2015-2016学年 3.1《菊花的组织培养》课件
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课件5：3.1 菊花的组织培养
2. 培养基的配制(MS培养基)
大量元素、微量元素、有机物、植物激素 （生长素、细胞分裂素 ）
a.植物激素使用顺序对分化的影响
使用顺序 先生长素，后细胞分裂素 先细胞分裂素，后生长素
同时使用
b.植物激素使用量对分化的影响
结果 有利于细胞分裂但不分化
细胞既分裂也分化 分化频率提高
生长素/细胞分裂素比值 比值高时 比值低时 比值适中
A．说明高度分化的植物细胞具有全能性 B．植物细胞的全能性得以表达要离开母体 C．新植株的形成是细胞分裂和分化的结果 D．高度分化的动物细胞也具有全能
4. 甘薯种植多年后易积累病毒而导致品种退化。
目前生产上采用茎尖分生组织离体培养的方法快
速繁殖脱毒这种通过分生组织离体培养获得种苗的过
2.植物组织培养过程中的脱分化是指 （C）
A.植物体的分生组织通过细胞分裂产生新细胞 B.未成熟的种子经过处理培育出幼苗的过程 C.植物的器官、组织或细胞，通过离体培养产生愈 伤组织的过程 D.取植物的枝芽培育成一株新植物的过程
3. 胡萝卜的韧皮部细胞通过组织培养，能发育成新 的植株。下列有关的叙述中，不正确的是 （D ）
程不涉及细胞的（ C）
A.有丝分裂
B.分化
C.减数分裂
D.全能性
5.在离体的植物器官、组织或细胞脱分化形成愈伤 组织的过程中，下列哪一项条件是不需要的（C） A.消毒灭菌 B.适宜的温度 C.充足的光照 D.适宜的养料和激素
6. 植物细胞表现出全能性的必要条件是（D） A.导入其他植物细胞的基因 B.将成熟的细胞核移植到去核的卵细胞中 C.用适当浓度的秋水仙素处理 D.脱离母体后，给予适宜的营养和适宜的温度等 外界条件
3.1 菊花的组织培养
大量元素、微量元素、有机物、植物激素 （生长素、细胞分裂素 ）
a.植物激素使用顺序对分化的影响
使用顺序 先生长素，后细胞分裂素 先细胞分裂素，后生长素
同时使用
b.植物激素使用量对分化的影响
结果 有利于细胞分裂但不分化
细胞既分裂也分化 分化频率提高
生长素/细胞分裂素比值 比值高时 比值低时 比值适中
A．说明高度分化的植物细胞具有全能性 B．植物细胞的全能性得以表达要离开母体 C．新植株的形成是细胞分裂和分化的结果 D．高度分化的动物细胞也具有全能
4. 甘薯种植多年后易积累病毒而导致品种退化。
目前生产上采用茎尖分生组织离体培养的方法快
速繁殖脱毒这种通过分生组织离体培养获得种苗的过
2.植物组织培养过程中的脱分化是指 （C）
A.植物体的分生组织通过细胞分裂产生新细胞 B.未成熟的种子经过处理培育出幼苗的过程 C.植物的器官、组织或细胞，通过离体培养产生愈 伤组织的过程 D.取植物的枝芽培育成一株新植物的过程
3. 胡萝卜的韧皮部细胞通过组织培养，能发育成新 的植株。下列有关的叙述中，不正确的是 （D ）
程不涉及细胞的（ C）
A.有丝分裂
B.分化
C.减数分裂
D.全能性
5.在离体的植物器官、组织或细胞脱分化形成愈伤 组织的过程中，下列哪一项条件是不需要的（C） A.消毒灭菌 B.适宜的温度 C.充足的光照 D.适宜的养料和激素
6. 植物细胞表现出全能性的必要条件是（D） A.导入其他植物细胞的基因 B.将成熟的细胞核移植到去核的卵细胞中 C.用适当浓度的秋水仙素处理 D.脱离母体后，给予适宜的营养和适宜的温度等 外界条件
3.1 菊花的组织培养
菊花的组织培养PPT(完整版)
。
生长素/细胞分裂素比值＜1：促进生芽
B．接种工具灼烧后未待冷却就接种外植体 3、植物组织培养的基本过程
菊花：一般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝。
B．接种工具灼烧后未待冷却就接种外植体
C．愈伤组织形成初期没有给予充足的光照 D、棉花叶肉细胞培养成抗虫棉植株
生长素/细胞分裂素比值＜1：促进生芽
D．培养过程中保持温度、pH的适宜，但没有 C．器官、组织的细胞在不离体的情况下必须通过脱分化才能形成愈伤组织
蔗糖 碳源、渗透压
甘氨酸、维生素等 特殊营养物质
MS培养基
植物激素 生长素、细胞分裂素
编
生长素
1）激素浓度
号
(mol/L)
1
蒸馏水
适宜
2
10-12
3
10-11
4
10-10
5
10-9
6
10-8
7
10-7
8
10-6
9
10-5
10
10-4
11
10-3
12
10-2
根的 平均数目
20.2 27.8 32.5 33.7 28.5 28.1 23.7 20.8 19.6 11.1 4.2 0
二、影响植物组织培养的因素 1、材料的选择
菊花：一般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝。
2、MS培养基
大量元素、微量元素 无机盐
甘氨酸等 特殊营养物质
MS培养基
蔗糖 碳源、渗透压
植物激素 生长素、细胞分裂素
3、环境条件（pH、温度、光照）
三、实验操作
习题巩固
1、在离体的植物器官、组织或细胞脱分化形 成愈伤组织的过程中，下列哪一项条件是不 需要的（ C ） A.消毒灭菌 B.适宜的温度 C.充足的光照 D.适宜的养料和激素
生长素/细胞分裂素比值＜1：促进生芽
B．接种工具灼烧后未待冷却就接种外植体 3、植物组织培养的基本过程
菊花：一般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝。
B．接种工具灼烧后未待冷却就接种外植体
C．愈伤组织形成初期没有给予充足的光照 D、棉花叶肉细胞培养成抗虫棉植株
生长素/细胞分裂素比值＜1：促进生芽
D．培养过程中保持温度、pH的适宜，但没有 C．器官、组织的细胞在不离体的情况下必须通过脱分化才能形成愈伤组织
蔗糖 碳源、渗透压
甘氨酸、维生素等 特殊营养物质
MS培养基
植物激素 生长素、细胞分裂素
编
生长素
1）激素浓度
号
(mol/L)
1
蒸馏水
适宜
2
10-12
3
10-11
4
10-10
5
10-9
6
10-8
7
10-7
8
10-6
9
10-5
10
10-4
11
10-3
12
10-2
根的 平均数目
20.2 27.8 32.5 33.7 28.5 28.1 23.7 20.8 19.6 11.1 4.2 0
二、影响植物组织培养的因素 1、材料的选择
菊花：一般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝。
2、MS培养基
大量元素、微量元素 无机盐
甘氨酸等 特殊营养物质
MS培养基
蔗糖 碳源、渗透压
植物激素 生长素、细胞分裂素
3、环境条件（pH、温度、光照）
三、实验操作
习题巩固
1、在离体的植物器官、组织或细胞脱分化形 成愈伤组织的过程中，下列哪一项条件是不 需要的（ C ） A.消毒灭菌 B.适宜的温度 C.充足的光照 D.适宜的养料和激素
《菊花的组织培养》课件
菊花组织培养案例
菊花种子萌发的组织培养
利用组织培养技术，可实现菊花 种子取代传统方式萌发的目的。
菊花组织快速繁殖的组织 培养
通过组织培养技术，可以将菊花 的种子迅速繁殖，提高育种效率。
菊花细胞的悬浮培养
通过菊花细胞的悬浮培养技术， 可以在短时间内大量生产和收获 菊花组织。
常见问题及解决方案
1 细胞污染
《菊花的组织培养》PPT 课件
本课程将介绍如何进行菊花的组织培养。组织培养可以有效地促进植物生长 并获得质量更高的植物。让我们一起开始吧！
概述
什么是组织培养？
组织培养是指利用外界因素来控制细胞组织生 长、分化和发育的一种方法。
组织培养的意义
组织培养可用于繁殖难以育种的珍稀植物，也 可以研究细胞分裂及开发新品种等。
组织培养的发展趋势
未来的发展趋势是要提高组织培养技术的效率 和实用性，广泛应用于众多领域。
进行无菌操作可以避免细 胞污染，严格控制实验条 件。
2 培养基配制不当
按照具体的实验步骤制备 营养液，不同的植物需要 不同的培养基。
3 培养条件不合适
掌握适宜的环境温度、湿 度和通气量等因素，即可 提高菊花的培养成功率。
结语
菊花组织培养的应用前景
组织培养技术在植物学、农业及医学等领域有 广泛应用，将来有望推动更多领域的发展。
菊花的组织培养方法
1
材料准备
2
玻璃器皿、无菌培养基等实验用品。
3
培养基配制
பைடு நூலகம்
4
按照一定比例调配不同种类的营养物质，
如有机物、水、微量元素、激素等。
5
基本步骤
细胞分离、培养基配制、培养条件设置、 菊花细胞的悬浮培养等。
菊花的组织培养优质课件ppt
体 组
脱分化
愈 伤 再分化
芽
织 或 细
细胞分 裂素≈
组 织
根 细胞分裂
植 物 体
胞 生长素
素<生长素
不需要光
需要光
从使用情况来看，闭胸式的使用比较 广泛。 敞开式 盾构之 中有挤 压式盾 构、全 部敞开 式盾构 ，但在 近些年 的城市 地下工 程施工 中已很 少使用 ，在此 不再说 明。
（三）植物组织培养的理论基础---细胞全能性
ABCDE
BADCE
ABCDE
ABCDE
从使用情况来看，闭胸式的使用比较 广泛。 敞开式 盾构之 中有挤 压式盾 构、全 部敞开 式盾构 ，但在 近些年 的城市 地下工 程施工 中已很 少使用 ，在此 不再说 明。
血红蛋白基因开启
红细胞
合成血红蛋白
肌动蛋白基因关闭 (不合成肌动蛋白)
肌细胞
血红蛋白基因关闭 合成肌动蛋白 肌动蛋白基因开启 (不合成血红蛋白)
2、稳定性
造血干细胞 原红细胞 早幼红细
胞 中幼红细胞 晚幼红细胞 成
熟红细胞 死亡
3、不可逆性
从使用情况来看，闭胸式的使用比较 广泛。 敞开式 盾构之 中有挤 压式盾 构、全 部敞开 式盾构 ，但在 近些年 的城市 地下工 程施工 中已很 少使用 ，在此 不再说 明。
细胞分化是
否意味着细胞
中遗传物质的
植物组织培养
从使用情况来看，闭胸式的使用比较 广泛。 敞开式 盾构之 中有挤 压式盾 构、全 部敞开 式盾构 ，但在 近些年 的城市 地下工 程施工 中已很 少使用 ，在此 不再说 明。
（一）植物组织培养概念
在无菌和人工控制条件下，将离体的 植物器官、组织、细胞，培养在人工配置 的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导 其脱分化产生愈伤组织再分化形成丛芽， 最终形成完整的植株。
3.1菊花的组织培养课件
2、实验具体操作
（5）.移栽 移栽生根的试管苗之前，应 先打开封口膜，在培养间生 长几日；然后用流水清洗 根部培养基 ___________，将幼苗移植 消过毒的蛭石或珍珠岩 到____________________ 等环境中生活一段时间，进 行壮苗。最后进行露天栽培。
思考
在整个操作过程中，是如何来实现无菌环境的？
• 什么是再分化？ 脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可 以重新分化成根或芽等器官，这个过程叫做 再分化。 • 如何控制细胞的脱分化与再分化？
人为使用植物激素控制
（二）影响植物组织培养的因素
1、外植体的选取
阅读教材，思考影响植物组织培养 △不同植物的组织培养难度 差别很大 ___________ 的因素有哪些？
2、实验具体操作
（4）.培养 无菌箱 接种后的锥形瓶最好放在__________中 消毒 培养。培养期间定期进行_________，温度控制 12 在18～22 ℃，并且每天用日光灯光照_________h。 _________
思考
培养过程中为什么需要进行光照？
在培养过程中，是脱分化、再分化的 过程，随着芽和根的形成，就具有了 自养的能力，是由细胞到一个个体的 演变过程
生长素
/
细胞分裂素
高
利于根和愈伤组织的形成
适中 利于根芽的分化
（二）影响植物组织培养的因素
4、环境因素：
不同 不同的植物对各种条件的要求往往______。 如进行菊花的组织培养，一般将 pH控制在__________左右； 5.8 温度控制在__________ ； 18～22 ℃ 12h 并且每天用日光灯照射_____ 。
2、培养基的配制
MS培养基 常用的一种培养基为___________
生物：3-1菊花的组织培养(选修1)(优秀课件)
光照等
植株
植物激素 (3)对营养、环境等条件有相对特殊的要求，一般用 细胞发育
培养基；
、
条件对组织培养也很重要。
[思维激活1] 启动细胞分裂、脱分化、再分化的关键性植物激素是什么？ 提示
植物激素中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的 关键性激素。
1．植物组织培养的理论基础 (1)植物组织培养的理论基础是细胞的全能性。 (2)植物细胞全能性表达的条件： ①离体状态；
答案
D
菊花茎段培养的实验操作与评价
1．制备MS固体培养基 可分为配制 用的方法是 2．外植体消毒
各种母液
、配制 高压蒸汽灭菌 。
培养基
、灭菌。其中，灭菌常
70%的酒精
将外植体用流水冲净后，先用 消毒，再用无菌 0.1%的氯化汞溶液 水清洗，然后用 消毒，最后再用无菌水 清洗。
处理措施 将所污染的培养瓶统一放在高压蒸汽锅内进行高压 蒸汽灭菌，然后再打开培养瓶进行清理
【巩固2】 生物工程的研究成果已经广泛应用于各个领域，目前科学家利 用植物的茎尖或叶片、茎段等，在无菌条件下，培养在玻璃器皿中人工配 制的培养基上，使之发育成完整的植株。下图是运用该技术培养兰花植株 的示意图。下列关于这种生物工程技术的叙述，错误的是 ( )。
②无菌操作(防止杂菌污染)；
③适宜物质的诱导和调节(激素主要是生长素、细胞分裂素等)。
2．植物组织培养的过程及影响因素 (1)植物组织培养的一般过程分析(见下表) 过程 形成体特点 条件
过程名称 脱分化
再分化
由外植体形 排列疏松、高度液泡 ①离体 成愈伤组织 化的薄壁细胞团 ②提供营养物质(有 机物、无机物) 由愈伤组织 有根、芽或有生根发 ③提供激素 形成幼苗或 芽的能力 胚状体结构 ④提供其他适宜条 件
植株
植物激素 (3)对营养、环境等条件有相对特殊的要求，一般用 细胞发育
培养基；
、
条件对组织培养也很重要。
[思维激活1] 启动细胞分裂、脱分化、再分化的关键性植物激素是什么？ 提示
植物激素中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的 关键性激素。
1．植物组织培养的理论基础 (1)植物组织培养的理论基础是细胞的全能性。 (2)植物细胞全能性表达的条件： ①离体状态；
答案
D
菊花茎段培养的实验操作与评价
1．制备MS固体培养基 可分为配制 用的方法是 2．外植体消毒
各种母液
、配制 高压蒸汽灭菌 。
培养基
、灭菌。其中，灭菌常
70%的酒精
将外植体用流水冲净后，先用 消毒，再用无菌 0.1%的氯化汞溶液 水清洗，然后用 消毒，最后再用无菌水 清洗。
处理措施 将所污染的培养瓶统一放在高压蒸汽锅内进行高压 蒸汽灭菌，然后再打开培养瓶进行清理
【巩固2】 生物工程的研究成果已经广泛应用于各个领域，目前科学家利 用植物的茎尖或叶片、茎段等，在无菌条件下，培养在玻璃器皿中人工配 制的培养基上，使之发育成完整的植株。下图是运用该技术培养兰花植株 的示意图。下列关于这种生物工程技术的叙述，错误的是 ( )。
②无菌操作(防止杂菌污染)；
③适宜物质的诱导和调节(激素主要是生长素、细胞分裂素等)。
2．植物组织培养的过程及影响因素 (1)植物组织培养的一般过程分析(见下表) 过程 形成体特点 条件
过程名称 脱分化
再分化
由外植体形 排列疏松、高度液泡 ①离体 成愈伤组织 化的薄壁细胞团 ②提供营养物质(有 机物、无机物) 由愈伤组织 有根、芽或有生根发 ③提供激素 形成幼苗或 芽的能力 胚状体结构 ④提供其他适宜条 件
3.1《菊花的组织培养》课件(新人教选修1)
练习1、下图是植物组织培养的简略表示。据此回答：
脱分化 ① ② 再分化 ③ ④
（1）①表示__________________，它能被培养成为④的根本原因是 _________________ _____________________。 （2）②表示____________，它与①相比分化程度____________，全能性 ____________。 （3）若想制成人工种子，应选用____________。 （4）若①是花药，则④是____________，继续对其使用____________处理 可获得____________正常植株，该过程称为____________。 （5）若①是胡萝卜根尖细胞，则培养成④的叶片的颜色为____________， 这说明____________。 （6）若利用此项技术制造治疗烫伤、割伤的药物——紫草素，培养将进行 到____________。 答案： 答案： （1）离体的植物组织或器官 植物细胞具有全能性 （2）愈伤组织 低 高 （3） ） ） ） ③ （4）单倍体植株 秋水仙素 纯合体 单倍体育种 （5）绿色 含有表达叶绿 ） ） 体的基因 （6）② ）
接种
培养
思考：培养过程中为什么需要进行光照？ 答案：在培养过程中，是脱分化、再分化的过程，随着芽和根的形成，就具有了自养的 能力，是由细胞到一个个体的演变过程
移栽
思考：在整个操作过程中，是如何来实现无菌环境的？ 1、培养基的灭菌；（高压蒸汽灭菌）
栽培
2、外植体的消毒；（酒精、氯化汞） 3、接种的无菌操作；（酒精、酒精灯——灼烧） 4、无菌箱中的培养； 5、移栽到消过毒的环境中生存一段时原生质体//酶解法 （2）聚乙二醇 （PEG）//诱导不同植物体细胞的原生质体的融合 （3）植物组织培养// 脱分化//再分化 （4）远缘杂交亲本的遗传特征//杂种植株获得双亲的遗 传物质 （5）四 （6）可育//不能，因为不同生物之间存在生殖隔离//克 服远缘杂交不亲合的障碍，大大扩展了可用于杂交的亲本组合范围 （7） 不遵循，因为生物在进行有性生殖过程中才遵循孟德尔的遗传定律，而植 物体细胞杂交不属于有性生殖。
课件6：3.1 菊花的组织培养
移栽的主要目的是壮苗。
试管苗的培养过程中应注意的问题：
(1)培养一株完整的试管苗，必须先进行生芽培养，然 后进行生根培养，如果顺序颠倒，就不好诱导生芽了。
(2)试管苗应该进行见光培养。
(3)试管苗一般在高湿、弱光、恒温下异养生长，移出 瓶后一定要保温、保湿。 (4)试管苗光合作用能力低，在移栽前应给予较强光照 且进行闭瓶炼苗，以促进小苗向自养转化。
知识拓展
组织培养时不用天然激素而是用人工合成的激素， 是因为植物中存在相应的分解天然激素的酶而没有 分解相应的人工合成激素的酶，所以天然激素在植 物体内作用和存在的时间短，人工合成激素的作用 和存在的时间长，作用效果明显。
（四）消毒 1.外植体消毒
旺盛 嫩枝
流水 冲洗
(70％的酒精) 摇动2-3次6-7s
(无菌水)清洗
(无菌水) 清洗3次
刷洗，冲洗 20min左右
(无菌吸水纸) 吸干表面水分
(无菌吸水纸) 吸干表面水分
(氯化汞)溶液 浸泡1～2min
2.接种室消毒
污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接 种室消毒是至关重要的。用70％的酒精喷雾使 空气消毒，酒精或新洁尔灭搽洗工作台并用紫 外线照射20分钟。
（五）接种
所有的接种操作都必须在酒精灯旁进行。
每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为70％ 的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧一遍， 冷却后再接种。
插入时应注意方向，不要倒插。茎段、茎尖基部插 入培养基利于吸收水分和养分。
（六）培养
pH=5.8
每日光照12h
温度控制在18—22℃ （七）移栽和栽培
(3)是否进行了统计、对照与记录：
做好统计和对照，填好结果记录表，从第一步开始 做好实验记录。可以分组配制不同培养基，如诱导愈 伤组织直接分化丛芽的培养基，做不同培养基配方的 实验比较。
试管苗的培养过程中应注意的问题：
(1)培养一株完整的试管苗，必须先进行生芽培养，然 后进行生根培养，如果顺序颠倒，就不好诱导生芽了。
(2)试管苗应该进行见光培养。
(3)试管苗一般在高湿、弱光、恒温下异养生长，移出 瓶后一定要保温、保湿。 (4)试管苗光合作用能力低，在移栽前应给予较强光照 且进行闭瓶炼苗，以促进小苗向自养转化。
知识拓展
组织培养时不用天然激素而是用人工合成的激素， 是因为植物中存在相应的分解天然激素的酶而没有 分解相应的人工合成激素的酶，所以天然激素在植 物体内作用和存在的时间短，人工合成激素的作用 和存在的时间长，作用效果明显。
（四）消毒 1.外植体消毒
旺盛 嫩枝
流水 冲洗
(70％的酒精) 摇动2-3次6-7s
(无菌水)清洗
(无菌水) 清洗3次
刷洗，冲洗 20min左右
(无菌吸水纸) 吸干表面水分
(无菌吸水纸) 吸干表面水分
(氯化汞)溶液 浸泡1～2min
2.接种室消毒
污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接 种室消毒是至关重要的。用70％的酒精喷雾使 空气消毒，酒精或新洁尔灭搽洗工作台并用紫 外线照射20分钟。
（五）接种
所有的接种操作都必须在酒精灯旁进行。
每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为70％ 的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧一遍， 冷却后再接种。
插入时应注意方向，不要倒插。茎段、茎尖基部插 入培养基利于吸收水分和养分。
（六）培养
pH=5.8
每日光照12h
温度控制在18—22℃ （七）移栽和栽培
(3)是否进行了统计、对照与记录：
做好统计和对照，填好结果记录表，从第一步开始 做好实验记录。可以分组配制不同培养基，如诱导愈 伤组织直接分化丛芽的培养基，做不同培养基配方的 实验比较。
3-1菊花的组织培养课件
使用顺序 先使用生长素，后使用细胞 分裂素 先使用细胞分裂素后使用生 长素 同时使用 生长素/细胞分裂素比值 比值高时 比值低时
实验结果 有利于细胞分裂，但不利 分化 细胞既分裂也分化 分化频率高 结果 促根分化， 抑芽形成 促芽分化， 抑根形成 促进愈伤组织生长
比值适中
植物组织培养过程:
离 体 愈 脱分化 组 伤 再分化 织 组 或 细胞分裂素 织 ≈生长素 细胞分裂素 细 <生长素 胞
思考：你打算做几组重复？你打算设置对照实 验吗？
答：每种材料或配方至少要做一组以上的重复。 设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养 基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养， 用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。
（四）培养
1.接种后的锥形瓶最好放在无菌箱中培养，
培养期间定期消毒
2.培养温度控制在18~22℃
（二）植物组织培养的基本过程
离体器官、 脱分化 再分化 愈伤组织 根、芽 组织或细胞
植物体
菠萝的愈伤组织
（三）影响植物组织培养的因素
• • • • 1.材料的种类、年龄、保存时间长短等 2.营养 3.植物激素 4.PH、温度、光照等
1、植物材料的选择 ——直接关系实验成败 （1）不同植物的组织培养难度不同
造血干细胞 原红细胞 早幼红细 胞 中幼红细胞 晚幼红细胞 成 熟红细胞 死亡 不可逆性
细胞分化是 否意味着细胞 中遗传物质的 改变？
遗传物质没有改变， 不同组织的细胞共同 来源于受精卵，经有 丝分裂产生。
3、细胞分化的实质
基因
选择性表达的过程
A B C D E
A B C D E A B C D E
烟草和胡萝卜的组织培养较为容易
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4.植物组织培养过程
植物细胞培养 离 体 组 织 或 细 胞 细胞分裂素> 生长素
脱分化
细胞分裂 素≈生长 素
不需要光
愈 伤 再分化 组 织
芽
根
植 物 体
细胞分裂素< 生长素 需要光
5.植物组织培养的应用
（1）培育无病毒植株 （2）培养紫草愈伤组织,提取紫草素（治疗烫伤和割伤的 药物以及染料和化妆品的原料）
你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？
每种材料或配方至少要做一组以上的重复。设 置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养基 的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，用 以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。
（四）培养
接种后的锥形瓶最好放在无菌箱中培养。培养期间应定期 消毒。培养温度18~22℃，每日用日光灯光照12h。
都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。
2.无菌操作要求 操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后， 3.材料的切取和接种
4.接种注意事项
①每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为70％的酒 精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧一遍，冷却后 再接种 ②外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根据锥 形瓶的大小确定，一般胡萝卜3－4块，菊的茎或叶6－8块， 也不要太少，以充分利用培养基中的营养成分和光照条件 ③插入时应注意方向，不要倒插。茎段、茎尖基部插入培 养基利于吸收水分和养分
MS培养基 主要成分 包括：
A、大量元素: N、P、 S 、 K、Ca、Mg等 B、微量元素:B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co等 C、有机物、植物激素
（3）植物激素的影响
①常用的植物激素：生长素、细胞分裂素和赤 霉素
生长素类： 2，4－二氯苯氧乙酸（2，4－D）、吲哚乙酸 （IAA）、萘乙酸（NAA）、吲哚丁酸（IBA） 细胞分裂素类： 激动素（KT）、6－苄基嘌呤（ 6－ BA）、玉米素（ZT） 赤霉素类：赤霉酸（GA3）
若在无菌室中培养，提前用甲醛熏蒸房间。培养条件如上。
（五）移栽
移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养 1.打开封口膜： 瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日 用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过 2.清洗转移： 毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间 珍珠岩：固体基质型，含水量高、蓄水性强、透性好，适合栽培 3.移栽： 幼苗长壮后，移栽到土壤中
由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此不 必添加植物激素
3、灭菌 分装好的培养基连同其他器械一起进行 高压蒸汽灭菌
（二）外植体消毒 1.选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝 2.消毒 ①流水冲洗 菊花茎段用流水冲洗后可加少许洗衣粉，用软
刷轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左右
②酒精处理 用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体
积分数为70％的酒精中摇动2－3次，持续6－7s， 立即将外植体取出，在无菌水中清洗
③消毒液处理 取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，
放入质量分数为0.1％的氯化汞溶液中1－2min， 取出后在无菌水中至少清洗3次，漂净消毒液
2.消毒
70% 的酒精
氯化汞
（三）接种
1.接种室消毒
污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室消 毒射20分钟
1、配置各种母液
①无机物中大量元素浓缩10倍，微量元素浓缩100倍，常温 保存
②激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按1mg/ml 的质量浓度单独配制成母液
③用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数， 计算用量
2、配置培养基
① 配制培养液
② 调PH
③培养基的分装 分装到锥形瓶中，每瓶分装50ml或100ml
2.植物组织培养条件
必要条件 细胞离体
一定的营养物质、激素和其他外界条件
植物激素 无机盐 适宜条件 糖类 无菌、温度、光照… 原理: 细胞的全能性 离体
3.影响植物组织培养的因素
（1）植物材料的选择 A、植物材料的选择直接关系到实验的成败 烟草和胡萝卜的组织培养较为容易 枸杞愈伤组织的芽诱导比较难 B、同一植物材料的年龄、保存时间的长短会影响实验结果 菊花的组织培养一般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝 （2）不同的离体组织和细胞对营养、环境等条件的要求相 对特殊，需配置适宜的培养基
（六）栽培
幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情况， 适时浇水、施肥，直至开花
1. 植物细胞全能性表达的条件有哪些？ 提示：①离体； ②一定的营养物质、激素等； ③适宜的外界条件。 2. 讨论并回答脱分化的实质是什么？ 提示：已分化的细胞回到未分化状态。
3. 植物组织培养过程中为什么要严格进行无菌操作？ 提示：由于植物组织培养的培养基中加入了一些有机
专题3 植物组织培养技术
课题1 菊花的组织培养
1.了解植物组织培养中各阶段的变化 2.了解影响植物组织培养的因素 3.理解植物组织培养的基本原理和基本技术
以视频为背景材料，设计问题，导入新课介绍组培的 优越性；接着直接阐明植物组织培养的基础知识和原理， 再讲授组织培养的操作过程和注意事项。结合形象的图片 ，使内容呈现更为清晰明了；通过结果分析和课题延伸， 完善内化课堂知识。 通过添加典型实例，结合情景图片设置相关问题，层 层深入，以此来突破无菌操作流程这一重点内容；组织培 养的基本操作过程，是本节内容的难点，结合图示，设计 问题，并总结规律，由此突破这一难点内容。
③生长素和细胞分裂素同时使用，用量的比例对植物细胞 发育方向的影响
生长素 > 细胞分裂素：有利于根的分化 生长素 < 细胞分裂素： 有利于芽的分化，抑制根的 分化
生长素 ＝ 细胞分裂素： 促进愈伤组织生长 （4）pH、温度、光照 pH控制在5.8左右，温度控制在18－22。C,每日用日 光灯照射12h
组织培养简介
植物组织培养:是指在无菌和人工控制的环境 条件下，利用适当的培养基，对离体的植物器官、 组织及细胞进行培养，使其再生完整植株的技术。
一、组织培养的基础知识
1.相关概念 （1）细胞的分化： 在个体发育过程中，由一个或一种细 胞增殖产生的后代，在形态、结构、 生理功能上发生稳定性差异的过程
物，使一些异养型的细菌很容易在培养基上生存，它们的
生长繁殖与所培养的植物细胞争夺营养，同时细胞代谢产 生一些有毒物质，导致培养物腐烂。
4. 分析植物组织培养过程中每日用日光灯照射12 h的原因。
提示：再分化过程中，细胞中叶绿素的形成需要光。
菊花的组织培养
（2）细胞的全能性： 已经分化的细胞，仍然具有 发育成完整个体的潜能
（3）外植体： 离体的器官、组织、细胞
（4）愈伤组织：细胞排列疏松而无 规则,是高度液泡 化的、成无定形状 态的薄壁细胞
（5）脱分化：脱分化产生的愈伤组织继续进行 培养，又可以重新分化成根或芽 等器官的过程 （6）再分化： 由高度分化的植物组织或细胞产 生愈伤组织的过程，也叫去分化
（3）诱导离体的植物组织形成具有生根发芽能力的胚状结 构，包裹上人造种皮，制成人工种子，可以解决有些作物 品种繁殖能力差，结子困难或发芽率低等问题 （4）基因工程中亦需用到植物组织培养的方法
二、实验操作
（一）制备MS固体培养基
MS培养基包括20多种营养成分，实验室一般使用4。C保存 配制好的培养基母液来制备
②生长素和细胞分裂素作用 植物中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再 分化的关键性激素。在生长素存在的情况下，细胞分裂素 的作用呈现加强的趋势
使用顺序 先使用生长素，后使用细胞 分裂素 先使用细胞分裂素后使用生 长素 同时使用 实验结果 有利于细胞分裂，但不利分 化 细胞既分裂也分化 分化频率高