ATCC菌株操作说明

M B L 技 术 资 料
不要使用棉质拭子或木质棒。 35℃，CO2 环境中， 使用烛缸较好，培养 5-15 天。使用显微镜观察平板 菌落。 方法 15 � 取一颗 M.orale 冻干颗粒于 10 B 精氨酸肉汤中，或 将 KWIK-STIK 接种在肉汤中。 作系列梯度稀释 （例 如，1:10，1:100，1:1000） 。在 35℃下，正常环境中 培养。一旦肉汤从黄色变成粉红色（48-72 个小时） ， 转接 0.2 mL 到 SP4 葡萄糖琼脂，划线分离。不要使 用棉棒或者木质棒，将平板至于 35℃厌氧环境中培 养 3-6 天。使用显微镜观察平板菌落。 方法 16 � Leeming Notman 琼脂，30℃下，正常环境中培养 72 个小时。 方法 17 � 取一颗 M.gallisepticum 冻干颗粒于 SP4 葡萄糖肉汤 中， 或将 KWIK-STIK 接种在肉汤中。 作系列梯度稀 释（例如，1:2，1:4） 。在 35℃下，正常环境中培养。 一旦肉汤从红色变成黄色（4 天-2 周） ，转接 0.2 mL 肉汤到 SP4 葡萄糖琼脂，划线分离。不要使用棉质 拭子或木质棒。35℃，CO2 环境中，使用烛缸较好， 培养 3 天-2 周。使用显微镜观察平板菌落。 方法 18 � 取一颗 M.hyorhinis 冻干颗粒于 SP4 葡萄糖肉汤中， 或将 KWIK-STIK 接种在肉汤中。作系列梯度稀释 （例如， 1:10， 1:100,1:1000） 。在 35℃下，正常环 境中培养。一旦肉汤从红色变成黄色（4 天-2 周） ， 转接 0.2 mL 肉汤到 SP4 葡萄糖琼脂，划线分离。 不 要使用棉质拭子或木质棒。 35℃，CO2 环境中，使 用烛缸较好，培养 2 天-10 天。使用显微镜观察平板 菌落。 方法 19 � 取一颗 M.synoviae 冻干颗粒于 SP4 葡萄糖肉汤中， 或将 KWIK-STIK 接种在肉汤中。作系列梯度稀释 （例如， 1:2， 1:4,1:8,1:16,1:32） 。 在 35℃下， 5%-10% CO2 环境中培养 7 天。7 天之后没有发生颜色变化， 转接 0.2 mL 肉汤到 SP4 葡萄糖琼脂，划线分离。 不 要使用棉质拭子或木质棒。 35℃，CO2 环境中，使 用烛缸较好，培养 1-4 周。使用显微镜观察平板菌 落。 方法 20 � 巧克力琼脂，羊血琼脂平板，TSA，添加 15%去纤 维蛋白羊血的 Bordet Gengou 琼脂--35℃ 正常环境 ---24-48 小时。 也可选择标准方法 荐培养方法： A
Acetobacter sp.
醋杆菌属 方法 3
注：25℃培养。 注：25℃，CO2 环境培养 3-4 天。
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Budvicia sp.
方法 1 方法 1 方法 3 方法 4 方法 1 方法 2
注：25℃培养。
布戴约维采菌属
菌)只在厌氧血平板上生长。
念珠菌属 噬二氧化碳菌属 西地西菌属 纤维微细菌 柠檬酸杆菌属 枝孢霉属 梭菌属
方法 5 方法 3 方法 1 方法 1 方法 1 方法 5 方法 4
注 ： Aeromonas hydrophila ( 嗜 水 气 单 胞 菌 ) 应 在 30℃ 培 养 。 Aeromonas salmonicida(杀鲑气单胞菌)应在 25℃培养。
操作前请仔细阅读使用说明 “KWIK-STIK Microorganisms”产品的使用说明
防范与限制 (PRECAUTIONS AND LIMITATIONS)
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这类产品仅适用于体外实验。 这些设备以及后来在培养基上生长出的微生物属生物危害材料(biohazard material )。 这些设备含具有活性的微生物，在一定的环境下可能致病。需使用适当的技术避免任 何微生物的暴露和接触。 微生物实验室需有相关实验装备，且有可接收、处理、储存、丢弃生物危害材料的设 备。 使用这类设备的微生物实验室工作人员必须在生物危害材料的操作过程， 维护， 储存， 丢弃等方面接受过培训，具备一定经验，能熟练示范。 相关机构和法规对生物危害材料的处理作了规定。各实验室需了解并遵守该生物危害 材料处理规定。
MBL 技术资料
TIB.081
推荐生长条件
® 和 KWIK-STIKTM 产品） （适用于 LYFO DISK DISK®
如何选择最适合的菌种生长条件
1. 最初的生长最好是在非选择性琼脂培养基上。除非 特殊情况或特别推荐，最初的生长一般不考虑液体 培养基。这是由于在液体培养基中获得冻干菌株的 纯种比较困难， 污染所带来的杂菌可能会过度生长， 影响得到目标菌株的纯种。 以下列出可供选择的琼脂培养基和相应的生长条 件，供各实验室培养菌种时参考。
M.fortuitum subsp. fortuitum, M.peregrinum 和 M.smegmatis 也可以选用胰蛋白胨大豆琼脂 (TSA) 和 Lowenstein Jensen 琼脂或 Middlebrook 琼脂一样， 只是需 额外培养一些时间。
方法 8 � 缓冲活性炭酵母提取物琼脂-----35℃， 正常环境， 3-5 天。 方法 9 � V 琼脂或巧克力琼脂 -----35℃， 5 ％－ 10％ CO2 环 境，48 小时。 方法 10 � 菌种水解可选用无菌脑心浸出液肉汤，胰蛋白胨大 豆肉汤，或 0.85％生理盐水。无菌水水解可能会导 致活力下降或不复苏。 在 KWIK-STIK 包装中自带的 培养基使得菌种很好的复苏。 � 在胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）上生长-----35℃，正常 环境，24-48 小时。Vibrio SP.也可在 Marine 琼脂上 生长 方法 11 � 先接种于 MRS 肉汤中-----35℃， 正常环境， 48 小时； 然后接入含羊血的哥伦比亚 CNA 培养基中----35℃， 5％ -10%CO2 环境，48 小时。 方法 12 � 马铃薯葡萄糖琼脂-----55℃，正常环境，48 小时。 方法 13 � 取一颗 M.hominis 或 Ureaplasma sp.冻干颗粒于 10 B 精氨酸肉汤中，或将 KWIK-STIK 接种在肉汤中。 作 系列梯度稀释 （例如， 1:10， 1:100， 1:1000， 1:10000） 。 在 35℃下，正常环境中培养。精氨酸瓶中液体一旦 变成粉红色 （24-48 小时） ， 转接 0.1 mL 到 A-8 琼脂， 划线分离。不要使用棉质拭子或木质棒。人型支原 体，35℃，5-10%CO2 环境；解脲支原体，35℃， 厌 氧环境， 培养 96 个小时。 使用显微镜观察平板菌落。 方法 14 � 取一颗 M.pneumoniae 冻干颗粒于 SP4 葡萄糖肉汤 中， 或将 KWIK-STIK 接种在肉汤中。 作系列梯度稀 释（例如，1:2，1:4，1:8，1:16，1:32） 。在 35℃下， 正常环境中培养。一旦肉汤从红色变成黄色（1-4 周） ，转接 0.2 mL 到 SP4 葡萄糖琼脂，划线分离。
2.
方法 1 � 胰蛋白胨大豆琼脂， 非选择性羊血琼脂， 标准计数平 板，或营养琼脂-----35℃，正常环境，24-48 小时。 方法 2 � 非选择性羊血琼脂----- 35℃， 正常环境， 24-48 小时。 在培养链球菌属和隐秘杆菌属时， CO2 环境可提高其生 长。推荐使用 5%CO2 环境来培养肺炎链球菌和其他甲型 溶血性链球菌。 方法 3 � 巧克力琼脂-----35℃，5％－10％ CO2环境，24-48 小时。 方法 4 � 厌氧血琼脂-----35℃，厌氧环境，48-72 小时； � 部分专性厌氧菌可能需要 5－7 天，才能充分生长； � 对于梭菌，以下新鲜配制的平板也可选用：营养琼 脂， 胰蛋白胨大豆琼脂和标准平板计数琼脂(标准方 法琼脂)；只是需额外培养 24 小时。 方法 5 � 沙保氏葡萄糖 Emmons 琼脂-----25℃， 正常环境， 2-7 天； � 非选择性羊血琼脂也可选用； � 以下培养基也可选用：营养琼脂，胰蛋白胨大豆琼 脂，马铃薯葡萄糖琼脂和标准平板计数琼脂，只是 需额外培养 24 小时。 方法 6 � 巧克力琼脂-----35℃，微需氧环境，48-72 小时。 方法 7 � Lowenstein Jensen 琼 脂 或 Middlebrook 琼 脂 -----35℃，5％－10％ CO2 环境或正常环境，7 天。
伯克霍尔德菌属 弯曲杆菌属
C Campylobacter sp.
注：巧克力琼脂是 Campylobacter jejuni(空肠弯曲杆菌 )的最适普遍生长 培养基。在最初的 48 小时培养期内不要揭开接过种的平皿。
Candida sp. Capnocytophaga sp. Cedecea sp. Cellulosimicrobium sp. Citrobacter sp. Cladosporium sp. Clostridium sp.
储存与有效期 (STORAGE AND EXPIRATION)
在原装密封瓶或含干燥剂的袋中的 LYFO DISK®、KWIK-STIK™ 和 KWIK-STIK™ Plus Microorganisms 三类产品应存放在 2°C -8°C。 冻干的微生物制剂在有效期内将保持其规格和性能，有效期在设备标签上标明。 若出现以下情况，LYFO DISK®, KWIK-STIK™ and KWIK-STIK™ Plus Microorganisms 三 类产品不能使用： � 储存不正确； 有过度暴露在湿热环境中的迹象； � � 已过有效期。
MBL 技术资料
TIB.081
操作流程
注：请严格按照 “操作流程 ” 、 “推荐生长条件 ”和“推荐培养方法 ” 注：请严格按照“ 操作流程” 推荐生长条件” 推荐培养方法” ， 活化标准菌株 活化标准菌株， 不建议使用实验室自己的方法及文献方法活化标准菌 株，否则菌种供应商不保证菌株的质量且不提供相应的售后服务。
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或营养琼脂，只是需要额外培养 24 小时 方法 21 � 添加了 15%去纤维蛋白羊血的巧克力琼脂或 Bordet Gengou 琼 脂 --35℃ 正 常 环 境 —2 天 到 一 周 . B.pertussis,MBL ﹟100,和 B.pertussis, MBL ﹟0843 培养基使用添加了 15% 去纤维蛋白羊血的 Bordet Gengou 琼脂 各类菌株的推荐培养方法见下页。