(江苏专用)2020版高考生物总复习考点加强课6课件
(江苏专用)2020版高考生物总复习补上一课6课件
（2）设植物能量为 M，则调整前，人所得能量为：M×12×10%＋M×12×（10%）2 ＝2M0＋2M00＝1210M0 ，调整后人所得能量为 M×45×10%＋M×15×（10%）2＝22M5 ＋5M00＝ 4510M0 ，则调整后∶调整前为4510M0 /1210M0 ≈1.49，即调整后供养的人口是调整前的 1.49 倍。 答案 （1）1.96 （2）1.49
解析 生产者固定的总能量为W1＝（A1＋B1＋C1＋D1），而D1＝A2＋B2＋C2＋D2， 是从第一营养级流入下一营养级的能量，因此生产者固定的总能量可表示为（A1＋B1 ＋C1＋A2＋B2＋C2＋D2），A错误；由第一营养级到第二营养级的能量传递效率为（ D1/W1）×100%或[D1/（A1＋B1＋C1＋D1）]×100%，B正确；流入初级消费者的能量 为D1＝（A2＋B2＋C2＋D2），C正确；图解表明能量流动的特点是单向流动、逐级递 减，D正确。 答案 A
方法三（拼图法）：
说明：四个去向（定时分析）：同化量＝自身呼吸作用消耗量（A）＋未利用（B） ＋分解者的分解量（C）＋下一营养级的同化量（D）（最高营养级除外）
【典例】 如图是生态系统的能量流动图解，N1～N6表示能量数值。请回答下列有关 问题：
（1）流经该生态系统的总能量为
（用N1～N6中的字母表示）。
解析 许多松毛虫可以生活在一株马尾松上，在生物数量上出现倒置现象，A错误 ；由图可知，松毛虫的同化量是A，杜鹃的同化量是E；两者传递效率可用E/A表示 ，B正确；松毛虫的粪便量C属于马尾松的同化量，杜鹃的粪便量F属于松毛虫的同 化量，故由松毛虫流入分解者的能量可用D＋F表示，C错误；若迁走全部杜鹃，松 毛虫的数量短期内会大量增加，以后又会下降，然后保持稳定，D错误。 答案 B
2021版高考生物(苏教版)复习：素养加强课6同位素标记法及其应用含答案
(3)将一个某种噬菌体DNA分子的两条链用32P进行标记、并使其感染大肠杆菌、在不含有32P的培养基中培养一段时间。若得到的所有噬菌体双链DNA分子都装配成噬菌体(n个)并释放、则其中含有32P的噬菌体所占比例为2/n、原因是_____________________。
[审题指导](1)弄清ATP中带有32P的磷酸基团的三个位置A—Pα～Pβ～Pγ。(2)弄清两个实验的目的、一个是让某种酶催化ATP的一个磷酸基团转移到DNA末端上、另一个是用带有32P的dATP作为DNA合成的原料。(3)根据DNA分子半保留复制的特点解释含有32P的噬菌体所占比例为2/n的原因。
(20xx·深圳模拟)不含放射性标记的蚕豆根尖细胞在含3H标记的胸腺嘧啶脱氧核苷酸的培养基中完成一个细胞周期、然后在不含放射性标记的培养基中继续分裂至中期、其染色体的放射性标记分布情况是( )
A．每条染色体中都只有一条单体被标记
B．每条染色体的两条单体都被标记
C．只有半数的染色体中一条单体被标记
D．每条染色体的两条单体都不被标记
(4)证明DNA分子进行半保留复制：用含有15N标记的NH4Cl培养液培养大肠杆菌、让大肠杆菌繁殖几代、再将大肠杆菌转移到含14N的普通培养液中培养、然后在不同时刻收集大肠杆菌并提取DNA、再通过密度梯度离心来区别亲代与子代DNA、从而证明DNA的复制是以半保留的方式进行的。
2020年高考生物(江苏)复习课件：免疫调节
2014 年 T21 制剂的作用等； 与生理功能，明确细胞
社会责任：结合“艾滋 间的转化关系，辨别特
病的流行与预防”知 异性的具体体现和细
艾滋病的流
识，认同健康的生活方 胞间信息传递的形式；
行和预防
A 2016 年 T13 案，远离毒品，向他人 辨析三种免疫异常的
宣传毒品的危害及传 表现和原因，关注 HIV
③ 若 T 细胞被破坏，则细胞免疫不存在，体液免疫也将大部分丧失
3. 二次免疫反应 (1) 二次免疫反应概念：相同抗原再次入侵时，记忆细胞很快地作出反应，即很 快增殖、分化产生新的浆细胞(或效应 T 细胞)和记忆细胞，浆细胞快速产生大量抗体 消灭抗原(或效应 T 细胞快速裂解靶细胞)。 (2) 记忆细胞的特点：寿命长，可以在抗原消失后很长时间保持对这种抗原的记 忆，如天花、麻疹、伤寒等，患者痊愈后可终生具有抵抗力。
考点二 体液免疫和细胞免疫 核心提炼
1. 体液免疫与细胞免疫过程图解
2. 体液免疫与细胞免疫的区别和联系
免疫类型
体液免疫
细胞免疫
作用对象
游离于体液中的抗原
被抗原侵入的宿主细胞、自身突变 细胞和来自异体的移植组织器官
免疫细胞
主要是 B 细胞
主要是 T 细胞
免疫时间 过程较迅速，所需时间短
过程较缓慢，所需时间长
抗体
浆细胞淋巴因子Fra bibliotekT 细胞、效应 T 细胞
功能 第一道防线，杀菌 第二道防线，杀菌 第三道防线，体液免疫 第三道防线，体液免疫和细胞免疫
3. 非特异性免疫与特异性免疫的比较
项目
非特异性免疫
特异性免疫
出生后在与病原体斗争过程中形成
来源 遗传而来，人人都有的先天性免疫
(江苏专用)2020版高考生物总复习考点加强课5教案
考点加强课5重点题型1 实验：探索生长素类似物促进插条生根的最适浓度1.实验原理（1）生长素类似物对植物插条的生根情况有很大的影响。
（2）用生长素类似物在不同浓度、不同时间处理插条，其影响程度不同。
（3）存在一个最适浓度，在此浓度下植物插条的生根数量最多，生长最快。
2.选材保留有芽和幼叶的插条。
3.处理部位插条的形态学下端。
4.处理方法（1）浸泡法：要求药液溶液浓度较低，处理时间为几小时至一天。
（2）沾蘸法：药液溶液浓度较高，处理时间很短（约5 s）。
5.实验流程6.实验分析由生长素作用曲线可知，存在作用效果相同的两种生长素浓度。
最适浓度应在作用效果相同的两种浓度之间，即在两种浓度之间再设置一系列浓度梯度的生长素类似物溶液进行实验。
（1）注意区分本实验的三个变量①自变量：生长素类似物（如2，4D溶液）的浓度。
②因变量：插条生根的数量（或长度）。
③无关变量：处理溶液剂量、温度、光照及选用相同的花盆、相同的植物材料，插条的生理状况、带有的芽数相同，插条处理的时间长短一致等。
（2）生长素类似物处理插条时应注意的问题①扦插时常去掉插条成熟叶片，原因是去掉成熟叶片能降低蒸腾作用，保持植物体内的水分平衡。
②处理时插条上下不能颠倒，否则扦插枝条不能成活。
【例证】（2017·海南卷，26）为探究植物生长素对枝条生根的影响，研究人员在母体植株上选择适宜的枝条，在一定部位进行环剥去除树皮（含韧皮部），将一定浓度的生长素涂抹于环剥口上端，并用湿土包裹环剥部位，观察枝条的生根情况，实验的部分结果如表所示。
（1）据表可知，生长素用量为0时，有些枝条也生根。
其首次出根需要天数较多的原因是_______________________________________________________________________________________________________________________________。
(江苏专用)2020高考生物二轮复习第一部分22个常考点专攻专题一细胞课件
7．脂质的元素组成及合成场所 (1)脂肪和固醇类的元素组成是 C、H、O。 (2)磷脂的元素组成是 C、H、O、N、P。 (3)脂质在细胞内的合成场所是光面(或滑面型)内质网。
8．病毒的特殊性 (1)病毒是生物，但不属于生命系统的结构层次。 (2)病毒营寄生生活，只能用活细胞培养，不能用普通培养 基直接培养。
9．原核细胞的三个特殊性 (1)无核膜、核仁，即无成型的细胞核。 (2)细胞器唯一，只有核糖体。 (3)没有叶绿体和线粒体，可能进行光合作用和有氧呼吸。
10．细胞膜结构和功能的 3 个“三” (1)三种成分：脂质、蛋白质、糖类。 (2)三种功能：将细胞与外界环境分隔开、控制物质进出细胞、 进行细胞间的信息交流。 (3)信息交流的三种形式：通过分泌的化学物质(物质传递)、 通过细胞膜的直接接触(接触传递)、通过细胞间的通道(通道 传递)。
因是细胞内含有本物种个体发育所需要的全部遗传物质。 17．衰老细胞的 5 个特征：①水分减少，细胞新陈代谢的速率减
慢；②酶的活性降低；③色素积累、增多；④呼吸速率减慢， 细胞核的体积变大，核膜内折，染色质收缩、染色加深； ⑤细胞膜通透性改变，使物质运输功能降低。
18．癌细胞的 3 个特征：①能够无限增殖；②形态结构发生显 著变化；③易在体内分散和转移。
11．细胞核结构和功能的“二、二、四”：二场所——遗传物 质的储存和复制场所；二中心——细胞代谢和遗传的控制 中心；四结构——核膜、核孔、核仁、染色质。
12．与分泌蛋白的合成、加工和运输密切相关的 6 种细胞结构： 核糖体、内质网、高尔基体、线粒体、囊泡、细胞膜。细 胞内的能量转换器是叶绿体和线粒体。与细胞分裂相关的 细胞器有：线粒体、核糖体、高尔基体(植物)、中心体(动 物、低等植物)。
(江苏专用)2020高考生物二轮复习第一部分22个常考点专攻专题三遗传4个主攻点之(一)基因的本质课件
[串知设计]
(1)在甲图中若看到表面光滑(答特征)的菌落，说明 R 型细菌转 变成了 S 型细菌。
(2)为了充分证明 DNA 是遗传物质，艾弗里还在培养 R 型细菌 的培养基中加入 S 型菌的 DNA 和 DNA 酶，进一步验证实 验结果。
(3)艾弗里的肺炎双球菌体外转化实验和赫尔希、蔡斯的噬菌体 侵染细菌的实验的共同设计思路都是把 DNA 和蛋白质分 开，直接地、单独地观察它们的作用。
的结果；格里菲思实验只能说明加热杀死的 S 型细菌中存在某种
“转化因子”，而不能说明该“转化因子”是 DNA；噬菌体是
病毒，在宿主细胞内才能完成 DNA 复制等生命活动，不能用 32P
直接标记噬菌体，而应先用 32P 标记噬菌体的宿主细胞，再用被
标记的宿主细胞培养噬菌体；赫尔希和蔡斯实验证明了 DNA 是 T2 噬菌体的遗传物质。 答案：D
腺嘧啶无关，B、C、D 项错误。 答案：A
[学方法] “图解法”解答细胞分裂与DNA复制问题
(1)有丝分裂与 DNA 复制 ①过程图解(一般只研究一条染色体)： a．复制一次(母链标记，培养液不含同位素标记)：
b．转至不含放射性同位素的培养液中再培养一个细胞周期：
②规律总结：若只复制一次，产生的子染色体都带有标记； 若复制两次，产生的子染色体只有一半带有标记；复制 n 次只有 2 条染色体有标记。
离出 S 型活菌
D．用放射性同位素标记 T2 噬菌体外壳蛋白，在子代噬菌体 中检测不到放射性
解析：红花植株与白花植株杂交，F1 为红花，F2 中红花∶白 花＝3∶1，属于性状分离现象，不能说明 RNA 是遗传物质， A 错误；病毒甲的 RNA 与病毒乙的蛋白质混合后感染烟草只 能得到病毒甲，说明病毒甲的 RNA 是遗传物质，B 正确；加 热杀死的 S 型肺炎双球菌与 R 型活菌混合培养后可分离出 S 型活菌，只能说明加入杀死的 S 型菌存在转化因子，不能说 明 RNA 是遗传物质，C 错误；用放射性同位素标记 T2 噬菌 体外壳蛋白，在子代噬菌体中检测不到放射性，说明蛋白质 未进入大肠杆菌，不能证明 RNA 是遗传物质，D 错误。 答案：B
(江苏专用)2020版高考生物总复习 考点加强课7教案
考点加强课7重点题型1 目标微生物的筛选与鉴定1.分离微生物的原理与措施（1）原理：自然环境中的微生物是混杂在一起的，因此分离获得纯培养物应首先采用的方法是将单个的微生物与其他微生物分离，再给该微生物提供合适的营养和条件，使其生长成为可见的群体。
（2）常用措施①接种过程中尽量使微生物分散开来，如平板划线法、稀释涂布平板法。
②运用选择培养基的作用特点，在培养基中添加某种特定的物质，抑制不需要的微生物的生长，促进所需微生物的生长。
2.选择培养基四种常见制备方法或实例【例证】（2017·全国卷Ⅰ，37）某些土壤细菌可将尿素分解成CO2和NH3，供植物吸收和利用。
回答下列问题：（1）有些细菌能分解尿素，有些细菌则不能，原因是前者能产生。
能分解尿素的细菌不能以尿素的分解产物CO2作为碳源，原因是__________________________________________________________________________________________________________________________________，但可用葡萄糖作为碳源，进入细菌体内的葡萄糖的主要作用是______________________________________________________（答出两点即可）。
（2）为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择（填“尿素”“NH4NO3”或“尿素＋NH4NO3”）作为氮源，不选择其他两组的原因是_________________________________________________________________________________________________________________________________________。
（3）用来筛选分解尿素细菌的培养基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用有___________________________________________________________________________________________________________________________（答出两点即可）。
江苏省2020高考生物大一轮复习第6单元第1讲DNA是主要的遗传物质课件
S 型细菌体内的转化因
实验 存在转化因子，促进了 R
DNA 是噬菌体的遗传物
子是 DNA
结论 型细菌向 S 型细菌的转化
质
DNA 是肺炎双球菌的遗传物质
易错提醒
(1) 培养含放射性标记的噬菌体不能用培养基直接培养，因为病毒必须寄生在活 细胞内，所以应先培养细菌，再用细菌培养噬菌体，从而使噬菌体被标记。
[解析] S 型肺炎双球菌的菌落为光滑的，R 型肺炎双球菌的菌落是粗糙的；加 热杀死的 S 型细菌不能在小鼠体内繁殖，S 型细菌中有活性的 DNA 能将部分 R 型细 菌转化为 S 型细菌，病死小鼠中分离得到的肺炎双球菌有 S 型细菌和 R 型细菌。
肺炎双球菌转化实验中，S 型细菌的部分 DNA 片段进入 R 型细菌内并 整合到 R 型细菌的 DNA 分子上，使这种 R 型细菌转化为能合成荚膜多糖的 S 型细 菌，下列叙述正确的是( C )
考点一 肺炎双球菌的转化实验
核心提炼
1. 肺炎双球菌两个转化实验的比较 体内转化实验
体外转化实验
科学家
格里菲思
艾弗里及其同事
细菌培养场所
小鼠体内
培养基(体外)
R 型细菌与 S 型细菌的毒性进行对
实验原则
S 型细菌各成分的作用进行对照
照
体内转化实验
体外转化实验
用 R 型活细菌、S 型活细菌、加热 将物质提纯分离后，直接地、单
(2) 噬菌体侵染细菌实验采用放射性同位素标记法，即分别标记 DNA 的特征元 素(P)和蛋白质的特征元素(S)。不能同时标记在同一个噬菌体上，因为检测放射性时， 只能检测到放射性的存在部位，不能确定是何种元素的放射性。
(3) 噬菌体侵染细菌实验的结论 ① 直接证明：DNA 是遗传物质。 ② 间接证明：DNA 能够自我复制，使前后代保持一定的连续性；DNA 能控制 蛋白质的生物合成。 ③ 不能证明 DNA 是主要的遗传物质。 (4) 噬菌体的复制式增殖条件 ① 模板是亲代噬菌体的 DNA。 ② 原料、能量、酶和场所都由宿主细胞(大肠杆菌)提供。
2020版高考生物 高考加强课(六)测定光合速率的常用方法及实验设计练习(含解析)
测定光合速率的常用方法及实验设计【考题范例】BTB是一种酸碱指示剂。
BTB的弱碱性溶液颜色可随其中CO2浓度的增高而由蓝变绿再变黄。
某同学为研究某种水草的光合作用和呼吸作用，进行了如下实验：用少量的NaHCO3和BTB加水配制成蓝色溶液，并向溶液中通入一定量的CO2使溶液变成浅绿色，之后将等量的浅绿色溶液分别加入到7支试管中.其中6支加入生长状况一致的等量水草，另一支不加水草，密闭所有试管.各试管的实验处理和结果见下表。
方。
若不考虑其他生物因素对实验结果的影响,回答下列问题:（1)本实验中，50 min后1号试管的溶液是浅绿色，则说明2至7号试管的实验结果是由__________________引起的；若1号试管的溶液是蓝色，则说明2至7号试管的实验结果是____________（填“可靠的"或“不可靠的"）.（2）表中X代表的颜色应为____________（填“浅绿色"“黄色"或“蓝色”），判断依据是______________________________。
(3）5号试管中的溶液颜色在照光前后没有变化，说明在此条件下水草_________________________________________.［审答提示］（1)明确BTB这种酸碱指示剂研究某种水草的光合作用和呼吸作用的原理。
（2)明确光合作用与呼吸作用的变化对指示剂的影响解析：（1）依题意并结合表中信息可知，距日光灯的距离表示光照的强弱.1号试管为对照组，其中的NaHCO3可维持CO2浓度的相对稳定；2~7号试管为实验组，2号试管遮光，其内的水草不能进行光合作用，但能进行呼吸作用；3~7号试管内的水草在有光的条件下，可进行光合作用和呼吸作用，溶液颜色的变化是由光合作用吸收的CO2量与呼吸作用释放的CO2量共同决定的.综上所述,若50min后，1号试管的溶液是浅绿色,则说明2～7号试管的实验结果是由不同光强下水草的光合作用与呼吸作用引起的；若1号试管的溶液是蓝色，则说明2～7号试管的实验结果是不可靠的。
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（1）如果要将 HBsAg基因和pPIC9K质粒重组，应该在 HBsAg基因两侧的A和B
位置接上限制酶
的识别序列，这样设计的优点是可避免质粒和目的
基因的自身环化。步骤1应选用
（选填“E·coli”或“T4”）DNA连接酶。
（2）步骤2的目的是
。已知大肠杆菌每20 min分裂一次，若1
个大肠杆菌中导入了10个重组质粒，则1 h后可从1个大肠杆菌的后代中得到重组
（3）若利用PCR技术增加目的基因的数量，由图2可知，A、B、C、D 4种单
链DNA片段中应选取
作为引物（DNA复制子链的延伸方向5′→3′）。
该DNA分子在PCR仪中经过4次循环后会产生等长的目的基因片段
个
（4）为了使目的基因和质粒定向连接并且有利于受体细胞的筛选，提高重组效率
，应该选择的限制酶是
化成功，所以要获得16个成功导入该基因的酵母菌菌落，图A中的酵母菌菌落数至少 要为16÷2×15＝120个。（4） 毕赤酵母表达系统中目的基因整合到酵母染色体上， 不易丢失，而大肠杆菌表达系统中质粒在细胞传代过程中有丢失现象，所以毕赤酵母
表达系统的遗传稳定性更高。
答案 （1）SnaB Ⅰ和Avr Ⅱ T4 （2）获得大量重组质粒（扩增） 不确定 （3）Bgl Ⅱ 卡拉霉素 120 （4）目的基因整合到酵母染色体上，不易丢失
达目的基因产物的有
，不能表达的原因是_____________ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ__________
_____________________________________________________________________。
图（c）
（ 3 ） DNA 连 接 酶 是 将 两 个 DNA 片 段 连 接 起 来 的 酶 ， 常 见 的 有
（1）经BamHⅠ酶切后得到的目的基因可以与上述表达载体被
酶切后的
产 物 连 接 ， 理 由 是 ______________________________________________________
。
（2）若某人利用图（b）所示的表达载体获得了甲、乙、丙三种含有目的基因的
重组DNA分子，如图（c）所示，这三种重组DNA分子中，不能在宿主细胞中表
。如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ同时
对质粒进行切割，假设同时只有任意两个位点被切断且每次机会相等，则形成含
有完整抗四环素基因的DNA片段有
种。
（5）如果大肠杆菌是受体细胞，则其体内应不含
基因，以利于筛选出含
重组质粒的受体菌。目的基因能在大肠杆菌细胞内表达出相同的蛋白质，其遗传
学基础是_____________________________________________________。
和
，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是____________________。
[慧眼识图 获取信息]
（1）三种限制酶切割结果分析
（2）表达载体与重组DNA分子分析
答案 （1）Sau3AⅠ 两种酶切割后产生的片段具有相同的黏性末端 （2）甲 、丙 甲中目的基因插入在启动子的上游，丙中目的基因插入在终止子的下游， 二者的目的基因均不能被转录 （3）E·coliDNA连接酶 T4DNA连接酶 T4DNA 连接酶
1.（2018·南京、盐城、连云港二模）人类是乙型肝炎病毒的唯一宿主，接种乙肝疫 苗是预防乙肝病毒感染的最有效方法。下图为“转基因酵母乙肝疫苗”的生产过 程示意图，该过程所用酵母菌为毕赤酵母菌，其体内无天然质粒，科学家改造出 了下图所示的pPIC9K质粒（松弛控制型，复制不受宿主细胞控制）用作载体，其 与目的基因形成的重组质粒经酶切后可以与酵母菌染色体发生同源重组，将目的 基因整合于染色体中以实现表达。请回答下列问题：
【 例 证 】 （ 2016·全国 卷 Ⅲ ， 40 ） 图 （ a ） 中 的 三 个 DNA 片 段 上 依 次 表 示 出 了 EcoRⅠ、BamHⅠ和Sau3AⅠ三种限制性内切酶的识别序列与切割位点，图（b） 为某种表达载体的示意图（载体上的EcoRⅠ、Sau3AⅠ的切点是唯一的）。
根据基因工程的有关知识，回答下列问题：
解析 （1）限制酶EcoRⅠ识别序列为GAATTC，切割位点在G与A之间，切开的是 鸟嘌呤脱氧核苷酸和腺嘌呤脱氧核苷酸之间相连的磷酸二酯键。（2）决定氨基酸的 密码子在mRNA上，A错误；DNA聚合酶和DNA连接酶都可作用于②磷酸二酯键处 ，解旋酶作用于①氢键处，B正确；假设只用这个片段中的3个碱基对，排列出的 DNA片段一定小于64种，C错误；该片段含2个游离的磷酸基团，重组质粒是环状 DNA ， 不 含 游 离 的 磷 酸 基 团 ， D 正 确 。 （ 3 ） 由 于 DNA 复 制 时 子 链 的 延 伸 方 向 为 5′→3′，所以选C和B作为引物。该DNA分子在PCR仪中经过3次循环后会产生2个等 长的目的基因片段，经过n次循环后产生等长的目的基因片段为2n—2n个，4次循环 后会产生等长的目的基因片段8个。（4）为了使目的基因和质粒定向连接应该选择 双酶切，质粒上至少要有一个标记基因存在，所以用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ。用限制 酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ同时对质粒进行切割，若顺时针方向PstⅠ与EcoRⅠ之间 的片段为a，EcoRⅠ与HindⅢ之间的片段为b，HindⅢ与PstⅠ之间的片段为c，则只 有任意两个位点被切断且每次机会相等时，形成的片段有a、b＋c、b、a＋c、c、a ＋b，其中含有完整抗四环素基因的DNA片段只有b＋c这1种。（5）经以上分析，重 组质粒构建时，抗青霉素基因被破坏，只保留了抗四环素基因，所以为了筛选出含 重组质粒的受体菌，受体细胞中应不含标记基因抗四环素基因。由于所有生物共用
的酵母菌菌落数至少要为
个。
（4）已知质粒在细胞传代过程中有丢失现象，试分析毕赤酵母表达系统的遗传稳
定性高于大肠杆菌表达系统的主要原因是________________________________。
解析 （1）如果要将 HBsAg基因和pPIC9K质粒重组，HBsAg基因插入的位置应该 在pPIC9K质粒的启动子和终止子之间，pPIC9K质粒的启动子和终止子之间有限制酶 SnaB Ⅰ和Avr Ⅱ的识别位点，所以在 HBsAg基因两侧的A和B位置要接上限制酶 SnaB Ⅰ和Avr Ⅱ的识别序列，可避免质粒和目的基因的自身环化。限制酶SnaB Ⅰ切 割后是平末端，限制酶Avr Ⅱ切割后是黏性末端，而T4DNA连接酶既可连接平末端又 可连接黏性末端，所以步骤1应选用T4DNA连接酶。（2）步骤2是将重组质粒导入大 肠杆菌体内进行扩增，以获得大量重组质粒。pPIC9K质粒是松弛控制型，复制不受
（3）参考Ti质粒的T－DNA片段选择限制酶 若质粒上标出T－DNA片段，则所选限制酶切点应位于T－DNA片段中，从而有利于 将目的基因嵌入到T－DNA片段上——因为Ti质粒的T－DNA片段最易转移至受体细 胞并且整合到受体细胞染色体DNA上，如用两种限制酶Xba Ⅰ和Sac Ⅰ（两种酶切 出的黏性末端不同）切割某DNA，获得含目的基因的片段。若利用该片段构建基因 表达载体，则下图中甲、乙、丁，Ti质粒均不宜选择，而丙Ti质粒宜选取。（分析 如下）
2.（2018·淮中、南师附中、海门、天一四校联考）基因表达载体的构建是基因工 程的核心。图1为限制酶EcoRⅠ的识别序列，图2表示目的基因及限制酶切点， 图3表示目的基因上的DNA片段，图4表示质粒。回答下列问题：
（1）若用图1所示的限制酶EcoRⅠ切割外源DNA，就其特异性而言，切开的
是
之间相连的化学键。
质粒的个数
。
（3）步骤4中应选用限制酶
切割重组质粒以获得一段线性DNA，然后
将其导入毕赤酵母菌细胞。为了确认毕赤酵母菌转化是否成功，应在培养基中
加入
以便筛选。除此以外，还可以用分子杂交技术鉴定上图中的毕赤
酵母菌转化是否成功，过程如下图所示：
根据图中显示结果推算，若要获得16个成功导入该基因的酵母菌菌落，则上图A中
②“标记基因”筛选后为何还需应用“DNA分子杂交技术”确认目的基因是否转入 ？ 经上述步骤筛选得到的受体细胞，只是含特定的标记基因的质粒，然而，该质粒上 是否成功嵌入了目的基因，还不能确定，故仍需使用“目的基因”作探针，利用 DNA分子杂交技术，检测受体细胞的质粒上是否含目的基因。 （2）使用“目的基因”作探针，运用“分子杂交技术”检测目的基因是否转录出 特定mRNA。 （3）采用“抗原—抗体杂交技术”，从转基因生物中提取蛋白质（作抗原）与相 应抗体杂交，依据是否出现杂交带确认目的基因是否“指导”特定蛋白质的合成。 （4）采用抗虫、抗病毒等“接种实验”进行目的基因成功表达的“个体生物学” 水平的检测。
宿主细胞控制，所以无法确定1个大肠杆菌复制3次后得到重组质粒的个数。（3）由 步骤4中获得的一段线性DNA两侧序列可知，应选用限制酶Bgl Ⅱ切割重组质粒，该 线性DNA中含卡拉霉素抗性基因，应在培养基中加入卡拉霉素以便筛选转化成功的毕
赤酵母菌。由图可知，图A中的酵母菌菌落数为15个时，用分子杂交技术鉴定有2个转
一套遗传密码子，所以目的基因能在大肠杆菌细胞内表达出相同的蛋白质。
答案 （1）鸟嘌呤脱氧核苷酸和腺嘌呤脱氧核苷酸 （2）BD （3）B和C 8 （ 4）Pst Ⅰ、EcoR Ⅰ 1 （5）抗四环素 各种生物共用一套遗传密码子
1.限制酶的选择原则
（1）根据目的基因两端的限制酶切点确定限制酶的种类 ①应选择切点位于目的基因两端的限制酶，以便将目的基因“切出”，如图甲可 选择PstⅠ。 ②不能选择切点位于目的基因内部的限制酶，以防破坏目的基因，如图甲不能选 择SmaⅠ。 ③为避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接，也可使用不同的限制酶切割目 的基因和质粒，如图甲也可选择用Pst Ⅰ和EcoR Ⅰ两种限制酶（但要确保质粒上 也有这两种酶的切点），而且这种切点不致于破坏所有的“标记基因”以及启动 子和终止子。