硫氧还蛋白氧化还原酶(thioredoxin reductase, TrxR)试剂盒说明书
硫氧还蛋白_Trx_的研究进展
分子植物育种，２００６年，第４卷，第６（Ｓ）期，第７８－８２页ＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｌａｎｔＢｒｅｅｄｉｎｇ，２００６，Ｖｏｌ．４，Ｎｏ．６（Ｓ），７８－８２专题介绍Ｒｅｖｉｅｗ硫氧还蛋白（Ｔｒｘ）的研究进展郑琼马旭俊杨传平＊教育部林木遗传育种与生物技术重点实验室，东北林业大学林木遗传育种省级重点实验室，东北林业大学林学院，哈尔滨，１５００４０＊通讯作者，ｙａｎｇｃｐ＠ｎｅｆｕ．ｅｄｕ．ｃｎ摘要硫氧还蛋白Ｔｈｉｏｒｅｄｏｘｉｎ（Ｔｒｘ）是一类高度保守的低分子量蛋白质。
Ｔｒｘ广泛分布于植物、细菌、酵母和动物中。
根据氨基酸序列的不同，Ｔｒｘ分为家族Ⅰ和家族Ⅱ２个家族。
根据最初结构的不同，Ｔｒｘ家族Ⅰ又被分为６大类型：ｈ，ｆ，ｍ，ｏ，ｘ和ｙ。
不同类型的Ｔｒｘ在不同生物以及细胞内的不同区域分布不同。
硫氧还蛋白具有多种生物学功能，对维持体内稳定的氧化还原状态具有重要的作用。
Ｔｒｘ具有调节细胞生长、抑制凋亡、调节基因转录等功能。
Ｔｒｘ还与植物抗逆性相关，如参与植物抗旱、耐热和抗氧化胁迫过程，调节抗逆基因的表达。
因此，我们可以将硫氧还蛋白基因通过转基因技术导入植物体中，在植物遗传性状改良等方面具有广泛的应用前景。
本文综述了硫氧还蛋白的类型、组织分布、生物学功能以及与植物抗逆性的关系。
关键词硫氧还蛋白（Ｔｒｘ），氧化还原，抗逆性ＦｕｎｃｔｉｏｎａｌＲｏｌｅｓｏｆＴｈｉｏｒｅｄｏｘｉｎ（Ｔｒｘ）ＺｈｅｎｇＱｉｏｎｇＭａＸｕｊｕｎＹａｎｇＣｈｕａｎｐｉｎｇ＊ＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＦｏｒｅｓｔｒｙＧｅｎｅｔｉｃｓａｎｄＢｒｅｅｄｉｎｇａｎｄＢｉｏ－ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎ，ＴｈｅＰｒｏｖｉｎｃｉａｌＫｅｙＬａｂｏｆＦｏｒｅｓｔｒｙＧｅ－ｎｅｔｉｃｓａｎｄＢｒｅｅｄｉｎｇ，ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＦｏｒｅｓｔｒｙ，ＮｏｒｔｈｅａｓｔＦｏｒｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｒｂｉｎ，１５００４０＊Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ，ｙａｎｇｃｐ＠ｎｅｆｕ．ｅｄｕ．ｃｎＡｂｓｔｒａｃｔＴｈｉｏｒｅｄｏｘｉｎ（Ｔｒｘ）ｉｓａｓｍａｌｌａｎｄｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｖｅｐｒｏｔｅｉｎ．Ｔｒｘｉｓｕｂｉｑｕｉｔｏｕｓｌｙｆｏｕｎｄｉｎｐｌａｎｔｓ，ｂａｃｔｅｒｉａ，ｙｅａｓｔｓａｎｄａｎｉｍａｌｓ．Ａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｓ，ＴｒｘｉｓｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｆａｍｉｌｙⅠａｎｄｆａｍｉｌｙⅡ．Ａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｏｆｔｈｅｉｎｉｔｉａｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ＴｒｘｆａｍｉｌｙⅠｉｓｃｌａｓｓｉｆｉｅｄｉｎｔｏ６ｇｒｏｕｐｓ：ｈ，ｆ，ｍ，ｏ，ｘａｎｄｙ．ＤｉｆｆｅｒｅｎｔｇｒｏｕｐｓｏｆＴｒｘｅｘｉｓｔｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｏｒｇａｎｉｓｍｓａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔａｐａｒｔｍｅｎｔｓｏｆａｃｅｌｌ．Ｔｒｘｈａｓｖａｒｉｏｕｓｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｆｕｎｃｔｉｏｎｓｉｎｋｅｅｐｉｎｇｓｔａｂｌｅｒｅｄｏｘｓｔａｔｕｓｏｆｃｅｌｌｓ．Ｔｒｘｐｌａｙｓｃｒｕｃｉａｌｒｏｌｅｓｉｎｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｃｅｌｌｇｒｏｗｔｈ，ａｐｏｐｔｏｓｉｓａｎｄｇｅｎｅｔｒａｎｓｃｒｉｐ－ｔｉｏｎ．Ｉｔｉｓａｌｓｏｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｐｌａｎｔｓｔｒｅｓｓｔｏｌｅｒａｎｃｅａｎｄｒｅｇｕｌａｔｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｓｔｒｅｓｓｒｅｌａｔｅｄｇｅｎｅｓ．Ｔｈｅｓｔｒｅｓｓｅｓｉｎ－ｃｌｕｄｅｄｒｏｕｇｈｔ，ｈｅａｔａｎｄｏｔｈｅｒｒｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｔｒｅｓｓｅｓ．ＳｏｗｅｅｘｐｅｃｔＴｒｘｇｅｎｅｃａｎｂｅｆｕｒｔｈｅｒｕｓｅｄｉｎｐｌａｎｔｔｒａｉｔｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｂｙｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎｇｔｈｉｓｇｅｎｅｉｎｔｏｐｌａｎｔｓ．Ｔｈｉｓｐａｐｅｒｒｅｖｉｅｗｅｄｔｈｅｔｙｐｅ，ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎａｎｄｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｆｕｎｃ－ｔｉｏｎｓｏｆＴｒｘａｎｄｉｔｓｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｗｉｔｈｐｌａｎｔｓｔｒｅｓｓｔｏｌｅｒａｎｃｅ．ＫｅｙｗｏｒｄｓＴｈｉｏｒｅｄｏｘｉｎ（Ｔｒｘ），Ｒｅｄｏｘ，Ｓｔｒｅｓｓｔｏｌｅｒａｎｃｅ硫氧还蛋白（ｔｈｉｏｒｅｄｏｘｉｎ，Ｔｒｘ）是一类分布广泛的低分子量的蛋白质，它们在进化上相当保守，有一个二硫化物活性中心Ｔｒｐ－Ｃｙｓ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ（ＣＧＰＣ），ＣＧＰＣ中的２个Ｃｙｓ分别为Ｃｙｓ３２和Ｃｙｓ３５，人和其它哺乳动物Ｔｒｘ还含有另外３个Ｃｙｓ残基，即Ｃｙｓ６２、Ｃｙｓ６９和Ｃｙｓ７３，这些Ｃｙｓ残基能可逆地催化许多氧化还原反应，赋予Ｔｒｘ独特的生物学特性。
硫氧还蛋白还原酶活性在肺癌患者化疗前后的变化
硫氧还蛋白还原酶活性在肺癌患者化疗前后的变化彭传真;宋兆录;赵永利;李贵新;冷宁;李方超;李碧蓉【摘要】目的：探讨肺癌病人的血浆硫氧还蛋白还原酶( TR)活性及化疗前后的变化。
方法收集2012年10月至2013年1月本院49例肺癌病人化疗前后的血浆和同期49例健康查体人员的血浆,进行硫氧还蛋白还原酶活性检测。
结果49例肺癌病人化疗前血浆TR活性值为4.34±6.52 U/mL,化疗后为3.93±6.30 U/mL,健康查体人员为－5.61±7.39 U/mL,数据均采用LOG(X＋4IQR)转换,并经t检验,结果显示,化疗前、后TR活性与健康查体组(对照组)相比较,P均<0.05。
化疗前、后TR活性的变化,有统计学差异。
结论肺癌病人的TR活性高；肺癌病人化疗前后血浆TR活性随疾病好转有降低。
%Objective To investigate the activity of thioredoxin reductase ( TR ) in lung cancer patients and the change before and after chemotherapy. Methods 49 patients with lung cancer were enrolled in the study,49 healthy sub￣jects served as control.The activity of TR in plasma was assayed. Results TR activity in the plasma of 49 patients with lung cancer before and aftrer chemotherapy is 4. 34 ± 6. 52U/mL, and 3. 93 ± 6. 30U/mL, respectively. While the healthy subjects is -5.61±7.39U/e LOG(X+4IQR) transform and by group t test,result showed the activity of TR between before chemotherapy and healthy group ( control group) ,and between after chemotherapy and healthy group were significant difference,( P<0. 05 ) . By paired t test, the change of the TR activity before and after chemotherapy was significant difference( P<0.05) . Conclusion Lung cancer patients have high TR activity,the plasma TRactivity decreased with the improvement of the disease in the lung cancer patients before and after chemotherapy.【期刊名称】《中南医学科学杂志》【年(卷),期】2016(044)004【总页数】3页(P425-427)【关键词】肺癌;硫氧还蛋白还原酶;化疗;活性【作者】彭传真;宋兆录;赵永利;李贵新;冷宁;李方超;李碧蓉【作者单位】青岛市胶州中心医院，山东青岛，266300;青岛市胶州中心医院，山东青岛，266300;青岛市胶州中心医院，山东青岛，266300;青岛市胶州中心医院，山东青岛，266300;青岛市胶州中心医院，山东青岛，266300;青岛市胶州中心医院，山东青岛，266300;邵阳医学高等专科学校生理教研室【正文语种】中文【中图分类】R734.2在恶性肿瘤中，肺癌的发病率及死亡率居首位[1]。
Thioredoxin Redox State Determination：硫氧还蛋白的氧化还原状态的确定
Hong Nguyen Mentor: Dr. Gary Merrill
Thioredoxin
protein essential for life in mammals acts as an antioxidant to prevent oxidative stress acts as an electron donor in a variety of cellular
IAA/IAM
IAA IAM
urea PAGE
0
-
-1 -2 -3 -4 -5 + -6
SASASASASASA-
SM
SM or SA-
SM
SM or SA-
SM
SM or SA-
SM
SM or SA-
SM
SM or SA-
SM
SM or SA-
1
2
3
4
TrxSS TrΒιβλιοθήκη SHRepresentative results
Acknowledgement
Dr. Gary Merrill
Biochemistry & Biophysics Lab
Dr. Kevin Ahern Howard Hughes Medical Institute Undergraduate, Research, Innovation, Scholarship &
HH SS
RNR reduced
SS
reduced Trx
oxidized Trx
Thioredoxin reductase & thioredoxin
硫氧还蛋白还原酶小分子抑制剂的发现及抗肿瘤机制探讨
硫氧还蛋白还原酶小分子抑制剂的发现及抗肿瘤机制探讨硫氧还蛋白还原酶小分子抑制剂的发现及抗肿瘤机制探讨概述：肿瘤是全球范围内的主要致死疾病之一，因此，研究肿瘤的发生机制及开发新的治疗方法一直是科学家们的重要任务。
近年来，对肿瘤细胞内还原酶的研究表明，硫氧还蛋白还原酶（thioredoxin reductase, TrxR）在肿瘤细胞中起着重要的作用。
本文将介绍硫氧还蛋白还原酶小分子抑制剂的发现以及其在抗肿瘤机制方面的探讨。
硫氧还蛋白还原酶小分子抑制剂的发现：硫氧还蛋白还原酶是一种钴卟啉依赖的酶，可以将还原型硫氧还蛋白还原酶（Trx）重新还原为活性的二硫键形式。
研究表明，TrxR在许多肿瘤细胞中高度表达，并且与肿瘤细胞的增殖、转移和抗药性密切相关。
因此，开发高选择性的TrxR抑制剂成为治疗肿瘤的潜在策略。
研究人员通过化学合成和药物筛选等方法发现了许多TrxR抑制剂。
其中，一些小分子化合物显示出很高的抑制活性，并且被证实对多种肿瘤细胞有显著的抗肿瘤作用。
通过结构活性关系研究，研究人员发现这些抑制剂能够与TrxR活性中心的蛋白质残基形成稳定的非共价连接，从而抑制其催化活性。
在抗肿瘤机制方面：通过研究，发现TrxR抑制剂能够通过多种途径发挥抗肿瘤作用。
首先，抑制TrxR可以干扰细胞内的氧化还原平衡，导致细胞内氧化应激增加，从而减少肿瘤细胞的生存能力。
其次，TrxR抑制剂还可以通过抑制肿瘤细胞的增殖和诱导细胞凋亡来发挥抗肿瘤作用。
最后，一些研究表明TrxR抑制剂还具有抑制肿瘤细胞迁移和侵袭的能力。
此外，一些研究还发现TrxR抑制剂可以增强化疗药物对肿瘤细胞的敏感性，并减少肿瘤细胞对药物的耐药性。
这一发现为联合应用TrxR抑制剂和化疗药物提供了新的治疗策略。
结论：硫氧还蛋白还原酶小分子抑制剂的发现为肿瘤治疗提供了新的方向，其抗肿瘤机制主要通过干扰细胞内的氧化还原平衡、抑制肿瘤细胞增殖和诱导细胞凋亡等方式实现。
硫氧还蛋白_Trx_的研究进展
分子植物育种，２００６年，第４卷，第６（Ｓ）期，第７８－８２页ＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｌａｎｔＢｒｅｅｄｉｎｇ，２００６，Ｖｏｌ．４，Ｎｏ．６（Ｓ），７８－８２专题介绍Ｒｅｖｉｅｗ硫氧还蛋白（Ｔｒｘ）的研究进展郑琼马旭俊杨传平＊教育部林木遗传育种与生物技术重点实验室，东北林业大学林木遗传育种省级重点实验室，东北林业大学林学院，哈尔滨，１５００４０＊通讯作者，ｙａｎｇｃｐ＠ｎｅｆｕ．ｅｄｕ．ｃｎ摘要硫氧还蛋白Ｔｈｉｏｒｅｄｏｘｉｎ（Ｔｒｘ）是一类高度保守的低分子量蛋白质。
Ｔｒｘ广泛分布于植物、细菌、酵母和动物中。
根据氨基酸序列的不同，Ｔｒｘ分为家族Ⅰ和家族Ⅱ２个家族。
根据最初结构的不同，Ｔｒｘ家族Ⅰ又被分为６大类型：ｈ，ｆ，ｍ，ｏ，ｘ和ｙ。
不同类型的Ｔｒｘ在不同生物以及细胞内的不同区域分布不同。
硫氧还蛋白具有多种生物学功能，对维持体内稳定的氧化还原状态具有重要的作用。
Ｔｒｘ具有调节细胞生长、抑制凋亡、调节基因转录等功能。
Ｔｒｘ还与植物抗逆性相关，如参与植物抗旱、耐热和抗氧化胁迫过程，调节抗逆基因的表达。
因此，我们可以将硫氧还蛋白基因通过转基因技术导入植物体中，在植物遗传性状改良等方面具有广泛的应用前景。
本文综述了硫氧还蛋白的类型、组织分布、生物学功能以及与植物抗逆性的关系。
关键词硫氧还蛋白（Ｔｒｘ），氧化还原，抗逆性ＦｕｎｃｔｉｏｎａｌＲｏｌｅｓｏｆＴｈｉｏｒｅｄｏｘｉｎ（Ｔｒｘ）ＺｈｅｎｇＱｉｏｎｇＭａＸｕｊｕｎＹａｎｇＣｈｕａｎｐｉｎｇ＊ＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＦｏｒｅｓｔｒｙＧｅｎｅｔｉｃｓａｎｄＢｒｅｅｄｉｎｇａｎｄＢｉｏ－ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎ，ＴｈｅＰｒｏｖｉｎｃｉａｌＫｅｙＬａｂｏｆＦｏｒｅｓｔｒｙＧｅ－ｎｅｔｉｃｓａｎｄＢｒｅｅｄｉｎｇ，ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＦｏｒｅｓｔｒｙ，ＮｏｒｔｈｅａｓｔＦｏｒｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｒｂｉｎ，１５００４０＊Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ，ｙａｎｇｃｐ＠ｎｅｆｕ．ｅｄｕ．ｃｎＡｂｓｔｒａｃｔＴｈｉｏｒｅｄｏｘｉｎ（Ｔｒｘ）ｉｓａｓｍａｌｌａｎｄｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｖｅｐｒｏｔｅｉｎ．Ｔｒｘｉｓｕｂｉｑｕｉｔｏｕｓｌｙｆｏｕｎｄｉｎｐｌａｎｔｓ，ｂａｃｔｅｒｉａ，ｙｅａｓｔｓａｎｄａｎｉｍａｌｓ．Ａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｓ，ＴｒｘｉｓｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｆａｍｉｌｙⅠａｎｄｆａｍｉｌｙⅡ．Ａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｏｆｔｈｅｉｎｉｔｉａｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ＴｒｘｆａｍｉｌｙⅠｉｓｃｌａｓｓｉｆｉｅｄｉｎｔｏ６ｇｒｏｕｐｓ：ｈ，ｆ，ｍ，ｏ，ｘａｎｄｙ．ＤｉｆｆｅｒｅｎｔｇｒｏｕｐｓｏｆＴｒｘｅｘｉｓｔｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｏｒｇａｎｉｓｍｓａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔａｐａｒｔｍｅｎｔｓｏｆａｃｅｌｌ．Ｔｒｘｈａｓｖａｒｉｏｕｓｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｆｕｎｃｔｉｏｎｓｉｎｋｅｅｐｉｎｇｓｔａｂｌｅｒｅｄｏｘｓｔａｔｕｓｏｆｃｅｌｌｓ．Ｔｒｘｐｌａｙｓｃｒｕｃｉａｌｒｏｌｅｓｉｎｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｃｅｌｌｇｒｏｗｔｈ，ａｐｏｐｔｏｓｉｓａｎｄｇｅｎｅｔｒａｎｓｃｒｉｐ－ｔｉｏｎ．Ｉｔｉｓａｌｓｏｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｐｌａｎｔｓｔｒｅｓｓｔｏｌｅｒａｎｃｅａｎｄｒｅｇｕｌａｔｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｓｔｒｅｓｓｒｅｌａｔｅｄｇｅｎｅｓ．Ｔｈｅｓｔｒｅｓｓｅｓｉｎ－ｃｌｕｄｅｄｒｏｕｇｈｔ，ｈｅａｔａｎｄｏｔｈｅｒｒｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｔｒｅｓｓｅｓ．ＳｏｗｅｅｘｐｅｃｔＴｒｘｇｅｎｅｃａｎｂｅｆｕｒｔｈｅｒｕｓｅｄｉｎｐｌａｎｔｔｒａｉｔｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｂｙｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎｇｔｈｉｓｇｅｎｅｉｎｔｏｐｌａｎｔｓ．Ｔｈｉｓｐａｐｅｒｒｅｖｉｅｗｅｄｔｈｅｔｙｐｅ，ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎａｎｄｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｆｕｎｃ－ｔｉｏｎｓｏｆＴｒｘａｎｄｉｔｓｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｗｉｔｈｐｌａｎｔｓｔｒｅｓｓｔｏｌｅｒａｎｃｅ．ＫｅｙｗｏｒｄｓＴｈｉｏｒｅｄｏｘｉｎ（Ｔｒｘ），Ｒｅｄｏｘ，Ｓｔｒｅｓｓｔｏｌｅｒａｎｃｅ硫氧还蛋白（ｔｈｉｏｒｅｄｏｘｉｎ，Ｔｒｘ）是一类分布广泛的低分子量的蛋白质，它们在进化上相当保守，有一个二硫化物活性中心Ｔｒｐ－Ｃｙｓ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ（ＣＧＰＣ），ＣＧＰＣ中的２个Ｃｙｓ分别为Ｃｙｓ３２和Ｃｙｓ３５，人和其它哺乳动物Ｔｒｘ还含有另外３个Ｃｙｓ残基，即Ｃｙｓ６２、Ｃｙｓ６９和Ｃｙｓ７３，这些Ｃｙｓ残基能可逆地催化许多氧化还原反应，赋予Ｔｒｘ独特的生物学特性。
硫氧还蛋白过氧化物酶(thioredoxin peroxidase, TPX)活性测定试
货号：QS1203 规格：50管/24样硫氧还蛋白过氧化物酶（thioredoxin peroxidase,TPX）试剂盒说明书紫外分光光度法注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：TPX属于过氧化物酶家族，在体内主要通过还原过氧化氢和一些氢过氧化物来实现抗氧化作用，功能与GPX类似，也是谷胱甘肽氧化还原循环关键酶之一。
TPX普遍存在于各种生物体内，如酵母、植物、动物、原生动物、寄生虫、细菌和古细菌，在进化上高度保守。
TPX与细胞增殖、分化、细胞凋亡及肿瘤发生调控密切相关。
TPX的主要功能包括细胞脱毒、抗氧化和调节由过氧化氢介导的信号转导和免疫反应。
测定原理：TPX催化H2O2氧化二硫苏糖醇（DTT），H2O2的吸收波长为240nm，通过测定240nm吸光度的下降速率，通过对照减去过氧化氢酶（CAT）催化分解的H2O2，即可计算出TPX活性。
因此，本试剂盒可以同时测定样品TPX和CAT活性。
自备实验用品及仪器:紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1mL石英比色皿和蒸馏水试剂组成和配制:试剂一：液体×1瓶，室温保存。
试剂二：液体×1瓶，- 20℃保存。
试剂三：液体×1瓶，4℃。
粗酶液提取：1.组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。
8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。
2.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3.血清等液体：直接测定。
TPX测定操作：1. 分光光度计预热30min，调节波长到240 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂一和试剂二置于25℃（一般物种）或者37℃（哺乳动物）水浴预热30 min。
硫氧还蛋白氧化还原酶(TrxR)活性检测试剂盒说明书 微量法
硫氧还蛋白氧化还原酶（TrxR）活性检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定货号：BC1155规格：100T/96S产品内容：试剂一：液体120mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存。
临用前加入2mL蒸馏水溶解。
试剂三：粉剂×1瓶，4℃避光保存。
临用前加入2mL蒸馏水溶解。
试剂四：液体×1支，-20℃避光保存。
产品说明：TrxR是一种NADPH依赖的包含FAD结构域的二聚体硒酶，属于吡啶核苷酸-二硫化物氧化还原酶家族成员，与硫氧还蛋白以及NADPH共同构成了硫氧还蛋白系统。
TrxR与GR活性类似，催化GSSG还原生成GSH，是谷胱甘肽氧化还原循环关键酶之一。
TrxR催化NADPH还原DTNB生成TNB和NADP+，TNB在412nm有特征吸收峰，通过测定412nm波长处TNB 的增加速率，即可计算TrxR活性。
自备仪器和用品：低温离心机、可调节移液器、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、蒸馏水。
操作步骤：一、粗酶液提取：1、称约0.1g样品，加入1mL试剂一，冰上充分研磨，10000rpm4℃离心10min，取上清液待测。
2、细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3s，间隔7s，总时间3min），然后10000rpm，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
测定前将上清液与试剂四以50：1的体积比混匀（即取100μL上清液加入2μL试剂四混合）37℃水浴30min后至冰上。
二、TrxR测定操作：1.分光光度计或酶标仪预热30min后，调节波长到412nm，用蒸馏水调零。
2.试剂一在25℃（一般物种）或者37℃（哺乳动物）预热30min。
3.空白管：取微量玻璃比色皿或96孔板，加入20μL试剂二，20μL试剂三，160μL试剂一，迅速混匀后于412nm测定10s时的吸光度，37℃水浴5min迅速拿出测量412nm下的吸光度记为A1和A2。
硫氧还蛋白还原酶1及其相关信号通路研究进展
硫氧还蛋白还原酶1及其相关信号通路研究进展李宝荣;熊咏民【摘要】硫氧还蛋白还原酶1(thioredoxin reductase 1,TrxR1)是维持机体稳态重要屏障的抗氧化系统成员.近年来,TrxR1相关信号通路的研究逐步受到关注.因此,本文将从硫氧还蛋白系统着手,对TrxR1及其相关信号通路的研究进展进行阐述,以期为TrxR1在疾病中的作用机制阐明提供新思路.【期刊名称】《国外医学（医学地理分册）》【年(卷),期】2018(039)003【总页数】4页(P272-275)【关键词】硫氧还蛋白还原酶1;核因子E2相关因子-2;c-Jun N-端激酶;κ基因结合核因【作者】李宝荣;熊咏民【作者单位】西安交通大学医学部公共卫生学院地方病研究所,国家卫计委微量元素与地方病重点实验室,陕西西安710061;西安交通大学医学部公共卫生学院地方病研究所,国家卫计委微量元素与地方病重点实验室,陕西西安710061【正文语种】中文【中图分类】R684人体抗氧化系统是机体应对各种内外环境刺激以及维持机体代谢平衡的重要屏障，其可分为酶性抗氧化系统和非酶性抗氧化系统。
前者主要由硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase,TrxR)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、过氧化氢酶(catalase,CAT)等组成；后者主要包括具有氧化还原活性的非酶性物质(例如：谷胱甘肽、硫氧还蛋白(Trx)、维生素E、维生素C等)。
硫氧还蛋白系统是机体酶性抗氧化系统的重要组成部分，主要通过信号通路的转导参与细胞呼吸、代谢、免疫及其目标信号蛋白活性和功能的调节等生物学过程，进而在维持机体稳态以及调节氧化还原信号等过程中发挥至关重要的作用。
1 硫氧还蛋白系统TrxR、Trx和还原型辅酶(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate，NADPH)共同构成了硫氧还蛋白系统，是细胞内重要的抗氧化系统之一。
硫氧还蛋白还原酶的生理学功能进展
注损伤 作 用 。蔡 成 等[5]研 究 高 浓 度 氧 暴 露 对 人 肺 泡Ⅱ型 上 皮 细 胞 来源的肺腺癌 A549 细 胞 中 Trx2 的 影 响 ，结 果 发 现 诱 导 A549 细 胞中 Trx2 mRNA 和蛋白水平发生动态变化，这种变化表 明 Trx 对 高 氧 肺 损伤 线 粒 体 可能 起 重 要的 保 护 作 用[5]。TrxR 所 在 的 Trx 系统可再生部分抗氧化物质，包括维生素 C 和维生素 E 的还原、 硫 辛 酸 、泛 醌 （辅 酶 Q10）、蛋 氨 酸 亚 砜 还 原 酶 、含 硒 物 质 等 ，实 现 对 氧 化 还 原 平 衡 的 调 控 [6-7]。 1.2 调控细胞生长和凋亡 TrxR 活性抑制到低于正常水平会产 生对细胞生长的抑制。核苷酸还原酶是在复制细胞或者快速生长 的 肿 瘤 细 胞 中 在 DNA 合 成 期 （S 期 ）特 异 表 达 的 酶 ，具 有 核 糖 核 苷酸向 2′-脱氧核 糖 核 苷 酸 转 变 的 功 能 并 且 因 此 提 供 了 DNA 合 成 和 修复 的 前 体。细 胞 用 TrxR 抑制 剂 阿 霉 素 和 地 丫 醌 中 任 何 一 种化合物处理导致核苷酸还原酶的抑制和细胞生长的抑 制[2]。用 不同浓度 TrxR 抑制剂 1，2-[1，2-苯并异硒唑-3（2H）-酮]乙烷（BBSKE）处 理 人 子 宫 颈 癌 细 胞 HeLa、肝 癌 细 胞 Bel-7402、胃 癌 细 胞 BGC823 和人口腔表皮样癌（KB）细胞，各处理组细胞生长抑制率 显 著 高于 对 照 组 ，TrxR 活性 和 细 胞 活 性 呈 线 性 关 系 （r≥0.989）， 凋 亡 相 关 蛋 白 Bcl-2（抗 凋 亡 ）/Bax（促 凋 亡 ）比 值 降 低 ，促 进 了 细 胞 凋 亡[8]。此 外 ，Sroka 等[9]用 有 机 锡 化 合 物 二 苯 基 锡 （DPhT）处 理 人 胚 肾 细 胞 （HEK-293），发 现 抑 制 了 细 胞 间 隙 连 接 通 讯 （GJIC）， 细 胞 生长 受 到 抑制 ；在 过 表 达 TrxR1 的 HEK-TrxR15 细 胞 中 ，该 效应被逆转。
以硫氧还蛋白还原酶为靶点的天然化合物抗肿瘤机制研究
以硫氧还蛋白还原酶为靶点的天然化合物抗肿瘤机制研究以硫氧还蛋白还原酶为靶点的天然化合物抗肿瘤机制研究硫氧还蛋白还原酶(TrxR)是生物体内依赖于NADPH的氧化还原调节蛋白,它主要通过作用于其底物分子硫氧还蛋白(Trx)来维持细胞的氧化还原平衡以及调控氧化还原所介导的信号转导,进而控制着细胞的增殖、分化和死亡等重要的生理过程。
近年来越来越多的证据支持过度活化的TrxR与肿瘤的发展关系密切,因而以其为靶点的抗肿瘤药物研发引起了广泛的关注,TrxR有望发展为治疗肿瘤的新靶点。
在本论文中,我们研究了藤黄酸、紫草素和小白菊内酯等几类具有抗肿瘤活性的天然小分子与TrxR的相互作用,以及此种作用与它们抗肿瘤活性之间的关系。
主要的内容如下：1.概述了TrxR的分布、结构和催化机理以及其生理功能,并对近期报道的具有抗肿瘤活性的TrxR抑制剂进行了简单的综述。
2.藤黄酸对许多癌细胞具有很强的细胞毒活性,并且已进入二期临床研究。
我们研究发现,藤黄酸可以选择性地抑制TrxR,产生氧化应激并诱导肝癌细胞SMMC-7721的凋亡。
藤黄酸主要靶向TrxR的硒半胱氨酸(Sec)而抑制其还原Trx的活性,导致细胞内活性氧(ROS)累积、破坏氧化还原平衡。
进一步研究表明,过表达细胞内的TrxR能够降低藤黄酸的细胞毒活性,而降低细胞内TrxR 时可以增加细胞对藤黄酸的敏感性,支持了藤黄酸与TrxR相互作用的生理意义。
我们的研究揭示了藤黄酸抗肿瘤作用的新机制,即可以通过作用于TrxR而诱导肿瘤细胞发生氧化应激介导的凋亡,这将有助于进一步认识藤黄酸在体内的作用机理。
3.紫草素是传统中药紫草的主要活性成分,作为中药已经在我国使用了很久。
尽管紫草素具有高效的抗肿瘤活性,但其在细胞内的靶点还不是特别清楚。
我们发现紫草素可以抑制TrxR而诱导活性氧介导的HL-60细胞凋亡。
紫草素主要靶向TrxR中的Sec而抑制其生理活性,同时经紫草素修饰的TrxR可以直接氧化NADPH而诱发ROS的产生,打破细胞内氧化还原态的平衡。
硫氧还蛋白还原酶结构与功能研究进展
动物医学进展,2019,40(9):79-83Progress in Veterinary Medicine硫氧还蛋白还原酶结构与功能研究进展陆金苗⑺，韦娜娜2,周金林2*(1.上海师范大学生命与环境科学学院，上海200241,2.中国农业科学院上海兽医研究所，上海200241)摘 要：硫氧还蛋白还原酶(TrxR)是硫氧还蛋白系统里主要的功能蛋白，广泛存在于从原核生物到哺乳动物等多个物种之中。
TrxR 属于毗吱核昔酸/二硫氧化还原酶家族的成员，TrxR 主要通过氧化还原反应，传递电子.解除机体氧化应激反应，是机体抵抗体内外因素导致的氧化应激损伤的主要途径。
同时其参 与碳水化合物合成、胰岛素产生、脂肪代谢等多种生理过程，以及慢性炎症、肿瘤、动脉粥样硬化等疾病的发 生发展。
论文从TrxR 的结构和功能等方面进行综述，以对TrxR 研究提供参考。
关键词：硫氧还蛋白还原酶；氧化还原；结构与功能中图分类号：S852.3；Q554文献标识码：A 文章编号:1007-5038(2019)09-0079-05硫氧还蛋白(thioredoxin,Trx)系统是多个物种 普遍存在的二硫化物还原酶系统.由硫氧还蛋白 (Trx)，硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase.TrxR)和还原型辅酶 U (triphosphopyridine nucleo tide, NADPH )组成TrxR 是目前已知的，唯一能够还原Trx 的酶⑵，通过二硫键还原酶活性调节 蛋白质的二硫醇/二硫键平衡。
TrxR 还原能力与氧化应激保持动态平衡，是保证机体正常的关键因素。
氧化应激因素包含超氧离子、轻自由基、过氧化氢等活性氧。
活性氧(reacti veoxygenspecies , ROS)通收稿日期:2018-09-14基金项目：国家重点基础研究发展计划(973计划)项目(2015CB150300)作者简介：陆金苗(1992-),女，陕西宝鸡人，硕士研究生，主要从事蝉和病原体研究。
新型硫氧还蛋白还原酶抑制剂的药物设计及生物应用
新型硫氧还蛋白还原酶抑制剂的药物设计及生物应用新型硫氧还蛋白还原酶抑制剂的药物设计及生物应用近年来，新型硫氧还蛋白还原酶（thioredoxin reductase，TrxR）抑制剂作为潜在的抗癌药物备受关注。
硫氧还蛋白还原酶是一种重要的氧化还原酶，参与细胞内氧化还原平衡的维持。
然而，一些研究证实，某些癌细胞中TrxR异常活跃，与肿瘤的发展和药物耐药性相关。
因此，开发TrxR抑制剂具有巨大的潜力成为肿瘤治疗以及其他相关疾病的新策略。
药物设计是药物研发过程中的核心环节，通过寻找合适的分子骨架，结合合适的活性基团和药物靶点进行灵敏性衍生，以达到最佳的药效与稳定性。
在新型硫氧还蛋白还原酶抑制剂的设计过程中，研究人员通常从天然产物、已知药物及合成化合物中发现具有抑制TrxR活性的分子。
通过结构改造和组合，优化药物分子的抑制效果和柔软度。
其中，结构修改和构效关系的研究是不可或缺的一部分。
这项工作展示了合理设计的重要性，参考结构活性关系，以及其他理论方法在药物分子的骨架构建和优化过程中的应用。
新型硫氧还蛋白还原酶抑制剂的设计不仅需要考虑药物的抑制效果，还需要考虑其生物利用度以及毒性。
因此，药物设计师需要充分理解分子的生物利用度和药代动力学特性，以确保药物的有效性和安全性。
此外，合适的药物制剂和给药途径也是非常重要的，可影响药物的稳定性、溶解度和吸收性。
当新型硫氧还蛋白还原酶抑制剂成功设计并合成后，其在生物体内的应用是至关重要的。
许多研究表明，TrxR抑制剂能够抑制肿瘤细胞的生长和增殖，并诱导细胞凋亡。
一些TrxR抑制剂还显示出对药物耐药性细胞株的抑制效果。
此外，一些研究指出TrxR抑制剂可用于治疗其他疾病，如炎症和神经系统疾病。
这些发现表明，新型硫氧还蛋白还原酶抑制剂具有广阔的生物应用前景。
尽管新型硫氧还蛋白还原酶抑制剂在肿瘤治疗和其他疾病治疗中显示出巨大的潜力，但是其临床应用仍然面临着许多挑战。
药物的选择性、药物代谢和排泄途径以及药物剂量和给药方式的优化，都是需要进一步研究的方向。
硫氧还蛋白还原酶
研究主要内容、结论
TrxR1中Sec残基和ATL中的α-亚甲基的γ-内酯结构 是相互作用的关键
ATL能有效抑制纯化的TrxR活性，因此选TrxR为 靶标
ATL促进ROS在HeLa细胞中的生成 从过表达和敲除实验的结果表明，ATL的细胞毒
性与其与TrxR相互作用有关 在HeLa细胞中ATL引起氧化应激介导的细胞凋亡
研究意义
作者的工作证明TrxR是一种新型的ATL的靶标， 并发现， ATL通过先前未知机制诱导凋亡性细 胞死亡。
ATL-TrxR相互作用的发现，揭示了ATL体内抗 癌功效的机制，而这个新的目标机制可能会促 进开发和发现强效的小分子TrxR抑制剂作为潜 在的癌症化疗药物。
研究目的
希望通过定位 TrxR，揭示 ATL的细胞活 性背后的一个 新的分子机制， 并指明可否将 ATL作为一个 潜在的癌症化 疗药物。
Graphical Abstract
主要研究方法
通过TRFS-green检测细胞 使用MTT法进行细胞活力测定
TrxR活性
TrxR体外活性通过DTNB还原法测定
TRFS-green：可在活细胞内实时监 用膜联蛋白V-FITC和PI双染测定凋亡细胞
测TrxR活性的小分子探针
研究表明TRFS-green可以高度选择 性的识别TrxR而不受细胞内各类硫 醇分子以及相关的各类酶类干扰。
J. Am. Chem. Soc. 2014, 136, 226-233
研究主要内容、结论
Inhibition of thioredoxin reductase by alantolactone prompts oxidative stress-
Thioredoxin Redox State Determination：硫氧还蛋白的氧化还原状态的确定
IAA IAM
urea PAGE
0
-
-1 -2 -3 -4 -5 + -6
SASASASASASA-
SM
SM or SA-
SM
SM or SA-
SM
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
SM or SA-
SM
SM or SA-
SM
SM or SA-
SM
SM or SA-
1
2
3
4
TrxSS TrxSH
Representative results
HH SS RNR
Hypothesis
Thioredoxin reductase is a major determinant of thioredoxin redox state
If true, then deletion of thioredoxin reductase should shift the redox state of thioredoxin from primarily reduced to primarily oxidized
Acknowledgement
Dr. Gary Merrill
Biochemistry & Biophysics Lab
Dr. Kevin Ahern Howard Hughes Medical Institute Undergraduate, Research, Innovation, Scholarship &
Wild Type
Mutant
Trxoxidized Mixed disulfide
Trxreduced
Trxox
mixed disulfide
硫氧还原蛋白还原酶
硫氧还原蛋白还原酶
硫氧还原蛋白还原酶是一种存在于细胞中的酶类，其主要功能是调节和维持细胞内的氧化还原平衡。
硫氧还原蛋白还原酶能够将被氧化的硫氧还原蛋白还原成其活性形式，以使其继续参与细胞内的氧化还原反应。
硫氧还原蛋白还原酶通过将氧化的硫氧还原蛋白与还原剂（如还原型谷胱甘肽）反应，将其转化为还原态。
这一过程需要NADPH作为电子输送体，并由硫氧还原蛋白还原酶催化。
这样，硫氧还原蛋白还原酶在细胞内起到了重要的抗氧化作用，能够防止由于活性氧的过度产生而引起的氧化损伤。
此外，硫氧还原蛋白还原酶还具有参与调节细胞凋亡、细胞周期调控以及细胞增殖等重要生物学过程的功能。
它还可以通过调节细胞内氧化还原平衡来参与对抗病原菌和其他外源性氧化物的免疫反应。
总结而言，硫氧还原蛋白还原酶在细胞内起着重要的作用，不仅能够抗氧化，还参与调节细胞生理活动和免疫应答等过程。
Thioredoxin Redox State Determination：硫氧还蛋白的氧化还原状态的确定
= Thioredoxin SH = thiol
M = neutral state
S = Disulfide S
Protein electrophoretic mobility shift
assay
SH
SH
SH
SH
Trx
SH
Trx
SH
red
SH
ox
SH
SH
S
SH
S
DTT
0
-
-1 -2
urea PAGE
SA- acetone wash
DTT
Dithiothreitol
SA- IAM Iodoacetamide
SA-
SH SH SH TRX SH ox S S
SASASA- TRX ox SAS S
SASASA- TRX ox SASH SH
SA-
SA-
TRX ox
SASA-
SM
SM
LEGEND A- = negative charge
Protein electrophoretic mobility shift assay (PEMSA)
SH
SA-
SA-
SA-
SH
SA-
SA-
SA-
SH TRX SH red
SA- TRX SA- red
TRX
SSAA-- red
SA- TRX SA- red
SH
SA-
SA-
SA-
SH IAA Iodoacetic acid
Wild Type
Mutant
Trxoxidized
Mixed disulfide Trxreduced
硫氧还蛋白还原酶大于10
硫氧还蛋白还原酶大于10硫氧还蛋白还原酶（thioredoxin reductase，TrxR）是一种关键酶，参与了细胞内的氧化还原反应，维持了细胞内的氧化还原平衡。
最近的研究发现，硫氧还蛋白还原酶的活性超过10，对细胞的功能有重要的影响。
本文将从不同角度探讨硫氧还蛋白还原酶的功能，以及如何调节其活性，为我们进一步研究该酶提供指导意义。
首先，硫氧还蛋白还原酶在维持细胞内氧化还原平衡方面扮演着重要的角色。
细胞内存在着许多氧化剂和还原剂，这些分子之间的平衡关系对于细胞的正常功能至关重要，而硫氧还蛋白还原酶正是调节细胞内氧化还原状态的关键因子之一。
当硫氧还蛋白还原酶的活性大于10时，它可以更有效地减少细胞内的氧化剂，保护细胞不受损伤。
其次，在抗氧化防御方面，硫氧还蛋白还原酶发挥了重要作用。
氧化剂的积累对细胞造成损害，而硫氧还蛋白还原酶可以通过将氧化剂还原为较为稳定的形式，减少其对细胞的伤害。
同时，硫氧还蛋白还原酶还可以作为抗氧化剂的再生酶，将被氧化的抗氧化剂重新还原为活性形式，进一步增强抗氧化能力，保护细胞免受氧化应激的影响。
此外，硫氧还蛋白还原酶在维持代谢平衡和细胞增殖方面也具有重要作用。
细胞内的氧化还原平衡与代谢过程密切相关，维持平衡可以保障细胞的正常代谢功能进行。
硫氧还蛋白还原酶作为一个关键的氧化还原调节因子，可以通过控制许多代谢相关酶的活性，调节细胞内的代谢过程，从而维持细胞的正常功能。
此外，硫氧还蛋白还原酶还参与了细胞分裂和增殖过程，保证细胞能够顺利进行细胞周期，正常分裂和增殖。
最后，如何调节硫氧还蛋白还原酶的活性成为了研究的重要方向。
通过探索能够调节该酶活性的因素，可以为研发新的治疗方法提供新思路。
一些研究表明，调节硫氧还蛋白还原酶的合成或者降低其活性可能对某些疾病的治疗具有潜在益处。
然而，更多的研究还需要开展，以深入理解硫氧还蛋白还原酶的调控机制。
综上所述，硫氧还蛋白还原酶作为维持细胞内氧化还原平衡的关键酶，在细胞功能、抗氧化防御、代谢平衡和细胞增殖等方面发挥着重要作用。
硫氧还蛋白还原酶结构与肿瘤治疗的研究进展
硫氧还蛋白还原酶结构与肿瘤治疗的研究进展
堵忠颖;夏东方;高学云
【期刊名称】《北京工业大学学报》
【年(卷),期】2024(50)2
【摘要】硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase,TrxR)是硫氧还蛋白(thioredoxin,Trx)系统里主要的功能蛋白,在调节多种细胞氧化还原信号通路中起关键作用。
近年来,TrxR/Trx被越来越多地认为是肿瘤发展的重要调节剂,因此靶向TrxR/Trx是一种很有前景的肿瘤治疗策略。
该文对TrxR的结构特点、与肿瘤相关的生理功能、TrxR抑制剂进行综述,以对TrxR的研究提供参考。
【总页数】15页(P246-260)
【作者】堵忠颖;夏东方;高学云
【作者单位】北京工业大学环境与生命学部
【正文语种】中文
【中图分类】U461;TP308
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货号：MS1110 规格：100管/96样
硫氧还蛋白氧化还原酶
（thioredoxin reductase,TrxR）试剂盒说明书
微量法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
TrxR是一种NADPH依赖的包含FAD结构域的二聚体硒酶，属于吡啶核苷酸-二硫化物氧化还原酶家族成员，与硫氧还蛋白以及 NADPH 共同构成了硫氧还蛋白系统。
TrxR与GR活性类似，催化GSSG还原生成GSH，是谷胱甘肽氧化还原循环关键酶之一。
测定原理：
TrxR催化NADPH还原DTNB生成TNB和NADP+，TNB在412nm有特征吸收峰，通过测定412nm波长处TNB的增加速率，即可计算TrxR活性。
自备仪器和用品：
低温离心机、可调节移液器、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。
临用前加入 2mL 蒸馏水溶解。
试剂三：粉剂×1 管，4℃保存。
临用前加入 2mL 蒸馏水溶解。
粗酶液提取：
1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g 组织，加
入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。
8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500
万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；
然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3. 血清等液体：直接测定。
TrxR 测定操作：
1. 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到412nm，用蒸馏水调零。
2. 试剂一在25℃（一般物种）或者37℃（哺乳动物）预热30min。
3. 空白管：取微量玻璃比色皿或96孔板，加入20μL试剂二，20μL试剂三，160μL试剂一，
迅速混匀后于412nm 测定10s和310s吸光度，记为A1和A2。
△A空白管=A2-A1。
4. 测定管：取微量玻璃比色皿或96孔板，加入20μL试剂二，20μL试剂三，140μL试剂一，
20μL上清液，迅速混匀后于412nm测定10s和310s吸光度，记为A3和A4。
△A 测定管=A4-A3。
注意：空白管只需测定一次。
TrxR 活性计算公式：
(1). 按蛋白浓度计算
活性单位定义：在25℃或者37℃中，每毫克蛋白每分钟催化1nmol DTNB还原为1个酶活单位。
TrxR（nmol/min/mg prot）=（△A测定管-△A空白管）÷ε÷d×V反总÷(Cpr×V样)÷T
= 147×（△A 测定管-△A 空白管）÷Cpr
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(2). 按样本质量计算
活性单位定义：在25℃或者37℃中，每克样本每分钟催化1nmol DTNB还原为1个酶活单位。
TrxR（nmol/min/g）=（△A测定管-△A空白管）÷ε÷d×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T = 147×（△A 测定管-△A 空白管）÷W
（3）按细胞数量计算
活性单位定义：在25℃或者37℃中，每104个细胞每分钟催化1nmol DTNB还原为1个酶活单位。
TrxR（nmol/min/104cell）=（△A测定管-△A空白管）÷ε÷d×V反总÷(细胞数量×V样÷V
样总)÷T= 147×（△A 测定管-△A 空白管）÷细胞数量
（4）按液体体积计算
活性单位定义：在25℃或者37℃中，每毫升液体每分钟催化1nmol DTNB还原为1个酶活单位。
TrxR（nmol/min /mL）=（△A 测定管-△A 空白管）÷ε÷d×V 反总÷V 样÷T
= 147×（△A 测定管-△A 空白管）
ε：TNB 在412nm处的微摩尔消光系数，0.0136 L/μmol/cm；d：比色皿光径，1cm；V 反总：反应体系总体积（L），200μL=2×10 -4 L；Cpr：上清液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定；W ：样品质量；V 样：加入反应体系中上清液体积（mL），20μL=0.02 mL；V 样总：提取液体积，1 mL；T：反应时间（min），5 min。
b.使用96孔板测定的计算公式如下
(1). 按蛋白浓度计算
活性单位定义：在25℃或者37℃中，每毫克蛋白每分钟催化1nmol DTNB还原为1个酶活单位。
TrxR（nmol/min/mg prot）=（△A测定管-△A空白管）÷ε÷d×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T
= 294×（△A 测定管-△A 空白管）÷Cpr
(2). 按样本质量计算
活性单位定义：在25℃或者37℃中，每克样本每分钟催化1nmol DTNB还原为1个酶活单位。
TrxR（nmol/min/g）=（△A测定管-△A空白管）÷ε÷d×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T = 294×（△A 测定管-△A 空白管）÷W
（3）按细胞数量计算
活性单位定义：在25℃或者37℃中，每104个细胞每分钟催化1nmol DTNB还原为1个酶活单位。
TrxR（nmol/min/104cell）=（△A测定管-△A空白管）÷ε÷d×V 反总÷(细胞数量×V样÷V
样总)÷T= 294×（△A 测定管-△A 空白管）÷细胞数量（4）按液体体积计算
活性单位定义：在25℃或者37℃中，每毫升液体每分钟催化1nmol DTNB还原为1个酶活单位。
TrxR（nmol/min/mL）=（△A测定管-△A空白管）÷ε÷d×V 反总÷V 样÷T
= 294×（△A 测定管-△A 空白管）
ε：TNB 在412nm处的微摩尔消光系数，0.0136 L/μ mol/cm；d：96 孔板光径，0.5cm；V 反总：反应体系总体积（L），200μL=2×10-4L；Cpr：上清液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定；W ：样品质量；V 样：加入反应体系中上清液体积（mL），20μL=0.02 mL；V 样总：提取液体积，1 mL；T：反应时间（min），5 min。
注意事项：
1. 测定前须先取 1～2 个样做预实验，使得吸光值在 5min 内程线性变化。
哺乳动物组织及血液制品 TrxR 活力测定时，一般须用蒸馏水稀释 5 倍左右；测定过程操作须迅速。
2. 试剂二和试剂三配制好后 3 天内使用完。
第2页，共2页。