mega操作过程-多序列比对、进化树、
怎样使用MEGA建立进化树
如何使用MEGA4.0建立进化树1、首先是双击软件打开如下图所示
2、现在是处于DNA序列，而我们要做蛋白质的进化树的话，就如下操作
3、接下来我们要进行序列的输入，点击左边那个红箭头，则出现下面的窗口；
4、然后右击sequence 1,修改名字，如改成DPV
5、然后从Word 里复制蛋白质序列，然后在下面的位置粘贴
6、则可出现如下图的序列了
7、然后点击窗口上的保存图标保存
8、重复从3开始，直到你的序列输入完
9、序列输入完后进行最后的保存，方法如下：
要输入ul7两次保存名字—然后关闭这个窗口。
接下来打开
出现下面这个窗口！
接下来就可以建立各种样式的进化树！
嗯，只是把过程写出来，方便大家建立进化树，不足的地方，大家补充好！。
MEGA使用说明
用MEGA2做进化树的步骤(图示)1、打开程序如下图所示：2、MEGA2只能打开meg格式的文件，但是它可以把其他格式的多序列比对文件转换过来，我们在这里用aln格式（Clustal的输出文件）转换meg文件。
点File:Convert to MEGA Format...打开转换文件对话框如下图所示：3、选择文件和转换文件对话框，选择aln文件，点OK如下图所示：4、转换好的meg文件，点存盘保存meg文件，meg文件会和aln文件保存在同一个目录如下图所示：5、关闭转换窗口，回到主窗口，现在点面板上的“Click me to activate a data file”打开刚才的meg 文件如下图所示：6、选择meg文件，点“打开”如下图所示：7、程序会自动识别序列的类型，如果识别错误，请手工选择数据类型。
然后点OK就行了如下图所示：8、数据输入之后的样子，窗口下面有序列文件名和类型如下图所示：9、现在终于可以开始做Bootstrap验证和进化树了，MEGA的主要功能就是做Bootstrap验证的进化树分析，Bootstrap验证是对进化树进行统计验证的一种方法，可以作为进化树可靠性的一个度量。
各种算法虽然不同，但是操作方法基本一致，我们在此以UPGMA方法为例进行演示。
点下图所示的菜单项。
如下图所示：10、...会弹出如下的对话框，在此你可以选择计算参数。
如下图所示：11、Distance Options标签页中的Models可以下拉，其中有若干个计算距离的方法可以选择，在此默认泊松校验(Poisson Correction)作为计算距离的方法。
如下图所示：12、Include sites标签页中可以选择处理空缺或者缺失数据的方法，在此也用默认方法如下图所示：13、系统进化树的测试方法，可以选择用Bootstrap，也可以选择不进行测试。
重复次数(Replications)通常设定至少要大于100比较好，随机数种子可以自己随意设定，不会影响计算结果。
怎样使用MEGA建立进化树
如何使用建立进化树1、首先是双击软件打开如下图所示
2、现在是处于DNA序列,而我们要做蛋白质的进化树的话,就如下操作
3、接下来我们要进行序列的输入,点击左边那个红箭头,则出现下面的窗口；
4、然后右击sequence 1,修改名字,如改成DPV
5、然后从Word 里复制蛋白质序列,然后在下面的位置粘贴
6、则可出现如下图的序列了
7、然后点击窗口上的保存图标保存
8、重复从3开始,直到你的序列输入完
9、序列输入完后进行最后的保存,方法如下：
要输入ul7两次保存名字—然后关闭这个窗口; 接下来打开
出现下面这个窗口
接下来就可以建立各种样式的进化树
嗯,只是把过程写出来,方便大家建立进化树,不足的地方,大家补充好。
Mega的使用以及进化树的绘制
1.MEGA构建系统进化树的步骤2.CLUSTALX进行序列比对1.MEGA构建系统进化树的步骤1. 将要用于构建系统进化树的所有序列合并到同一个fasta格式文件，注意：所有序列的方向都要保持一致( 5’-3’)。
如图：2. 打开MEGA软件，选择"Alignment" - "Alignment Explorer/CLUSTAL"，在对话框中选择Retrieve sequences from a file, 然后点OK，找到准备好的序列文件并打开，如图：。
3. 在打开的窗口中选择”Alignment”-“Align by ClustalX” 进行对齐，对齐过程需要一段时间，对齐完成后，最好将序列两端切齐，选择两端不齐的部分，单击右键，选择delete即可，如图：。
4. 关闭当前窗口，关闭的时候会提示两次否保存，第一次无所谓，保存不保存都可以，第二次一定要保存，保存的文件格式是.meg。
根据提示输入Title，然后会出现一个对话框询问是否是Protein-coding nucleotide sequence data, 根据情况选择Yes或No。
最后出现一个对话框询问是否打开，选择Yes，如图：。
5. 回到MEGA主窗口，在菜单栏中选择”Phylogeny”-“Bootstrap Test of Phylogeny” -“Neighbor-joining”，打开一个窗口，里面有很多参数可以设置，如何设置这些参数请参考详细的MEGA说明书，不会设置就暂且使用默认值，不要修改，点击下面的Compute按钮，系统进化树就画出来了，如图：在菜单栏中选择”Phylogeny”-“Bootstrap Test of Phylogeny” –“Minimun-evolution”,如图：在菜单栏中选择”Phylogeny”-“Bootstrap Test of Phylogeny” –“Maximun-parsimony”,如图：在菜单栏中选择”Phylogeny”-“Bootstrap Test of Phylogeny” –“UPGMA”，如图：6. 最后，使用TreeExplorer窗口中提供的一些功能可以对生成的系统进化树进行调整和美化。
手把手教你构建系统进化树
9、要学生做的事，教职员躬亲共做； 要学生 学的知 识，教 职员躬 亲共学 ；要学 生守的 规则， 教职员 躬亲共 守。2021/6/292021/6/29Tuesday, June 29, 2021
10、阅读一切好书如同和过去最杰出 的人谈 话。2021/6/292021/6/292021/6/296/29/2021 8:10:36 AM
以外米缀蛾的cds为例，点击cdsTA格式，如何保 存见下图
一般情况下点
击该页的右上 角有send 图标， 选择后点击 create file 即 可下载。Txt可 以打开。
该图显示的是
序列全长的 FASTA格式下 载。
因为我采取基于氨
17、儿童是中心，教育的措施便围绕 他们而 组织起 来。2021/6/292021/6/292021/6/292021/6/29
2、Our destiny offers not only the cup of despair, but the chalice of opportunity. (Richard Nixon, American President )命运给予我们的不是失望之酒，而是机会之杯。二〇二一年六月十七日2021年6月17日星期四 3、Patience is bitter, but its fruit is sweet. (Jean Jacques Rousseau , French thinker)忍耐是痛苦的，但它的果实是甜蜜的。10:516.17.202110:516.17.202110:5110:51:196.17.202110:516.17.2021 4、All that you do, do with your might; things done by halves are never done right. ----R.H. Stoddard, American poet做一切事都应尽力而为，半途而废永远不行6.17.20216.17.202110:5110:5110:51:1910:51:19 5、You have to believe in yourself. That's the secret of success. ----Charles Chaplin人必须相信自己，这是成功的秘诀。-Thursday, June 17, 2021June 21Thursday, June 17, 20216/17/2021
进化树构建方法-MEGA
利用MEGA 来构建进化树（molecular evolutionary genetics analysis 分子进化遗传分析）打开mega5，选择Align----edit/built alignment----create a new alignment—OK选择DNA/protein出现新的对话框Open------选择已经保存好的用clustalx 经过比对保存的以.aln格式的文件打开之后，出现下面的页面双击文件名可以进行修改的。
我的就是从这里开始修改把A,B,C 都去掉，只留号码就好右键菜单点击delete 删除带※的那一行。
得到下面的图示，点击保存，重新起名字。
之后点击此图内的Alignment 选择Align by clustalW即可。
默认设置即可，点击OK就进行比对了，此后会出现一个过渡对话框，显示的是两两比对和多序列比对的过程之后回到初始页面，就是这个页面之后点File---点开，把刚才保留的文件点开然后出现下面的页面多了几个内容，点击TA的那个框框。
之后出现这样的框框图片然后在主程序中选择phylogeny---construct/test neighbor-joining tree,然后出现下面的页面黄色框框处的的参数是可以改变的，该图为我已经改变好的，把Bootstrap 的值改为1000 Methods根据文献上的参考改为了Kimura2-parameter model.之后点击compute,就出现了，而且还带有必需的支持率即自展值，是用来检验你所计算的进化树分支可信度的。
简单地讲就是把序列的位点都重排，重排后的序列再用相同的办法构树，如果原来树的分枝在重排后构的树中也出现了，就给这个分枝打上一分，如果没出现就给0分，这样经过你给定的repetitions 次（至少1000次）重排构树打分后，每个分枝就都得出分值，计算机会给你换算成bootstrap值。
重排的序列有很多组合，值越小说明分枝的可信度越低，最好根据数据的情况选用不同的构树方法和模型。
MEGA使用图解
用MEGA2做进化树的步骤(图示)1、打开程序如下图所示：2、MEGA2只能打开meg格式的文件，但是它可以把其他格式的多序列比对文件转换过来，我们在这里用aln格式（Clustal的输出文件）转换meg文件。
点File:Convert to MEGA Format...打开转换文件对话框如下图所示：3、选择文件和转换文件对话框，选择aln文件，点OK如下图所示：4、转换好的meg文件，点存盘保存meg文件，meg文件会和aln文件保存在同一个目录如下图所示：5、关闭转换窗口，回到主窗口，现在点面板上的“Click me to activate a data file”打开刚才的meg 文件如下图所示：6、选择meg文件，点“打开”如下图所示：7、程序会自动识别序列的类型，如果识别错误，请手工选择数据类型。
然后点OK就行了如下图所示：8、数据输入之后的样子，窗口下面有序列文件名和类型如下图所示：9、现在终于可以开始做Bootstrap验证和进化树了，MEGA的主要功能就是做Bootstrap验证的进化树分析，Bootstrap验证是对进化树进行统计验证的一种方法，可以作为进化树可靠性的一个度量。
各种算法虽然不同，但是操作方法基本一致，我们在此以UPGMA方法为例进行演示。
点下图所示的菜单项。
如下图所示：10、...会弹出如下的对话框，在此你可以选择计算参数。
如下图所示：11、Distance Options标签页中的Models可以下拉，其中有若干个计算距离的方法可以选择，在此默认泊松校验(Poisson Correction)作为计算距离的方法。
如下图所示：12、Include sites标签页中可以选择处理空缺或者缺失数据的方法，在此也用默认方法如下图所示：13、系统进化树的测试方法，可以选择用Bootstrap，也可以选择不进行测试。
重复次数(Replications)通常设定至少要大于100比较好，随机数种子可以自己随意设定，不会影响计算结果。
mega操作过程-多序列比对、进化树、
启发式算法
启发式算法（heuristic algorithms）：
计算机程序自动比对 通过特定的算法（如穷举法，启发式算法等），由计算机程 序自动搜索exhaustive alignment method）
将序列两两比对时的二维动态规划矩阵扩展到多维矩阵。即用 矩阵的维数来反映比对的序列数目。这种方法的计算量很大， 对于计算机系统的资源要求比较高，一般只有在进行少数的较 短的序列的比对的时候才会用到这个方法
大多数实用的多序列比对程序采用启发式算法 （heuristic algorithms），以降低运算复杂度。
随着序列数量的增加，算法复杂性也不断增加。用O （m1m2m3…mn）表示对n个序列进行比对时的算法复杂性， 其中mn是最后一条序列的长度。若序列长度相差不大，则 可简化成O（mn），其中n表示序列的数目，m表示序列的长 度。显然，随着序列数量的增加，序列比对的算法复杂性 按指数规律增长。
根据自己的需要选择合适的输出格式。
用ClustalW得到的多序列比对结果中，所有序列排列在一起，
并以特定的符号代表各个位点上残基的保守性，“*”号表示保 守性极高的残基位点；“.”号代表保守性略低的残基位点。
Progressive Alignment Method
Clustal W 使用
输入地址：/clustalw/ 设置选项 （next）
用于描述一组同源序列之间的亲缘关系的远近，应用到 分子进化分析中。 序列同源性分析：是将待研究序列加入到一组与之 同源，但来自不同物种的序列中进行多序列同时比 较，以确定该序列与其它序列间的同源性大小。
MEGA蛋白序列比对-保守序列分析-进化树
MEGA蛋⽩序列⽐对-保守序列分析-进化树
蛋⽩质序列进化（protein sequence phylogenetic}，⼀种⽤于测定各种⽣物之间遗传关系的技术。
#百度百科#⼀般通过蛋⽩质的氨基酸序列进⾏⽐对后建树，⽅法过程如下：
⾸先由NCBI或其他查询基因途径获取要⽐对的⽬的蛋⽩氨基酸序列（⽹站上有很多此类说明）我的由于序列较多，就先把氨基酸序列复制到⽂本⽂件中
之后将序列⽂本⽂件扩展名改为.fas
之后打开MEGA软件进⾏序列⽐对，选择Align---Edit/Build/Alignment---Retrieve sequence from a file---选择⽂件---确定，输出结果默认以最右端蛋氨酸对齐，如图
在建树之前序列应该以保守序列⽐对模式进⾏，选择Alignment---Align by ClustalW，以输出以保守序列⽐对结果，如图
保存序列⽐对⽂件，默认格式为*.mas格式，并选择phylogeny---construct/Test UPGMA Tree进⾏建树，步骤如图
选择蛋⽩序列
之后就会输出树，如下
之后可以根据不同要求更改树形，选择下图按钮进⾏输出设置并输出环形树
之后可以保存到指定⽂件，同时也可以将树以pdf格式导出，选择image---Save as pdf file或者png file。
怎样使用MEGA建立进化树
怎样使用MEGA建立进化树在进行生物信息学研究中，建立进化树是一项非常重要的任务。
MEGA （分子进化遗传学分析）是一款常用的软件，专门用于进行进化树和多序列分析。
下面将详细介绍如何使用MEGA建立进化树。
安装完成后，打开MEGA软件。
在MEGA的主界面上，有几个常用的功能选项，包括「File」、「Edit」、「View」、「Tools」、「Align」、「Phylogeny」和「Help」。
我们主要关注「Phylogeny」（进化树）选项。
在新窗口中，我们需要选择构建进化树的方法。
MEGA支持多种构建进化树的方法，包括Neighbor Joining、Maximum Parsimony、Maximum Likelihood和Bayesian等。
在这里，我们以Neighbor Joining方法为例进行演示。
在Neighbor Joining方法中，我们需要先选择计算进化距离的方法。
MEGA支持许多计算进化距离的方法，如P-distance、Kimura 2-parameter、Tamura 3-parameter等。
在这里，我们选择P-distance方法。
在选择了计算进化距离的方法后，我们还需要选择树的标准。
MEGA支持Bootstrap（Bootstrap方法是统计学中一种用于评估统计性信号和树的可靠性的方法）和Nearest-Neighbor Interchange等标准。
在这里，我们选择Bootstrap标准。
在选择了进化距离的方法和树的标准后，我们需要选择输入序列数据的文件格式。
MEGA支持多种格式的序列文件，如FASTA、PHYLIP和MEGA 等。
选择相应的格式后，我们需要导入序列数据。
可以通过从文件中导入或从剪贴板中粘贴来导入序列数据。
MEGA是一款非常强大的进化树分析软件，但对于初学者来说，可能需要一些时间去了解其中的各种选项和功能。
因此，建议在使用MEGA之前，先阅读相关文档和教程，以便更好地使用MEGA进行进化树的构建和分析。
怎样使用MEGA建立进化树
如何使用MEGA4、0建立进化树1、首先就是双击软件打开如下图所示
2、现在就是处于DNA序列,而我们要做蛋白质的进化树的话,就如下操作
3、接下来我们要进行序列的输入,点击左边那个红箭头,则出现下面的窗口;
4、然后右击sequence 1,修改名字,如改成DPV
5、然后从Word 里复制蛋白质序列,然后在下面的位置粘贴
6、则可出现如下图的序列了
7、然后点击窗口上的保存图标保存
8、重复从3开始,直到您的序列输入完
9、序列输入完后进行最后的保存,方法如下:
要输入ul7两次保存名字—然后关闭这个窗口。
接下来打开
出现下面这个窗口！
接下来就可以建立各种样式的进化树！
嗯,只就是把过程写出来,方便大家建立进化树,不足的地方,大家补充好！。
怎样使用MEGA建立进化树
如何使用MEGA4.0建立进化树1、首先是双击软件打开如下图所示
2、现在是处于DNA序列，而我们要做蛋白质的进化树的话，就如下操作
3、接下来我们要进行序列的输入，点击左边那个红箭头，则出现下面的窗口；
4、然后右击sequence 1,修改名字，如改成DPV
5、然后从Word 里复制蛋白质序列，然后在下面的位置粘贴
6、则可出现如下图的序列了
7、然后点击窗口上的保存图标保存
8、重复从3开始，直到你的序列输入完
9、序列输入完后进行最后的保存，方法如下：
要输入ul7两次保存名字—然后关闭这个窗口。
接下来打开
出现下面这个窗口！
接下来就可以建立各种样式的进化树！
嗯，只是把过程写出来，方便大家建立进化树，不足的地方，大家补充好！
（注：可编辑下载，若有不当之处，请指正，谢谢!）。
怎样使用MEGA建立进化树
如何使用MEGA4.0建立进化树1、首先是双击软件打开如下图所示
2、现在是处于DNA序列，而我们要做蛋白质的进化树的话，就如下操作
3、接下来我们要进行序列的输入,点击左边那个红箭头，则出现下面的窗口;
4、然后右击sequence 1,修改名字，如改成DPV
5、然后从Word 里复制蛋白质序列,然后在下面的位置粘贴
6、则可出现如下图的序列了
7、然后点击窗口上的保存图标保存
8、重复从3开始，直到你的序列输入完
9、序列输入完后进行最后的保存,方法如下:
要输入ul7两次保存名字-然后关闭这个窗口。
接下来打开
出现下面这个窗口！
接下来就可以建立各种样式的进化树！
嗯，只是把过程写出来，方便大家建立进化树，不足的地方，大家补充好!。
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基 在NCBI/EBI的FTP服务器上可以找到下载的软件包。
础 生
ClustalW 程序用选项单逐步指导用户进行操作，用户
物
可根据需要选择打分矩阵、设置空位罚分等。
信 息
ftp:///pub/software/
学
EBI的主页还提供了基于Web的ClustalW服务，用户可以
物
信
随着序列数量的增加，算法复杂性也不断增加。用O
息
（m1m2m3…mn）表示对n个序列进行比对时的算法复杂性，
学
其中mn是最后一条序列的长度。若序列长度相差不大，则
及 应
可简化成O（mn），其中n表示序列的数目，m表示序列的长
用
度。显然，随着序列数量的增加，序列比对的算法复杂性
按指数规律增长。
第二节 多序列比对程序及应用
及 应
把序列和各种要求通过表单提交到服务器上，服务器
用
把计算的结果用Email返回用户（或在线交互使用）。
/clustalw/
Progressive Alignment Method
ClustalW 程序
基
ClustalW对输入序列的格式比较灵活，可以是FASTA格式，还可
1 2 3 4 5 6 7 8 91
ⅠY D G G A V - E AL
基
础
ⅡY D G G - - - E AL
生
物
ⅢF E G G I L V E AL
信
息
学
ⅣF D - G I L V Q AV
及
应
ⅤY E G G A V V Q AL
用
表1 多序列比对的定义
表示五个短序列（I-V）的比对结果。通过插入空位，使5个序列中 大多数相同或相似残基放入同一列，并保持每个序列残基顺序不变
础 生
Clustal程序有许多版本
物
ClustalW（Thompson等，1994）是目前使用最广泛的多序列
信
比对程序
息
学
它的PC版本是ClustalX
及 应
作为程序的一部分，Clustal 可以输出用于构建进化
用
树的数据。
Progressive Alignment Method
ClustalW 程序：ClustalW 程序可以自由使用
基
础
生
物 信
概念
息 学
多序列比对的意义
及 应
多序列比对的打分函数
用
多序列比对的方法
1、概念
多序列比对（Multiple sequence alignment）
基 align multiple related sequences to achieve
础
optimal matching of the sequences.
基础生物信息学及应用
王兴平
内容
基
础
多序列比对
生
物 信
分子进化分析——系统发生树构建
息
学
核酸序列的预测与鉴定
及
应 用
酶切图谱制作
引物设计
基
础 生
多序列比对
物
信
息
学
及
应
用
内容：
基 础
多序列比对
生 物
多序列比对程序及应用
信
息
学
及
应
用
第一节、多序列比对
（Multiple sequence alignment）
基 础
Progressive Alignment Method
生
物
Iterative Alignment
信
息 学
Block-Based Alignment
及 应
DNASTAR
用
DNAMAN
1、Progressive Alignment Method
Clustal:
基 Clustal，是由Feng和Doolittle于1987年提出的。
基
将序列两两比对时的二维动态规划矩阵扩展到多维矩阵。即用
础
矩阵的维数来反映比对的序列数目。这种方法的计算量很大，
生
对于计算机系统的资源要求比较高，一般只有在进行少数的较
物 信
短的序列的比对的时候才会用到这个方法
息
DCA (Divide-and-Conquer Alignment）：a web-based
学
program that is semiexhaustive
及 应
http://bibiserv.techfak.uni-bielefeld.de/dca/
用
启发式算法
启发式算法（heuristic algorithms）：
基
础
大多数实用的多序列比对程序采用启发式算法
生
（heuristic algorithms），以降低运算复杂度。
物 信
说是非常必要的。
息
为了便于进行交互式手工比对，通常使用不同颜色表示具有
学
不同特性的残基，以帮助判别序列之间的相似性。
及 应
计算机程序自动比对
用
通过特定的算法（如穷举法，启发式算法等），由计算机程
序自动搜索最佳的多序列比对状态。
穷举法
穷举法（exhaustive alignment method）
及 应
较，以确定该序列与其它序列间的同源性大小。
用 其他应用，如构建profile，打分矩阵等
3、多序列比对的方法
手工比对
基
在运行经过测试并具有比较高的可信度的计算机程序（辅助
础
编辑软件如bioedit，seaview，Genedoc等）基础上，结合实
生
验结果或文献资料，对多序列比对结果进行手工修饰，应该
础 生
以是PIR、SWISS-PROT、GDE、Clustal、GCG/MSF、RSF等格式。
物
输出格式也可以选择，有ALN、GCG、PHYLIP和GDE等，用户可以
信
根据自己的需要选择合适的输出格式。
息 学
用ClustalW得到的多序列比对结果中，所有序列排列在一起，
及
并以特定的符号代表各个位点上残基的保守性，“*”号表示保
生
物
为了便于描述，对多序列比对过程可以给出下面的定义：把多序
信
列比对看作一张二维表，表中每一行代表一个序列，每一列代表
息
一个残基的位置。将序列依照下列规则填入表中：
学
及
（a）一个序列所有残基的相对位置保持不变；
应
（b）将不同序列间相同或相似的残基放入同一列，即尽可能将序列
用
间相同或相似残基上下对齐（下表）。
2、多序列比对的意义
用于描述一组序列之间的相似性关系，以便了解一个分
基 子家族的基本特征，寻找motif，保守区域等。
础 生
用于描述一组同源序列之间的亲缘关系的远近，应用到
物 分子进是将待研究序列加入到一组与之
学
同源，但来自不同物种的序列中进行多序列同时比