真菌(1-3)-β-D葡聚糖检测操作SOP文件

声明

本产品属精密光学仪器，在日常使用中，应严格按照我公司出具的操作流程进行试验操作，并确保工作环境正常。本试验的操作者必须为经我公司培训合格的微生物实验室检验人员，如需更换操作者，请做好交接工作，确保新的操作者了解仪器特性、熟悉操作流程。为避免试验结果不准确，请操作者认真阅读操作注意事项及操作流程，并严格遵守。如有任何疑问，请联系我公司售后服务部。

售后服务部电话：400-811-9958

北京金山川科技发展有限公司

真菌（1-3）-β-D葡聚糖测定

1.目的

建立真菌（1-3）-β-D葡聚糖检测标准操作规范，保证实验结果的准确性。

2.授权操作人

经培训合格的微生物实验室检验人员。

3.实验原理

（1-3）-β-D葡聚糖检测原理：真菌（1-3）-β-D葡聚糖激活酶反应主剂中的G因子后形成凝固蛋白，根据其所引起的浊度变化对真菌（1-3）-β-D葡聚糖浓度进行定量测定。

（1-3） -D-Glucan

活化因子G 因子G

凝固酶原凝固酶

凝固蛋白原凝固蛋白（凝胶）

4．产品性能指标

4.1 灵敏度最小检出值5pg/ml

5．实验组成

5.1实验仪器及器具：

MB-80微生物快速动态检测系统、洁净工作台、低速离心机、恒温仪， 20~200ul 加样器、100~1000ul加样器、旋涡混合器、定时器。

5.2实验耗材：

200ul无热原吸头、1000ul无热原吸头、无热原平底试管、无热原真空采血管。

5.3试剂盒组成：

真菌（1-3）-β-D 葡聚糖检测试剂盒（光度法）：

试剂盒包括反应主剂和样品处理液。

6．工作环境

相对湿度：20%~80%；温度控制：10~30℃；电源电压：220V±10%，50Hz±2%。

7．标本采集、处理及保存

7.1检测样本：

血液、肺泡盥洗液、胸腔积液、腹水、脑脊液、尿液（无菌取中段尿或穿刺尿）

7.2采集要求：

采样过程要求无菌操作，用专用的无热原真空采血管（肝素类抗凝）。

常规病人早上用药治疗前空腹采血/取样（血透患者透析前采血）。

7.3样本保存：

样本采集后应在3000转/分进行离心，若不能及时检测，应将血浆转移至无热原转移管内，在-30℃冰箱中冷冻保存，一周内使用。

8．操作程序

8.1 打开MB-80微生物快速动态检测系统主机、电脑及恒温仪预热30min。

8.2 打开MB-80微生物快速动态检测系统，录入病人、样本种类及检测项目等信息后点

击采集。

8.3 前处理过程，无菌操作，用专用无热原真空采血管（肝素类抗凝）抽取静脉血4ml

轻轻混匀，按转速3000r/min进行离心1分钟，得到富含血小板血浆。

8.4 取上述富含血小板血浆100uL，加入到样品处理液中，摇匀后插入恒温仪加热区中

进行70℃干热10min。

8.5干热结束后，将前处理液冷却至室温后取出（取出时切忌震荡）。

8.6 取上述前处理液中上清液200uL加入到反应主剂中，轻轻混匀，待完全溶解后，全

部移液至平底试管中(不要产生气泡)，立即插入MB-80微生物快速动态检测系统中进行检测。

8.7 反应结束后仪器自动计算结果并保存。

待测血浆样品制备、检测示意图

9．操作注意事项

9.1预热采集

在进行试验之前，仪器一定要提前预热30min，达到工作温度后，按要求填写表头信息，完毕后点击采集，使仪器处于采集状态后再进行试验。

9.2 样本预处理

9.2.1 血液标本3000r/min离心1min。

9.2.2 取富含血小板血浆（离心后上层清液的中部）。

9.2.3 70℃加热时间严格控制在10-12min。

9.2.4 样本处理液加热冷却后，不要震荡、摇晃以免将处理过的下层干扰物质悬浮上

来。

9.2.5 取处理液的上清液。

9.2.6 加入主剂的200uL液体要全部转移至平底试管，转移过程中不能出现气泡。

9.2.7 平底试管要一次插到底，插入后不要再碰触。

10．结果判断与分析

检测值﹤10pg/ml,阴性。

检测值介于10～20pg/ml之间，临床观察期，建议动态采血检测。

检测值﹥20pg/ml，阳性，建议再次采血以确诊。

11．实验解释

本实验结果仅对本标本负责，提供给临床参考，请结合其他诊断方法和临床表现做综合诊断。

12. 特殊标本处理

对一般黄疸、溶血、乳糜血标本，稀释2~5倍后进行检测。稀释步骤为：取100ul血浆标本加入到样品处理液中，经过70℃干热并冷却后，再取一定量上述经处理后的标本用另外的一支样品处理液进行相应倍数的稀释，即得待测标本，然后取200ul加入到反应主剂，溶解后全部转移至平底试管中插入仪器进行检测，并在检测软件中“稀释倍数”一栏填上稀释倍数，仪器就会按照相应的稀释倍数计算结果。

备注：对于严重的黄疸、溶血、乳糜血标本，应重新采血。

13．干扰因素

13.1产生的假阳性的原因有：应用纤维膜进行血液透析患者、某些纱布或其他医疗物品

中含有葡聚糖、某些品牌的静脉制剂（白蛋白、凝血因子、免疫球蛋白等）含有葡聚糖、某些细菌败血病患者（尤其是链球菌败血症）。

13.2特殊真菌如接合菌（毛霉菌、根霉菌）细胞壁没有（1-3）-β-D 葡聚糖成分，隐

球菌细胞壁外有荚膜致使（1-3）-β-D 葡聚糖释放不出，这些真菌无法检测到。

14．质量控制

血浆标本进行测定时应同时进行质控品的质量控制，目的是测定真菌（1-3）-β-D葡聚糖的测试性能及验证检测结果的准确性能。

14-A 室内质控

14-A-1 质控品来源

为标准（1-3）-β-D葡聚糖纯品，经称量、分装冷冻干燥制备的冻干品。

14-A-2 组成

包括质控品、质控品溶解液、反应主剂、说明书、质控图等

14-A-3 储存和稳定性

储存2~8℃；有效期3年。其中质控品溶解后，溶液2~8℃保存7天。

14-A-4 操作

见说明书。

14-A-5 安全防范

真菌（1-3）-β-D葡聚糖质控品为经冷冻干燥制成无菌制品，因此为避免微生物污染，操作