，孵育一段时间。
（5）洗涤：重复洗涤步骤，去除未结合的酶联抗体。
（6）加底物：加入底物，根据颜色变化判断结果。
（7）终止反应：加入终止液，终止酶促反应。
（8）读取结果：使用酶标仪读取吸光度值，根据标准曲线判断HBcAb的滴度。
3. 乙肝核心抗体检测结果分析（1）HBcAb阴性：表示未感染HBV。
（2）HBcAb阳性：表示曾经感染过HBV，包括既往感染和现症感染。
（3）HBcAb滴度：滴度越高，表示感染时间越长，病毒复制活性可能越高。
三、实训结果本次实训中，我们检测了10份血清样本的HBcAb。
其中，5份样本为阴性，5份样本为阳性。
阳性样本中，3份为既往感染，2份为现症感染。
四、实训讨论1. 乙肝核心抗体检测在临床上的应用HBcAb检测在乙型肝炎的筛查、诊断、疗效监测和预后评估等方面具有重要意义。
以下为HBcAb检测在临床上的应用：（1）乙型肝炎的筛查：HBcAb阳性者应进一步检查HBsAg、HBeAg等指标，以确定是否为现症感染。
（2）乙型肝炎的诊断：HBcAb阳性结合其他指标，可确诊为乙型肝炎。
（3）疗效监测：HBcAb滴度下降或转阴，提示抗病毒治疗有效。
（4）预后评估：HBcAb阳性提示病毒复制活性可能较高，预后较差。
乙型肝炎病毒核酸定量检测标准作业指导书
乙型肝炎病毒核酸定量检测标准作业指导书-模板1.目的采用PCR技术、实时荧光探针技术，用于临床血清或血浆标本中的乙型肝炎病毒核酸的定量检测，或用于乙型肝炎的辅助诊断和抗病毒药物治疗中的疗效观察。
2.范围适用于乙型肝炎病毒核酸（HBV DNA）定量检测（PCR-荧光探针法）。
3.职责3.1操作人员：负责标本制备检测、仪器操作、报告发送。
3.2专业组组长：负责本组耗材的请购，监督本组标本检测、仪器操作、报告发送、质控管理等各方面工作。
3.3实验室主任：负责监督和指导实验室各方面工作。
4.原理采用荧光PCR技术，以HBV基因组中相对保守区为靶区域，设计特异性引物及荧光探针，在样品核酸纯化之后，通过荧光定量PCR对HBV DNA进行扩增，并检测荧光信号，仪器软件系统自动绘制出实时扩增曲线，根据阈循环值（CT）实现对未知样品的检测。
另外，本试剂盒带有内标物质，用于对核酸提取的整个过程进行监控，减少假阴性结果的出现。
5.样品要求5.1适用样品类型：血清或血浆。
5.2样品采集：5.2.1血清用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血2:^，注入无菌的真空采血管中（未加抗凝剂），室温（22-25℃）放置30-60min血标本可自发完全凝集析出血清，或直接使用水平离心机，1500rpm离心5min，吸取上层血清，转移至1.5ml灭菌离心管。
5.2.2血浆用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血2ml，注入含EDTA （乙二胺四乙酸二钠）抗凝剂的真空采血管，立即轻轻颠倒混匀5-10次，使抗凝剂与静脉血充分混匀，5-10min后分离血浆于无菌的1.5ml 灭菌离心管。
5.3样品保存和运送使用专用样品0c冰壶送检，温度约维持在4℃左右。
分离后的血清或血浆可立即用于测试，也可以保存于-20℃待测，保存期为6个月。
5.4拒收样品：拒绝重度溶血样品、肝素抗凝的血浆。
6.仪器和试剂6.1仪器AB7500核酸扩增仪、恒温金属浴、生物安全柜、低温离心机等。
实验七 乙型肝炎病毒核心 抗体测定
二、操作步骤： 1、配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。 2、编号: 将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对 照3 孔、阳性对照2孔、空白对照1孔。 3、加样：分别在相应孔中加入待测样品及阴、阳性对 照各50微升；非原倍样品（稀释样品、质控品等）加 100微升。 4、加酶：每孔加入酶标试剂50微升，空白孔除外,混匀。 5、温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 6、洗涤：小心揭掉封板膜，用洗涤液充分洗涤5遍，扣 干。 7、显色：每孔加显色剂A、B液各50微升，混匀，37℃ 避光显色15分钟。 8、测定：每孔加终止液50微升，混匀，10分钟内测定 果。
实验七 乙型肝炎病毒核心 抗体测定
一、实验原理： 竞争抑制酶联免疫吸附实验原理。在微孔板上 预包被纯化乙肝核心抗原(HBcAg), 加入待测样品及 酶标抗体（HBcAb－HRP）试剂进行温育，酶标抗体 和样品中的HBcAb竞争酶标板上的包被抗原。若样品 中无乙型肝炎核心抗体时，酶标抗体与包被抗原结 合形成“包被抗原－酶标抗体”复合物，洗板后加 入显色剂（TMB），复合物上连接的HRP催化显色剂 反应，生成蓝色产物，终止反应后变为黄色。若样 品中存在乙型肝炎病毒核心抗体时，会与酶标抗体 竞争形成“包被抗原－抗体”复合物，不显色。
乙型肝炎病毒核心抗原( ELISA)标准操作程序SOP文件
3、洗涤：扣去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置3-4分钟，扣去洗涤液，重复3次后在吸水纸上拍干。
4、加裂解液：每孔加100ul（4滴），37℃孵育40分钟。
5、洗涤：扣去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置3-4分钟，扣去洗涤液，重复3次后在吸水纸上拍干。
临界值（C.O.）=2.1×阴性对照平均OD值；
样本OD值S/C.O.≥1者为阳性。（即S≥临界值）
样本OD值S/C.O.＜1者为阴性。（即S＜临界值＝
注：阴性对照孔OD值小于0.05时，按0.05计算；大于0.05时，按实际值计算。
[质量控制]
每批检测同步进行标准和质控品测定，绘制室内质控图。其它按室内质量控制管理规定进行。
6、加酶：除空白对照孔外，每孔加100ul（2滴）酶标记物，轻轻振荡封板后，置37℃水浴20分钟。
7、洗涤：扣去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置3-4分钟，扣去洗涤液，重复3次后在吸水纸上拍干。
8、显色：每孔加底物液A、B各1滴，轻轻振荡封板后，置37℃水浴10-15分钟。
ＡＢＣＤ医院
免疫实验室
文件编号：
[参考范围]
酶联免疫吸附试验（ELISA）：抑制率〈50%为阴性
[临床意义]:
与HBV-DNA同。
[注意事项]
1、不同批号的试剂不可混用。
2、结果判断应在10分钟内完成。
3、试剂盒用前先平衡至室温。含血球的标本易出现假阳性，应避免使用。
4、未用完的板条应及时封存于易封袋中。
5、滴加试剂前，应将滴瓶翻转数次混匀。滴加时瓶身应保持垂直。
[试剂盒组成]
1、包被板条6、底物液A
2、阴性对照血清7、底物液B
乙肝检测指南说明书
Appendix 5 – Hepatitis B Testing Guide 11 BCCDC Hepatitis B Testing Guide (2018). Available from: www.bccdc.ca/health-professionals/clinical-resources/communicable-disease-control-manual/communicable-disease-control2 Anti-HBs ≥ 10 IU/L3If prior vaccination history and/or anti-HBs is detectable but <10 IU/L, see the BCCDC Hepatitis B Guidelines and Immunization Manual For post-exposure prophylaxis, see the BCCDC Hepatitis B Guidelines Manual and Blood and Body Fluid Exposure Management Guidelines .4Other infectious causes include Hepatitis A, C, D and E, Cytomegalovirus and Epstein-Barr Virus. Non-infectious causes include hepatotoxic drugs, autoimmune hepatitis, Wilson’sdisease, vascular causes, or other pre-existing chronic liver diseases. Screen for HIV infection.BCGuidelines.ca: Viral Hepatitis Testing: Appendix 5 (2021) 1HBV screening tests:HBsAg, Anti-HBs and Anti-HBc totalHBsAg can be detected 4-12 weeks after exposureFollow-up• Offer vaccines for hep A, pneumococcal and influenza • Test and offer household and sexual contacts hep B vaccineNo further follow-up Immune memory persists despite waning antibodiesSee isolated HBV core letter Can occur ifimmunocompromised(rare)Acute HBV infection• No history of prior infection • Symptomatic• Recent exposure risks• 95% of immune competent adults will resolve infection• Rule out other potential causes of acute hepatitis 4• Repeat serology to confirm status and possible resolutionChronic HBV infection • History of prior infection ororiginating from endemic country • Often asymptomatic • No recent exposure•HBsAg positive > 6 months• Recommend further evaluation: HBV DNA, HBeAg and ALT/AST• Liver fibrosis assessment: APRI, Elastography (e.g., Fibroscan®)• Baseline ultrasound as appropriate • Consult liver specialist。
区人民医院乙型肝炎核心抗体操作规程
区人民医院乙型肝炎核心抗体（抗-HBc）操作规程1、原理：采用基因工程重组HbcAg包被反应板，加入待测样品，同时加入抗-HBc-HRP，与抗原形成竞争结合，如待测样品中抗-HbcAg含量高，则抗-HBc-HRP与HbcAg 结合少，加入TMB底物时显色淡，反之则显色深。
2、标本采集与处理׃2.1 受检者准备：对于体检对象抽血前保持平时的饮食习惯，采血前应禁食4-6小时。
2.2静脉采血：除非是卧床病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，因此影响测定水平。
故在采血前至少应静坐５分钟。
一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过１分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
2.3采血管：一般采用血清做检验，可以用一般洁净的塑料管或玻璃试管作为容器。
2.4标本处理：血清：采血后，室温下自然放置1-2小时，待血液凝固、血块收缩后，在于3000转每分钟离心15分钟，吸出血清待用。
血浆：采血后，样本和抗凝剂轻轻颠倒混匀6-8次后，充分离心，将血浆与血细胞分离后，吸出血浆待用。
2.5标本接收：接收标本时应检查标本是否符合要求(要求密封、无溶血、无杂物)、所用试管是否正确、试管是否填写完整、并问讯采血日期，对不合格标本应退回重采，并填写记录。
2.6标本储存：一般该标本应随到随做，血清和血浆标本在2-8o c保存。
如需长期保存，可在-20℃保存，并避免反复冻融。
3、试剂与仪器：3.1测定试剂：3.1.1生产厂商：英科新创（厦门）科技有限公司3.1.2批准文号：国药准字2008第34007003.1.3包装：48T×1、96T×13.1.3试剂配置：25倍浓缩稀释液40ml×1瓶HBcAb包被板96孔HBcAb酶标记抗体6.21ml×1瓶HBcAb阳性对照1.0ml×1瓶HBcAb阴性对照1.0ml×1瓶底物液A、B液8.0ml×1瓶终止液7.0ml×1瓶封片2片说明书1份3．2测定仪器：3.2.1酶标仪：上海安泰MODEL MT-8583.2.2洗扳机：ANALYTECH8284、操作步骤：4．1配液：浓缩洗涤液配置前充分混匀（如有结晶析出应充分溶解），将浓缩洗涤液（25*）用蒸馏水或去离子水按1：19稀释后使用。
乙肝核心抗原anti-HBc标准操作程序SOP文件
可用Elecsys通用稀释液或HBV阴性的人血清、血浆或胎牛血清稀释标本。
ABCD医院
免疫实验室
文件编号：
ABCD-02-19
anti-HBc
版序：ABCD
页码：第4页，共4页
结果解释：
标本的Cutoff指数>1.0判断为抗HBc无反应性。可判定该标本抗HBc阴性，不需进一步的试验。标本的Cutoff指数<=1.0判断为抗HBc有反应性。必须用该试剂重复测定两次：如两次结果均为无反应性，则判定该标本抗HBc阴性；如两次检测中有一次是有反应性，则判定该标本抗HBc重复有反应性。
·M链霉亲和素包被的微粒
·R0 DTT
·R1 HBc Ag
·R2生物素化的抗HBc Ag抗体，三联吡啶钌标记的抗HCal 2阳性定标液
需要的材料（未提供）：
·Elecsys抗HBc质控品1和2（PreciControl抗HBc）货号1876325
·Elecsys通用稀释液货号1732277
质控：
Elecsys抗HBc质控品1和2（PreciControl）。质控品1和质控品2至少每24小时或每一次定标后测定一次。质控间隔期应适用于各实验室的具体要求。检测值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，应采取校正措施。
计算：
仪器会自动根据Cal 1和Cal 2的测定值计算Cut-off值。每一个标本的结果以有反应性或无反应性以及Cutoff指数（标本信号/ Cutoff）报告。
定标：
每批试剂盒必须用新鲜试剂和抗HBc Cal 1,Cal 2定标一次。另外，以下情况需要再次定标：
Elecsys2010：
·一个月（同一批号试剂）
·7天（放置仪器上的同一试剂盒）
乙型肝炎核心抗体定性检测操作规程
乙型肝炎核心抗体定性检测操作规程乙型肝炎核心抗体定性检测（Antibody to Hepatitis B Virus Core Antigen，anti-HBc/CORE）1.检验目的检测HBcAb主要是用于乙型肝炎的的诊断.了解乙肝病毒感染者的感染状况，另外还用于乙型肝炎的流行病学调查。
2.方法原理采用ELISA竞争法，反应板的琼脂微孔包被基因工程重组HBcAb，加入待测血液，同时单克隆抗-HBc-HRP，与抗原形成竞争结合，如待测标本中抗-HBc含量高，则抗-HBc-HRP与HBcAg结合少，加入底物TMB时显色淡，反之则显色深。
3.性能指标此方法快速简便.特异性强.检测灵敏度度0.5ng/ml. 4.标本收集4.1标本类型：静脉血或动脉血的血清或血浆标本均可作为检测标本（抗凝剂可用肝素钠.枸橼酸钠.ACD.CPDA-1或EDTA，抗凝剂的质量应符合化试药品要求——化学纯或分析纯，使用的比例以厂家推荐为准）；其他体液如尿液.唾液.精液.羊水.胸水.腹水.乳汁等体液可以作为检测标本，但加热灭活的血清和血库的库存血则不宜作为检测标本。
4.2标本留取：以空腹为宜，收到标本后最好立即离心留取血清或血浆（凝固血应待其充分凝固后收集血清），不能有残留的红细胞.纤维蛋白丝，使用肝素治疗的病人宜在肝素治疗前抽血。
4.3标本保存：留取的标本最好在3小时内检测，不能立即检测的应放置于2-8℃最长达14天（可以含有凝块但要密闭以防蒸发），或者-10℃最长达14天（不能反复冻融也不能含有凝块和红细胞）。
易生物 w w w .e b i o e.c om4.4标本容器：盛放标本的容器必须为洁净的一次性真空采血管.玻璃试管.一次性的不同规格的塑料离心管4.5标本外送：如涉及到需要外送的标本，必须以规定的容器（0.5ml塑料离心管）存放并密封，并根据邮寄规则和要求进行包装，运送时还要放入冰袋（2-8℃）或干冰（-10℃）由专人运送至指定地点指定接收人。
科华乙型肝炎病毒核心抗体IgG( HBcIgG )标准操作程序SOP文件
样本OD值S/C.O.＞1者为抗-HBc阴性。（即S＞临界值）
注：阴性对照孔OD值大于1.5时，按1.5计算；小于1.5时，按实际值计算。
[质量控制]
每批检测同步进行标准和质控品测定，绘制室内质控图。其它按室内质量控制管理规定进行。
[参考范围]
[操作步骤]
1、加样：设空白对照1孔，阴、阳性对照各2孔。分别加阴、阳性对照血清各1滴（50ul）和50ul待测样本于相应孔内。（待测标本用生理盐水作1：30稀释，检测结果为临床意义；原血清不作稀释，检测结果为流行病学意义）
2、加酶：除空白对照孔外，每孔加1滴酶标记物，轻轻振荡封板后，置37℃水浴30分钟。
文件编号：
ABCD-01-53
乙型肝炎病毒核心抗体IgG( HBcIgG )
版序：ABCD
页码：第2页，共2页
2、酶标仪检测（选波长450nmபைடு நூலகம்：每孔加终止液1滴后，用空白孔校零，测定各孔OD值。
原倍血清临界值（C.O.）=0.3×阴性对照平均OD值；
1：30稀释血清临界值（co)=0.5X阴性对照平均OD值；
ABCD医院
免疫实验室
文件编号：
ABCD-01-53
乙型肝炎病毒核心抗体IgG( HBcIgG )
版序：ABCD
页码：第1页，共2页
[前言]
HBAb是由乙型肝炎核心抗原刺激肝细胞产生的一种免疫球蛋白，其中有IgG、IgM、IgA和IgE型。临床上常规检测的有IgM和IgG型。
[原理]
本试剂盒采用竞争法原理检测人血清或血浆原液中的抗-HBc。具有简便、准确、灵敏度高、特异性强等优点。
酶联免疫吸附试验（ELISA）：抑制率〈50%为阴性
乙肝五项手工加样说明书
乙肝五项手工加样说明书摘要：一、前言二、实验原理1.乙肝五项检测的意义2.手工加样操作流程三、实验材料1.实验仪器2.实验试剂四、实验步骤1.样本处理2.加样操作3.检测结果分析五、注意事项1.实验环境要求2.操作过程中的注意事项3.结果处理的注意事项六、实验结果的判断与解读1.乙肝五项指标的正常范围2.各项指标异常的意义七、实验报告的出具正文：乙肝五项手工加样是一种用于检测乙肝病毒感染的方法，可以帮助医生了解患者的乙肝病毒感染状况，为临床诊断和治疗提供依据。
下面我们将详细介绍乙肝五项手工加样的操作流程及注意事项。
一、前言乙肝病毒（HBV）感染是全球性的公共卫生问题，长期携带病毒可能导致肝炎、肝硬化乃至肝癌等严重疾病。
因此，对HBV感染的检测和监控具有重要意义。
乙肝五项检测是一种常用的检测方法，通过检测血清中的乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝表面抗体（HBsAb）、乙肝e抗原（HBeAg）、乙肝e抗体（HBeAb）和乙肝核心抗体（HBcAb）五项指标，判断患者是否感染乙肝病毒及病毒感染的阶段。
二、实验原理1.乙肝五项检测的意义乙肝五项检测可以帮助诊断HBV感染，分析病毒感染阶段，评估病毒复制活跃程度，预测病毒感染的发展趋势，以及评估抗病毒治疗的效果。
2.手工加样操作流程手工加样操作是将待检测血清样本与试剂混合，使试剂与样本充分反应，从而实现对乙肝五项指标的检测。
三、实验材料1.实验仪器离心机、移液器、微量振荡器、酶标仪等。
2.实验试剂乙肝五项检测试剂盒，包括各种酶标抗体、底物、终止液等。
四、实验步骤1.样本处理采集患者血清样本，用离心机将血清与红细胞等细胞成分分离，取上清液进行检测。
2.加样操作将血清样本与试剂盒中的各种酶标抗体按照一定比例混合，充分振荡，使试剂与样本充分反应。
3.检测结果分析将混合液加入酶标仪进行检测，根据酶标仪显示的数据，判断各项指标是否异常。
五、注意事项1.实验环境要求实验应在干净、无尘、恒温恒湿的环境中进行，避免光线直射。
18HBcAb临床检验标准操作规程
HBcAb定量测定试剂盒（化学发光法）临床检验标准操作规程项目名称：乙型肝炎核心抗体（HBcAb）定量测定试剂盒（化学发光法）操作规程文件号：KM-SOP-CLIA-018第1版第 1 页共 4 页2008年1月1日起实施，2010年9月1日修订起草人：起草日期：2007-12-14复核人：复核日期：批准人：批准日期：分发部门或个人：1.实验原理：用乙肝病毒核心抗原包被微孔板制成固相抗原，用酶标记乙肝病毒核心抗体制成酶标抗体。
在包被板微孔中先加入Anti-HBc校准品或待测血清，再加入酶标记物，温育后与固相抗原竞争结合即形成固相抗原-抗体复合物，充分洗涤后加入化学发光底物液，然后测定其发光强度，根据校准曲线即可算出样品中Anti-HBc的含量，样品的RLU 值随Anti-HBc浓度的增加而降低。
2.临床应用：机体感染乙肝病毒（HBV），血清中HbsAg阳转后，早期即可出现乙型肝炎病毒核心抗体（Anti-HBc）阳性，它是HBV感染的早期标志物，在血清中存在的时间很长，高滴度的Anti-HBc表示HBV在体内持续复制，低滴度的Anti-HBc表示HBV既往感染。
3.标本采集及处理：检测标本种类要求：静脉血或动脉血的血清或血浆标本均可作为检测标本。
溶血、脂血、黄疸血不宜使用，如需使用，应在报告单上注明“标本溶血/脂血/黄疸”。
受检者准备：受检者无需做特殊准备；标本采集及处理：宜空腹采集全血标本，离心分离后提取血清用于检测，心方法分离血清，分离血清应彻底，不含纤维蛋白；标本保存：待测血清如在24小时之内使用，可放置于2-8℃，若需长期存放应保存在-20℃以下，但应避免反复冰融。
标本容器：盛放标本的容器必须为洁净的一次性真空采血管、玻璃试管、一次性的不同规格的塑料离心管；标本外送：如涉及到需要外送的标本，必须以规定的容器（0.5ml塑料离心管）存放并密封，并根据邮寄规则和要求进行包装，运送时还要放入冰袋（2-8℃）或干冰（-10℃）由专人运送至指定地点指定接收人。
乙型肝炎病毒核心抗体检测
乙型肝炎病毒核心抗体检测一、标本收集及处理：人血清或血桨类标本。
二、测定原理：采用基因工程重组HBcAg包被反应板，加入待测标本，同时加入抗-HBc-HRP，与抗原形成竞争结合，如待测标本中抗-HBc含量高，则抗-HBc-HRP与HBcAg 结合少，加入TMB底物时显色淡，反之则显色深。
三、试剂来源：上海荣盛生物药业有限公司四、试验器材：（一）、试验试剂：1．预包被反应条 1袋2．酶结合物 1瓶3．HBcAb阳性对照 1瓶4．HBcAb阴性对照 1瓶5．浓缩洗涤液 1瓶6．显色剂A（TMB） 1瓶7．显色剂B（TMB） 1瓶8．终止液 1瓶9．封口胶纸 1片10．说明书 1份11．自封袋 1只（二）、试验仪器：1．洗板仪：2．酶标仪：五、试剂制备：1、洗涤液使用前按要求用蒸馏水作1：20稀释。
2、其他试剂按说明可直接使用。
六、操作程序：1.加待测标本：加入待测标本每孔50微升，并设HBcAb阳性对照2孔，HBcAb阴性对照2孔，空白对照1孔。
2.加酶结合物：每孔50微升，空白对照孔不加，充分混匀，封板，置37℃孵育30分钟。
3.洗板：1）手工洗板：弃去反应板条孔内液体，拍干；用洗涤液注满每孔，静置5-10秒，弃去孔内洗涤液拍干，如此反复5次，拍干。
2）洗板机洗板：选择洗涤5次的程序洗板，最后拍干。
4.加显色剂：先加显色剂A，每孔50微升；再加显色剂B，每孔50微升；充分混匀，封板，放置37℃避光孵育15分钟。
七、结果判断：1．终止反应：每孔加入终止液50微升，混匀。
2．测定：用酶标仪读数，可选择单波长450 nm（以空白孔校零）或双波长450/630 nm，读取各孔OD 值。
3．Cutoff 值计算：原倍血清COV = 阴性对照平均OD值×0.31：30稀释血清COV = 阴性对照平均OD值×0.5标本OD值≥COV为阴性，标本OD值＜COV为阳性。
八、质控要求：每次每块反应板应做质控、阴性对照、阳性对照和空白对照。
(2024版)乙肝SOP
可编辑修改精选全文完整版【标本的采取和保存】采静脉血2ml,分离血清备用。
也可以使用血浆标本进行检测。
标本宜新鲜，无污染，避免溶血，避免反复冻融，不可用NaN3防腐【检验原理】乙肝五项检测卡（胶体金法）采用胶体金免疫层析技术，将五个诊断意义相关的试剂通过一个包装组合在一起，同时进行乙型肝炎病毒五项标志物的检测，在不影响各自性能的情况下，便于客户的储存和使用。
HBsAg金标试条利用双抗体夹心法原理，在玻璃纤维素膜上预包被金标鼠抗HBsAg单抗（AU-SAbI）,在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被鼠抗HBsAg单抗（sAb2）和羊抗鼠IgG。
检测阳性样本时，样本中HBsAg与胶体全标记抗体结合形成复合物,在层析作用下复合物沿膜带向前移动，经过检测线时与预包被的抗体结合形成"Au-sAbl-HBsAg-sAb2"夹心物而凝聚显色，游离金标抗体则在对照线处与羊抗鼠I g G结合而富集显色。
阴性样本则仅在对照线处显色。
HBsAb金标试条利用双抗原夹心法原理，在玻璃纤维纸上预包被金标表面抗原（重组抗原）（Au-SAg）,在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被（重组抗原）HBsAg和羊抗HBsAg。
检测阳性样本时，样本中HBsAb 与胶体全标记表面抗原结合形成复合物,在层析作用下复合物沿膜带向前移动，经过检测线时与预包破的表面抗原结合形成"Au-sAg-HBsAb-sAg"夹心物而凝聚显色，游离金标抗原则在对照线处与羊抗HBsAg结合而富集显色。
阴性样本则仅在对照线处显色。
HBeAg金标试条利用双抗体夹心法原理，在玻璃纤雄素膜上预包被金标鼠抗HBeAg单抗(Au-eAbl),在硝酸纤维素膜上的检测线和对照线处分别包被鼠抗e单抗(eAb2)和羊抗鼠IgG。
检测时，样本中的eAg可与胶体金标记抗体结合形成免疫复合物，在层析作用下复台物沿膜带移动，经过检测线时与预包被的抗体形成&Ab2-eAg-eAbl-Au”夹心物而凝聚显色;阴性样本仅在对照线处显色。
HBcAb半定量测定-检验科免疫室作业指导书
HBcAb半定量测定1.原理抗原或抗体包被的微粒子，是由多孔高分子粒子制成，具有很好的亲水性，悬浮性极佳，微粒子可与玻璃纤维不可逆结合，从而提高了反应的特异性。
标本与微粒子以一定比例混合，标本中被检物质与微粒子上包被的抗体进行一定时间的反应，以反应终了后，反应液的一部分被移到玻璃纤维上，洗去未反应的被检物质与其它的不要成份，加入基质液，基质液被碱性磷酸所分解生成Methylumbelliferone。
当该物受荧光照射后就产生荧光，测定荧光强度的分化率，从而决定被测物质的浓度。
2.标本采集：2.1标本采集前病人准备：受检者应空腹。
2.2标本种类：血清或血浆。
2.3标本要求：采集血清样本，取被检者静脉血，用无菌取血针抽取病人静脉血3ml，收集干燥试管中，室温放置不超过8小时，2000转/分离心20分钟备用.采集血浆样本，用无菌取血针取被检者静脉血3ml，收集于含有EDTA作抗凝剂的试管中，室温被置不超过8小时，2000转/分离心20分钟备用。
3.标本储存：待测样本室温不超过8小时，4-8℃不超过72小时，-20℃可长期保存，避免反复冻融。
4.标本运输：室温运输。
5.标本拒收标准：细菌污染，严重溶血或脂血标本不能作测定。
6.试剂：6.1试剂名称：HBcAb诊断试剂盒。
6.2试剂生产厂家：美国雅培制药有限公司6.3包装规格：100Test/kit6.4试剂盒组成：HBcAb诊断试剂。
6.5试剂储存条件及有效期：试剂盒贮存2-8℃条件，有效期12个月。
7.仪器设备：7.1仪器名称：AXSYM免疫自动分析仪7.2仪器厂家：美国雅培公司7.3仪器型号：AXSYMTm型7.4仪器校准：本仪器校准由厂家工程师负责校准。
8.操作步骤：8.1样本处理：取待测样本血清或血浆置于样本杯中（不能有纤维蛋白，不能有气泡）。
8.2仪器准备：检查纤维杯，反应杯数量满足实验需要，废物桶和废液桶是否连接好，仪器的光路是否正常，环境温度是否符合要求，打印机的连接。
乙型肝炎核心抗体定量检测
乙型肝炎核心抗体定量检测（Antibody to Hepatitis B Virus Core Antigen，anti-HBc/CORE）1、检验目的检测HBcAb主要是用于乙型肝炎的的诊断、了解乙肝病毒感染者的感染状况，另外还用于乙型肝炎的流行病学调查。
2、方法原理采用了美国雅培公司的专利技术—微粒子酶免疫分析（MEIA），即以HBcAg包被微粒子（M-Ag）与标本中的HBcAb形成M-Ag-Ab 复合物，当复合物被转移到纤维杯上时，微粒子就不可逆地结合到纤维杯表面的玻璃纤维上，并与加入的碱性磷酸酶标记HBcAb 结合，洗去未结合的游离物质，加入底物—四甲基伞形酮磷酸盐，碱性磷酸酶脱去底物的磷酸基而发出荧光，通过MEIA光路元件检测而得到定量结果。
3、性能指标MEIA定量检测HBcAb不精密度CVs为5.8-10.4%，检出限<1.0 PEI unit/ml），灵敏度1.0 PEI unit/ml，特异性对99.9%。
4、标本收集4．1标本类型：静脉血或动脉血的血清或血浆标本均可作为检测标本（抗凝剂可用肝素钠、枸橼酸钠、ACD、CPDA-1或EDTA，抗凝剂的质量应符合化试药品要求——化学纯或分析纯，使用的比例以厂家推荐为准）；其他体液如尿液、唾液、精液、羊水、胸水、腹水、乳汁等体液可以作为检测标本，但加热灭活的血清和血库的库存血则不宜作为检测标本。
4．2标本留取：以空腹为宜，收到标本后最好立即离心留取血清或血浆（凝固血应待其充分凝固后收集血清），不能有残留的红细胞、纤维蛋白丝，使用肝素治疗的病人宜在肝素治疗前抽血。
4．3标本保存：留取的标本最好在3小时内检测，不能立即检测的应放臵于2-8℃最长达14天（可以含有凝块但要密闭以防蒸发），或者-10℃最长达14天（不能反复冻融也不能含有凝块和红细胞）。
4．4标本容器：盛放标本的容器必须为洁净的一次性真空采血管、玻璃试管、一次性的不同规格的塑料离心管4．5标本外送：如涉及到需要外送的标本，必须以规定的容器（0.5ml塑料离心管）存放并密封，并根据邮寄规则和要求进行包装，运送时还要放入冰袋（2-8℃）或干冰（-10℃）由专人运送至指定地点指定接收人。
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进样分析，将标本按在Workplace菜单中输入的标本号顺序在样本架上排好，放入进样盘内,按START键，输入该批上机标本的起始标本号，再点START键，仪器自动开始推架检测标本。
Elecsys2010：
· 一个月（同一批号试剂）
· 7天（放置仪器上的同一试剂盒）
· 根据要求进行标定：如质控结果超出范围时；
· 根据规定进行多次标定。
定标范围：
（电化学发光信号计数）阴性定标液（Cal 1） 27，000-200，000 阳性定标液（Cal 2） 100-3000
4.操作步骤（以E 170为例）
7.参考范围
8.分析性能
9.干扰因素
该方法不受黄疸（胆红素<25mg/dl）、溶血（血红蛋白<1.6g/dl）、脂血（脂质<1000mg/dl）和生物素<50ng/ml等干扰。
接受高剂量生物素（>5mg/天）治疗的病人，至少要等最后一次摄入生物素8小时后才能采血。不受类风湿因子干扰（676U/ml）。
19种常用药物经试验对本测定无干扰。接受过小鼠单抗治疗或诊断的病人可能会出现假阳性反应。偶尔会遇到抗链酶亲和素抗体的干扰。Elecsys 抗HBc测定结果应结合病人病史、临床其他检查结果综合起来进行诊断。
· Elecsys 添加剂液（SysWash）货号1930346
· Elecsys 系统清洗液（SysClean）ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ号1298500
3.仪器和校准
使用仪器：瑞士罗氏诊断公司生产Elecsys 2010/E 170/E 411全自动电化学发光免疫自动分析仪
仪器校准：
每批试剂盒必须用新鲜试剂和抗HBc Cal 1,Cal 2定标一次。另外，以下情况需要再次定标：
· 第4步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。Elecsys自动将标本产生的光电信号与从抗HBc定标液得出的Cutoff值相比较。
1.标本要求
血清：按标准常规方法采集。
血浆：肝素钠、EDTA-K3、枸橼酸钠或氟化钠/草酸钾抗凝。
标本在2－8度可稳定5天，-20度可稳定3个月。标本可冻融5次。
注意：冻融过的标本、有沉淀的标本、反复测定过的标本使用前需离心。加热灭活的标本可使用。
2.试剂、校准品、质控品和其他所需材料
采用罗氏原装配套试剂。
试剂：
M：链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），1瓶，6.5ml。粒子浓度0.72mg/ml，生物素结合能力： 470ng生物素/mg粒子。含防腐剂。
5.质量控制
Elecsys抗HBc质控品1和2（PreciControl）。质控品1和质控品2至少每24小时或每一次定标后测定一次。质控间隔期应适用于各实验室的具体要求。检测值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，应采取校正措施。
6.计算方法
仪器会自动根据Cal 1和Cal 2的测定值计算Cut-off值。每一个标本的结果以有反应性或无反应性以及Cutoff指数（标本信号/ Cutoff）报告。
质控品：
Elecsys 抗HBc质控品1和2 （PreciControl 抗HBc）货号1876325
其他所需材料：
· Elecsys通用稀释液货号1732277
· Elecsys2010分析仪
· Elecsys 系统缓冲液（ProCell）货号1662988
· Elecsys测量池清洗液（CleanCell）货号1662970
分析原理
原理：采用竞争法原理，整个过程27分钟完成。
· 第1步：40µl标本用还原试剂预处理。
· 第2步：加入HBc抗原液，标本中的抗- HBc与HBc抗原结合形成复合物。
· 第3步：加入生物素化的和钌标记的抗HBc抗体以及链霉亲和素包被的微粒，HBc抗原上仍然游离的位点被占据。形成的免疫复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。
R0：DTT（白盖），1瓶，5ml：二硫苏糖醇，浓度110mmol/l；枸橼酸缓冲液50mmol/l。
R1：HBcAg（灰盖），1瓶，8ml：HBcAg（E.coli，rDNA）浓度高于25ng/ml，磷酸缓冲液0.1mol/l，pH7.4，含防腐剂。
R2：生物素化的抗HBcAg抗体;Ru(bpy)32+标记的抗HBcAg抗体（黑盖），1瓶，
8ml：生物素化的抗HBcAg单克隆抗体浓度高于800ng/ml；Ru(bpy)标记的抗HBcAg单克隆抗体浓度高于130ng/ml；磷酸缓冲液0.1mol/l，pH7.4，含防腐剂。
校准品：
Cal 1 阴性定标液（白盖），2瓶，1.0ml/瓶人血清, 含防腐剂
Cal 2 阳性定标液（黑盖），2瓶，1.0ml/瓶，抗HBc（人）浓度高于8PEIU*/ml,人血清, 抗HCV和抗HIV1+2无反应性。含防腐剂。
5.1 校准操作步骤：
在编缉各项目的参数时，已经在Application—Calib菜单中定义好了定标类型和几点定标。因此在对各项目进行定标时，只需在定标菜单Calibration中进行即可。3.2进入Calibration—Status菜单，用鼠标选择需定标的项目，再根据需要点单点定标（BLANK键）或两点定标（TWO POINT键）、跨距定标（SPAN键）、多点定标（FULL键），再选择其它项目进行相应选择，最后点SAVE，将定标物放入在Calibration—Calibrator中定义好的位置，点Start，再点Start，仪器开始定标。
在Calibration—Status菜单中看定标结果，点Calibration Result键看定标结果，点Reaction Monitor键看每个定标物的反应曲线。
5.2 样本检测程序：
单个样本输入，在主菜单下选择Workplace- Testslection，在Sequence No栏输入标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目，点SAVE键，样本号自动累加。