6实验六金黄色葡萄球菌的检验[1]资料
金葡球菌实验报告
一、实验目的通过本次实验，掌握金黄色葡萄球菌的分离、培养和鉴定方法，了解其生物学特性，为临床诊断和治疗提供依据。
二、实验材料1. 实验菌株：金黄色葡萄球菌标准菌株2. 培养基：普通琼脂、血琼脂、Baird-Parker培养基、营养肉汤3. 实验仪器：恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、显微镜、移液器、试管、培养皿等4. 实验试剂：革兰氏染色液、碱性复红液、氯化钠、葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、甲基红等三、实验方法1. 菌株分离与纯化（1）将金黄色葡萄球菌标准菌株接种于营养肉汤中，37℃培养24小时。
（2）取培养好的肉汤，用无菌移液器吸取适量接种于普通琼脂平板，37℃培养24小时。
（3）挑取单菌落，接种于血琼脂平板，37℃培养24小时。
（4）挑取单菌落，接种于Baird-Parker培养基平板，37℃培养24小时。
2. 鉴定试验（1）革兰氏染色：取纯化后的金黄色葡萄球菌，进行革兰氏染色，观察菌体形态。
（2）生化试验：进行触酶实验、葡萄糖发酵实验、麦芽糖发酵实验、乳糖发酵实验、蔗糖发酵实验、甲基红反应、VP反应等，以确定金黄色葡萄球菌的生化特性。
（3）溶血试验：观察金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上的溶血情况。
（4）过氧化氢酶试验：观察金黄色葡萄球菌在Baird-Parker培养基平板上的过氧化氢酶反应。
四、实验结果1. 菌株分离与纯化在普通琼脂平板、血琼脂平板和Baird-Parker培养基平板上均分离出金黄色葡萄球菌，菌落呈圆形、凸起、表面光滑、湿润、不透明，产生黄色脂溶性色素。
2. 革兰氏染色金黄色葡萄球菌革兰氏染色阳性，呈球形，排列成葡萄串状。
3. 生化试验金黄色葡萄球菌触酶实验阳性，分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、产酸不产气，甲基红反应阳性，VP反应阴性。
4. 溶血试验金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上产生溶血环。
5. 过氧化氢酶试验金黄色葡萄球菌在Baird-Parker培养基平板上产生黑色沉淀。
五、实验结论根据实验结果，分离出的金黄色葡萄球菌符合金黄色葡萄球菌的生物学特性，可以确认为金黄色葡萄球菌。
实验六 金黄色葡萄球菌检验
实验六金黄色葡萄球菌检验（第二篇）1 目的1.1 了解金黄色葡萄球菌检验原理1.2 掌握金黄色葡萄球菌鉴定要点和检验方法2 原理葡萄球菌在自然界分布极广，空气、土壤、水、饲料、食品(剩饭、糕点、牛奶、肉品等)以及人和动物的体表粘膜等处均有存在，大部分是不致病，也有一些致病的球菌。
金黄色葡萄球菌是葡萄球菌属一个种。
可引起皮肤组织炎症，还能产生肠毒素。
如果在食品中大量生长繁殖，产生毒素，人误食了含有毒素的食品，就会发生食物中毒，故食品中存在金黄色葡萄球菌对人的健康是一种潜在危险，检查食品中金黄色葡萄球菌及数量具有实际意义。
金黄色葡萄球菌能产生凝固酶，使血浆凝固，多数致病菌株能产生溶血毒素，使血琼脂平板菌落周围出现溶血环，在试管中出现溶血反应。
这些是鉴定致病性金黄色葡萄球菌的重要指标。
3 材料3.1 样品奶、肉、蛋、鱼制品和饮料等。
3.2 菌种金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）藤黄八叠球菌（Sarcina lutea）3.3 培养基与试剂7.5%氯化钠肉汤、血琼脂平板、Baird-parker氏培养基、无菌盐水、兔血浆、革兰氏染色液。
3.4 其它显微镜、温箱、离心机、无菌吸管、无菌试管、无菌平皿、均质器、载玻片、L型涂布棒、酒精灯、接种环等。
4 流程5 步骤5.1 一般培养称取25g固体样品，加入225mL无菌生理盐水，制成混悬液(液体样品可不稀释)。
吸取5mL上述混悬液，接种于7.5%氯化钠肉汤或胰酪胨大豆肉汤50mL培养基内，同时挑取混悬液或液体样品直接在血平板和Baird-Parker平板划线分离。
同时将对照菌种在上述两种平板上作划线分离接种。
置36±1℃温箱培养24h。
5.2 分纯培养将上述血平板和Baird-Parker平板上挑取可疑菌落,先观察对照的菌落特征,再观察被检样品的菌落.,并挑取可疑菌落在血平板上进行分离纯化。
若无菌落生长，可用也增菌培养物在上上述平板上划线分离，在36±1℃温箱培养24h后再分离纯化，挑取可疑菌落及对照菌种进行革兰氏染色及血浆凝固酶试验。
金黄色葡萄球菌检测实验报告
金黄色葡萄球菌检测实验报告一、实验目的金黄色葡萄球菌是一种常见的病原菌，能够引起多种感染性疾病。
本次实验的目的是通过一系列的检测方法，准确检测出样本中是否存在金黄色葡萄球菌，并确定其数量和特性，为食品安全、临床诊断和环境卫生等领域提供可靠的检测依据。
二、实验原理金黄色葡萄球菌具有一些独特的生物学特性和生化反应，可通过以下几种方法进行检测：1、血浆凝固酶试验：金黄色葡萄球菌能够产生血浆凝固酶，使血浆发生凝固。
2、甘露醇发酵试验：金黄色葡萄球菌可发酵甘露醇产酸。
3、革兰氏染色：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，呈葡萄串状排列。
三、实验材料1、样本：食品样本（如乳制品、肉类）、临床样本（如脓液、血液）等。
2、培养基和试剂：血琼脂平板甘露醇氯化钠琼脂培养基兔血浆革兰氏染色液生理盐水3、仪器设备：恒温培养箱显微镜无菌接种环、移液管等四、实验步骤1、样本处理食品样本：称取一定量的样品，加入适量生理盐水进行均质处理，制成稀释液。
临床样本：直接进行涂片或适当稀释。
2、增菌培养将处理后的样本接种于 75%氯化钠肉汤中，置于 36±1℃恒温培养箱中培养 18 24 小时。
3、分离培养从增菌培养物中分别划线接种于血琼脂平板和甘露醇氯化钠琼脂培养基上，于 36±1℃培养 18 24 小时。
4、形态观察观察血琼脂平板上的菌落形态，金黄色葡萄球菌菌落呈金黄色，周围有明显的透明溶血圈。
观察甘露醇氯化钠琼脂培养基上的菌落，金黄色葡萄球菌能使培养基变黄。
5、革兰氏染色挑取可疑菌落进行革兰氏染色，在显微镜下观察，金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，呈葡萄串状排列。
6、血浆凝固酶试验取兔血浆与可疑菌落混合，置于 36±1℃培养箱中观察，若血浆发生凝固，则为阳性。
7、甘露醇发酵试验接种可疑菌落于甘露醇氯化钠琼脂培养基中，观察是否产酸。
五、实验结果1、形态观察在血琼脂平板上观察到金黄色、周围有透明溶血圈的菌落。
在甘露醇氯化钠琼脂培养基上观察到变黄的菌落。
金黄色葡萄球菌检验
金黄色葡萄球菌检验1. 概述金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一种常见的细菌，广泛存在于自然环境和人体皮肤表面。
虽然大多数的金黄色葡萄球菌对人体无害，但一些菌株具有致病性，可以引起多种感染，包括皮肤感染、肺炎、血流感染等。
因此，对金黄色葡萄球菌的检验具有重要意义，能及早发现和控制感染的传播。
本文将介绍金黄色葡萄球菌检验的一些常用方法和技术。
2. 菌种的采集和处理2.1 采集样本金黄色葡萄球菌通常从病人的感染部位或者其他潜在的感染源采集样本。
常见的样本类型包括：皮肤切口分泌物、鼻拭子、血液、尿液等。
2.2 样本处理在进行金黄色葡萄球菌的检验之前，需要对采集的样本进行适当的处理。
处理方法取决于样本的类型和检验的目的。
常见的处理步骤包括：•鼻拭子：将鼻拭子放置在含有缓冲液的管中，将管子旋紧，并轻轻摇动一段时间，使细菌尽可能地释放到缓冲液中。
•血液：采集静脉血样本，将血液转移到无菌包装的管中，并立即将管子送到实验室进行处理。
•皮肤分泌物：使用无菌棉签或拭子采集患者分泌物，放入管中并送到实验室。
3. 常用的金黄色葡萄球菌检验方法3.1 培养方法金黄色葡萄球菌通常通过培养方法来进行检验。
常用的培养基包括牛肉肝脏套，Columbia血琼脂和Mannitol盐琼脂。
在封闭器具中加热灭菌后，将菌种均匀涂布于培养基上，并在适宜的温度（通常为37摄氏度）下孵育24-48小时，观察是否有金黄色小圆菌落的形成。
3.2 利用PCR技术检测PCR（聚合酶链式反应）是一种敏感且快速的方法，可以检测金黄色葡萄球菌的DNA。
通过PCR技术，可以快速鉴定金黄色葡萄球菌的存在和菌株的特性。
这种方法特别适用于高致病性金黄色葡萄球菌的检测。
3.3 人类源金黄色葡萄球菌的毒力基因检测金黄色葡萄球菌通常通过其特有的毒力基因来引起感染。
通过PCR技术，可以检测和鉴定菌株中的毒力基因。
常见的毒力基因包括PVL、TSST-1、ETA等。
金黄色葡萄球菌检验方法
3、涂片、染色与镜检
将纯培养的未知菌涂片，革兰氏染色，显微镜观察。
4、生化实验
①触酶试验
在载玻片上滴1滴3%的过氧化氢，调取纯化的细菌放在过氧 化氢中观察变化。30s内产生大量气泡者为阳性，不产生气 泡者为阴性。
②血浆凝固酶试验
吸取1：4新鲜兔血浆0.5ml，放入小试管中，再加入培养24h 的2①中的肉汤培养液0.5ml，摇荡均匀，放入（37±1℃） 恒温箱中培养，每0.5h观察一次，观察6h，检查是否出现凝 固。将试管倾斜或倒置时，呈现凝块状，可判定为阳性，同 时以已知阳性葡糖球菌和阴性肉汤作为对照。
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5、动物感染实验
用无菌生理盐水将2①中血琼脂板上纯化的菌落洗下后，以 0.5ml/只腹腔注射入小白鼠体内，同时用灭菌生理盐水注射 入另外的小白鼠体内，以做对照，分别在相同条件饲养，观 察其症状。对感染试验出现症状或死亡的小白鼠进行剖检， 并采集病料，进行分离。
二．结果与分析
1、培养特性及形态特征
2、方法
待检样品25g+225ml灭菌生理盐水
│
┌─────┴─────┐
直接计数法
实验金黄色葡萄球菌的检验
实验金黄色葡萄球菌的检验YUKI was compiled on the morning of December 16, 2020实验5 金黄色葡萄球菌的检验1 目的和要求（1）掌握金黄色葡萄球菌的检验方法（2）了解金黄色葡萄球菌各检验步骤的依据及原理2 基本原理金黄色葡萄球菌进入人体内，可引起局部的痈疾和蜂窝组织炎，还可以引起肺炎、心肌炎、骨骼炎、肾盂肾炎等系统化脓性感染，甚至可发展成败血症。
此外，食品中生长金黄色葡萄球菌是食品卫生中的一种潜在危险，因为金黄色葡萄球菌在是中会产生肠毒素，食用后将引起食物中毒，这在我国细菌性食物中毒事件中，仅次于沙门氏菌和副溶血弧菌。
因此，检验食品中金黄色葡萄球菌是实际意义。
绝大多数金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上产生金黄色色素，菌落周围有透明的溶血圈，在厌氧条件下能分解甘露醇产酸，产生血浆凝固酶和耐热的DNA酶。
3 实验材料检样乳与乳制品（如奶粉、消毒乳）、肉制品、饮料菌种金黄色葡萄球菌、藤黄八叠球菌斜面培养物。
培养基 %氯化钠肉汤、肉浸液肉汤、血琼脂平板、Baird-Parker氏培养基试剂与染色剂无菌生理盐水、兔血浆、革兰氏染色液等。
仪器与其他用具无菌吸管（1mL、5、10）、无菌试管、载玻片、接种环、酒精灯、显微镜、均质器、恒温箱等。
4 检样程序5 操作步骤样品的处理称取 25 g 样品至盛有 225 mL %氯化钠肉汤或 10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均质 1 min～2 min，或放入盛有 225 mL %氯化钠肉汤或 10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打 1 min～2 min。
若样品为液态，吸取 25 mL 样品至盛有225 mL %氯化钠肉汤或 10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌锥形瓶(瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠)中，振荡混匀。
增菌和分离培养将上述样品匀液于 36 ℃±1 ℃培养 18 h～24 h。
金黄色葡萄球菌的测定
金黄色葡萄球菌的测定1 卫生学意义金黄色葡萄球菌定性检验（增菌培养法）：适用于检查含有受损伤的金黄色葡萄球菌的加工食品。
2 检验方法2.1 术语与定义金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）为一种革兰氏染色阳性球形细菌。
显微镜下排列成葡萄串状，金黄色葡萄球菌无芽孢、鞭毛，大多数无荚膜。
是常见的引起食物中毒的致病菌。
常见于皮肤表面及上呼吸道黏膜。
2.2 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：（1）恒温培养箱：36℃±1℃。
（2）冰箱：2℃～5℃。
（3）恒温水浴箱：37℃～65℃。
（4）天平：感量0.1g。
（5）无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。
（6）无菌锥形瓶：容量100mL、500mL。
（7）无菌培养皿：直径90mm。
（8）pH计或pH比色管或精密pH试纸。
2.3 培养基和试剂（1）7.5%氯化钠肉汤1）成分：蛋白胨：10.0g；牛肉膏：5.0g；氯化钠：75g；蒸馏水：1000mL；pH：7.4；2）制法：将上述成分加热溶解，调节pH，分装，每瓶225mL，121℃高压灭菌15min。
（2）B－P琼脂平板1）成分：胰蛋白胨：10.0g；牛肉膏：5.0 g；酵母膏：1.0g；丙酮酸钠：10.0g；甘氨酸：12.0g；氯化锂（LiCl·6H2O）：5.0g；琼脂：20.0g；蒸馏水：950mL；pH：7.0±0.22）增菌剂的配法：30%卵黄盐水50mL与经过除菌过滤的1%亚碲酸钾溶液10mL 混合，保存于冰箱内。
3）制法：将各成分加到蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，调节pH。
分装每瓶95mL，121℃高压灭菌15min。
临用时加热溶化琼脂，冷至50℃，每95mL加入预热至50℃的卵黄亚碲酸钾增菌剂5mL摇匀后倾注平板。
培养基应是致密不透明的。
使用前在冰箱储存不得超过48h。
金黄色葡萄球菌检验原理
金黄色葡萄球菌检验原理
金黄色葡萄球菌检验的原理是通过培养和鉴定来确定细菌是否为金黄色葡萄球菌。
具体步骤如下：
1. 培养：将样本在含有富含营养物质的培养基上进行培养。
金黄色葡萄球菌在常见的琼脂培养基上能够快速生长并形成典型的黄色菌落。
2. 鉴定：通过一系列的生化反应和特征性实验来确认细菌的身份。
金黄色葡萄球菌一般具有以下特征：
- 革兰氏染色：呈阳性，即菌体呈紫色。
- 非运动性：无鞭毛或鞭毛不活跃。
- 产生黄色色素：金黄色葡萄球菌能够产生一种特殊的黄色色素，使得菌落呈现金黄色。
3. 确认：通过进一步的检测，如凝胶酶试验和DNA鉴定等，来进一步确认菌株是否为金黄色葡萄球菌。
金黄色葡萄球菌是一种常见的致病菌，可以引起多种感染，如皮肤感染、呼吸道感染和食物中毒等。
通过对其进行准确快速的检验可以帮助医生进行针对性治疗和控制传播。
第六章金黄色葡萄球菌的检验PPT资料
3、生化特性：
可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸 不产气。甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。
许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝 酸盐，液化明胶。
金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺 类药物敏感性低，但对青霉素、红霉素等高度敏 感。
金黄色葡萄球菌的致病性
金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素 和侵袭性酶： a.溶血毒素：外毒素，分α、β、γ、δ，能损伤血小板， 破坏溶酶体，引起肌体局部缺血和坏死； b.杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞； c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血液 或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞噬细胞 的吞噬作用。 葡萄球菌形成的感染易局部化与此酶有关； d.脱氧核糖核酸酶：金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖核酸酶 能耐受高温，可用来作为依据鉴定金黄色葡萄球菌； e.肠毒素：金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃肠炎的蛋 白质性肠毒素，分为A、B、C、D、E及F六种血清型。
比如：法国梅里埃公司生产的RPF培养基、API检测系统等。 当用接种针触及菌落时具有黄油样粘稠感。 葡萄球菌形成的感染易局部化与此酶有关； 5%氯化钠肉汤或胰酪胨大豆肉汤50 mL培养基内，36℃±1℃培养24 h，转种血平板和Baird-Parker平板， 36℃±1℃培养24 h，挑取血 平板上金黄色（有时为白色）菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验。 金黄色葡萄球球菌的单个菌落在血平板上呈金黄色，有时也为白色，大而突出、圆形、不透明、表面光滑，周围有溶血圈。 Staphylococcus aureus Enhanced sem w: 7. 5～15%NaCl肉汤中生长。 中毒食品种类多，如奶、肉、蛋、鱼及其制品。 金黄色葡萄球菌的扫描电镜照片 杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞；
金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析
金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一种常见的革兰氏阳性球菌，广泛存在于自然界中，同时也是人体皮肤和黏膜的正常微生物。
金黄色葡萄球菌也是人体病原微生物中的一种，并且可以引起一系列的感染疾病，包括皮肤感染、肺炎、败血症等严重疾病。
及时、准确地检测金黄色葡萄球菌对于预防和控制与该菌相关的疾病具有重要意义。
金黄色葡萄球菌的检验技术主要包括细菌培养、生化鉴定、药敏试验等，下面将对这些技术进行介绍。
一、细菌培养1. 培养基金黄色葡萄球菌主要可在营养琼脂、大豆肉汤琼脂、牛肉心脏培养基等细菌培养基上生长。
营养琼脂是最常用的培养基，可用于对金黄色葡萄球菌的初步筛查。
2. 培养条件金黄色葡萄球菌在37°C下培养24-48小时，产生充分的菌落。
3. 形态特征金黄色葡萄球菌在琼脂培养基上可形成金黄色的圆形菌落，直径一般在1-2mm左右。
二、生化鉴定1. 皮肤试验皮肤试验是金黄色葡萄球菌的特异性鉴定方法之一，又称为凝集素试验。
通过皮肤试验，可以判断金黄色葡萄球菌是否具有产生凝集素的能力。
2. 协和试验协和试验又称凝集酶试验，是用于检测金黄色葡萄球菌产生凝集酶的一种生化试验。
该试验通过将金黄色葡萄球菌的培养液加入到含有凝集酶专一底物的试管中，观察底物被溶解的情况，用于判断金黄色葡萄球菌是否产生凝集酶。
3. 床旋试验床旋试验又称为巯基甲酸盐试验，是一种利用巯基甲酸盐来检测金黄色葡萄球菌的特异性试验。
通过观察琼脂培养基上金黄色葡萄球菌菌落周围出现的红色环的形成情况，判断金黄色葡萄球菌是否产生巯基甲酸盐酶。
4. 溶血酶试验溶血酶试验是一种通过检测金黄色葡萄球菌产生的溶血酶来鉴定其特性的生化试验。
溶血酶试验主要有两种方法：血凝素试验和牛血红蛋白试验。
这两种方法都是通过观察金黄色葡萄球菌对红细胞造成的溶血现象来判断其产生的溶血酶。
三、药敏试验药敏试验是检测金黄色葡萄球菌对抗生素的敏感性的一种方法。
金黄色葡萄球菌检验与计数1
检验程序
检样25g(mL) ＋225mL生理盐水或磷酸 盐缓冲液
10倍稀释
选择三个连续的适宜浓度的
样品匀液，接种Baird-
3P6a±rk1e℃r平板
45~48h
计数及血浆酶试验
报告
典型菌落计数与计算公式的应用
计数范围要求：选择合计菌落数在20~200的平板，计数典型 菌落。
公式一
T=AB/Cd T:样品中金黄色葡萄球菌落数； A:某一稀释度典型菌落的总数 ； B:某一稀释度血浆凝固酶阳性的菌落数 ； C:某一稀释度用于血浆凝固酶试验的菌落数；
金黄色葡萄球菌的菌落形态：呈金黄色，有时也呈白色， 大而突起，圆形、不透明、表面光滑，周围有透明的β 溶血环。
金黄色葡萄球菌的重要鉴定血浆凝固酶试验
试验原理：致病性的金黄色葡萄球菌产生的血浆凝固 酶，使血浆中纤维蛋白原转变为纤蛋白，附着于细菌 表面 ，产生凝固。
金黄色葡萄球菌可产生两种凝固酶：一种是与细胞壁 结合的凝固酶，为结合凝固酶；另一种是菌细胞释放 于培养基中，为游离凝固酶。二者的抗原性不同。
7.5%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨
大豆3肉6±汤1℃
18~24h
Baird-Parker平板，血
36±1℃
平板血平板18~24h， Baird-Parker 平板18~24h或45~48h。
涂片染色
观察溶血
BHI肉汤和营养琼脂 小斜面
血浆凝固酶 试验
报告
Baird-Parker琼脂平板 •金黄色葡萄球菌的菌落形态：圆形、光滑凸起、湿润， 直径约2~3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围 为一混浊带，在其外层有一透明圈。用接种针接触菌 落似有奶油树胶的硬度，偶而可见无混浊带和透明圈 的非典型菌落。
金色葡萄球菌实验报告
金色葡萄球菌实验报告1. 引言金色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一种常见的细菌，广泛存在于自然界和人体内。
它是一种革兰氏阳性细菌，通常以球状或卵圆形的形态出现。
金色葡萄球菌可以引起多种疾病，包括皮肤感染、血液感染和肺炎等。
本实验旨在研究金色葡萄球菌的生长特性和抗菌药物敏感性。
2. 材料和方法2.1 材料•金色葡萄球菌培养基•无菌琼脂平板•无菌培养皿•无菌试管•灭菌吸管•无菌移液器•紫外灯2.2 方法1.准备工作：将培养皿、试管、琼脂平板等器材进行灭菌处理，保证实验环境的无菌。
2.采集样品：使用无菌吸管，从待测样品中采集适量的金色葡萄球菌。
3.培养金色葡萄球菌：将采集的样品转移到金色葡萄球菌培养基中，轻轻摇匀，然后在无菌琼脂平板上均匀涂抹样品。
4.孵育：将涂有样品的琼脂平板置于恒温培养箱中，在37摄氏度下孵育24小时。
5.观察生长情况：观察琼脂平板上是否有金色葡萄球菌的生长，记录菌落的形态、颜色和大小等特征。
6.统计菌落数量：使用计数板或显微镜统计菌落数量，以评估金色葡萄球菌的生长情况。
7.抗菌药物敏感性测试：使用纸片扩散法或碟片扩散法，将不同种类的抗菌药物施加到含有金色葡萄球菌的琼脂平板上，观察是否形成抑制圈，评估菌株的敏感性。
3. 结果与讨论根据实验结果，我们观察到金色葡萄球菌在培养基上形成了典型的黄色菌落。
菌落呈圆形，直径约为2-4毫米，表面平整光滑。
这与金色葡萄球菌的形态特征相符合。
在抗菌药物敏感性测试中，我们使用了几种常见的抗菌药物。
结果显示，金色葡萄球菌对某些抗菌药物表现出抗性，即在药物施加区域没有形成抑制圈，而对其他抗菌药物则表现出敏感性，形成了明显的抑制圈。
这表明金色葡萄球菌对不同抗菌药物的敏感性存在差异。
4. 结论通过本实验，我们成功培养了金色葡萄球菌，并观察到了其典型的生长特征。
同时，通过抗菌药物敏感性测试，我们发现金色葡萄球菌对不同抗菌药物表现出不同的敏感性。
金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析
金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一种常见的致病菌，广泛存在于环境中和人体的皮肤黏膜上。
它是一种革兰氏阳性球菌，通过空气、飞沫、直接接触等途径传播。
金黄色葡萄球菌引起的感染包括皮肤感染、呼吸道感染、骨髓炎、心内膜炎等，严重时还可以导致败血症和中毒性休克。
为了诊断金黄色葡萄球菌感染，需要进行相关的检验技术。
以下是金黄色葡萄球菌检验的常用技术介绍及分析：1. 细菌培养：将样品（如血液、脓液、分泌物等）接种到适当的培养基上，利用培养器将细菌培养在适当的温度和湿度下。
金黄色葡萄球菌能够在常规寒温培养基上生长，并产生特征性的金黄色色素。
2. 葡萄糖发酵试验：用含葡萄糖的培养基培养金黄色葡萄球菌，通过观察培养基的酸碱指示剂变化，如果培养基变为黄色，则说明金黄色葡萄球菌能够发酵葡萄糖产生酸。
3. 凝固酶试验：用凝固酶试剂与金黄色葡萄球菌接触，在一定时间内观察是否发生凝固反应。
凝固酶是金黄色葡萄球菌特有的酶，可以将凝血蛋白原转化为凝血蛋白，从而导致液体凝固。
4. 硝酸盐还原试验：将含有硝酸盐的培养基与金黄色葡萄球菌接触，观察是否产生还原反应。
正常情况下，金黄色葡萄球菌可以将硝酸盐还原为亚硝酸盐和硝酸，导致培养基变为红色。
5. 蛋白酶试验：用含有牛血清蛋白的培养基培养金黄色葡萄球菌，观察是否溶解蛋白质。
金黄色葡萄球菌能够产生多种蛋白酶，可以分解牛血清蛋白，形成溶解区。
通过以上的检验技术，可以初步判断金黄色葡萄球菌的存在和性质。
这些检验方法并不是专门针对金黄色葡萄球菌的，也不能确定金黄色葡萄球菌的毒力和抗药性等重要特征。
要做进一步的分析和确认，需要使用专门的分子生物学方法，如聚合酶链反应（PCR）和基因测序等。
金黄色葡萄球菌的检验(共27张PPT)
金黄色葡萄球菌的定性检验
检样
增菌〔7.5％氯化钠肉汤或 10％氯化钠胰酪胨大豆肉汤〕
BP平板，血平板
涂片染色
观察溶血
报告
BHI肉汤和营养琼脂 血浆凝固酶实验
金黄色葡萄球菌的检验
1、样品制备
按无菌操作取检样25 g〔mL〕， 参加225 mL灭菌生理盐水，固体样 品研磨或置均质器中制成1:10样品
＊＊＊当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较多的食品，如牛奶和 乳制品、肉、蛋等，在温度条件适宜时，经过8～10小时即可产生相当数 量的肠毒素，肠毒素可耐受100℃煮沸30分钟而不被破坏。
人摄食该菌污染的食物2～3h后 可引起中毒病症，它引起的食
物中毒病症是呕吐和腹泻。
金黄色葡萄球菌的流行病学特点
2、培养特性：
金黄色葡萄球菌营养
要求不高，在普通培养基 上生长良好，加少量葡萄
糖或血液生长更旺盛。需 氧或兼性厌氧，最适生长 温度37℃，最适生长pH 7.4
金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在7.5～ 15%NaCl肉汤中生长。
3、生化特性：
可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、 蔗糖，产酸不产气。甲基红反响阳 性，VP反响弱阳性。
季节分布，多见于春夏季；中毒食品种类 多，如奶、肉、蛋、鱼及其制品。此外，剩饭 、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中毒事件也 有报道。
金黄色葡萄球菌的检验
GB4789.10-2021 √第一法：金黄色葡萄球菌的定性检测 √第二法：金黄色葡萄球菌Baird-Parker平板计数 √第三法：金黄色葡萄球菌MPN计数
细胞；
c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时， 该酶使血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体外 表或凝固，阻碍吞噬细胞的吞噬作用。 葡萄
金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析
金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析作者：***来源：《食品安全导刊》2020年第06期金黄色葡萄球菌是生活中最常见的病原菌之一，也是革兰氏阳性菌的代表，可引起许多严重的感染。
该菌对营养的要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧。
容易受金黄色葡萄球菌污染的食品主要为乳制品、蛋及蛋制品、各类熟肉制品，其次是含有乳类的冷冻食品等，因此对于该菌的检验也被确定为食品致病性菌种检验中的重要项目。
按照现行的国标方法，金黄色葡萄球菌检测方法分为第一法定性检验、第二法平板计数法（适用于金黄色葡萄球菌含量较高的食品），以及第三法MPN计数法（适用于金黄色葡萄球菌含量较低的食品）。
第一法定性检验过程包括样品处理、样品增菌、平板分离划线、初步鉴定、确证鉴定这5个步骤，整个流程全部完成至少需要5天时间。
第二法平板计数法包括5个步骤——样品稀释、样品接种涂布、典型菌和可疑菌计数、鉴定试验、结果计算，整个流程全部完成至少需要4天时间。
第三法MPN计数法同样包括5个步骤，即样品稀释、样品增菌、平板分离划线、鉴定试验、查MPN表确认结果，整个流程全部完成至少需要5天时间。
以下将对金黄色葡萄球菌的检测流程进行简单介绍，并对难点、注意事项进行梳理和讲解。
1 第一法：金黄色葡萄球菌定性1.1 样品处理固态和半固态样品：称取25g样品至盛有225mL7.5%氯化钠肉汤中，充分混匀。
液体样品：吸取25mL样品至盛有225mL7.5%氯化钠肉汤的无菌锥形瓶（瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠）中，振荡混匀。
1.2 样品增菌将上述样品匀液置于36±1℃的恒温培养箱中培养18～24h。
1.3 平板分离划线该步骤是整个金黄色葡萄球菌检测环节中最重要的步骤之一，因为平板划线分离的效果决定了可疑菌落的判定和选择。
平板划线选择三分法或四分法则分离效果较好，更容易出现单菌落平板。
1.4 初步鉴定分离的培养基选用Baird-Parker平板（BP平板）和血平板。
金黄色葡萄球菌的检验
金黄色葡萄球菌的检验注：本方法源自奶牛乳房炎防治技术指南(试行)（农医发[20l0]29号）1主要试剂和试验方法：1.1革兰氏染色：1.1.1涂片、火焰固定。
1.1.2草酸铵结晶紫染1min。
草酸铵结晶紫染液的配制：溶液A：结晶紫2g，95％酒精20mL，溶液B：草酸铵0.8g，蒸馏水80mL。
将A、B溶液混合，用滤纸过滤后即可使用。
1.1.3自来水冲洗。
1.1.4加碘液掩盖涂面染约1min。
1.1.5水洗，用吸水纸吸去水分。
1.1.6加95％酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20s后水洗，吸去水分。
1.1.7沙黄液（稀）染2min后，自来水冲洗。
干燥，镜检。
革兰氏阳性菌染色为蓝色，革兰氏阴性菌染色为红色。
1.2触酶试验：取槽置于干净的试管内或玻片上，然后加3％过氧化氢数滴；或直接滴加3％过氧化氢于不含血液的细菌培育物中，马上观看结果。
有大量气泡产生者为阳性，无则为阴性。
1.3血浆凝固酶试验：吸取0.5mI。
兔血浆与0.5mlj金黄色葡萄球菌浸液肉汤24h培育物充分混匀，置361℃培育，每隔半小时观看一次，连续观看6h，消失凝固，即将小试管倾斜或倒置时，内容物不流淌，判为阳性。
同时做阴阳性对比。
2乳样的采集选取消失临床症状（或者怀疑为亚临床型乳房炎）乳房炎奶牛，先用温水，再用0.2％新洁尔灭擦洗乳房，最终用70％的酒精擦拭乳头。
采样者同时进行手指擦拭消毒。
每个乳室先挤去头2-3把奶，以排解污染的杂菌，每头奶牛取乳样5mI.于无菌乳样杯中，待检。
3病原菌的分别培育初步诊断：将少量乳汁涂片、革兰氏染色、镜检。
如发觉圆球形革兰氏阳性细菌可怀疑为葡萄球菌。
分别培育：将乳样摇匀，分别取适量接种于养分肉汤（10％血清）、鲜血琼脂、麦康凯琼脂培育基（平板）后，置于37℃温箱培育24～48h。
观看每个平板中细菌生长的状况，记录菌落生长表现。
一般琼脂平板上，37℃，24～72h培育后，可见到潮湿、光滑、隆起的圆形金黄色菌落。
金黄色葡萄球菌检测方法
金黄色葡萄球菌检测方法Document number：NOCG-YUNOO-BUYTT-UU986-1986UT金黄色葡萄球菌检测方法1.纸片法目前广泛应用的一种方法，用纸片、膜、胶片等作为培养基载体，将特定的培养基和显色物质附着在上面，通过观察微生物在测试片上面的生长、显色来测定食品中微生物。
采用快速测试片检测具有显着的优点：可测定少量检品，不需要配制试剂，不需要大量的玻璃器皿，操作简便迅速；易于消毒保存，便于运输携带方便，价格低廉；除纸片外无其他任何废液废物，大大减少了工作量；可以在取样时同时接种，结果更能反映当时样本中真实细菌数，防止延长接种时间时细菌繁殖造成的污染。
技术优点：操作简单使用方便，避免了繁琐的操作。
技术缺点：用时间比较长，无法准确定性及计数。
此方法现在应用于快速检测领域，美国3M公司Petrifilm为载体的测试片应用最为广泛。
但其也存在一些问题：Petrifilm测试片上覆盖了一层薄膜，当样品粘液过多时会出现菌落的扩散和融合，影响计数；Petrifilm测试片面积较小，当菌量大于250cfu时，准确计数较困难；待测样品中含有的某些有机物可能使显色减缓。
使目视效果下降，导致计数偏低。
2.免疫学方法各种免疫学方法的基本原理都是抗原抗体反应。
抗原抗体反应是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。
金黄色葡萄球菌特异的抗原能激发机体产生相应的特异性抗体。
在免疫检测中，可利用单克隆抗体检测金黄色葡萄球菌的特异抗原，也可利用金黄色葡萄球菌抗原检测体内产生的特异抗体，两种方法均能判断机体的感染状况。
目前对于金黄色葡萄球菌的测定主要进行了肠毒素的测定，方法以酶联免疫吸附实验为主，有胶体金方法，也有用亲和素一生物素乳胶凝集实验和免疫荧光实验，但都有一定的局限性。
免疫学方法包括下面两个部分：（1）抗原抗体技术分析：抗原抗体技术是免疫技术中的核心部分，对于金黄色葡萄球菌检测全菌免疫筛选抗体是很困难的事情，现在目前市场有的大多都是对金黄色葡萄球菌毒素类进行免疫得到的抗体，金黄色葡萄球菌毒素有12种，军事医学科学院生产的金黄色葡萄球菌毒素A、B、C的抗体。
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金黄色葡萄球菌凝固酶实验（玻片法）
金黄色葡萄球菌凝固酶实验（试管法）
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；
8、产生蛋白酶、脂肪酶、磷脂酶、脂酶和溶 菌酶，大多数菌株可水解天然的动物蛋白， 例如血红蛋白、纤维蛋白、卵白、酪朊和多 肽类如明胶，水解脂类、吐温类和磷脂蛋白 质，并释放脂肪酸
9、所有的毒株产生凝固酶，人和动物来源的 菌株通常可凝固兔、人、马和猪的血浆。
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致病性
金黄色葡萄球菌是人 类化脓感染中最常见的病 原菌，临床表现多种多样， 可引起局部化脓感染，也 可引起肺炎、伪膜性肠炎、 心包炎等，甚至败血症、 脓毒症等全身感染。
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致病性
葡萄球菌性食物中毒是葡萄球菌肠毒素所引起的
疾病，可引发不同程度的急性胃肠炎症状，恶心、
2－3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，
在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落似有奶油树胶的硬 度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落；但无混浊带及透明 圈。长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落 所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。
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直接计数法
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形态：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，排列呈葡萄球状， 无芽胞，无荚膜，致病性葡萄球菌，菌体较小，直径约为 0.5－－1um。 培养特征：在肉汤中呈混浊生长，在胰酪胨大豆肉汤内有时
液体澄清，菌量多时呈混浊生长，血平板上菌落呈金黄色，
有时也为白色，大而突起、圆形、不透明、表面光滑，周围 有溶血圈。在B--P平板上为圆形、光滑凸起、湿润、直径为
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结果
金黄色葡萄球菌革兰氏染色镜检阳性，致病菌较非
致病菌小，大小排列整齐。细菌繁殖时多呈多个平
面的不规则分裂，堆挤成葡萄串状。在中毒食品、
脓汁或液体培养基中常呈单个或环状球短链排列，
易误认为是链球菌
血平板上菌落呈金黄色，周围有溶血圈。在B--P平板上呈灰
色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透
血平板和Baird-Parker琼脂平板上生长的菌落特征
观察金黄色葡萄球菌产生血浆凝固酶现象
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2、基本原理
金黄色葡萄球菌可产生多种毒素和酶。 在血平板上生长可金黄色色素使菌落呈现金黄色； 由于产生溶血素使菌落周围形成大而透明的溶血圈 在B-P平板上生长时，因将亚碲酸钾还原成碲酸钾 使菌落呈灰黑色；因产生脂酶使菌落周围有一混浊 带，而在其外层因产生蛋白水解酶有一透明带。
转种血平板和B-P 平板，置36℃±1℃培养24h ，挑取血平板上金 黄色（有时为白色）菌落时行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验
血浆凝固酶试验：吸取1：4 新鲜兔血浆0.5ml，放入小试管中，再加入培养 24h的金黄色葡萄球菌肉浸液肉汤培养物0.5ml，振荡摇匀，置36℃±1℃温 箱或水浴内，每半小时观察一次，观察6h，如呈现凝固，即将试管倾斜或倒 置时，呈现凝块者，被认为阳性结果。同时以已知阳性和阴性葡萄球菌株及 肉汤作为对照。
电镜照片
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5、大多数菌株能生长在6.5-46℃之间（最适 温度30-37℃）能在pH4.2-9.3之间生长（最 适pH为7.0-7.5）； 6、大多数菌株产生类胡萝卜素，使细胞团呈 现出深橙色到浅黄色，色素的产生取决于生 长的条件，而且在单个菌株中可能也有变化
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实验材料
仪器材料：显微镜、恒温箱、无菌吸管、无菌试 管、 无菌平皿、 载玻片、L型涂布棒、酒精灯、接 种环等 培养基及试剂：10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤、 7.5%氯化钠肉汤、血琼脂平板、Baird-parker 培养基、无菌盐水、BHI肉汤、兔血浆、革兰氏染 色液
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明圈。 致病性葡萄球菌血浆凝固酶为阳性
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注意事项
样品中金黄色葡萄球菌计数进行10倍稀释时要注意，
每个稀释度要更换吸管
实验中操作者须注意生物安全防护， 实验结束后要消毒环境，把实验室
材料高压灭菌后方可清洗或弃之。
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思考题
金黄色葡萄球菌引起食物中毒的机理是什么？ 为什么要采用血浆凝固酶实验来决定葡萄球 菌的致病和不致病？
金黄色葡萄球菌能产生凝固酶，使血浆凝固，多数致病菌株 能产生溶血毒素，使血琼脂平板菌落周围出现溶血环，在试 管中出现溶血反应。这些是鉴定致病性金黄色葡萄球菌的重 要指标。
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肠毒素形成条件：
存放温度，在37°C内，温度越高，产毒时间越 短； 存放地点，通风不良氧分压低易形成肠毒素； 食物种类，含蛋白质丰富，水分多，同时含一定 量淀粉的食物，肠毒素易生成。
B—P平板
主要成分及作用：
氯化锂、甘氨酸:抑制非制病性葡萄球的生长
丙酮酸钠: 促进葡萄球菌生长
亚碲酸钾: 抑制G-杆菌生长，可被金黄色葡萄球
菌还原为碲盐呈黑色
卵黄: 含蛋白质、卵磷、脂肪
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检 验 程 序
取2 5ml 样品，接种于225ml 7.5％氯化钠肉汤培养基内， 置36℃±1℃培养24h
致病性
金黄色葡萄球菌为条件致病菌，菌株致病力的强 弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶： a.溶血素：外毒素，分α、β、γ、δ四种， 能损伤血小板，破坏溶酶体，引起肌体局部缺血 和坏死； b.杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞；
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c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶 使血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固， 阻碍吞噬细胞的吞噬作用。葡萄球菌形成的感染易 局部化与此酶有关 d.脱氧核糖核酸酶：金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖 核酸酶能耐受高温，可用来作为依据鉴定金黄色葡 萄球菌 e.肠毒素：金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃肠 炎的蛋白质性肠毒素，分为A、B、C、D、E五种。
呕吐最为突出而且普遍，腹痛、腹泻次之。
当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较多的食 品，如牛奶和奶制品、肉、蛋等，在温度条件适 宜时，经8-10小时即可产生相当数量的肠毒素。
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1、目的要求
了解食品和食物中毒样品中金黄色葡萄球菌及肠毒
素的检测方法
观察金黄色葡萄球菌的革兰氏染色镜检形态以及在
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葡萄球菌在自然界分布极广，空气、土壤、水、饲料、食品 (剩饭、糕点、牛奶、肉品等)以及人和动物的体表粘膜等处 均有存在，大部分不致病，也有一些致病的球菌。金黄色葡 萄球菌是葡萄球菌属一个种。可引起皮肤组织炎症，还能产 生肠毒素。如果在食品中大量生长繁殖，产生毒素，人误食 了含有毒素的食品，就会发生食物中毒，故食品中存在金黄 色葡萄球菌对人的健康是一种潜在危险
实验六 金黄色葡萄球菌的检验
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Contents
生物学特性---菌体形态及培养特征
1 革兰氏阳性球菌，直径为0.8-1.0微米，镜检时 呈单个、成对、四联或不规则的簇群； 无芽孢，不运动
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兼性厌氧菌，在好氧条件下生长最好
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可在15%氯化钠和40%胆汁中生长
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金黄色葡萄球菌Ⅰ型溶血 金黄色葡萄球菌在BP平板上的菌落形态
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在肉汤中培养时，菌体可生成血浆凝固酶并释放于
培养基中，此酶类似凝血酶原物质，不直接作用到
血浆纤维蛋白原上，而是被血浆中的致活剂激活后，
变成耐热的凝血酶样物质，此物质可使血浆中的液
态纤维蛋白原变成纤维蛋白，血浆因而成凝固状态