6实验六金黄色葡萄球菌的检验[1]资料
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致病性
金黄色葡萄球菌是人 类化脓感染中最常见的病 原菌，临床表现多种多样， 可引起局部化脓感染，也 可引起肺炎、伪膜性肠炎、 心包炎等，甚至败血症、 脓毒症等全身感染。
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致病性
葡萄球菌性食物中毒是葡萄球菌肠毒素所引起的
疾病，可引发不同程度的急性胃肠炎症状，恶心、
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实验材料
仪器材料：显微镜、恒温箱、无菌吸管、无菌试 管、 无菌平皿、 载玻片、L型涂布棒、酒精灯、接 种环等 培养基及试剂：10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤、 7.5%氯化钠肉汤、血琼脂平板、Baird-parker 培养基、无菌盐水、BHI肉汤、兔血浆、革兰氏染 色液
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金黄色葡萄球菌Ⅰ型溶血 金黄色葡萄球菌在BP平板上的菌落形态
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在肉汤中培养时，菌体可生成血浆凝固酶并释放于
培养基中，此酶类似凝血酶原物质，不直接作用到
血浆纤维蛋白原上，而是被血浆中的致活剂激活后，
变成耐热的凝血酶样物质，此物质可使血浆中的液
态纤维蛋白原变成纤维蛋白，血浆因而成凝固状态
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葡萄球菌在自然界分布极广，空气、土壤、水、饲料、食品 (剩饭、糕点、牛奶、肉品等)以及人和动物的体表粘膜等处 均有存在，大部分不致病，也有一些致病的球菌。金黄色葡 萄球菌是葡萄球菌属一个种。可引起皮肤组织炎症，还能产 生肠毒素。如果在食品中大量生长繁殖，产生毒素，人误食 了含有毒素的食品，就会发生食物中毒，故食品中存在金黄 色葡萄球菌对人的健康是一种潜在危险
血平板和Baird-Parker琼脂平板上生长的菌落特征
观察金黄色葡萄球菌产生血浆凝固酶现象
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2、基本原理
金黄色葡萄球菌可产生多种毒素和酶。 在血平板上生长可金黄色色素使菌落呈现金黄色； 由于产生溶血素使菌落周围形成大而透明的溶血圈 在B-P平板上生长时，因将亚碲酸钾还原成碲酸钾 使菌落呈灰黑色；因产生脂酶使菌落周围有一混浊 带，而在其外层因产生蛋白水解酶有一透明带。
B—P平板
主要成分及作用：
氯化锂、甘氨酸:抑制非制病性葡萄球的生长
丙酮酸钠: 促进葡萄球菌生长
亚碲酸钾: 抑制G-杆菌生长，可被金黄色葡萄球
菌还原为碲盐呈黑色
卵黄: 含蛋白质、卵磷、脂肪
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检 验 程 序
取2 5ml 样品，接种于225ml 7.5％氯化钠肉汤培养基内， 置36℃±1℃培养24h
致病性
金黄色葡萄球菌为条件致病菌，菌株致病力的强 弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶： a.溶血素：外毒素，分α、β、γ、δ四种， 能损伤血小板，破坏溶酶体，引起肌体局部缺血 和坏死； b.杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞；
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c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶 使血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固， 阻碍吞噬细胞的吞噬作用。葡萄球菌形成的感染易 局部化与此酶有关 d.脱氧核糖核酸酶：金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖 核酸酶能耐受高温，可用来作为依据鉴定金黄色葡 萄球菌 e.肠毒素：金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃肠 炎的蛋白质性肠毒素，分为A、B、C、D、E五种。
金黄色葡萄球菌能产生凝固酶，使血浆凝固，多数致病菌株 能产生溶血毒素，使血琼脂平板菌落周围出现溶血环，在试 管中出现溶血反应。这些是鉴定致病性金黄色葡萄球菌的重 要指标。
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肠毒素形成条件：
存放温度，在37°C内，温度越高，产毒时间越 短； 存放地点，通风不良氧分压低易形成肠毒素； 食物种类，含蛋白质丰富，水分多，同时含一定 量淀粉的食物，肠毒素易生成。
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结果
金黄色葡萄球菌革兰氏染色镜检阳性，致病菌较非
致病菌小，大小排列整齐。细菌繁殖时多呈多个平
面的不规则分裂，堆挤成葡萄串状。在中毒食品、
脓汁或液体培养基中常呈单个或环状球短链排列，
易误认为是链球菌
血平板上菌落呈金黄色，周围有溶血圈。在B--P平板上呈灰
色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透
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直接计数法
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形态：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，排列呈葡萄球状， 无芽胞，无荚膜，致病性葡萄球菌，菌体较小，直径约为 0.5－－1um。 培养特征：在肉汤中呈混浊生长，在胰酪胨大豆肉汤内有时
液体澄清，菌量多时呈混浊生长，血平板上菌落呈金黄色，
有时也为白色，大而突起、圆形、不透明、表面光滑，周围 有溶血圈。在B--P平板上为圆形、光滑凸起、湿润、直径为
转种血平板和B-P 平板，置36℃±1℃培养24h ，挑取血平板上金 黄色（有时为白色）菌落时行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验
血浆凝固酶试验：吸取1：4 新鲜兔血浆0.5ml，放入小试管中，再加入培养 24h的金黄色葡萄球菌肉浸液肉汤培养物0.5ml，振荡摇匀，置36℃±1℃温 箱或水浴内，每半小时观察一次，观察6h，如呈现凝固，即将试管倾斜或倒 置时，呈现凝块者，被认为阳性结果。同时以已知阳性和阴性葡萄球菌株及 肉汤作为对照。
电镜照片
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5、大多数菌株能生长在6.5-46℃之间（最适 温度30-37℃）能在pH4.2-9.3之间生长（最 适pH为7.0-7.5）； 6、大多数菌株产生类胡萝卜素，使细胞团呈 现出深橙色到浅黄色，色素的产生取决于生 长的条件，而且在单个菌株中可能也有变化
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呕吐最为突出而且普遍，腹痛、腹泻次之。
当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较多的食 品，如牛奶和奶制品、肉、蛋等，在温度条件适 宜时，经8-10小时即可产生相当数量的肠毒素。
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1、目的要求
了解食品和食物中毒样品中金黄色葡萄球菌及肠毒
素的检测方法
观察金黄色葡萄球菌的革兰氏染色镜检形态以及在
7、好氧生长的细胞产生接触酶；
8、产生蛋白酶、脂肪酶、磷脂酶、脂酶和溶 菌酶，大多数菌株可水解天然的动物蛋白， 例如血红蛋白、纤维蛋白、卵白、酪朊和多 肽类如明胶，水解脂类、吐温类和磷脂蛋白 质，并释放脂肪酸
9、所有的毒株产生凝固酶，人和动物来源的 菌株通常可凝固兔、人、马和猪的血浆。
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金黄色葡萄球菌凝固酶实验（玻片法）
金黄色葡萄球菌凝固酶实验（试管法）
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明圈。 致病性葡萄球菌血浆凝固酶为阳性
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注意事项
样品中金黄色葡萄球菌计数进行10倍稀释时要注意，
每个稀释度要更换吸管
实验中操作者须注意生物安全防护， 实验结束后要消毒环境，把实验室
材料高压灭菌后方可清洗或弃之。
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思考题
金黄色葡萄球菌引起食物中毒的机理是什么？ 为什么要采用血浆凝固酶实验来决定葡萄球 菌的致病和不致病？
2－3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，
在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落似有奶油树胶的硬 度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落；但无混浊带及透明 圈。长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落 所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。
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实验六 金黄色葡萄球菌的检验
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Contents
生物学特性---菌体形态及培养特征
1 革兰氏阳性球菌，直径为0.8-1.0微米，镜检时 呈单个、成对、四联或不规则的簇群； 无芽孢，不运动
2
3
兼性厌氧菌，在好氧条件下生长最好
4
可在15%氯化钠和40%胆汁中生长
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致病性
金黄色葡萄球菌是人 类化脓感染中最常见的病 原菌，临床表现多种多样， 可引起局部化脓感染，也 可引起肺炎、伪膜性肠炎、 心包炎等，甚至败血症、 脓毒症等全身感染。
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致病性
葡萄球菌性食物中毒是葡萄球菌肠毒素所引起的
疾病，可引发不同程度的急性胃肠炎症状，恶心、
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实验材料
仪器材料：显微镜、恒温箱、无菌吸管、无菌试 管、 无菌平皿、 载玻片、L型涂布棒、酒精灯、接 种环等 培养基及试剂：10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤、 7.5%氯化钠肉汤、血琼脂平板、Baird-parker 培养基、无菌盐水、BHI肉汤、兔血浆、革兰氏染 色液
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金黄色葡萄球菌Ⅰ型溶血 金黄色葡萄球菌在BP平板上的菌落形态
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在肉汤中培养时，菌体可生成血浆凝固酶并释放于
培养基中，此酶类似凝血酶原物质，不直接作用到
血浆纤维蛋白原上，而是被血浆中的致活剂激活后，
变成耐热的凝血酶样物质，此物质可使血浆中的液
态纤维蛋白原变成纤维蛋白，血浆因而成凝固状态
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葡萄球菌在自然界分布极广，空气、土壤、水、饲料、食品 (剩饭、糕点、牛奶、肉品等)以及人和动物的体表粘膜等处 均有存在，大部分不致病，也有一些致病的球菌。金黄色葡 萄球菌是葡萄球菌属一个种。可引起皮肤组织炎症，还能产 生肠毒素。如果在食品中大量生长繁殖，产生毒素，人误食 了含有毒素的食品，就会发生食物中毒，故食品中存在金黄 色葡萄球菌对人的健康是一种潜在危险
血平板和Baird-Parker琼脂平板上生长的菌落特征
观察金黄色葡萄球菌产生血浆凝固酶现象
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2、基本原理
金黄色葡萄球菌可产生多种毒素和酶。 在血平板上生长可金黄色色素使菌落呈现金黄色； 由于产生溶血素使菌落周围形成大而透明的溶血圈 在B-P平板上生长时，因将亚碲酸钾还原成碲酸钾 使菌落呈灰黑色；因产生脂酶使菌落周围有一混浊 带，而在其外层因产生蛋白水解酶有一透明带。
B—P平板
主要成分及作用：
氯化锂、甘氨酸:抑制非制病性葡萄球的生长
丙酮酸钠: 促进葡萄球菌生长
亚碲酸钾: 抑制G-杆菌生长，可被金黄色葡萄球
菌还原为碲盐呈黑色
卵黄: 含蛋白质、卵磷、脂肪
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检 验 程 序
取2 5ml 样品，接种于225ml 7.5％氯化钠肉汤培养基内， 置36℃±1℃培养24h
致病性
金黄色葡萄球菌为条件致病菌，菌株致病力的强 弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶： a.溶血素：外毒素，分α、β、γ、δ四种， 能损伤血小板，破坏溶酶体，引起肌体局部缺血 和坏死； b.杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞；
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c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶 使血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固， 阻碍吞噬细胞的吞噬作用。葡萄球菌形成的感染易 局部化与此酶有关 d.脱氧核糖核酸酶：金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖 核酸酶能耐受高温，可用来作为依据鉴定金黄色葡 萄球菌 e.肠毒素：金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃肠 炎的蛋白质性肠毒素，分为A、B、C、D、E五种。
金黄色葡萄球菌能产生凝固酶，使血浆凝固，多数致病菌株 能产生溶血毒素，使血琼脂平板菌落周围出现溶血环，在试 管中出现溶血反应。这些是鉴定致病性金黄色葡萄球菌的重 要指标。
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肠毒素形成条件：
存放温度，在37°C内，温度越高，产毒时间越 短； 存放地点，通风不良氧分压低易形成肠毒素； 食物种类，含蛋白质丰富，水分多，同时含一定 量淀粉的食物，肠毒素易生成。
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结果
金黄色葡萄球菌革兰氏染色镜检阳性，致病菌较非
致病菌小，大小排列整齐。细菌繁殖时多呈多个平
面的不规则分裂，堆挤成葡萄串状。在中毒食品、
脓汁或液体培养基中常呈单个或环状球短链排列，
易误认为是链球菌
血平板上菌落呈金黄色，周围有溶血圈。在B--P平板上呈灰
色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透
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直接计数法
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形态：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，排列呈葡萄球状， 无芽胞，无荚膜，致病性葡萄球菌，菌体较小，直径约为 0.5－－1um。 培养特征：在肉汤中呈混浊生长，在胰酪胨大豆肉汤内有时
液体澄清，菌量多时呈混浊生长，血平板上菌落呈金黄色，
有时也为白色，大而突起、圆形、不透明、表面光滑，周围 有溶血圈。在B--P平板上为圆形、光滑凸起、湿润、直径为
转种血平板和B-P 平板，置36℃±1℃培养24h ，挑取血平板上金 黄色（有时为白色）菌落时行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验
血浆凝固酶试验：吸取1：4 新鲜兔血浆0.5ml，放入小试管中，再加入培养 24h的金黄色葡萄球菌肉浸液肉汤培养物0.5ml，振荡摇匀，置36℃±1℃温 箱或水浴内，每半小时观察一次，观察6h，如呈现凝固，即将试管倾斜或倒 置时，呈现凝块者，被认为阳性结果。同时以已知阳性和阴性葡萄球菌株及 肉汤作为对照。
电镜照片
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5、大多数菌株能生长在6.5-46℃之间（最适 温度30-37℃）能在pH4.2-9.3之间生长（最 适pH为7.0-7.5）； 6、大多数菌株产生类胡萝卜素，使细胞团呈 现出深橙色到浅黄色，色素的产生取决于生 长的条件，而且在单个菌株中可能也有变化
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呕吐最为突出而且普遍，腹痛、腹泻次之。
当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较多的食 品，如牛奶和奶制品、肉、蛋等，在温度条件适 宜时，经8-10小时即可产生相当数量的肠毒素。
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1、目的要求
了解食品和食物中毒样品中金黄色葡萄球菌及肠毒
素的检测方法
观察金黄色葡萄球菌的革兰氏染色镜检形态以及在
7、好氧生长的细胞产生接触酶；
8、产生蛋白酶、脂肪酶、磷脂酶、脂酶和溶 菌酶，大多数菌株可水解天然的动物蛋白， 例如血红蛋白、纤维蛋白、卵白、酪朊和多 肽类如明胶，水解脂类、吐温类和磷脂蛋白 质，并释放脂肪酸
9、所有的毒株产生凝固酶，人和动物来源的 菌株通常可凝固兔、人、马和猪的血浆。
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金黄色葡萄球菌凝固酶实验（试管法）
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注意事项
样品中金黄色葡萄球菌计数进行10倍稀释时要注意，
每个稀释度要更换吸管
实验中操作者须注意生物安全防护， 实验结束后要消毒环境，把实验室
材料高压灭菌后方可清洗或弃之。
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思考题
金黄色葡萄球菌引起食物中毒的机理是什么？ 为什么要采用血浆凝固酶实验来决定葡萄球 菌的致病和不致病？
2－3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，
在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落似有奶油树胶的硬 度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落；但无混浊带及透明 圈。长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落 所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。
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生物学特性---菌体形态及培养特征
1 革兰氏阳性球菌，直径为0.8-1.0微米，镜检时 呈单个、成对、四联或不规则的簇群； 无芽孢，不运动
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兼性厌氧菌，在好氧条件下生长最好
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可在15%氯化钠和40%胆汁中生长
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