KS50微生物菌剂试验方案
KS50微生物菌剂概要
KS50微生物菌剂概要2012年9月9日一、KS50产品背景位于韩国南部全罗南道木浦市的建农株式会社，经50多年的不懈努力，从自然界微生物群落中提取了复合微生物种群，采用称作Natural-Biotechnology的结构培养技术，培养出了复合微生物菌种，命名为KS50。
建农公司的KS50微生物菌剂产品在韩国成功用于污水处理、除臭处理、河川湖泊水质改善等环境领域及土壤改善、农作物增产等农业领域以及水产养殖、畜产养殖领域、保健食品等领域，取得了瞩目的成绩。
尤其是制革污水的处理及污水处理中氨氮的处理方面取得了很好的效果。
由于KS50在环境保护、农业增产等方面有不俗的表现，韩国MBC电视台（韩国三大电视台之一）、韩国经济TV等媒体相继进行了报导。
在日本，建农与日本水处理界巨头栗田工业株式会社合作，成功将KS50应用于福冈县久留米市中央净化中心（污水处理厂）污水处理及久留米市下弓削川河川复原事业，并在日本建立了微生物发酵健康食品－KANNO的生产工厂。
在中国，KS50在沈阳仙女湖水质改善试验（2010年）、上海汉德水产加工公司污水处理（2007年）试验均取得了很好的处理效果。
辽宁大学用KS50微生物菌剂用在鸡粪堆肥腐熟、发酵床养猪、发酵秸秆反应堆（2010年）等方面，均取得了很好的效果（均有资料）。
二、KS50微生物菌剂的特点有三个最主要的特点：一是KS50的来源。
KS50取自自然界微生物群落，是自然界的复合微生物群，包含了很多个菌种。
已从KS50中鉴别出的菌种有枯草菌、芽孢杆菌等十几种菌种（KS50微生物菌剂介绍书_（株）建农.pdf 中有详细描述）。
这与人为选择的菌种和将几种选择的菌种组合的微生物是有很大区别的；二是培养方式的不同。
KS50采用叫做Natural-Biotechnology的结构培养技术，在85℃高温下培养。
在这个温度下培养微生物的方式是世界唯一的；三是不产生变异，适应性强。
在－50℃~+150℃范围内及很宽的酸碱度范围内均可以生存。
菌剂质量测定方法
菌剂质量测定方法
菌剂质量可以通过多种方法进行测定，以下是一些主要的质量测定方法：
1. 重量法：微生物菌剂的有机质含量可以通过称量物质的方法来测定。
具体步骤包括摩擦瓶中加入已经干燥的微生物菌剂，然后加入适量的氢氧化钠，加热至水分析后，将其放入烘箱中干燥至恒定质量，然后称量其重量。
通过计算比例，即可得出微生物菌剂的有机质含量。
2. 细菌数量测定：通过在凝胶中依赖（或独立）生长技术，或平板计数法或滤膜法测定细菌菌量。
这通常以CFU/g（或/ml）的形式报告。
3. 纯度检测：使用不同的原核生物和真核生物培养基对微生物进行检测。
该标准是确保微生物菌剂纯度的关键。
4. 活性检测：测定微生物菌剂中生物活性的程度。
这种活性可以测定菌剂对病原体的抑制作用，或对土壤生态系统的生物地球化学循环的发挥作用。
通过这些方法，可以对菌剂的质量进行全面的评价。
如需更多信息，建议咨询微生物学家或查阅相关文献资料。
微生物控制验证计划
受控状态：北京港龙华佳食品有限公司生产车间微生物验证（含涂抹实验、食品接触面、车间环境）（依据QS市场准入有关规定编制）文件编号：HJ-HACCP-02编制人员：我审核：批准：2013年10月10日发布2013年10月30日实施北京港龙华佳食品有限公司生产车间微生物验证1范围本标准规定了公司生产过程中微生物控制要求及验证计划。
本标准适用于公司食品生产过程中对微生物控制的验证活动。
2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准条款，凡是注明日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误内容）或修订版均不适用于本标准，然后，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本均适用于本标准。
GB5749 生活饮用水卫生标准GB14881 食品企业通用技术规范GB15980 一次性使用医疗用品卫生标准GB4789.2食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定GB4789.3 食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数卫生标准操作程序（SSOP）3职责品管部对车间卫生状况进行监控，定期开展微生物验证，并根据检验结果对车间卫生进行管控，必要时委托化验室抽样检测。
4术语和定义食品接触面：指生产过程中与所生产的食品直接接触的设备、工具器具、人、水、空气、包材等；或直接接触的门把手、电源开关等。
5验证计划5.1工厂应按照GB14881等相关国家规定，采取适宜的措施控制食品生产经营过程中微生物。
5.2验证内容包括食品生产经营过程中微生物控制的各个环节（如原材料、人员、生产环境等）及采取的各种措施（如清洗、消毒措施、提高生产车间洁净度要求等）5.3微生物控制标准应符合食品安全国家标准要求，具体见表一5.4可通过以下环节的检测进行微生物控制效果验证5.4.1生产用水1）采样时间：生产过程中2）生产用水取样：选定取样点，打开水阀门，5min后用灭菌的广口瓶取约200ml水样，立即送检。
微生物限度检查法-检验标准操作规程
——————————文件类别：技术标准 1/25文件名称微生物限度检查法(二部)检验标准操作规文件编号：09T-I636-01 起草人审核人批准人日期：日期：日期：颁发部门：质量管理部生效日期：分发部门：质量控制科1.目的：建立微生物限度检查法(二部)检验标准操作规程，并按规程进行检验，保证检验操作规范化。
2.依据：2.1.《中华人民共和国药典》2010年版二部。
3.范围：适用于所有用微生物限度检查法(二部)测定的供试品。
4.责任：检验员、质量控制科主任、质量管理部经理对本规程负责。
5.正文：5.1.简述：5.1.1. 微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。
检查项目包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。
5.1.2. 微生物限度检查应在环境洁净度10 000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内进行。
检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。
防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
单向流空气区域、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。
5.1.3.供试品检查时，如果使用了表面活性剂、中和剂或灭活剂，应证明其有效性及对微生物无毒性。
5.1.4.除另有规定外，本检查法中细菌及控制菌培养温度为30～35℃，霉菌、酵母菌培养温度为23～28℃。
5.1.5.检验结果告以1g、1ml、10g、10ml或10cm2为单位报告，特殊品种可以最小包装单位报告。
5.2. 检验量。
5.2.1.检验量即一次试验所用的供试品量（g、ml 或cm2）。
5.2.2.除另有规定外，一般供试品的检验量为10 g或10ml；膜剂为100cm2；贵重药品、微量包装药品的检验量可以酌减。
要求检查沙门菌的供试品，其检验量应增加20g或20ml（其中10g或10ml用于阳性对照试验）。
5.2.3.检验时，应从2个以上最小包装单位中抽取供试品，膜剂还不得少于4片。
百分之50凯泽WG防治番茄灰霉病田间药效试验
50%凯泽WG防治番茄灰霉病田间药效试验[摘要] 通过对50%凯泽等5种不同药剂处理的试验，得知：50%凯泽wg用量为24-48克/亩对番茄灰霉病进行防治，其防治效果非常明显，防效在79%-86%之间；比对照药剂处理30%翠泽sc45ml/667m3的防治效果略好；50%异菌脲wp30g/667m3的防治效果最差，防效达到65%左右。
建议50%凯泽wg和30%翠泽sc在生产上轮换使用。
[关键词] 凯泽番茄灰霉病防治效果[中图分类号] s436.412 [文献标识码] a [文章编号] 1003-1650 （2013）05-0129-02番茄是百色市主要蔬菜品种，2012年，我市番茄种植面积有25500hm2，番茄产量为95750万千克，是菜农主要经济来源之一。
但近年来，番茄灰霉病在我市番茄产区普遍发生；该病是以病原葡萄孢菌（botrytis cinerea）浸染为害番茄的花、果实、叶片和茎等，严重影响我市番茄产量和质量。
为了向菜农提供高效低毒化学农药轮换使用防治该病，笔者于2012年做了50%凯泽wg对番茄灰霉病的防治试验，现将试验情况总结如下。
一、材料与方法1.供试材料供试药剂：50%凯泽wg[巴斯夫（中国）有限公司生产]；对照药剂：30%翠泽sc[巴斯夫（中国）有限公司生产]和50%异菌脲wp（市场购买）。
供试番茄品种：千禧。
2.试验方法试验选在百色市田阳县田州镇新城村番茄地进行，设6个处理：50%凯泽wg 24g/667m3，50%凯泽wg 36g/667m3，50%凯泽wg48g/667m3，30%翠泽sc45ml/667m3，50%异菌脲wp30g/667m3和清水对照，每个处理设4次重复，共24个小区，小区间随机区组排列，每小区22.5m3。
试验共施药3次，分别于2012年2月2日、2月8日、2月15日施药。
首次喷药正值番茄灰霉病发生初期。
用电动喷雾器按不同处理剂量，从低浓度到高浓度对整株叶片的正反两面进行均匀喷施，施药液量为30kg/667m3。
微生物限度检查方法适用性试验方案
微生物限度检查方法适用性试验方案验证方案组织与实施微生物限度检查方法适用性试验工作应由质量管理部门负责组织，质量管理部门有关人员组成验证小组，参与实施。
方案起草方案审核方案批准目录一、概述二、验证目的和风险评估三、验证内容四、方法判定五、再验证周期六、参考文献七、结果评价及结论1、概述：微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。
检查项目包括需氧菌数、霉菌数和酵母菌数及控制菌检查。
当建立产品的微生物限度检查法时，应进行需氧菌、霉菌和酵母菌计数方法的适用性试验和控制菌检查方法的适用性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的需氧菌、霉菌和酵母菌数的测定和控制菌检查。
由于依照中国药典2010版的检查方法验证,需氧菌、霉菌和酵母菌、控制菌均采用平皿法。
故现升级为中国药典2015版，需氧菌、霉菌和酵母菌及控制菌均采用平皿法进行方法适用性试验。
2、试验目的和风险评估：验证目的：确认所采用的需氧菌、霉菌和酵母菌计数方法及控制菌检查方法适合我公司所生产产品的微生物限度检查。
风险评估：3、验证内容：3.1、培养基来源：确认人：确认日期：3.2、检查用培养基配制方法：确认人：确认日期：3.3、使用仪器确认人: 确认日期：3.4、验证试验用菌种：确认人：确认日期：3.5试验方法：取供试品 10 g加PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml→1:10供试液。
需氧菌、霉菌和酵母菌、控制菌采用常规法。
3.6菌液的制备：3.6.1取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的胰酪大豆胨琼脂斜面培物一铂金饵，加入胰酪大豆胨液体培养基中置30～35℃培养箱中培养18～24h，取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的胰酪大豆胨液体培养物1ml加入9ml0.9％无菌氯化钠溶液中，制成10-1 的菌液，依法10倍稀释至10～7，分取各菌悬液1ml注入平皿中，立即倾注胰酪大豆胨琼脂培养基20ml，各菌悬液平行制备两个平皿，平皿法培养计数，取小于100CFU/ml和1000CFU/ml的菌液备用。
最新微生物限度检查方法验证方案
微生物限度检查方法验证方案六、验证内容1.供试液的制备1.1.取供试品10g，加pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液至100ml，充分振摇使混匀，作为1:10的供试液。
1.2.取1:10供试品10ml，加pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液至100ml，充分振摇使混匀，作为1:100的供试液。
1.3.取1:100供试品10ml，加pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液至100ml，充分振摇使混匀，作为1:1000的供试液。
备注：供试液制备若需加温时，应均匀加热，且温度不超过45℃。
供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小时。
2.菌液制备2.1.接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中，30〜35℃培养18～24小时；分别取上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，依次稀释至、、、制成每1ml含菌数为小于100cfu的菌悬液。
2.2.接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中，20〜25℃培养2～3 天；取此培养物用0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，依次稀释至，制成每1ml含菌数为小于100cfu的菌悬液。
2.3.将黑曲霉菌斜面的新鲜培养物接种至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上，20〜25℃培养5〜7天，使大量的孢子成熟。
加入3-5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，将孢子洗脱。
然后，采用适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液依次稀释至，制成每 1ml 含孢子数小于100cfu 的孢子悬液。
2.4.上述菌悬液制备后若在室温下放置，应在2小时之内使用；若保存在2~8℃，可在24小时内使用。
黑曲霉孢子悬液可保存在2~8℃，在验证过的贮存有效期内使用。
微生物限度检查方法适用性试验方案
微生物限度检查方法适用性试验方案一、试验目的本试验旨在验证微生物限度检查方法的适用性，并评估其在实际样品中的准确性、精密度和灵敏度，以确保检测结果的可靠性。
二、试验范围本试验适用于各类药品、食品、环境以及生物制品等样品的微生物限度检查。
三、试验设备与试剂1. 培养基：本试验需使用适当的培养基，如大肠杆菌培养基、沙门氏菌培养基等，以满足特定微生物的培养需求。
2. 灭菌设备：试验中的培养基、工具及试剂需经过灭菌处理，以保证试验环境的无菌状态。
3. 微量移液器：用于准确取样和移液，确保实验的精确性。
4. 微生物培养箱：用于提供适宜的温度和湿度条件来培养微生物样品。
四、试验步骤1. 样品制备：按照相关规定和标准采集样品，并根据不同样品的特性进行适当处理，以便得到具有代表性的样品。
2. 培养基接种：将样品按照试验要求接种到相应的培养基中，并在一定条件下进行培养，以促使微生物生长。
3. 培养基培养：将接种过样品的培养基置于微生物培养箱中，根据微生物的生长特性进行培养，通常包括温度、湿度和培养时间等方面的控制。
4. 结果观察与记录：根据实验要求，观察培养基上是否有微生物的生长，并记录对应的观察结果。
5. 试验数据处理与分析：根据试验结果进行数据处理与分析，并评估微生物限度检查方法的适用性、准确性和灵敏度。
五、试验评价指标1. 准确性：通过与参考方法的比对，评估限度检查方法的准确程度。
2. 精密度：利用不同实验者、设备和试剂的重复试验，评估方法的可重复性和稳定性。
3. 确定度：评估方法的灵敏度和特异性，以确定方法对微生物的检测能力。
4. 可靠性：综合以上评价指标，评估方法在实际应用中的可靠性和适用性。
六、试验结果与分析根据试验评价指标，通过一系列试验和数据分析，我们可以得出以下结论：1. 限度检查方法在各类样品中的准确性良好，能够准确反映样品中微生物的含量。
2. 试验结果表明，方法具有较好的重复性和稳定性，不同实验者、设备和试剂的试验结果相对一致。
微生物限度检查方法验证方案
微生物限度检查方法验证方案微生物限度检查方法验证方案1.目的：为确认所采用的方法适合于该药品的微生物限度检查，包括细菌、霉菌及酵母菌计数和控制菌检查，特制定本验证方案，通过比较试验菌的恢复生长结果，来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性，以确认供试品在该实验条件下无抑菌活性或其抑菌活性可忽略不计，所采用的方法适用于该品种的微生物限度检查。
验证过程应严格按照本方案规定的容进行，若因特殊原因确需变更时，应填写验证方案修改申请并报验证领导小组批准2.围：本验证方案适用于微生物限度检查方法的验证。
3.规性引用文件：根据《中国药典》2010年版二部附录ⅪJ 微生物限度检查法的要求，由于某些供试品具有抗菌活性，在建立微生物检查方法或产品的组分发生改变或原检查法的检验条件发生改变时，可能影响检验结果的准确性，必须对供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性进行验证。
4.验证实施：4.4.1 试验前的准备:4.4.1.1 试验用具的准备：将试验需用的试管、刻度吸管、薄膜过滤器、滤膜（孔径0.22um、直径50mm）、平皿、空三角瓶、称量纸等，用牛皮纸包扎好后，放于湿热灭菌器中，在121℃，灭菌30 min，在3天使用。
4.4.1.2试验用培养基的制备：取适用性检查合格的营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、营养肉汤培养基、胆盐乳糖培养基（BL）、改良马丁琼脂培养基、4-甲基伞形酮葡糖苷酸培养基（MUG）等脱水培养基，按照相应的配制说明，用纯化水配制、分装后，在2小时，放于湿热灭菌器中，在121℃，灭菌15 min，在3周使用。
4.4.1.3试验用稀释剂/缓冲液、冲洗液的制备：取在有效期的试剂，按照相应的配制方法，配制pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、0.9%无菌氯化钠溶液、0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液等，用纯化水配制，加热使溶，过滤，分装，在121℃，灭菌15 min，在3周使用。
4.4.2 试验菌的制备和稀释：4.4.2.1细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证用菌液：4.4.2.1.1取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物少许接种至10ml营养肉汤中，在30～35℃培养18～24小时；取白色念珠菌的新鲜培养物接种至改良马丁培养基中，在23～28℃培养24～48小时；取黑曲霉的新鲜培养物接种至改良马丁琼脂斜面培养基上，23～28℃培养5～7天。
土壤杀菌活化实验报告
一、实验目的1. 了解土壤中微生物的种类和数量。
2. 掌握土壤杀菌和活化实验的基本操作方法。
3. 分析土壤杀菌剂对土壤微生物的影响，评估其活化效果。
二、实验原理土壤杀菌活化实验是研究土壤微生物与土壤环境相互作用的实验。
通过土壤杀菌剂处理，可以杀死土壤中的病原菌和杂草种子，降低土壤中的微生物数量，从而提高土壤的卫生状况。
活化实验则有助于促进土壤微生物的生长和繁殖，改善土壤肥力。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 土壤样品：采集于某农田，样品量约为500g。
- 土壤杀菌剂：50%多菌灵可湿性粉剂。
- 活化剂：50%过磷酸钙。
- 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基。
2. 实验仪器：- 高压蒸汽灭菌锅- 烧杯、试管、三角瓶- 搅拌器、电子天平- 移液器、酒精灯- 紫外可见分光光度计- 显微镜四、实验步骤1. 土壤样品的预处理- 将采集的土壤样品风干，过筛，去除杂质。
- 称取50g土壤样品，加入50mL无菌水，搅拌均匀。
2. 土壤杀菌实验- 将处理好的土壤样品分为两组，每组25g。
- 一组加入1g 50%多菌灵可湿性粉剂，另一组不添加杀菌剂。
- 混匀后，将两组土壤样品分别放入两个无菌培养皿中。
3. 土壤活化实验- 在土壤杀菌实验的基础上，向添加杀菌剂的土壤样品中加入1g 50%过磷酸钙活化剂。
- 混匀后，将土壤样品放入另一个无菌培养皿中。
4. 土壤样品的微生物培养- 将培养皿放入恒温培养箱中，在适宜温度下培养5天。
5. 土壤样品的微生物检测- 采用牛肉膏蛋白胨培养基进行微生物培养，观察菌落生长情况。
- 使用显微镜观察土壤样品中的微生物种类和数量。
6. 数据分析- 对实验数据进行统计分析，比较不同处理条件下土壤微生物的种类和数量差异。
五、实验结果与分析1. 土壤样品的微生物种类和数量- 在土壤杀菌实验中，添加杀菌剂的土壤样品中微生物数量明显低于未添加杀菌剂的土壤样品。
- 在土壤活化实验中，添加活化剂的土壤样品中微生物数量与未添加活化剂的土壤样品无显著差异。
食品安全食品车间环境卫生及接触食品表面的微生物测试计划
食品安全食品车间环境卫生及接触食品表面的微生物测试计划1、检测区域及监测标准1.1、沉降法检测区域及标准备注：布点采用对角线法。
1.2、涂抹法检测区域及标准：2、检测方法：2.1 沉降法（适用于环境检测）2.1.1在化验室将已溶化并冷凉至45±1℃左右的营养琼脂培养基和孟加拉红培养基15ml左右分别注入直径为9.0cm的玻璃平皿内并转动培养皿混合均匀，琼脂混合待用。
2.1.2将无菌营养琼脂平板和孟加拉红琼脂平板于各取样点打开放置30分钟后，盖好。
2.1.3将上述营养琼脂平板倒置于35-37℃恒温培养48小时后，计算菌落总数；孟加拉红琼脂平板倒置于28-32℃恒温培养箱培养72小时观察，5天后计算霉菌菌落总数。
2.2涂抹法（适用于工器具设备及操作台面的消毒情况）2.2.1物体表面涂抹法：将经过灭菌的方框（框内面积为50cm2）放在待测面上，用灭菌镊子取无菌医用棉球，蘸上无菌生理盐水擦拭方框中间部分后，将棉球投入盛有9ml无菌生理盐水的三角瓶中。
参照GB 4789.2和GB 4789.15检测菌落总数和霉菌总数，结果以每平方厘米的菌落个数计算。
2.2.2人员手部涂抹：菌落总数和霉菌检测：用经过灭菌的镊子取一枝蘸有生理盐水的棉球，边转边涂擦待测手的全部，反复两次后，将棉球放入装有50ml 无菌生理盐水的三角瓶内。
参照GB 4789.2和GB 4789.15检测菌落总数和霉菌总数，结果以每只手的菌落个数计算。
参照GB 4789.3-2003食品大肠菌群检测方法，采用乳糖胆盐发酵9管法检测，查MPN检索表，结果以双手大肠菌群的最大可能数计。
2.2.4计算方法：沉降法：平皿上所长菌落数即该环境的菌落数涂抹法：1.工器具及台面：菌落总数（cfu/cm2）=平皿上菌落的平均数×样液稀释倍数×9/50霉菌总数（cfu/cm2）=平皿上菌落的平均数×样液稀释倍数×9/50 2.人员手部：菌落总数（cfu/只）=平皿上菌落的平均数×样液稀释倍数×50/2霉菌总数（cfu/只）=平皿上菌落的平均数×样液稀释倍数×50/23检测流程3.1每周定期对生产生产车间进行环境检测。
抗菌活性测试步骤
抗菌活性测试步骤与实验器材第一天中午12点1、准备9个锥形瓶〔1个备用，4个培养菌液，4个稀释菌液〕，洗净，烘干2、先在备用锥形瓶中配制500ML液体培养基，溶解后，倒入其余8个锥形瓶中，每瓶50ML。
盖上半透膜，用绳或皮筋系住，在用报纸盖上一层，用皮筋系住。
液态培养基：蛋白胨5g，酵母2.5g，氯化钠5g，水500ML，按比例增减。
〔半透膜〕第一天下午3点3、将9个锥形瓶，200μL枪头两盒，10μL枪头，1ML枪头，用报纸包住，放入灭菌箱中，灭菌20min。
121摄氏度。
〔灭菌锅〕第一天下午4点4、配药液，按照0.0010g—1ML，0.0020g—2ML，这种浓度配药液配出的浓度为1000μg/mL,溶剂为DMSO：水=1:1.等着全部溶解。
第一天晚上6点5.稀释药液，将配制好的药液浓度为1000，500，250，125μg/mL，四个浓度梯度。
第一天晚上9点6、将超净台打开紫外灯灭菌20min，点燃酒精灯，从灭菌箱取出4个锥形瓶，把接种环放在酒精灯上烧红，冷却几秒，从固体斜面菌落中划出一点，放在培养基中，放入摇床〔转速131，温度37摄氏度〕中培养12个小时。
〔从左到右依次为接种环，超净台，摇床〕第二天早上7点7、将超净台打开紫外灯灭菌20min〔需要灭菌的器材：96孔板，枪，酒精灯；放在超净台上即可〕。
将稀释好的药液加入到96孔板中，每孔加10μL〔用从灭菌器中取出灭过菌的10μL枪头〕，横行12个孔，每种浓度的药液重复加3个孔；竖行8排，8种药。
每种菌要加一排阳性对照：即氯霉素4种浓度，每种浓度重复3个孔，4个浓度，正好横行一排12个孔。
再加一排对照，其中3个孔为溶剂10μL〔无药空白对照〕，另三个孔只加菌液90μL〔阴性对照〕〔96孔板，EP管〕第二天早上9点——到11点8、把摇床中菌液取出〔浑浊即为菌长起来了〕，再把灭菌器中的另外4瓶培养基和1ml的枪头取出，点燃酒精灯，用酒精喷壶，喷下试验台和手，进行灭菌。
不同生物菌剂在蔬菜上应用试验方案
不同生物菌剂在蔬菜上应用试验方案生物菌剂含多种有益微生物及腐殖质和多种微量元素, 能明显改良土壤结构,培肥土壤地力,增加多种生物刺激素,促进作物发根壮苗,增强抗性,改善品质，为了探索生物菌剂在蔬菜上应用效果，为保证试验规范、科学，制定方案如下。
一、试验地点及承担单位试验地点：试验安排在2个县，每个县安排1栋温室开展试验，温室选用标准二代节能日光温室（80米×8-10米）。
承担单位：农业技术推广中心。
二、供试产品及供试作物（一）供试产品1、晖茂生物提供晖润牌土壤改良剂、劲护、红霜、劲雷。
2、永旭生物提供活化增效剂、腐植酸矿土粉、木霉胺基酸。
3、万胜生物提供武夷菌、金盾、芸苔素内酯、高能红钾液。
（二）供试作物供试作物为番茄，品种选用各地主栽品种。
三、试验设计1、试验选用晖茂生物、永旭生物、万胜生物提供的生物菌剂应用方案。
2、本试验设4个处理：处理1：晖茂生物提供的生物菌剂方案；处理2：永旭生物提供的生物菌剂方案；处理3：万胜生物提供的生物菌剂方案；处理4：常规施肥方案（以上详见附件）处理1、处理2、处理3是在处理4的基础进行操作。
试验采取大区对比法，同一温室内设四个大区，一个处理为一个大区，不设重复，顺序排列；大区面积依据试验地块情况确定，最小不得低于100m2，保证各处理区的起垄数量、滴管安装数量、定植株数相同。
各处理大区分别安装文丘里施肥器及水表，以准确计量施肥和灌水量。
3、试验温室最好选择连作障碍bing虫hai发生严重，连续种植多年的温室。
4、试验安排在秋冬茬番茄生产中，8月底-9月中旬定植。
5、试验温室和对照温室温室均按垄距1.5m起垄，垄高30cm，垄面宽80cm，垄沟宽70cm，每垄铺设2条滴灌带，滴灌带铺在植株外侧。
定植密度，垄面株距45cm,平均株行距75cm×45cm, 亩定植1975株。
6、施肥方法各处理严格按照施肥方案进行。
7、田间管理：底肥、追肥、温室环境调控、bing虫hai防治及植株调整等田间农事操作保持一致。
微生物学实验指导书
实验一微生物的分离和纯化本实验以微生物的分离和纯化为主线，综合包括了培养基的配制、消毒灭菌、微生物的分离等内容，在给定的时间内由学生自主完成。
包括以下知识内容。
学生书写实验报告的时候，不能照抄袭原文，要用自己的语言，表述实验过程，在别人看完你的实验报告后，能够知道你是怎样做的，能够重复你的实验过程。
一、目的要求1．了解培养基的配制原理，掌握常用培养基的配制方法。
2．掌握高压蒸汽灭菌的原理和操作方法。
3 学习、掌握细菌、放线菌、酵母菌和霉菌稀释分离、划线分离等技术。
4 学习从样品中分离、纯化出所需菌株。
5 学习并掌握平板倾注法和斜面接种技术，了解培养细菌、放线菌及霉等种类的微生物的培养条件。
二、原理培养基是将微生物生长繁殖所需要各种营养物质，用人工方法配制而成的各种营养基质。
其中除含有水分、碳水化合物、含氮化合物和无机盐类。
此外，微生物还必须在最合适的酸碱度范围的培养基上生长繁殖，因此，对不同种类的微生物，应将培养基调节到一定的PH值范围。
根据研究目的不同，可将培养基制成固体、半固体和液体三种形式。
固体培养基是在液体培养基中加入1.5～2%的琼脂作凝固剂，半固体培养基则加入0.5～0.8%的琼脂。
有时为了特殊目的，也可用明胶或硅胶等作为凝固剂。
由于微生物营养类型不同，应提供不同种类的培养基。
在分离、培养异样微生物时，对一般细菌常用肉膏蛋白胨培养基，对放线菌常用高氏合成1号培养基，培养酵母菌、霉菌则用麦芽汁或豆芽汁葡萄糖培养基，有时也常用马丁培养基分离霉菌。
马丁培养基除含有霉菌所含需的各种营养物外，还有孟加拉红染料，能抑制放线菌和细菌，链霉素可杀死或抑制细菌，但对霉菌均无害，所以这种培养基具有选择作用。
灭菌的方法很多，最常用的是加压蒸汽灭菌法。
此法是把待灭菌的物品放在一个可密闭的加压蒸汽灭菌锅中进行的。
在每平方厘米为一个大气压（即15磅/时2）的压力下，温度可达121℃，一般只要持续15～20分钟后，就可杀死一切微生物的营养体和它们的各种孢子。
江苏如东小棚养虾用强微菌剂方案（2020版）
江苏如东小棚养虾用强微菌剂方案（2020版）2020年9月3日修订：一、对虾饲料中使用“微生物产品”+“功能性产品”+“营养性产品”操作技术1、常规保健的添加方案有两个如下：⑴第一餐早7点用：每公斤饲料中添加“强微乳酸丁酸拌料宝”2克+ “强微水产苷” 0.5～1克；先用饲料量20～30%的水溶化产品，然后撒入饲料中，过几分钟，让其渗透到饲料中后，再投喂；或者再静置发酵3～12小时以内喂完，注意不要超过时间，以免过度发酵；⑵第二餐中午11点用：胆汁酸+水产专业维生素+海洋红酵母10毫升/公斤饲料拌料用；养殖前期使用胆汁酸，中后期可不用，维生素类产品则全程使用；虾青素类产品（海洋红酵母等）则可选择性使用（工厂化建议全期使用）⑶第三餐下午15点用：同第一餐；⑷第四餐傍晚19点用：同第二餐；2、或增加一餐发酵饲料饲喂方法本方法代替以上方案中的添加“强微乳酸丁酸拌料宝”和“强微水产苷”的那餐；本方法效果更好，采食量大增，抗病力强，并帮助对虾蜕壳，特别是帮助脱壳后的迅速恢复硬壳，可减少脱壳虾受到病菌和同类攻击的机率；发酵方法：1包“强微水产饲料发酵剂”，对虾料100公斤，加水30公斤，严格密封发酵6～12小时，并在24小时内喂完；如果发酵时间超过1天以上，则建议只占喂料量的50%以内。
注意事项：若用发酵的方法，要注意不要发酵过度，按上面规定的时间内喂完；如果因为太忙，忘记发酵时间了，则已经发酵过度的饲料就只能掺着喂，掺10～50%来喂即可；否则长期用超过规定时间的发酵料来喂，反而会造成对虾肠道菌群单一，造成肠道变薄或脱节，但当然，一旦发生这种情况的，马上恢复规定操作，过几天就可以恢复正常，即这种现象是可逆的；二、放标粗淡化虾苗之前的做水工作和养殖全程水质控制操作做水要一气哈成，一般4～5天就可以放标粗或淡化后的虾苗入棚养成虾了；①第一天：进水消毒：进水0.8米深，加漂白粉25公斤左右闷消毒处理12小时以上（当天可关闭棚门进行闷消，注意安全）；然后开启底曝气（脱余氯作用），曝气1～2天；抽检余氯高的，可用大苏打（硫代硫酸钠）2公斤/棚，检测到余氯合格为止；若检测到重金属，可用EDTA钠盐1公斤/棚（一般用测氨氮的试剂，变成浑浊白色的，则说明有重金属过多）；注意事项：消毒也可以用过硫酸氢钾复合盐、二氧化氯等强氧化消毒剂代替；②第二天：调节盐度：地下水盐度高的，可以掺一些淡水，降盐度调到3～5格，内陆淡水模仿小棚的则加海盐和海水晶调节盐度在1.5‰左右；③第三天：放苗前做高乳酸菌相，有以下两种方法：方法一：用“保苗救急乳酸菌相”200克/棚+红糖1公斤（或糖蜜2～3公斤代替）；方法二：泼洒“乳酸菌扩培液”25～50公斤/棚+ “发酵玉米液”5公斤/棚；注意事项：以上两种方法是二选一，不是指同时使用；④第三天：调节PH值：检测PH值，若超过8.5以上，可泼洒“发酵玉米液”15公斤，或直接用2公斤一水柠檬酸调节一下，可降0.3左右，微调PH值到7.5～8.2；⑤第四天：清水放苗即可：然后进入下表中的养成虾的操作过程：表1：如东小棚养虾养殖全程的强微用菌方案强微经验：也有偷懒的客户采用天天只是光泼洒“降亚清淤改底颗粒”40克/棚/天，拌料撒下去，天天用，养殖效果也有明显改善，新手可以先这样去尝试；3、紧急状态下的处理：对虾出现比较强的应激和不良反应时：先把PH和总碱度调理到最适范围（如前表所述）；再如下操作：⑴先用“保苗救急乳酸菌相”200克/棚（400立方米）+红糖1公斤+水10～20公斤，浸泡活化6小时以上泼洒；同时泼洒“生物络合解毒剂”400克/棚（这个不用活化，直接泼洒）；⑵接下来再按前述表7的养成池，用菌方案操作即可，拌料也是餐餐用“强微乳酸丁酸拌料宝”+“强微水产苷”拌料即可；可争取到深度治疗或卖虾的时间。
脱氮除磷微生物菌剂在一体化农村污水处理设备中的应用实施方案
脱氮除磷微生物菌剂在一体化农村污水处理设备中的应用实施方案1. 方案的技术路线2 中试试验2.1 菌种目前，脱氮除磷菌种来源有两个，一个是公司于江南大学联合研发的具有自主知识产权的脱氮菌和除磷菌。
还有一个就是桐乡建农生物科技有限公司从韩国引进的KS50复合微生物菌剂。
2.1.1 KS50复合微生物菌剂KS50取自自然界微生物群落，是自然界的复合微生物群，包含了很多个菌种。
已从KS50中鉴别出的菌种有枯草菌、芽孢杆菌等十几种菌种。
这与人为选择的菌种和将几种选择的菌种组合的微生物是有很大区别的。
KS50微生物菌剂培养原液培养按KS50粉剂1份（5公斤）、水（自来水、地下水）200份（如1000L）、糖蜜原液总量的2%（如20公斤）的比例放入培养容器（塑料桶），进行曝气，曝气的溶解氧DO保持在2-5ppm的水平，连续培养72小时。
活性液培养按KS50原液1份、水（自来水、地下水）35份、糖蜜活性液总量的0.2%的比例放入培养容器（铁管、水槽），进行曝气。
曝气的溶解氧DO保持在2-5ppm，连续培养48小时。
与桐乡建农生物科技有限公司陆经理联系，对方同意提供KS50微生物菌剂给我们试用，而且可以按我们的要求提供原液或活性液，运输方式还需与对方沟通。
2.1.2公司菌种公司与江南大学联合研发的脱氮除磷微生物菌种保藏在中国典型培养保藏中心。
需江南大学那边提供菌种给我们。
菌种培养方案：第一步联系江南大学李江华教授，让对方从保藏中心去除菌种进行实验室摇瓶接种培养，做成一定量的菌种原液给我们。
第二步要求李教授那边提供菌种扩大培养的培养方案，主要包括培养基的配方和培养条件。
第三步在公司德清运维中心进行扩大培养，扩大培养的方法可以参照建农公司那边的方法，结合江南大学那边提供的技术资料。
关键点有扩培条件的控制，扩培的规模，最终活性液中目标脱氮除磷微生物的含量。
扩培所需的仪器设备与材料：塑料发酵桶（带盖，大小0.5吨左右）、曝气装置、溶解氧测定仪、搅拌器、培养基的原料等。
微生物检测试验方案
样品前处理：将样品放离心管中进行超高压处理
营养琼脂培养基配方(每升)：
蛋白胨10g，牛肉膏粉3g，氯化钠5g，琼脂15g，最终pH7.3±0.2 于121
℃下灭菌30min。
在无菌条件下，奶酪样品（体重1 g样品）均匀涡流搅拌（2分钟）蒸压（121°C 15分钟）用9ml蒸馏水稀释10-1，连续稀释到10-6用于制备和倒平板法制备菌落计数。
等量等分（1毫升）被加入到干净的培养皿和等体积熔融无菌琼脂（无Na、预冷在45 - 50°C）轻轻添加和混合3 - 5次，，顺时针和逆时针旋转。
均在无菌条件下进行。
当琼脂凝固时，平板培养在一个倒置的位置（30°C为24°C 3小时）。
板从培养箱取出后立即直接计数的菌落数（CFUg-1）。
获得30至300个菌落的板进行了记录。
本论文总体来说有一定的参考价值，但存在以下问题：
1）第一部分1 超高压设备原理和特点，建议修改为超高压技术的原理及特点，把设备图删了，把杀菌流程删了，因为超高压在奶酪上不一定是杀菌。
2）作为综述，其写作还很不规范，请参考有关国内外同类论文大幅度修改写作方式，如摘要、前言等。
后续部分每个部分首先提炼内容，并对其影响因素予以阐述，并列举适当文献支撑，目前后面部分感觉基本为文献堆砌。
这是本论文能否被接受最关键的地方，也是目前最大的缺陷。
3）表1里面的影响是对干酪用乳的影响还是对干酪的影响，要交代清楚。
4）展望部分应集中，不要跑题，在阐述超高压技术干酪应用成就的基础上，提出目前该领域研究存在的主要问题及今后的主要研究方向。
5）要大幅度加强论文写作的条理性，而不是累计素材。
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KS50微生物菌剂应用方案
1. 应用对象
地点：待确定
某些站点因为运行调试时间不长，处理器中微生物的生长情况不理想，达不到处理的要求。
投加微生物菌剂，可在短时间内提高系统中微生物的数量和种类，通过各种微生物之间的相互配合，可以对污水中有机物进行有效降解。
2. 应用方法
往一体化设备里投加KS50微生物菌剂，100公斤KS50活性液已送到德清运维中心。
一体化设备主要采用A2O法，菌剂每次分三个点投加，A1池、A2池和O好氧池每个点各投加1/3的量。
3.投加方法
人工进行投加作业，每次称取相应的投加量送到站点，人工投加，总共分2
4.
投加前先对站点的进出水质进行连续几天（三天左右）的监测记录，投加开始后，每天取水样测定一次，最后一次投加后，继续每天测一次水样（三天后改为两天一次，一周后改为一周测一次，约3周）。
测定指标主要是COD、氨氮和TP，根据测得的数据计算这三项指标的去除率，同时对投加的菌种的有效期进行分析。
5.注意事项
KS50活性液的贮存：避光，低温。