最新常规石蜡制片he染色技术幻灯片课件

4．酒精：单纯固定液为80%~95%的浓 度，不必水洗而直接脱水。多用于组织化学 中的糖原固定
酒精固定的组织易变硬和发脆、组织收 缩较大，所以不易长时间停留其中（70%酒 精除外）
可作为配制混合固定液的基本成分
5 ．其它固定液 丙酮 醋酸 三氯醋酸 氯化汞
苦味酸 重铬酸钾 铬酸 锇酸
（二）混合固定液
2. 固定液 动物血液量的2倍 动物体重（g）×7%×20（ml）
无论是局部灌注固定，还是全身灌 注固定，在灌注完毕后，必须立即将组 织块、器官或整个动物再放入同样的固 定液中进行后固定
（三）固定注意事项及影响因素
1．组织块不宜过大
2．软组织或较大块组织可先经2~3小时固定后， 再修整成小块重投入新配制的固定液内继续固定
固定小块组织(15×15×2mm)10小时左右
经它长期固定的组织，需经24~48小时的自 来水流水冲洗
甲醛单纯固定液的常用配方
10%甲醛水溶液 37%-40%甲醛液 自来水或蒸馏水
10ml 90ml
10%甲醛生理盐水溶液
37%-40%甲醛液 氯化钠
10ml 0. 85g
自来水或蒸馏水
90ml
2．多聚甲醛：一种渗透速度极快的 甲醛聚合物，在热水中可解聚成甲醛单体 而溶解，在接近水的沸点时溶解极快；也 可溶解于弱碱中。多聚甲醛溶液实际上是 新配制的甲醛液，宜临用前配制
5ml
0.2 mol/L PB（pH 7.4）
～100ml
第二节 固定后处理及切片
一、组织修整
固定结束后，将受挤压或不需要的 部分组织修切或整形，同时选择好包埋 面，称组织修整。修整可在冲洗前、也 可放在冲洗后
二、组织洗涤
洗去渗入组织内的固定液，再进行下一 步骤的操作；否则会妨碍染色效果，或引起 沉淀、结晶而影响观察，也可能会继续发生 化学反应造成后道操作困难
4%多聚甲醛单纯固定液的常用配方
多聚甲醛
4g
蒸馏水（或0.2 mol/L PB）
50ml
在通风橱内加热使之完全溶解，然后冷却
0.2 mol/L PB（或蒸馏水）
～100ml
3．戊二醛：一种常用的醛类固定 剂，能较好的保存组织结构，但其穿透 力弱，作为单纯固定液多用于电镜技术 中。市售的戊二醛是25%的溶液，使用 时需配制成1%~6%的不同浓度
3．固定液的量是组织块大小的5-20倍为宜，在 固定组织的瓶底垫上脱脂棉、数层纱布或滤纸
4．固定时间的长短视固定剂的种类、温度、 组织块的大小而定
四、固定液
（一）单纯固定液
1．甲醛（福尔马林）：商品甲醛的浓度是 37% ~ 40%的甲醛水溶液。常用甲醛的固定液浓 度是10%，而实际甲醛浓度只有4%
液极难渗入内部的组织标本） （1）局部灌注固定（肺、肝、肾、脑等） （2）全身灌注固定 （小鼠、大鼠、兔、
狗、猴、人） 4. 微波固定法
灌注过程
充分暴露心脏 针尖插入左心室或升主动脉中 快速灌注生理盐水 剪开右心耳（或右心房）放血 换灌固定液，先快后慢输入
用量
1. 生理盐水 大鼠需用80-100ml、兔150-200ml、 猫200-250ml、猴300-500ml、 狗800-1000ml
四、透明
（一）透明意义及透明剂
组织脱水后，内部仅含脱水剂，但大多数脱 水剂不能与石蜡相溶，石蜡仍不能浸入组织内进 行包埋和切片。为此，需要一种既能溶于脱水剂 又能溶于包埋剂（石蜡）的溶剂，以便逐步将脱 水剂置换成包埋剂。这一过程往往使组织呈半透 明状，故称透明
10ml 30ml 60ml
75ml 25ml 5ml
4．Helly 液
重铬酸钾
2.5g
升汞
5g
蒸馏水
100ml
（以上是Helly储存液）
甲醛液(37%~40%) (临用时加入) 5ml
5．1%多聚甲醛-1.25%戊二醛固定液
多聚甲醛
1g
蒸馏水
50ml
在通风橱内加热使之完全溶解，然后冷却
25%戊二醛
1．水洗涤法：凡用水配制、或含铬、锇 等的固定液所固定的组织块，需用水洗涤
2．酒精洗涤法：凡用酒精、或酒精混合 液、或含有苦味酸等固定液固定的组织块， 多采用酒精洗涤
三、组织脱水
（一）脱水意义与脱水剂
因水和石蜡不能相溶，而组织经固定及 水洗后含有水分，所以不能直接用石蜡进行 包埋。需用某些溶剂逐步置换组织块中的水 分，称脱水
常规石蜡制片he染色技 术
第二章
光镜Βιβλιοθήκη Baidu本的基本制作技术
动物致死方法
1．断头法 2．击头法 3．麻醉法 4．股动脉放血法 5．空气栓塞法
细胞标本制备
1. 印片法 2. 穿刺法 3. 沉淀法 4. 培养细胞标本制备
二、取材及注意事项
1．材料保持新鲜 2．组织块免受挤压 3．组织块力求小而薄 4．尽量保持组织的原有形态 5．选取好组织块的切面 6．动物品种的选择和熟悉取材的解剖位置 7．切除不需要的部分 8．保持材料的清洁
用多种具有固定作用的试剂混合配 制的固定液，达到各试剂在固定作用中 具有的优缺点平衡目的
常用混合固定液
1．酒精-甲醛液（A-F 液） 95%或无水酒精（A） 37%~40%甲醛液（F）
2．Carnoy液 冰醋酸 氯仿 无水酒精
3．Bouin 液 饱和苦味酸水溶液 甲醛液（37%~40%） 冰醋酸
90ml 10ml
脱水剂必须具有下列特性：1）脱水剂 能与水按任意比例混合；2）脱水剂高浓度 时不含水分；3）脱水剂也能与透明剂按任 意比例互相混合
脱水剂中最常用的是酒精。
一般从70%酒精开始脱水，逐步 升高酒精浓度；脱水时间根据组织块 的种类、大小、及使用的固定液种类 等因素而定
（二）脱水步骤和时间
以18mm×18mm，厚约2~3mm的组织块 为例，其脱水步骤和参考时间如下
70%酒精
2~5小时(可长期保存组织)
80%酒精
2~5小时
90%酒精
2~5小时
95%酒精（Ⅰ） 2~5小时
95%酒精（Ⅱ） 2~5小时
无水酒精（Ⅰ） 30分钟
无水酒精（Ⅱ） 30分钟
无水酒精（Ⅲ） 30分钟
（三）脱水注意事项
1．组织脱水必须掌握由低浓度逐步 过渡到高浓度的原则
2．脱水时间要适度 3．组织脱水要彻底干净
三、组织固定法
固定是使要观察的组织构造尽量 接近它取材前的状态
（一）固定目的
1．标本不发生离开身体后或死后变化 2．随后处理中，标本不易损坏 3. 组织块硬化 4．使组织内各种结构产生不同的折光
率，或对染料具有不同的亲和力
（二）固定方法
1．蒸气固定法（较细小而薄的标本） 2．小块组织固定法（直接投入固定液中） 3．注射、灌注固定法（体积过大或固定