生物样品前处理方法资料

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生物样品预处理技术

取500g有代表性的猪肉可食部分，用组织捣碎机充分捣碎均匀；
样品均匀化

取2g 捣碎样品，加入8ml乙酸钠缓冲液(pH=5.2)，再
• 固相萃取
• • • • • • • 操作：活化上样淋洗洗脱收集直接进样或者浓缩后进样与色谱理论相同
二、生物样品预处理方法
二、生物样品预处理方法
• 采用离心或者抽真空的办法，以一定离心力或者流速，进行上样、淋洗和洗脱
二、生物样品预处理方法
• 固相萃取的优点：
• 无乳化现象 • 使用溶剂安全价格低廉
有机强酸
季铵碱、盐
有机酸、酚类
示例不同生物样品中虎杖苷预处理方法
• A：虎杖苷标准对照品由海王集团技术中心天然药物室提供批号：03050803 • 3，4’，5-三羟基芪-3-β-D-葡萄糖苷 Mr390 • • B：二苯乙烯苷化学对照品由中国药品生物制品检定所提供 • 2，3，5，4‘-四羟基二苯乙烯-β-D-葡萄糖苷 Mr406
• 萃取效率高
• 处理速度快，具有一定通量 • 易于同时萃取出目标药物及其代谢产物，包括极性强的Ⅱ相代谢产物
• MCX固相萃取柱 • 反相作用和阳离子交换作用
• 酸性环境中含氮碱性基团与磺酸基结合 • 酸性药物呈分子状态发生反相结合作用
对有机碱: 对有机酸、酚类对有机强酸对季铵碱、盐 pKa 2-8 pKa 2-10 pKa <1.0 pKa >10 选择 Oasis® MCX 选择 Oasis® WAX 选择 Oasis® WCX 选择 Oasis® MAX
• 储存条件
–20℃：大部分药物 –80℃：阿莫西林等抗生素加稳定剂：卡托普利等

生物样品前处理方法

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生物样品前处理的考虑因素
▲药物的理化性质和存在形式 ▲待测药物的浓度范围 ▲选用的生物样品类型
▲样品预处理与分析技术的关系
▲药物测定的目的
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生物样品前处理-有机破坏法
▲湿法破坏
硝酸-高氯酸法、电热消化器法、电热板消化法、烘箱消化法。
▲干法破坏
高温电阻炉灰化法、低温等离子灰化法。
中某些组分，再用适当溶剂冲出杂质。然后用少量溶剂洗脱，从而达到分离、净化与浓缩的目的。
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生物样品前处理-固相萃取法
▲固相萃取法适用范围
大多数液体生物样品的前处理（如血浆、尿等）。
固体、半固体样品经过处理后也可使用SPE进行分离。
▲固相萃取法操作步骤
活化：根据所选择固定相的类型使用相应的活化溶剂
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生物样品前处理-固相萃取法
▲固相萃取法简介
固相萃取技术（SPE）是从上世纪八十年代中期发展起
来的，广泛运用于医学、制药、环境、食品等领域。固相萃取法（SPE）就是用固体物质作为萃取剂，采用高效、高选择性的固定相，进行萃取的样品预处理技术。
▲固相萃取法原理
以吸附剂为固定相，当液体样品通过固定相时，保留其
▲ 沉淀蛋白法优点
操作简便易行
▲ 沉淀蛋白法缺点
此法仅除去了蛋白质，内源性杂质并没有除去。
运用此法处理后的样品浓度会被稀释，不利于检测。
。此法所得样品不能用光谱法检测。
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生物样品前处理-液液萃取法
▲液液萃取法简介
多数药物是亲脂性的，在适当的有机溶剂中的溶解度大于在水相中的溶解度，而生物样品中的大多数内源性杂质是强极性的水溶性物质。因而用有机溶剂萃取一次即可除去大部分杂质。

生物样品前处理

[4]张丽.固相微萃取在生物体液分析中的研究进展[J].国外医学药学分册.2003,30(5)302-308
[5]胡小刚,李攻科.分子印迹技术在样品前处理中的应用[J].分析化学.2006,(34)7: 1035-1041
[6]张丽华，肖国平，宋游.微波技术在生物样品预处理中的应用[J].基础和应用基础研究与放射化学与核化学:133
2.对于在常温下需要长时间反应的样品，可将准备好的样品放置过夜，第2天再放进消解炉消解。
3.对于预处理时间长的难处理样品，也可采用放过夜的方法，第2天再进行消解处理。样品经过处理后，若溶液体积小于5ml时，则必须补加水或酸，使其体积不小于5ml，然后再进行微波消解。
总之,生物样品的预处理因其多样、复杂而成为整个检测过程中的关键环节。所述各种处理方法各有其特点,根据化合物的物理化学性质选择合适的前处理方法是取得满意检测结果的必要条件。
[1]周婷婷,范国荣,吴玉田.超临界流体萃取法在生物样品前处理中的应用[J].药学学报.2004 ,39(4) :317 – 320
[2]张颖.生物样品预处理技术及应用进展[J].天津药学,2006, 18(1):56-58
[3]李向阳，杨梅，彭宝珠.固相微萃取在生物药物分析中的应用[J].2002,23(4):69-71
目前各类文献上报道的MIP制备方法基本上是非共价法。在此方法中,印迹分子与功能单体之间通过分子间的非共价作用预先自组装排列,以非共价键形成多重作用位点,这种分子间的相互作用通过交联聚合后保留下来。常用的非共价作用有:氢键、静电引力、金属螯合作用、电荷转移、疏水作用以及范德华力等,其中以氢键应用最为广泛[5]。
分子印迹聚合物(molecularly imp rinted polymer, MIP)制备简单,能够反复使用,机械强度较高,稳定性好。因此它非常适合用作SPE的填充剂或SPME的涂层材料来分离富集复杂样品中的分析物,以达到分离净化和富集的目的。

药物分析中的生物样品前处理方法研究

药物分析中的生物样品前处理方法研究近年来，随着生物医药领域的快速发展，药物分析在疾病的诊断和治疗中扮演着至关重要的角色。

为了获得准确可靠的分析结果，生物样品的前处理方法显得尤为重要。

本文将探讨药物分析中常用的生物样品前处理方法的研究进展。

一、血液样品的前处理方法研究血液样品作为一种常见的生物样品，在药物分析中扮演着重要的角色。

然而，血液样品中存在着各种成分的干扰，如蛋白质、血红蛋白等。

因此，研究人员提出了多种前处理方法来解决这些问题。

1. 血浆/血清的蛋白质沉淀方法血浆/血清中的蛋白质是最常见的干扰物之一。

为了降低蛋白质对分析结果的影响，研究人员开发了各种蛋白质沉淀方法。

例如，酸沉淀法可以通过改变pH值使蛋白质凝聚沉淀，从而去除蛋白质干扰。

此外，还有醇沉淀法、有机溶剂沉淀法等。

2. 血浆/血清的固相萃取方法固相萃取方法是血液样品前处理中常用的技术之一。

其原理是利用吸附剂对目标化合物进行特异性吸附，从而去除干扰物。

通过选择合适的吸附剂，可以实现对特定成分的富集。

例如，固相萃取柱常用于血浆/血清样品中药物的富集与净化。

二、尿液样品的前处理方法研究尿液样品常用于药物代谢和排泄的研究，但由于其复杂的成分和高度变异性，前处理方法显得尤为重要。

1. 尿液样品的前处理方法选择尿液样品前处理的关键是选择合适的方法。

常见的前处理方法包括尿液蛋白质去除、有机溶剂浓缩、尿液稀释等。

根据具体的分析需求和目标物质的特性，选择恰当的前处理方法可以显著提高分析结果的准确性和灵敏度。

2. 尿液样品的固相萃取方法研究固相萃取也是尿液样品前处理中常用的技术之一。

通过选择适当的吸附剂和前处理条件，可以有效地去除尿液中的杂质，提高目标物质的测量灵敏度。

例如，固相萃取柱结合气相色谱-质谱联用技术可以用于尿液样品中药物代谢产物的研究。

三、其他生物样品的前处理方法研究除了血液和尿液样品，还有其他生物样品在药物分析中的应用。

例如，头发样品被广泛用于毒品滥用的检测。

生物样本样品前处理

4
常用液液提取溶剂
溶剂名称二氯甲烷乙酸乙酯氯代正丁烷
乙醚戊烷环己烷正己烷甲苯异丙醇* 四氢呋喃* 乙腈* 正丁醇* 水*
分子量 84.9 88.1 92.6 74.1 72.2 84.2 86.2 92.2 60.1 72.1 41.1 74.1 18.0
注：“*”表示与水互溶
沸点（℃） 40
5、固相萃取法：可实现自动化，基质效应降低，同时完成样品的富
集与净化；但成本较高
3
液液提取法
利用目标化合物在生物基质和与水不互溶的有机溶剂中溶解度或分配系数的不同，使化合物从生物基质中转移至有机相中。
➢两相的分离需借助两相的密度差来实现
➢原理：相似相溶
➢分配系数：kA=yA/xA yA和xA分别表示在萃取相和萃余相中的质量比率
常见表面活性剂：Triton-X-100，吐温等
Tips
1、表面活性剂需确立一个浓度范围而不是单一浓度。 2、样本已经采集，考虑将待测物从容器中解离出来。
14
讨论和问题
Thank you!
15
0.08 0.36 1.66 1.63 3.92 1.50 1.84
5
固相提取法
◇HLB(Hydrophilic-Lipophilic Balance Copolymer)材料的优点
△水可浸润 △反相保留 △PH1-14范围内稳定 △没有裸露硅羟基
6
固相提取法
7
固相提取法
8
固相提取法
改变化合物PH，酸性保留，碱性洗脱
77.1 77
34.5 36.1 80.7
69 110.6 82.4
66 81.6 117 100
密度（g/mL) 1.33 0.90 0.89 0.71 0.63 0.78 0.66 0.87 0.79 0.89 0.78 1.00 1.00

透射电镜生物样品前处理步骤

电镜样品制备步骤1、取材：放入2.5%戊二醛溶液中固定2-4h(4℃可保存1-2周，冷冻可保存2年)注：不可用自来水冲洗，被钳、镊夹取造成机械损伤的组织不可部分可取较大面积，但厚度必须小于1mm（戊二醛固定能力小于0.5mm）2、漂洗：牙签取出样品至新的1.5ml离心管，用0.1M pH7.0磷酸缓冲液（PBS）漂洗样品三次（摇床），每次15min3、锇酸固定与再漂洗：1%锇酸溶液固定样品1-2h（临用前计算用量≤50ul/样，用0.1M PBS将2%锇酸稀释至1%，通风橱操作），吸出固定液，用0.1M pH7.0 PBS漂洗样品三次，每次15min注：漂洗以清除固定液，避免产生沉淀物干扰结构观察4、脱水剂梯度脱水：用梯度浓度（50%，70%，80%，90%和95%）乙醇溶液对样品进行脱水处理，每个浓度处理15min再用100%乙醇处理20min （乙醇细胞内抽提少，但与包埋剂相容性差）最后用纯丙酮处理20min（若包埋剂为Epon改用环氧乙烷置换）注：脱水以清除游离水以便包埋剂均匀渗透；脱水剂易吸收空气中水分，密封，置换时应该迅速由低到高逐级脱水而不能急剧脱水，更换溶液时应迅速，以免组织内外产生气泡。

5、包埋剂梯度渗透：①用包埋剂丙酮混合液（V/V=1/1）处理样品1h：计算用量80ul/样再配制(参考样品大小)②用包埋剂丙酮混合液（V/V=3/1）处理样品3h：计算用量80ul/样再配制(参考样品大小)③纯包埋剂渗透样品过夜：将样品移至干燥的新离心管中，常温过夜(所用器具均应干燥)注：样品周围不能有气泡6、加热聚合：牙签取出经渗透处理的样品至0.5ml干燥离心管（预先装入约300ul包埋剂），加热聚合仪70℃加热过夜。

7、莱卡EM UC 7超薄切片仪修快、切片（50-70nm）8、正染色：塑料包埋模具（刀划几道缝隙），染色时温度低影响染色效果，冬天空调醋酸双氧铀50%乙醇饱和溶液100ul染色（15min-1h），双蒸水冲洗柠檬酸铅100ul染色15min（极易吸收空气中CO2产生PbCO3,染色时毋对着说话、呼吸，同时放置数块NaOH）9、日立H-7650透射电镜观察spurr包埋剂配制：ERL 2.5gNSA 5.2 g 混合均匀后再加入催化剂DMAE，搅拌30min；低温干燥保存DER 2.5 gDMAE 0.1g宜新鲜配制但由于使用期限长(3-4天)，混合物可在使用前一天制备。

生物材料样品预处理

了解有机物和无机物的区别： • 有机化合物一般是共价化合物,以C原子为骨架连接其他元素的原子,形成的化合物如 CH3CH2OH（乙醇）；无机化合物一般没有这些特征,即使含C元素,也不是有机物，如 CO、CO2 • 无机物是无机化合物的简称，通常指不含碳元素的化合物。少数含碳的化合物，如一氧化碳、二氧化碳、碳酸盐、氰化物等也属于无机物。无机物大致可分为氧化物、酸、碱、盐等 • 有机物一般难溶于水，易溶于有机溶剂，熔点较低。绝大多数有机物受热容易分解、
•
常见无机物：金属、盐类
一、无机元素分析的样品预处理
*预处理目的（掌握）P9
提取、净化和浓缩被测元素或破坏样品中的有机物，释放出被测元素，以利于后续测定（测定前排除干扰组分，对样品进行浓缩） *选择预处理方法时满足一下基本要求（了解）P10
1、避免待测元素损失及污染 2、尽可能减少化学试剂的用量 3、操作简便，省时 4、待测组分回收率达到分析要求 5、操作过程安全性高
容易燃烧。
• 无机物与有机物在性质及反应上的差别只是相对的、有条件的，不同的有机物有其特殊的性质。例如，乙醇、乙酸、乙醛、丙酮能与水以任意比互溶；四氯化碳、二氟二
溴甲烷等有机物不但不能燃烧，反而可以用来灭火；乙酸及其金属盐能在水溶液中电
离 • 常见有机物：醋、油、酒、糖、蛋白质、脂质、核酸、汽油
(三）矿物化法（掌握）
破坏生物样品中有机物的方法
*1、干灰化定义：在供给能量的前提下直接利用氧来氧化分解样品中有机物的方法（掌握）步骤：干燥、炭化、灰化、溶解灰
*2、湿消化法
定义：利用氧化性酸和氧化剂对有机物进行氧化，以分解破坏有机物（掌握）常用的氧化性酸和氧化剂：H2SO4 HNO3 HClO4 H2O2

生物实验样品预处理

样品预处理4.1.5.1准备工作若必要时将冷冻样在冰箱（-2-4C）中放置过夜，使部分解冻以便切片。

用合成洗涤剂清洗塑料刀、碟、镊子、塑料板及尺和称重塑料膜，用蒸馏水或清洁海水漂洗干净。

工作台用洗净的塑料膜罩上。

用合成洗涤剂(4.1.2-2)仔细地洗手，后用蒸馏水或漂洗干净。

PF一胸鳍；DF一脊鳍，虚线表示刀切位置图3鱼体简图中小型鱼样制备4.1.5.4.1单个体样品：测量鱼的叉长，并于聚乙烯称样膜上称重。

记下叉长和体重。

用蒸馏水或清洁表层海水（4.1.2.1)洗涤鱼样，将它放在工作台上，用塑料刀切除胸鳍并切开背鳍附近自头至尾部的鱼皮（图3),在鳃附近和尾部，横过鱼体各切一刀；在腹部，鳃和尾部两侧各切一刀。

四刀只切在鱼体一侧，且不得切太深，以免切开内脏，沾污肉片。

最好在切片时，由另一人帮助按住鱼的头尾。

用镊子将鱼皮与肉片分离，谨防外表皮沾污肉片。

用另一把塑料刀将肌肉与脊椎分离，并用镊子取下肌肉。

将组织盛于塑料容器中，称重并记录重量。

若一侧的肌肉量不能满足分析用量，取另一侧肌肉补充。

盖紧容器，贴上标签或记号，记录各所有数据，于低温冰箱中保存。

鉴定性腺性别。

4.1.5.4.2多个体试样：制备方法如下。

仔细记下各个体体长、鲜重、肌肉重。

鉴定性别。

个体数不应少于6个，且性别应相同，大小相近。

用匀浆器匀化鱼组织，将匀浆转入已知重量的塑料容器中，盖紧，贴上标签并称重，记下匀浆重和其他数据。

置于低温冰箱中存放。

干样制备将部分新鲜试样按4.1.6.1或4.1.6.2步骤烘干，计算干／湿比，以校正水分含量。

干燥后的样品用玛脑研钵磨碎，全部筛过80-100目（尼龙筛），供痕量元素分析用。

4.1．6干重测定41.6.1烘干半开称量瓶的磨口盖，放入105℃烘箱中。

2h后，取出称量瓶，置于干燥器中冷却30min. 盖好瓶盖，用分析天平称重，记下重量。

取5^10g生物制备样（4.1.5)于称量瓶中，盖好瓶盖，再称重（士0.5mg）并记下重量。

【精品】生物样品分析前处理技术

生物样品分析前处理技术生物样品的前处理涉及很多方面，但主要应考虑生物样品的种类，被测定药物的性质和测定方法三个方面的问题.样品的分离、纯化技术应该依据生物样品的类型。

例如，血浆或血清需除蛋白，使药物从蛋白结合物中释出；唾液样品则主要采用离心沉淀除去粘蛋白；尿液样品常采用酸或酶水解使药物从缀合物中释出,当原型药物排泄在尿中时，可简单地用水稀释一定倍数后进行测定.根据被测定药物的结构、理化及药理性质、存在形式、浓度范围等,采取相应的前处理方法。

例如，药物的酸碱性（pka)、溶解性质涉及到药物的提取手段；是否具有挥发性涉及到能否采用气相色谱法测定；药物的光谱特性及官能团性质涉及到分析仪器的选择、能否制成衍生物及应用特殊检测器的可能性。

药物在样品中的浓度相差很大，浓度大的样品，对前处理要求可稍低；浓度越低则样品前处理要求越高。

此外，药物在体内常产生许多代谢产物，其中一些代谢物仍具有药理活性，需要与原型药分别测定,因而也要了解药物的药理学性质和药物动力学特性.样品于测定前是否需要纯化以及纯化到什么程度均与其后采用的测定方法的不同而不同。

即纯化程度与所用测定方法的专属性、分离能力、检测系统对不纯样品污染的耐受程度等密切相关.一般说来,放射免疫测定法由于具有较高的灵敏度和选择性，因此当初步除去主要干扰物质之后即可直接测定微量样品；而对灵敏度和专属性较差的紫外分光光度法,分离要求就要相应高一些；至于常用的高效液相色谱法，为防止蛋白质等杂质沉积在色谱柱上,上柱前需对生物样品进行去蛋白,有时对被测组分进行提取、制备衍生物等前处理。

下图大致反映了检测方法与样品前处理要求的相三关系。

样品处理步骤与分析方法的选择—（一）去除蛋白质在测定血样时，首先应去除蛋白质.去除蛋白质可使结合型的药物均出来，以便测定药物的总浓度；去除蛋白质也可预防提取过程中蛋白质发泡，减少乳化的形成,以及可以保护仪器性能（如保护HPLC柱不被沾污)，延长使用期限.去除蛋白法有以下几种.1.加入与水相混溶的有机溶剂加入水溶性的有机溶剂;可使蛋白质的分子内及分子间的氢键发生变化而使蛋白质凝聚，使与蛋白质结合的药物释放出来。

生物样品前处理及在原子吸收光谱仪分析中应用

生物样品前处理及在原子吸收光谱仪分析中应用引言：原子吸收光谱仪是一种广泛应用于分析化学和环境科学领域的仪器，它基于原子在特定波长的光的吸收来测定样品中特定元素的含量。

在样品分析之前，必须进行一系列的前处理步骤，以准确地测定元素的含量。

本文将介绍一些常见的生物样品前处理方法，并探讨其在原子吸收光谱仪分析中的应用。

一、生物样品前处理方法1.溶解方法：将生物样品溶解于适当的溶剂中，以便进一步处理和分析。

对于固体样品，常用的方法是使用强酸或共熔混合物进行溶解；对于液体样品，可以直接使用或进行适当的稀释。

2.液-液萃取：适用于有机物或水中低浓度的金属离子的分离和富集。

通过添加有机溶剂与水中的金属离子发生配位作用，使其从水相中转移到有机相中。

3.气-液萃取：适用于挥发性有机物的分离和富集。

将气相中的有机物吸附到液相中，通过溶解和挥发的反复过程来富集。

4.溅射：将固体样品溅射成为微细颗粒，以提高其表面积，便于进一步处理和分析。

5.气相色谱：通过样品的挥发性和分子量差异进行分离和富集，可用于分析挥发性有机物。

以上这些生物样品前处理方法可以根据样品类型、元素需要测定的量级、所需分析的基体元素等因素进行选择和操作，以获得准确可靠的测定结果。

二、原子吸收光谱仪分析中的应用原子吸收光谱仪是测定样品中金属元素含量的重要工具，其应用涉及许多领域，如环境科学、药学、食品安全等。

以下将以环境科学领域为例，介绍原子吸收光谱仪在生物样品分析中的应用。

1.土壤样品分析：土壤是环境中重要的污染介质，其中金属元素的含量与土壤质量和环境负荷密切相关。

使用原子吸收光谱仪可以准确测定土壤中的重金属元素，如铅、镉、铬等，从而评估土壤污染状况。

2.水样分析：水是人类生存的重要资源，其中金属元素的含量直接影响到水的质量。

原子吸收光谱仪可用于测定水中的重金属元素，如铜、锌、汞等，用于水质检测、环境监测等。

3.植物样品分析：植物在生态系统中起着重要的作用，并且可以作为环境污染的指示物。

生物样本样品前处理

血液样本前处理
包括抗凝、分离血清或血浆等步骤，为血液学实验提供合格的样本。
THANKS
感谢观看
对于光敏感的样品，在处理和保存过程中应避免直接光照，采用避光容器或包装材料。
添加稳定剂
根据样品的性质，可以添加适量的稳定剂，如抗氧化剂、防腐剂等，以保持样品的稳定性。
减少处理时间
尽量缩短样品前处理的时间，减少样品暴露在不利环境中的机会
，从而降低样品变质的风险。
05
样品前处理中的质量控制
质量控制标准制定
稳定性和可重复性。
前处理流程简介
样本收集与保存
根据研究目的和实验设计，选择合适的生物样本（如血液、尿液、组织等），并进行适当的保存和处理，以避免样本变质或目标分析物的损失。
样本预处理
对收集到的生物样本进行初步处理，如离心、过滤、稀释等，以去除杂质和干扰因素，为后续的分析步骤提供纯净的样本。
目标分析物的提取与富集
03
代谢物衍生化
利用色谱、质谱等技术对代谢物进行分离和纯化，去除干扰物质。
对于某些难以检测或不稳定的代谢物，可以通过衍生化反应提高其检测灵敏度和稳定性。
其他生物样本前处理技术
组织样本前处理
包括组织固定、脱水、包埋、切片等步骤，为后续组织学观察和实验提供基础。
细胞样本前处理
包括细胞培养、传代、冻存等步骤，为细胞实验提供充足的细胞来源。
03
样品分离与纯化
分离技术介绍
01
02
03Leabharlann 色谱分离技术利用不同物质在固定相和流动相之间的分配系数差异，实现样品的分离，如液相色谱、气相色谱等。
电泳分离技术
利用物质在电场作用下的迁移速度差异，实现样品的分离，如凝胶电泳、毛细管电泳等。

生物样品的采集、储存和预处理的SOP

生物样品的采集、储存和预处理的SOP1. 生物样品的采集：服药前取空白血样，服药后取样点应包括吸收相，分布相，消除相；药浓度峰值前至少有4个点，峰后取6个点或6个以上点，峰时间附近应有足够的取样点。

总取样点不少于11个，取样应持续到3 ～ 5个半衰的1/10 ～1/20。

具体可依据文献报道及预试验结果确定具体采血时期，或Cmax间点。

于服药前（0 h）和各时间点，取前臂静脉血5mL，处理后，离心10 min ( 3000r.p.m)，分离血浆或血清样品置试管中。

2. 生物样品的储存:血浆、血清样品，尽快分离（24h内），冷冻保存；短期内分析，可置4℃冰箱内冷藏。

长期分析，于－ 20℃冰箱内冷冻保存。

3. 生物样品的预处理:依据药物的理化性质，其酸碱性（pKa）、分子的亲脂性、挥发性、稳定性及可能的生物转化途径，制定相应的预处理方法。

a. 沉淀蛋白法生成不溶性沉淀:酸性试剂（三氯醋酸、高氯酸、钨酸、焦磷酸）重金属盐类（锌盐、铜盐、银盐、汞盐）盐析、脱水:硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等中性盐。

甲醇、乙腈、丙酮等可与水混溶的有机试剂。

各种沉淀试剂使用情况表b. 液-液萃取法水相pH：碱性药物最佳pH应高于其p Ka 2 ～ 3个单位酸性药物最佳pH应低于其p Ka 2 ～ 3个单位常用的有机溶剂：正己烷、异辛烷、环己烷、四氯化碳、甲苯、乙醚、苯、1，2-二氯乙烷、氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯（极性由依次小至大）。

有机溶剂与水相容积比一般为 1：1或2：1。

选择提取溶剂的原则：对被测物有较大的亲和力；与水不互溶，极性较小；沸点适宜；不影响紫外检测；价廉、无毒、不易燃烧；化学性质稳定。

生物样品前处理技术及其应用

生物样品前处理技术及其应用生物样品前处理技术是生物医学研究中不可避免的一部分，同时也是保证实验结果准确性的关键。

因此，研究生物样品前处理技术及其应用对于生物医学研究具有非常重要的意义。

一、生物样品前处理技术的定义生物样品前处理技术是指在功能分析前对生物样品进行分离、富集、净化、转化、分解、修饰等处理操作的方法。

它对于提高样品的分析精度和敏感度、减少干扰物的影响、清除样品中的杂质和提高分析效率具有非常重要的作用。

二、生物样品前处理技术的类型（一）样品分离技术样品分离技术是将混合的样品物质按特定的属性进行分离的一种技术。

常见的样品分离技术包括离心分离、过滤分离、电泳分离、毛细管电泳等。

其中最为常见的是离心分离和过滤分离。

（二）样品富集技术样品富集技术是将样品中需要分析的目标物质从大量的杂质和干扰物中富集出来的一种技术。

常见的样品富集技术包括固相萃取、液相萃取、直接萃取等。

其中固相萃取技术是最常用的样品富集技术之一。

（三）样品净化技术样品净化技术是将样品中不需要分析的组分或杂质去除的一种技术。

常见的样品净化技术包括超滤、离子交换、凝胶过滤等。

其中超滤技术被广泛应用于蛋白质和核酸等生物样品的净化和分离中。

（四）样品转化技术样品转化技术是将样品进行化学变化以实现对目标物质的分析的一种技术。

常见的样品转化技术包括水解、酶促反应、化学修饰等。

其中，水解技术常用于生物高分子的降解和分析。

三、生物样品前处理技术的应用（一）样品前处理技术在蛋白质质谱分析中的应用蛋白质质谱分析是一种非常重要的生物医学研究方法，但受到样品制备的影响而产生误差。

因此，样品前处理技术在蛋白质质谱分析中起到了非常重要的作用。

常用的技术包括蛋白质SOAP清洗、胶拍/台拍，PTM富集，等。

（二）样品前处理技术在DNA测序中的应用DNA测序是基因工程和分子生物学研究的重要代表。

在进行DNA测序前，通常需要对DNA样品进行前处理，以去除杂质和细胞碎片等非必要成分。

生物样品前处理

生物样品前处理第四节生物样品分析的前处理技术一般要在测定之前进行样品的前处理，即进行分离、纯化、浓集，必要时还需对待测组分进行化学衍生化，从而为测定创造良好的条件。

生物样品进行前处理的目的在于：1．药物进入体内后，经吸收、分布、代谢，然后排出体外。

在体液、组织和排泄物中除了游离型（原型）药物之外，还有药物的代谢物、药物与蛋白质形成的结合物、以及药物或其代谢物与内源性物质，如葡萄糖醛酸、硫酸形成的葡萄糖醛酸甙（glucuronides）、硫酸酯（sulphates）缀合物等多种形式存在，需要分离后测定药物及代谢物；2．生物样品的介质组成比较复杂。

如在血清中既含有高分子的蛋白质和低分子的糖、脂肪、尿素等有机化合物，也含有Na ＋、K＋、X-等无机化合物］。

其中影响最大的是蛋白质，若用HPLC法测定药物浓度时，蛋白质会沉积在色谱柱上发生堵塞，严重影响分离效果。

因此，为了保护仪器，提高测定的灵敏度，必须进行除蛋白等前处理。

一、常用样品的种类、采集和贮藏生物样品包括各种体液和组织，但实际上最常用的是比较容易得到的血液（血浆、血清、金血）、尿液、唾液。

在一些特定的情况下选用乳汁、脊髓液、精液等。

（一）血样血浆（plasma）和血清（serum）是最常用的生物样品。

血浆中的药物浓度反映了药物在体内（靶器官）的状况，因而血浆浓度可作为作用部位药物浓度的可靠指标。

供测定的血样应能代表整个血药浓度，因而应待药物在血液中分布均匀后取样。

由采集的血液制取血浆或血清。

血浆的制备将采取的血液置含有抗凝剂（如：肝萦、草酸盐、拘橡酸盐、EDTA、氟化钠等）的试管中，混合后，以2500～3000rpm 离心5min使与血细胞分离，分取上清液即为血浆。

血清的制备将采取的血样在室温下至少放置30min到1h，待凝结出血饼后，用细竹捧或玻璃棒轻轻地剥去血饼，然后以2000～3000rpm离心分离5～10min，分取上清液．即为血清。

血浆比血清分离快，而且制取的量多，其量约为全血的一半。

生物样本前处理技术

【讨论】生物样本前处理技术样本前处理技术在分析方法中占有极其重要的地位，很多分析问题都可以通过样本前处理解决，本文将对样本前处理过程中遇到的问题和样本前处理方法进行综述，以期形成一个系统。

本文将分为1.样本分类及采集2.初步处理3.游离药物分离4.萃取技术5.萃取后过程五个部分进行分别阐述。

其中有不少为个人观点，希望各位战友能不吝指正（纠正错字，纠正观点，进行讨论都欢迎），希望和园内战友共同学习。

-------------------------------------------------------------------------------- 楼主快点介绍吧。

-------------------------------------------------------------------------------- 1.1 生物样本分类生物样本多种多样，有血浆、血清、全血、淋巴、唾液、各种组织、毛发、尿液、胆汁、泪液、脊髓液、汗液、乳汁、羊水、粪便以及呼出的气体。

（以下文字主要摘自《体内药物分析》姚彤伟编著 2001年）生物样品可大致分为①均匀样品：血液、尿液、唾液、胆汁、脑脊液、淋巴液、乳汁和性腺分泌液等体液；②非均匀样品：心、肝、脾、肺、肾、胃、肠、生殖器官、脑、体脂、胸腺肾上腺和骨骼肌等11种器官、组织。

Ruth Endacott[1]总结了临床样本采集时需要注意的问题以使采样够用和适用。

[1]:Endacott R, Botti M. Clinical research 3: sample selection. Intensive Crit Care Nurs. 2005 Feb;21(1):51-5.1.2 生物样品采集1.2.1 血样1.2.1.1 组成血样包括血浆、血清和全血，其中最常用的是血浆。

一般认为，药物在体内达到稳定状态时，血浆中药物浓度是与药物在作用点的浓度紧密相关的，即血浆中药物浓度可以反映药物在体内(靶器官)的状况，而且血浆中药物浓度的数据报道较多，可供借鉴。