GMP-无菌检查操作规程
gmp无菌医疗器械及现场检查指导原则
gmp无菌医疗器械及现场检查指导原则无菌医疗器械是在医疗领域中广泛应用的一类器械，其质量与安全性直接关系到患者的生命和健康。
为了保证无菌医疗器械的质量，各国纷纷制定了相应的指导原则和监管措施。
本文将针对gmp无菌医疗器械及现场检查指导原则进行详细介绍。
一、gmp无菌医疗器械的概念和重要性GMP（Good Manufacturing Practice）是指合格的生产规范，旨在确保药品和医疗器械的质量、安全性和有效性。
无菌医疗器械是指在使用前不需要再经过灭菌处理的医疗器械，其制造过程需要严格遵守GMP的要求，以确保产品的无菌性。
无菌医疗器械的质量和安全性对于患者的治疗效果和生命安全至关重要。
二、gmp无菌医疗器械的制造要求1. 设备和工艺控制：生产无菌医疗器械的企业应具备适当的设备和工艺控制能力，确保产品在制造过程中不受到污染。
2. 原材料和包装材料的质量控制：无菌医疗器械的原材料和包装材料应符合相关的质量标准，且供应商应具备良好的供应质量管理体系。
3. 人员培训和卫生要求：相关人员应接受充分的培训，了解无菌医疗器械的制造要求和操作规程，并应遵守相关的卫生要求，如穿戴洁净服、戴口罩等。
4. 环境控制：生产无菌医疗器械的场所应具备适宜的温度、湿度和洁净度，以保证产品的质量。
5. 工艺验证和过程控制：在生产过程中，应进行工艺验证和过程控制，以确保产品的无菌性。
三、gmp无菌医疗器械的现场检查指导原则1. 检查人员应具备相关的技术知识和经验，了解无菌医疗器械的制造要求和现场检查的程序。
2. 现场检查应根据相关的检查指导原则进行，对无菌医疗器械的制造设施、设备、原材料、包装材料、生产记录等进行全面检查。
3. 检查过程中应注重对关键环节的监控，如无菌区域的洁净度、灭菌设备的有效性验证等。
4. 对于发现的问题，应及时提出整改要求，并对整改措施进行跟踪和监督，确保问题得到解决。
5. 现场检查结果应及时记录，形成检查报告，并将结果反馈给相应的监管部门。
(完整版)2010版GMP无菌药品附录
附录1：无菌药品第一章范围第一条无菌药品是指法定药品标准中列有无菌检查项目的制剂和原料药，包括无菌制剂和无菌原料药。
第二条本附录适用于无菌制剂生产全过程以及无菌原料药的灭菌和无菌生产过程。
第二章原则第三条无菌药品的生产须满足其质量和预定用途的要求，应当最大限度降低微生物、各种微粒和热原的污染。
生产人员的技能、所接受的培训及其工作态度是达到上述目标的关键因素，无菌药品的生产必须严格按照精心设计并经验证的方法及规程进行，产品的无菌或其它质量特性绝不能只依赖于任何形式的最终处理或成品检验（包括无菌检查）。
第四条无菌药品按生产工艺可分为两类：采用最终灭菌工艺的为最终灭菌产品；部分或全部工序采用无菌生产工艺的为非最终灭菌产品。
第五条无菌药品生产的人员、设备和物料应通过气锁间进入洁净区，采用机械连续传输物料的，应当用正压气流保护并监测压差.第六条物料准备、产品配制和灌装或分装等操作必须在洁净区内分区域（室）进行。
第七条应当根据产品特性、工艺和设备等因素，确定无菌药品生产用洁净区的级别。
每一步生产操作的环境都应当达到适当的动态洁净度标准，尽可能降低产品或所处理的物料被微粒或微生物污染的风险。
第三章洁净度级别及监测第八条洁净区的设计必须符合相应的洁净度要求，包括达到“静态”和“动态”的标准。
第九条无菌药品生产所需的洁净区可分为以下4个级别：A级：高风险操作区，如灌装区、放置胶塞桶和与无菌制剂直接接触的敞口包装容器的区域及无菌装配或连接操作的区域，应当用单向流操作台（罩）维持该区的环境状态。
单向流系统在其工作区域必须均匀送风,风速为0.36-0。
54m/s（指导值）。
应当有数据证明单向流的状态并经过验证。
在密闭的隔离操作器或手套箱内，可使用较低的风速。
B级：指无菌配制和灌装等高风险操作A级洁净区所处的背景区域.C级和D级:指无菌药品生产过程中重要程度较低操作步骤的洁净区.以上各级别空气悬浮粒子的标准规定如下表：注：（1）为确认A级洁净区的级别，每个采样点的采样量不得少于1立方米.A级洁净区空气悬浮粒子的级别为ISO 4。
药品生产质量管理规范GMP及附录一无菌药品(2010年修订,2011年3月施行)
药品生产质量管理规范（2010年修订）（卫生部令第79号）中华人民共和国卫生部第 79 号令《药品生产质量管理规范（2010年修订）》已于2010年10月19日经卫生部部务会议审议通过，现予以发布，自2011年3月1日起施行。
部长陈竺二○一一年一月十七日第一章总则第一条为规范药品生产质量管理，根据《中华人民共和国药品管理法》、《中华人民共和国药品管理法实施条例》，制定本规范。
第二条企业应当建立药品质量管理体系。
该体系应当涵盖影响药品质量的所有因素，包括确保药品质量符合预定用途的有组织、有计划的全部活动。
第三条本规范作为质量管理体系的一部分，是药品生产管理和质量控制的基本要求，旨在最大限度地降低药品生产过程中污染、交叉污染以及混淆、差错等风险，确保持续稳定地生产出符合预定用途和注册要求的药品。
第四条企业应当严格执行本规范，坚持诚实守信，禁止任何虚假、欺骗行为。
第二章质量管理第一节原则第五条企业应当建立符合药品质量管理要求的质量目标，将药品注册的有关安全、有效和质量可控的所有要求，系统地贯彻到药品生产、控制及产品放行、贮存、发运的全过程中，确保所生产的药品符合预定用途和注册要求。
第六条企业高层管理人员应当确保实现既定的质量目标，不同层次的人员以及供应商、经销商应当共同参与并承担各自的责任。
第七条企业应当配备足够的、符合要求的人员、厂房、设施和设备，为实现质量目标提供必要的条件。
第二节质量保证第八条质量保证是质量管理体系的一部分。
企业必须建立质量保证系统，同时建立完整的文件体系，以保证系统有效运行。
第九条质量保证系统应当确保：（一）药品的设计与研发体现本规范的要求；（二）生产管理和质量控制活动符合本规范的要求；（三）管理职责明确；（四）采购和使用的原辅料和包装材料正确无误；（五）中间产品得到有效控制；（六）确认、验证的实施；（七）严格按照规程进行生产、检查、检验和复核；（八）每批产品经质量受权人批准后方可放行；（九）在贮存、发运和随后的各种操作过程中有保证药品质量的适当措施；（十）按照自检操作规程，定期检查评估质量保证系统的有效性和适用性。
GMP无菌药品附录
附录1：无菌药品第一章范围第一条无菌药品是指法定药品标准中列有无菌检查项目的制剂和原料药，包括无菌制剂和无菌原料药。
第二条本附录适用于无菌制剂生产全过程以及无菌原料药的灭菌和无菌生产过程。
第二章原则第三条无菌药品的生产须满足其质量和预定用途的要求，应当最大限度降低微生物、各种微粒和热原的污染。
生产人员的技能、所接受的培训及其工作态度是达到上述目标的关键因素，无菌药品的生产必须严格按照精心设计并经验证的方法及规程进行，产品的无菌或其它质量特性绝不能只依赖于任何形式的最终处理或成品检验（包括无菌检查）。
第四条无菌药品按生产工艺可分为两类：采用最终灭菌工艺的为最终灭菌产品；部分或全部工序采用无菌生产工艺的为非最终灭菌产品。
第五条无菌药品生产的人员、设备和物料应通过气锁间进入洁净区，采用机械连续传输物料的，应当用正压气流保护并监测压差。
第六条物料准备、产品配制和灌装或分装等操作必须在洁净区内分区域（室）进行。
第七条应当根据产品特性、工艺和设备等因素，确定无菌药品生产用洁净区的级别。
每一步生产操作的环境都应当达到适当的动态洁净度标准，尽可能降低产品或所处理的物料被微粒或微生物污染的风险。
第三章洁净度级别及监测第八条洁净区的设计必须符合相应的洁净度要求，包括达到“静态”和“动态”的标准。
第九条无菌药品生产所需的洁净区可分为以下4个级别：A级：高风险操作区，如灌装区、放置胶塞桶和与无菌制剂直接接触的敞口包装容器的区域及无菌装配或连接操作的区域，应当用单向流操作台（罩）维持该区的环境状态。
单向流系统在其工作区域必须均匀送风，风速为0.36-0.54m/s（指导值）。
应当有数据证明单向流的状态并经过验证。
在密闭的隔离操作器或手套箱内，可使用较低的风速。
B级：指无菌配制和灌装等高风险操作A级洁净区所处的背景区域。
C级和D级：指无菌药品生产过程中重要程度较低操作步骤的洁净区。
以上各级别空气悬浮粒子的标准规定如下表：注：（1）为确认A级洁净区的级别，每个采样点的采样量不得少于1立方米。
新版GMP附录1+无菌药品附..
附录1：无菌药品第一章范围第一条无菌药品是指法定药品标准中列有无菌检查项目的制剂和原料药，包括注射剂、眼用制剂、无菌软膏剂、无菌混悬剂等。
第二条本附录适用于无菌制剂生产全过程以及无菌原料药的灭菌和无菌生产过程。
第三条悬浮粒子、浮游菌、沉降菌和表面微生物等测试方法应按照相关标准执行。
第二章原则第四条无菌药品的生产须满足其质量和预定用途的要求，应最大限度降低微生物、各种微粒和热原的污染。
生产人员的技能、所接受的培训及其工作态度是达到上述目标的关键因素，无菌药品的生产必须严格按照精心设计并经验证的方法及规程进行，产品的无菌或其它质量特性绝不能只依赖于任何形式的最终处理或成品检验。
第五条无菌药品按生产工艺可分为两类：采用最终灭菌工艺的为最终灭菌产品；部分或全部工序采用无菌生产工艺的为非最终灭菌产品。
第六条无菌药品生产的人员、设备和物料应通过气锁间进入洁净区，如采用机械连续传输物料时，应采用正压气流保护并监测压差。
物料准备、产品配制和灌装或分装等操作必须在洁净区内分区（室）进行。
第七条应按所需环境的特点确定无菌药品洁净生产区的级别。
每一步生产操作的环境都应达到适当的动态洁净度标准，以尽可能降低产品或所处理的物料被微粒或微生物污染的风险。
第三章洁净度级别及监测第八条洁净区的设计必须符合相应的洁净度要求，包括达到“静态”和“动态”的标准。
第九条无菌药品生产所需的洁净区可分为以下4个级别：A级高风险操作区，如：灌装区、放置胶塞桶、敞口安瓿瓶、敞口西林瓶的区域及无菌装配或连接操作的区域。
通常用层流操作台（罩）来维持该区的环境状态。
层流系统在其工作区域必须均匀送风，风速为0.36-0.54m/s（指导值）。
应有数据证明层流的状态并须验证。
在密闭的隔离操作器或手套箱内，可使用单向流或较低的风速。
B级指无菌配制和灌装等高风险操作A级区所处的背景区域。
C级和D级指生产无菌药品过程中重要程度较低的洁净操作区。
以上各级别空气悬浮粒子的标准规定如下表：注：(1)为了确定A级区的级别，每个采样点的采样量不得少于1m3。
[整理]版gmp无菌制剂实施指南.
![[整理]版gmp无菌制剂实施指南.](https://img.taocdn.com/s3/m/741eb17ff18583d049645992.png)
14.6过滤除菌本节旨在提供系统的方法对除菌过滤工艺进行选择和验证。
除菌过滤过程中的关键设备为除菌（级）过滤器，对其进行的具体确认和验证项目的相关原理和要求等，将在以下14.6.1~14.6.3中详细阐述。
按照不同药品分类，需要、推荐、可选和评估后确定是否进行的确认和验证项目，总结为下表。
很多生产最终灭菌产品的企业，在最终灭菌前，为控制微生物污染水平，使用过滤器对最终灭菌前的产品进行过滤。
此时，不论该企业采用了何种过滤器，包括精度（标称）为0.45μm的过滤器、0.2μm的微生物污染控制过滤器，甚至0.2μm除菌级过滤器，因为这些过滤器的使用目的都是在最终灭菌之前对微生物污染水平进行控制，而不是作为产品生产过程中最后一步的灭菌手段，对这些过滤器的工艺验证要求，低于非最终灭菌产品除菌过滤过程中所使用的除菌级过滤器。
14.6.1除菌级过滤器的验证/细菌截留【法规要求】编者理解：在这里法规要求的第一个要点是在采用除菌过滤方法时，首先确认采用的过滤器为“除菌级”的，即“除菌过滤器”。
达到此要求后，除菌过滤法中的其它无菌保障措施才有意义。
定义过滤器是否为除菌级，需要依据过滤器的微生物截留能力，并完成相关的标准方法确认和工艺验证。
而过滤药液所用的时间、流速、温度、滤出总量、过滤器二侧压力（压差）、药液对微生物的生存性的影响和过滤器的重复使用等情况，都是可能影响过滤器细菌截留能力的重要因素，需要在验证过程中考虑并确证。
【背景介绍】除菌过滤是指除去流体中微生物的工艺过程，该过程不应对产品质量产生不良影响。
包括液体和气体除菌过滤。
药品生产中采用的除菌过滤膜的孔径一般不超过0.22um（或者0.2um，这两种标称没有区别）。
当膜过滤器在1960年代出现在市场上时，0.45um孔径的膜被认为是“除菌级”的液体过滤器，并被成功应用于注射剂的除菌过滤。
这些过滤器采用黏质沙雷氏菌(Serratia marcescens）进行挑战确认。
3无菌检查法(薄膜过滤法)操作程序
贵州明湖药业股份有限公司GMP文件目的建立无菌检查法。
依据国家药品监督局《药品生产质量管理规范》(2010年修订)第七十五条范围本标准适用于抗菌药物注射液。
责任人试剂配制人及QA负责人、化验员对本标准实施负责。
内容1 概述无菌检查是检查药品是否染有活菌的一种方法。
2仪器、设备和用具2.1 恒温培养箱及可调20～25℃的生化培养箱。
2.2 显微镜、蒸汽灭菌器、标准pH比色器(0.02％酚磺酞指示液和澳钾酚蓝指示液)、恒温烤箱。
2．3 三角瓶、刻度吸管(1、5、10m1)、玻璃器皿、移液管、试管。
2．3．1 移液管、刻度吸管在管口上端内，松松地塞少许棉花，然后放于吸管衙内或牛皮纸袋内盖严，灭菌备用。
2.3.2 试管、三角瓶等在管(瓶)口塞上海棉胶专用塞或纱布棉塞，塞子应塞进管口内2／3处，用皮纸格管口(包括塞子)包扎严,灭菌备用。
2.3.3 将注射器、针头(8—9号)配对，检查针头是否畅通后，将注射芯、管和针头分别放在双层纱布(或布)内，包扎严密，置带盖容器(瓷盘或铝制饭盒)内，盖严，用牛皮纸包扎后，灭菌备用。
2.4 无菌衣、裤、帽、口罩等洗净晾干，配套，用牛皮纸包严，灭菌备用或用一次性的无菌物品代替。
2.5 真空泵。
2.6 用具的灭菌将包扎妥的用具(除另有规定外)，在(121土0．5)℃蒸气灭菌30分钟，物品取出时切勿立即置冷处，以免急速冷却，使灭菌物品内蒸气冷凝造成负压，易致染菌，应置恒温培养箱中烘干。
适于高温灭菌的器皿也可采用160℃干热灭菌2小时。
3 试液3.1 75％乙醇溶液配制酒精棉球用。
3.2 碘配溶液配制碘酒棉球用。
3.3 新洁尔灭(1：1000)溶液。
3.4 3-5％甲酚溶液或其他适宜消毒溶液。
3.5 0.02％酚磺酞指示液pH6.8-8.4系列比色液管3.6 溴甲酚蓝指示液pH6.0-7.6系列比色液管。
3.7 2mol/L盐酸溶液。
3.8 2mol/L氢氧化钠溶液。
4 培养基4.1 一般采用商品脱水培养基，临用时按照使用说明书进行配制，需注意培养基的pH值应符合规定，否则必须校正后，灭菌使用。
无菌药品GMP检查指南
无菌药品GMP检查指南2015年10月目录一、目的 (3)二、适用范围及检查依据 (3)三、无菌药品生产工艺概述 (3)四、检查要点 (6)(一)质量管理系统 (6)(二)厂房、设施及设备系统 (9)(三)物料系统 (15)(四)生产系统 (18)(五)包装和贴签系统 (24)(六)实验室控制系统 (26)五、参考文献 (29)一、目的本指南的主要目的是为检查员在实施无菌药品生产企业检查时提供指导。
检查组应参照本指南的要求检查无菌药品生产质量管理情况，评价企业无菌保证的能力，以确定企业是否符合《药品生产质量管理规范（2010年修订）》（以下简称GMP）的要求。
二、适用范围及检查依据本指南适用于无菌药品的GMP检查，包括无菌制剂生产全过程和无菌原料药的灭菌和无菌生产过程。
无菌药品是指法定药品标准中列有无菌检查项目的制剂和原料药，通常包括大容量注射剂、小容量注射剂、粉针剂、冻干粉针剂、眼用制剂、耳用制剂、埋植剂、供雾化器用的液体制剂、冲洗剂、外用制剂、无菌原料药等。
无菌药品按生产工艺可分为两类：采用最终灭菌工艺的为最终灭菌产品；部分或全部工序采用无菌生产工艺的为非最终灭菌产品。
本指南适用于对上述不同生产工艺及不同类型的无菌药品的检查。
检查过程中，检查员应依据《药品生产质量管理规范（2010年修订）》及其附录来确定检查缺陷所涉及的条款。
三、无菌药品生产工艺概述无菌药品按生产工艺可分为最终灭菌产品和非最终灭菌产品两类，部分或全部工序采用无菌生产工艺的为非最终灭菌产品。
无菌药品、直接接触药品的包装材料应尽可能采用热力灭菌方式进行最终灭菌。
采用湿热灭菌方法进行最终灭菌的，通常标准灭菌时间F0值应当大于8分钟，流通蒸汽处理不属于最终灭菌。
最终灭菌产品中的微生物存活概率（即无菌保证水平，SAL）不得高于10-6。
(一)最终灭菌工艺产品的无菌保证水平不能仅依赖最终灭菌。
灭菌工艺必须与产品注册批准要求相一致，且应当经过验证。
无菌药品GMP检查指南
无菌药品GMP查看指北之阳早格格创做2015年10月目录一、脚法3二、适用范畴及查看依据 (3)三、无菌药品死产工艺概括 (3)四、查看重心6(一)本量管制系统6(二)厂房、办法及设备系统9(三)物料系统15(四)死产系统18(五)包拆战揭签系统24(六)真验室统制系统26五、参照文献29一、脚法本指北的主要脚法是为查看员正在真施无菌药品死产企业查看时提供指挥.查看组应参照本指北的央供查看无菌药品死产本量管制情况，评介企业无菌包管的本领，以决定企业是可切合《药品死产本量管制典型（2010年建订）》（以下简称GMP）的央供.二、适用范畴及查看依据本指北适用于无菌药品的GMP查看，包罗无菌制剂死产齐历程战无菌本料药的灭菌战无菌死产历程.无菌药品是指法定药品尺度中列有无菌查看名脚法制剂战本料药，常常包罗大容量注射剂、小容量注射剂、粉针剂、冻搞粉针剂、眼用制剂、耳用制剂、埋植剂、供雾化器用的液机制剂、浑洗剂、中用制剂、无菌本料药等.无菌药品按死产工艺可分为二类：采与最后灭菌工艺的为最后灭菌产品；部分大概局部工序采与无菌死产工艺的为非最后灭菌产品.本指北适用于对付上述分歧死产工艺及分歧典型的无菌药品的查看.查看历程中，查看员应依据《药品死产本量管制典型（2010年建订）》及其附录去决定查看缺陷所波及的条款.三、无菌药品死产工艺概括无菌药品按死产工艺可分为最后灭菌产品战非最后灭菌产品二类，部分大概局部工序采与无菌死产工艺的为非最后灭菌产品.无菌药品、间接交战药品的包拆资料应尽大概采与热力灭菌办法举止最后灭菌.采与干热灭菌要领举止最后灭菌的，常常尺度灭菌时间F0值应当大于8分钟，流利蒸汽处理不属于最后灭菌.最后灭菌产品中的微死物存活概率（即无菌包管火仄，SAL）不得下于10-6.(一)最后灭菌工艺产品的无菌包管火仄不克不迭仅依好最后灭菌.灭菌工艺必须与产品备案担当央供相普遍，且应当通过考证.最后灭菌工艺常常将产品正在净净度级别较下净净区（不得矮于C级）举止灌拆战稀启，以降矮产品的微死物战微粒传染.最后灭菌前的所有工序应尽大概降矮产品微死物传染火仄，进而降矮灭菌工艺的危害.灭菌要领常常包罗干热灭菌法、搞热灭菌法、辐射灭菌法、气体灭菌法.1、干热灭菌法本法系指将东西置于灭菌柜内利用下压鼓战蒸汽、过热火喷淋等脚法使微死物菌体中的蛋黑量、核酸爆收变性而杀灭微死物的要领.该法是热力灭菌中最灵验、应用最广大的灭菌要领.药品、容器、培植基、胶塞以及其余逢下温战干润不爆收变更大概益坏的东西，均可采与本法灭菌.流利蒸汽不克不迭灵验杀灭细菌孢子，不属于最后灭菌.干热灭菌法包罗过分杀灭法、残存概率法.(1)过分杀灭法：①通时常使用于热宁静的产品大概东西；②无论待灭菌的产品大概东西中本量微死物的传染火仄易耐热性怎么样，均能最大程度保证无菌包管火仄，需要时，应当监控热本大概细菌内毒素；③待灭菌的产品大概东西需要下温战/大概万古间的处理.(2)残存概率法：①需要钻研决定产品大概东西中微死物传染火仄易耐热性；②能杀灭微死物，但是不益害产品；③需对付灭菌前产品的微死物传染火仄举止凡是是监控，相识产品及环境监测样品中微死物的耐热性.无论采与何种灭菌参数，皆必须道明其灭菌工艺战监控步伐脚以保证被灭菌产品大概东西的无菌包管火仄.2、搞热灭菌法本法系指将东西置于搞热灭菌柜、隧讲烘箱等设备中，利用搞热气氛达到杀灭微死物大概去除热本物量的要领.适用于耐下温但是不宜用干热灭菌法灭菌的东西，如玻璃器具、金属容器等均可采与本法灭菌.搞热灭菌前，普遍无需检测东西的微死物传染火仄.搞热灭菌条件普遍为160～170℃×120分钟、170～180℃×60分钟大概250℃×45分钟以上，也可采与其余灭菌参数，但是均应包管被灭菌东西的无菌包管火仄.某些搞热灭菌条件可与消热本物量，但是必须通过考证确认.3、辐射灭菌法本法系指将东西置于相宜搁射源辐射的γ射线大概相宜的电子加速器爆收的电子束中举止电离辐射而达到杀灭微死物的要领.本法最时常使用的为60Co -γ射线辐射灭菌.容器、死产辅帮用品、不受辐射益害的本料药及废品等均可用本法灭菌.γ射线辐射灭菌所统制的参数主假如辐射剂量（指灭菌东西的吸支剂量）.该剂量的制定应试虑灭菌东西的切合性及大概传染的微死物传染火仄及最强抗辐射力，应试证所使用的剂量不效率被灭菌东西的仄安性、灵验性及宁静性.时常使用的辐射灭菌吸支剂量为25kGy.对付最后产品、本料药应尽大概采与矮辐射剂量灭菌.灭菌前，应付于被灭菌东西微死物传染的数量战抗辐射强度举止测定，以评介灭菌历程给予该灭菌东西的无菌包管火仄.对付于已设定的剂量，应定期考查，以考证其灵验性.辐射灭菌时，应采与切合的化教大概物理要领对付灭菌东西吸支的辐射剂量举止监控，以充分证据灭菌东西吸支的剂量正在确定的极限内.如采与与灭菌东西所有被辐射的搁射性剂量计，剂量计要置于确定的部位.正在初拆置时剂量计应用尺度源举止矫正，并定期举止再矫正.60Co-γ射线辐射灭菌法时常使用的死物指示剂为短小芽孢杆菌孢子.4、气体灭菌法本法系指用化教消毒剂产死的气体杀灭微死物的要领.时常使用的化教消毒剂有环氧乙烷、气态过氧化氢、甲醛等，本法适用于正在气体中宁静的东西灭菌.采与气体灭菌法时，应注意灭菌气体的可焚可爆性、致畸性战残留毒性.本法中最时常使用的气体是环氧乙烷，普遍与80%～90%的惰性气体混同使用，正在充有灭菌气体的下压腔室内举止.该法可用于塑料制品等不克不迭采与热力灭菌的东西灭菌.含氯的东西及能吸附环氧乙烷的东西则不宜使用本法灭菌.采与环氧乙烷灭菌时，灭菌柜内的温度、干度、灭菌气体浓度、灭菌时间是效率灭菌效验的要害果素.灭菌条件应予考证.(二)无菌死产工艺采与无菌死产工艺死产的产品比最后灭菌工艺死产的产品微死物传染危害下，效率果素多.正在无菌灌拆工艺中，产品、间接交战药品的包拆资料分别灭菌后，正在A级净净区下灌拆大概分拆，以降矮微死物传染的危害.对付已灭菌药品、间接交战药品的包拆资料的所有支配皆存留微死物传染的危害.保守的无菌死产工艺中，特天是正在支配人员加进灌拆线的A级净净区时，人是主要的传染源.除了正在关键支配天区有惯例支配人员搞预中，还波及对付无菌产品、间接交战药品的包拆资料举止脚工支配.暂时，已越去越多企业采与更进步的无菌死产技能，如节制加进屏障系统（RABS）战吹灌启技能（BFS），其进步的安排不妨缩小人员对付无菌灌拆关键支配天区的搞预；断绝支配器可把无菌灌拆战中部环境真足分开，最大极限减矮人员对付关键支配天区的效率.查看无菌药品时，应重面关注对付产品有最大传染危害的系统战天区以及需要庄重统制的工艺参数.比圆，一家企业罕见条无菌工艺死产线，应重面关注正在A级净净区需要最多脚工支配的死产线.如果一家企业有多个最后灭菌产品，应重面关注对付热敏感并采与残存概率法灭菌的产品.四、查看重心(一)本量管制系统1、企业应当建坐药品本量管制体系，使用本量危害管制的要领对付本量危害举止评估、统制、相通、考查，最大极限天降矮药品死产历程中的传染、接叉传染以及殽杂、过得等危害，对付于无菌药品而止，应重面关注统制微死物传染的步伐.对付本量管制系统的查看分为二个部分：(1)查看企业本量管制部分是可履止了本量管制体系确定的相关工做，并保证本量管制体系灵验运止.(2)查看企业正在死产本量管制历程中支集到的数据，以决定潜正在的本量危害.那些数据的周到考查战评估是保证产品无菌的基础央供，果此，屡屡查看皆应关注那些数据及趋势分解报告，评介产品的无菌包管火仄.2、本量管制系统的查看应包罗但是不限于所列出的真量：(1)产品本量回瞅分解报告：①死产工艺宁静性评介情况；②产品本量趋势分解.(2)投诉与药品不良反应监测报告：①投诉与不良反应监测记录、评估、观察战处理情况；②需要时采与的纠正步伐；③对付相关产品的处理.(3)退货与召回：①退货记录；②对付果产品本量本果退货的评估.需要时举止蔓延查看；③当产品存留仄安隐患时，是可即时开用并赶快真施召回步调；④对付退货/召回产品的处理.(4)返工/重新加工及回支：①对付返工/重新加工大概回支产品的评估、考查战担当情况，但是重新加工仅限于无菌本料药；②需要的考证、特殊考验战宁静性观察截止；③偏偏好战波折的观察.(5)偏偏好记录、评估、观察、处理:爆收以下情形时，应针对付根根源基本果大概大概的本果采与纠正步伐战防止步伐：①所有无菌查看阳性截止战培植基模拟灌拆波折；②非常十分的截止大概趋势；③灭菌工艺、除热本工艺考证大概再考证波折；④培植基模拟灌拆、无菌工艺模拟波及的所有观察；⑤环境及人员监控截止超出警戒极限大概纠偏偏极限；⑥火系统监控截止超出警戒极限大概纠偏偏极限；⑦波及关键设备历程统制的偏偏好及设备障碍，如灭菌柜、冻搞机；⑧产品含量测定、杂量、不溶性微粒、复溶时间（如适用）的OOS数据；⑨分歧格产品（死产历程监测战本量统制检测截止判决分歧格的）.(6)变动统制：①变动统制记录；②变动对付产品本量潜正在效率评估、需要的确认大概考证；③变动担当；④上次查看此后关键办法设备的变动统制情况，比圆：灭菌器、冻搞机、除热本设备；⑤无菌死产线、病毒灭活工艺；⑥杂蒸汽系统、工艺气体系统；⑦注射用火系统；⑧气氛净化系统；⑨自动化管制系统.(7)持绝宁静性观察：①对付要害变动大概死产战包拆有要害偏偏好的产品，大概重新加工、返工大概回支的产品举止宁静性观察的情况；②趋势分解以及创制非常十分时需要的蔓延查看、评估；③物料战产品的搁止：对付物料战产品举止本量评介的记录.(8)供应商的评估战担当：①对付供应商的本量评估；②本量协议；③供应商本量档案.(9)确认与考证：①关键办法设备确认筹备战报告；②关键工艺考证，如灭菌工艺考证、病毒灭活考证、培植基模拟灌拆；③共用设备浑净考证；④确认战考证状态的维护、再考证.(10)委派死产与委派考验：①委派圆战受托圆签订的书籍里合共，单圆责任；②委派圆对付保证物料战产品切合相映的本量尺度所采与的步伐；③受托圆必须具备的厂房、设备、知识战体味以及人员条件.(11)人员天分及支配：①死产控制人、本量控制人战本量受权人的天分战体味；②关键岗位，如配制、灭菌、病毒灭活、无菌灌拆、无菌查看岗位人员支配的典型性.(二)厂房、办法及设备系统无菌药品死产厂房、办法战设备不妨谦脚产品无菌包管央供.本系统的查看分由二部分：1、查看、评估企业是可充分思量厂房、办法战设备的安排谦脚预约的用途；2、评估厂房、办法战设备处于受控状态的疑息数据.除查看厂房、办法设备的工艺筹备战确认数据中，查看人员应重面关注厂房、办法及设备防止性维护、维建状态（如设备老化引起的变形、腐蚀等），特天是设备老化大概引起的大概反复爆收的非常十分情况，设备表面无法大概易以浑净的部位、已经确认的大概效率产品本量的关键设备大概系统的变动，超出办法设备死产本领的批量变更.(1)厂房鉴于产品会受到悬浮粒子战微死物传染的危害，净净区应有切合的安排尺度（如工艺筹备、气流目标、净净度级别、分歧房间战天区的压好、温度、相对付干度等）.应评估厂房办法的安排战工艺筹备情况（如：人物流走背、净净区安排等），需查看净净区确认战考证文献以证据切合安排尺度.净净区确认战考证数据普遍包罗：气流流型考查、下效气氛过滤器（HEPA）完备性尝试、气流流速尝试、悬浮粒子、切合的压好梯度、温度战相对付干度等.重面查看、评估动背死产情况下的气流办法（如烟雾考查），以确认无菌药品、间接交战药品的包拆资料所表露环境的单背流战紊流情况.查看应包罗但是不限于所列出的真量：①查看凡是是监测战维护数据是可能保证气氛净化系统正在设定的参数范畴内持绝运止（微死物监测查看重心睹真验室统制系统）；②需特天注意净净室内及净净室周边厂房办法的动工，果为微死物（如真菌的孢子）大概由于墙壁的振动大概其余施处事业而被释搁，判决该厂房办法正在正式死产前是可不妨通过切合的步伐战脚法（如环境监测战培植基模拟灌拆考查）回复到可担当的环境统制火仄；③查看死产支配历程中悬浮粒子等环境监测的布面位子，确认是可包罗了产品、间接交战产品的包拆资料表露的危害最大的位子；④查看凡是是死产历程中是可监控压好及压好梯度、温度、相对付干度；⑤决定连绝监测系统是可有脚以引起支配人员注意的报警功能；⑥查看如有超出可担当范畴内的偏偏好是可举止观察，以评估对付产品的效率战需要的纠正步伐；⑦查看关键天区下效气氛过滤器的定期检测、再考证情况，包罗下效气氛过滤器的完备性尝试以及风速、气流流型的查看；⑧查看净净区的浑净战消毒情况.重面查看无菌产品表露大概已真足稀启的下危害天区.应查看消毒剂的适用性、效力战限制性以及消毒步调的充分性，包罗设定的消毒剂的灵验期；⑨对付于共用厂房战设备，应评估其调换品种的步调战浑净步调是可不妨灵验防止分歧产品之间的接叉传染.(2)设备无菌药品死产中普遍使用以下设备：①死产设备；②间接交战药品的包拆资料战容器具处理设备（如胶塞荡涤机、玻璃器皿除热本设备）；③公用系统及其相关设备（如注射用火系统及相关设备、工艺用气系统）.查看应包罗但是不限于所列出的真量：①死产设备②无菌死产设备决定间接交战产品的设备（比圆：过滤器、输支管路、储罐、胶塞料斗、灌拆线等）战与产品间接交战的包拆资料（比圆胶塞）正在使用前已灭菌并正在使用历程中受到呵护不会被传染.设备使用日志大概其余相关疑息应记录要害维建及大概减少产品受传染危害的其余问题.③轧盖设备（西林瓶）瓶盖是包管西林瓶稀启的最后启心组件，西林瓶中的铝盖可呵护胶塞免受中部益害，共时紧压住胶塞使之真足稀启.应查看评估轧盖设备的参数树坐（包罗卷直角度、压力等），并建坐轧盖设备的防止性维护计划.④灌拆后目检/自动查看设备应付于灌拆战稀启后的产品通过脚动、自动大概半自动的办法举止100%的局部查看.脚动大概半自动化查看应指定查看环境并校准光源.半自动查看可使用传递戴大概转动目检设备供支配人员举止查看.所有的传递戴及转动速率等设定的参数应通过考证决定.齐自动检测系统应能对付给定的产品举止一项大概多项瑕疵的查看，其查看的瑕疵典型应预先被定义并制备供挑拨性确认瑕疵样品.惯例使用前，灌拆后目检/自动查看设备确认以及挑拨性确认应得到评估，挑拨性确认截止与人为目检支配截止应脆持普遍.⑤灭菌设备查看应涵盖用于产品、灌拆设备、容器等灭菌设备的拆置（IQ）、运止（OQ）及本能确认（PQ）、支配、校准战防止性维护.灭菌设备包罗干热灭菌柜、搞热灭菌柜、搞热隧讲烘箱、正在线灭菌（SIP）设备战睦体灭菌系统（如：过氧化氢、过氧乙酸）.灭菌设备查看应包罗设备材量、回瞅设备安排确认（DQ）中举止形貌的技能参数以及是可有切合的丈量拆置（如温度传感器、压力表等），并确认灭菌设备维护、校准战排火是可仄常.DQ应正在IQ战OQ之前举止.应查看设备的防止性维护计划战维护记录，以保证所有主要变动举止评估并考证.还应查看设备的使用日志,如：果循环障碍引导的二次灭菌大概隐现灭菌设备存留宽重问题.二次灭菌对付产品本量的效率应举止危害评估.灭菌设备不妨用人为大概者电脑统制.对付于使用估计机统制系统的应举止评估并确认，如可编写逻辑统制器（PLC）大概者更搀杂的数据支集统制系统（SCADA）禁锢统制.⑥冻搞设备由于冻搞历程中产品处于半加塞状态，正在灌拆中断至真足稀启前无菌产品是表露正在环境中的.查看应确认半加塞产品的转运及拆载处于A级层流呵护之下.查看时应瞅察产品的出进箱支配.冻搞设备的查看还应包罗：冻搞机灭菌考证、灭菌统制步伐、揭收尝试、气体过滤器完备性检测、温度战压力统制器的校准等.⑦断绝支配器查看评估断绝支配器的安排战统制元件，应关注是可能脆持产品的灵验断绝，如压好、脚套完备性以及物料进、出传播时的呵护步伐等断绝支配关键果素.应重面关注庄重统制东西出进断绝支配器的传播历程，以及断绝支配器腔室内的浑净战灭菌步调.断绝支配器表面灭菌主要采与气体灭菌（如：过氧化氢、过氧乙酸），灭菌考证应道明不妨使死物指示剂达到10-6的缩小量.可用定量尝试分解拆置（如近黑中）大概者化教指示剂（定性尝试）去查看通过死物指示剂考证出的最好条件的位子.其余应试虑的果素包罗如死物指示剂的搁置位子及指示剂接种表面的典型.与产品间接交战的工器具以及断绝器的内表面应举止灭菌保证无微死物传染.⑧节制加进断绝系统（RABS）RABS系统是一条将支配人员与产品灌拆历程举止灵验物理断绝的死产线.支配人员使用脚套箱、半身防备服正在灌拆历程中对付里里天区举止搞预支配.常常情况下，RABS 的背景环境央供起码为C级，且支配人员应衣着确定的净净服.有二种形式的RABS，即“开搁式的”战“启关式的”.“启关式的”RABS正在支配齐历程中真足不克不迭挨开；“开搁式的”RABS普遍也处正在关关状态下举止支配，但是正在某些预先定义的特殊情况下不妨挨开柜门举止搞预支配.如果该系统正在灌拆历程中时常被挨开举止搞预支配，则不被认为是RABS系统，果为它无法再对付关键天区举止出进节制.应当使用杀孢子剂对付RABS系统的内表面举止消毒，企业应建坐消毒步调，并持绝保证消毒步调的灵验性.节制加进断绝系统（RABS）的查看重心包罗:•拆置前应确认脚套箱的脚套是无菌的.别的，脚套拆置后应不妨定期消毒战检漏，以尽管降矮传染的危害.•应确认有粗确的书籍里步调，央供对付开门搞预的支配历程举止记录.所有的搞预支配均应正在批死产记录中记录，并包罗之后的消毒记录等.•RABS系统的浑净支配应当举止记录.•确认所有间接交战产品的部件，均应正在每批产品死产前已举止灭菌.•瞅察东西变化至RABS内的历程.考证传输系统不妨防备无菌表面不被再次传染.•RABS内与产品不间接交战的表面正在每批产品死产前应使用杀孢子剂真足消毒.所有消毒步调的灵验性也应依照计划举止考证，并定期评估.⑨吹灌启技能（BFS）吹灌启技能（BFS）是一条集容器成型、灌拆以及启心正在连绝的工序中自动完毕的灌拆历程.吹灌启技能（BFS）是通过缩小支配人员的搞预支配进而降矮产品传染的危害.钻研标明被传染的产品数量战微死物传染火仄与设备周围的气氛净净度有间接通联.间接交战药品的包拆资料的内表面正在容器成型历程之前背去表露于环境中，正在灌拆战稀启步调产品也表露于环境中.果此，用于死产非最后灭菌产品的吹灌启设备自己应拆有A级层流呵护拆置，人员着拆应当切合A/B级净净区的式样，吹灌启设备起码应当拆置正在C级净净区环境中.用于死产最后灭菌产品的吹灌启设备起码应当拆置正在D级净净区环境中.吹灌启技能（BFS）死产线及无菌过滤器普遍使用正在线灭菌.吹灌启技能（BFS）的查看重心包罗:•正在无菌产品及资料表露工序支配时（容器成型战灌拆历程），确认设备的下效过滤器处于仄常运奇迹态并系A级净净区.•查看与吹灌启技能相关的大众系统（热却火、加热系统等）已举止了定期监控战防止性维护.•查看用于死产线灭菌的正在线灭菌系统.确认灭菌周期通过考证且热凝火粗确排搁.该死产线正在死产战灭菌历程中也应加以维护.•确认加进BFS系统天圆天区的人员通过切合的换衣并受过相关训练.•如有大概，瞅察设备的开用历程，以及大概引导传染危害的其余情况.⑩反应釜、离心机、搞燥机、混同机那类设备普遍用于无菌本料药的死产.设备战所有的料液输支管讲正在使用前必须通过灭菌处理，常常使用正在线灭菌大概化教灭菌.应查看正在线灭菌系统的考证、循环统制战惯例监控.设备战所有输支管讲应稀关且所有死产历程中脆持无菌.查看企业怎么样正在死产历程中保证设备的完备性.若一台设备正在死产历程中被挨开（如增加晶种），应保证敞心支配的环境处于A级层流呵护产品不受传染.○11间接交战药品的包拆资料战容器具的处理设备查看历程中应试虑设备确认、胶塞荡涤考证战支援数据、设备的防止性维护（包罗维护央供战频次）、胶塞荡涤用火火量、胶塞荡涤历程监测情况，以及搞燥历程所用气体的适用性等.b.去热本设备耐下温东西的去热本设备包罗搞热灭菌柜战/大概去热本的隧讲烘箱.不耐下温的东西，如胶塞的去热本支配可通过注射用火反复荡涤去完毕.○12公用系统相关的设备应查看注射用火的死产过程图、制备系统、调配系统及防止性维护计划.调配系统包罗储罐、管路、阀门、呼吸器等.与火系统相关的监控系统也应举止评估.可共时参照本指北中物料系统的火系统部分.b.空调系统：查看维护与调养；评估监测截止.药品死产历程中与药品交战大概与关键设备交战的气体称为工艺用气.用于无菌支配大概消毒后支配的气体必须通过除菌过滤器过滤，以保证无菌.应查看评估除菌过滤器（常常为疏火性的）的完备性尝试.工艺用气的制备设备也应举止评估，如防止性维护的时间表、监控（如温度、压力战相对付干度），并与样检测.可共时参照本指北中物料系。
药品GMP无菌检验操作指导书
ABC药品有限公司药品生产质量管理体系操作规程文件2020年最新版编制: 日期:审核: 日期:批准: 日期:发放范围：公司各部门2020年01月01日生效目录序号内容页码1目的 (3)2 适用范围 (3)3职责 (3)4 内容 (3)文件更改履历 (4)1.目的：建立无菌检查的标准操作规程，确保检验结果的准确性。
2.范围：适用于本厂质监科化验室对本厂生产的注射剂进行无菌检查。
3.责任：化验员有责任按本操作规程操作，并对检验结果负责。
4.定义：无菌检查法系指检查药品是否无菌的一种方法。
5.内容：5.1无菌操作设备：无菌操作室或超净工作台，无菌衣、口罩、帽子、消毒鞋、酒精灯等。
5.1.1无菌室分无菌操作室和缓冲间。
在缓冲间内应有洗手盆、干手器、无菌衣放置架及挂钩、拖鞋等。
无菌操作室应具有空气除菌过滤的层流装置，局部洁净度100级超净工作台。
缓冲间及操作室内均设置能达到空气消毒的紫外光灯和照明灯，操作室或工作台应保持空气正压。
5.1.2无菌室应每周和每次操作前用0.1％新洁尔灭或2％甲酚液擦拭操作台及可能污染的死角，开动无菌空气过滤器及紫外光灯杀菌1小时。
在每次操作完毕，同样用2％甲酚或0.1％新洁尔灭溶液擦拭工作台面，用紫外光灯杀菌半小时。
5.1.3无菌室的无菌程度检查：无菌室在消毒处理后，无菌试验前及操作过程中需检查空气中菌落数。
取直径90mm双碟，在接种室内点燃酒精灯，在酒精灯旁，以无菌操作，将双碟半开注入溶化的营养琼脂培养基约20ml，制成平板：在35-37℃预培养48小时，证明无菌后将3个平板以无菌方式带入无菌操作间的洁净区域左、中、右各放1个；打开碟盖扣置，平板在空气中暴露30分钟后将盖盖好，置35-37℃培养48小时，取出检查，3个平板上生长的菌落数相加总数不得超过10个。
无菌操作台面或超净工作台应定期请有关部门检测其洁净度，应达到100 级（一般用尘埃粒子计数仪），检测尘埃粒径≤5μm的粒数不得超过3.5个／升；空气流量应控制在0.75-1.0m3/s；细菌菌落数平均<1个，可根据无菌状况定期置换过滤器。
GMP检查细则(菌检室)
GMP检验细则（）
2802 生物检定、微生物程度检定和放射性同位素检定等应分室进行。
-- 微生物检测室通常分：无菌检测室、微生物程度检测室、阳性对照室。
-- 无菌室检测室：万级背景下百级层流。
有条件企业可采取隔离操作系统，确保环境条件优于或等于生产环境，预防假阳性
-- 微生物程度检测室：万级背景下百级层流
-- 阳性对照室：用于微生物判别、毒、菌种传代等。
条件好企业能够使用生物安全柜，避免致病菌扩散。
条件差可使用层流柜，但必需是垂直流。
阳性对照室回风应经过处理后直排。
-- 抗生素效价测定、不溶性微粒测定通常要求在避菌条件下进行，可在层流操作台下完成。
◇检验微生物试验室应注意：
-- 无菌室和微生物程度室不可公用更衣室及缓冲间，预防污染无菌室；
-- 无菌检验时要监测环境，同时作沉降菌检验；定时对微生物试验室作环境监控，测悬浮粒子及沉降菌。
-- 检验企业是否做无菌室及层流柜高效过滤器检漏试验，是否定时验证。
1．无菌检验室应按无菌操作区管理，最少应在10，000级背景下局部100级超净工作台内进行，不得和生物检定、微生物程度检验，污染菌判别和阳性对照试验使用同一试验室。
2．无菌检验室和非无菌操作间共享人流通道时，有没有对应管理方法，如避免在同一时间同时做不一样性质试验；对检品外表面进行取样，看消毒是否达成预期效果等。
3．微生物程度试验、生物负荷（Ambient load或Bioburden）检验可在同一室进行；孢子D值测定、污染菌判别和阳性对照试验可在同室进行但应使用不一样LAF操作台；细菌内毒素检验不需要无菌操作条件。
这些试验均应有书面规程，并有预防污染方法。
新版GMP中要求的操作规程
新版GMP中要求的操作规程一、应当制定操作规程确保质量受权人独立履行职责，不受企业负责人和其他人员的干扰。
(第20条)质量受权人独立履行职责SOP 二、企业应当建立人员卫生操作规程，包括与安康、卫生习惯及人员着装相关的容；应当采取措施，防止体表有伤口、患有传染病或其他可能污染药品疾病的人员从事直接接触药品的生产。
〔第29、30、32条〕人员卫生SOP三、应当对厂房进展适当维修，并确保维修活动不影响药品的质量。
应当按照详细的书面操作规程对厂房进展清洁或必要的消毒。
〔第41条〕厂房清洁及消毒SOP四、应建立设备使用、清洁、维护和维修的操作规程，并保存相应的操作记录。
〔第72条〕设备使用、清洁、维护和维修的SOP 五、生产用模具的采购、验收、保管、维护、发放及报废应当制定相应操作规程，设专人专柜保管，并有相应记录。
〔第78条〕生产用模具的采购、验收、保管、维护、发放及报废SOP六、应当制定设备的预防性维护方案和操作规程，设备的维护和维修应当有对应的记录。
〔第80条〕其中设备编码很重要，可看出在哪个房间的哪个设备，工艺规程、批生产记录中都应表达。
设备的预防性维护方案和SOP七、主要生产和检验设备都应当有操作规程、生产设备还要有清洁规程。
〔第82条、84条〕用于生产或检验的设备和仪器，应当有使用日志，容包括使用、清洁、维护和维修情况以及日期、时间、所生产及检验的药品名称、规格和批号。
〔第86条〕主要生产和检验设备SOP/使用日志、生产设备清洁SOP八、应当按照操作规程和校准方案定期对生产和检验用衡器、量具、仪表、记录和控制设备以及仪器进展校准和检查，并保存记录。
〔第90条〕衡器、量具、仪表、记录和控制设备以及仪器校准和检查的SOP九、应当按照操作规程对纯化水、注射用水管道进展清洗消毒，并有相关记录。
〔第101条〕纯化水、注射用水管道清洗消毒SOP 十、应当建立物料和产品的操作规程，确保物料和产品的正确接收、贮存、发放、使用和发运。
微生物限度检查法操作规程
制药GMP管理文件题 目微生物限度检查操作规程制 定审 核批 准制定日期审核日期批准日期颁发部门GMP办 颁发数量2生效日期分发部门质量管理部、综合办公室一、引用标准：中华人民共和国S药典（2005年版）一部。
二、目 的：本标准规定了微生物限度检查法标准操作规程。
三、适用范围：适用于微生物限度的检查。
四、责 任 者：质检人员。
正 文：1、简述 微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。
检查项目包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。
微生物限度检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内进行。
检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。
单向流空气区域、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。
供试品检查时，如果使用了表面活性、中和剂或灭活剂，应证明其有效性及对微生物的生长和存活无影响。
除另有规定外，本检查法中细菌培养温度为30～35℃；霉菌、酵母菌培养温度为23～28℃；控制菌培养温度为35～37℃。
检验结果以1g、1ml、10g、10ml或10㎝2为单位报告。
检验量： 检验量即一次试验所用的供试品量（g、ml、㎝2）。
除另有规定外，一般供试品的检验量为10g或10ml；贵重药品、微量包装药品的检验量可以酌减。
要求检查沙门氏菌的供试品，其检验量应增加10g或10ml。
检验时，应从2个以上最小包装单位中抽取供试品。
一般应随机抽取不少于检验用量（两个以上最小包装单位）的3倍量供试品。
2、供试液的制备根据供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法制备供试液。
供试液制备若需用水浴加温时，温度不应超过45℃供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小时。
除另有规定外，常用的供试液制备方法如下。
（1），液体供试品 取供试品10ml，加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为1：10的供试液了。
无菌室操作规程
GMP文件--无菌室操作规程1.目的：本规程旨在为无菌操作及无菌室的保护提供一个标准化规程。
2.适用范围：生测实验室3.责任者：QC主管生测员4.定义：无5.安全注意事项：严格无菌操作，防止微生物污染；操作人员进入无菌室应先关掉紫外灯。
6.规程6.1.无菌室应设有无菌操作间和缓冲间，无菌操作间洁净度应达到10000级，室内温度保持在20-24℃，湿度保持在45-60%。
超净台洁净度应达到100级。
6.2.无菌室应保持清洁，严禁堆放杂物，以防污染。
6.3.严防一切灭菌器材和培养基污染，已污染者应停止使用。
6.4.无菌室应备有工作浓度的消毒液，如5％的甲酚溶液，70％的酒精，0.1％的新洁尔灭溶液，等等。
6.5.无菌室应定期用适宜的消毒液灭菌清洁，以保证无菌室的洁净度符合要求。
6.6.需要带入无菌室使用的仪器，器械，平皿等一切物品，均应包扎严密，并应经过适宜的方法灭菌。
6.7.工作人员进入无菌室前，必须用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在缓冲间更换专用工作服，鞋，帽子，口罩和手套(或用70%的乙醇再次擦拭双手)，方可进入无菌室进行操作。
6.8.无菌室使用前必须打开无菌室的紫外灯辐照灭菌30分钟以上，并且同时打开超净台进行吹风。
操作完毕，应及时清理无菌室，再用紫外灯辐照灭菌20分钟。
6.9.供试品在检查前，应保持外包装完整，不得开启，以防污染。
检查前，用70％的酒精棉球消毒外表面。
6.10.每次操作过程中，均应做阴性对照，以检查无菌操作的可靠性。
6.11.吸取菌液时，必须用吸耳球吸取，切勿直接用口接触吸管。
6.12.接种针每次使用前后，必须通过火焰灼烧灭菌，待冷却后，方可接种培养物。
6.13.带有菌液的吸管，试管，培养皿等器皿应浸泡在盛有5%来苏尔溶液的消毒桶内消毒，24小时后取出冲洗。
6.14.如有菌液洒在桌上或地上，应立即用5%石碳酸溶液或3％的来苏尔倾覆在被污染处至少30分钟，再做处理。
工作衣帽等受到菌液污染时，应立即脱去，高压蒸汽灭菌后洗涤。
2010版GMP实施指南无菌药品----无菌区着装和更衣确认
2010版GMP实施指南无菌药品----无菌区着装和更衣确认《药品生产质量管理规范》2010 版：第三十四条任何进入生产区的人员均应按规定更衣。
工作服的选材、式样及穿戴方式应与所从事的工作和空气洁净度级别要求相适应。
药品生产质量管理规范2010 版附录1：无菌药品第二十三条应当按照操作规程更衣和洗手，尽可能减少对洁净区的污染或将污染物带入洁净区。
第二十四条工作服及其质量应与生产操作的要求及操作区的洁净度级别相适应，其式样和穿着方式应能满足保护产品和人员的要求。
各洁净区的着装要求规定如下：D 级洁净区：应将头发、胡须等相关部位遮盖。
应当穿合适的工作服和鞋子或鞋套。
应当采取适当措施，以避免带入洁净区外的污染物。
C 级洁净区：应将头发、胡须等相关部位遮盖，应当戴口罩。
应当穿手腕处可收紧的连体服或衣裤分开的工作服，并穿适当的鞋子或鞋套。
工作服应不脱落纤维或微粒。
A/B 级洁净区：应当用头罩将所有头发以及胡须等相关部位全部遮盖，头罩应塞进衣领内，应当戴口罩以防散发飞沫，必要时戴防护目镜。
应当戴经灭菌且无颗粒物（如滑石粉）散发的橡胶或塑料手套，穿经灭菌或消毒的脚套，裤腿应塞进脚套内，袖口应塞进手套内。
工作服应为灭菌的连体工作服，不脱落纤维或微粒，并能滞留身体散发的微粒。
第二十五条个人外衣不得带入通向B级或C 级洁净区的更衣室。
每位员工每次进入A/B 级洁净区，应当更换无菌工作服；或每班至少更换一次，但应当用监测结果证明这种方法的可行性。
操作期间应当经常消毒手套，并在必要时更换口罩和手套。
第二十六条洁净区所用工作服的清洗和处理方式应当能够保证其不携带有污染物，不会污染洁净区。
应当按照相关操作规程进行工作服的清洗、灭菌，洗衣间最好单独设置。
【背景介绍】洁净室内操作人员快步行走时发菌量远大于静止时的发菌量；咳嗽会增加发菌量，而打一次喷嚏会大大增加发菌量；穿衣也会使发菌量大大增加。
无菌操作前及无菌操作全过程中，操作人员的活动应注意避免衣着遭受不必要的污染。
最新无菌药品GMP检查指南汇编
一、目的 (3)二、适用范围及检查依据 (3)三、无菌药品生产工艺概述 (3)四、检查要点 (6)(一) 质量管理系统 (6)(二) 厂房、设施及设备系统 (9)(三) 物料系统 (15)(四) 生产系统 (18)(五) 包装和贴签系统 (24)(六) 实验室控制系统 (26)五、参考文献 (29)一、目的本指南的主要目的是为检查员在实施无菌药品生产企业检查时提供指导。
检查组应参照本指南的要求检查无菌药品生产质量管理情况，评价企业无菌保证的能力，以确定企业是否符合《药品生产质量管理规范（2010年修订）》（以下简称GMP）的要求。
二、适用范围及检查依据本指南适用于无菌药品的GMP检查，包括无菌制剂生产全过程和无菌原料药的灭菌和无菌生产过程。
无菌药品是指法定药品标准中列有无菌检查项目的制剂和原料药，通常包括大容量注射剂、小容量注射剂、粉针剂、冻干粉针剂、眼用制剂、耳用制剂、埋植剂、供雾化器用的液体制剂、冲洗剂、外用制剂、无菌原料药等。
无菌药品按生产工艺可分为两类：采用最终灭菌工艺的为最终灭菌产品；部分或全部工序采用无菌生产工艺的为非最终灭菌产品。
本指南适用于对上述不同生产工艺及不同类型的无菌药品的检查。
检查过程中，检查员应依据《药品生产质量管理规范（2010年修订）》及其附录来确定检查缺陷所涉及的条款。
三、无菌药品生产工艺概述无菌药品按生产工艺可分为最终灭菌产品和非最终灭菌产品两类，部分或全部工序采用无菌生产工艺的为非最终灭菌产品。
无菌药品、直接接触药品的包装材料应尽可能采用热力灭菌方式进行最终灭菌。
采用湿热灭菌方法进行最终灭菌的，通常标准灭菌时间F0值应当大于8分钟，流通蒸汽处理不属于最终灭菌。
最终灭菌产品中的微生物存活概率（即无菌保证水平，SAL）不得高于10-6。
(一)最终灭菌工艺产品的无菌保证水平不能仅依赖最终灭菌。
灭菌工艺必须与产品注册批准要求相一致，且应当经过验证。
最终灭菌工艺通常将产品在洁净度级别较高洁净区（不得低于C级）进行灌装和密封，以降低产品的微生物和微粒污染。
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1.目的：建立无菌检查的标准操作规程，确保检验结果的准确性。
2.范围：适用于本厂质监科化验室对本厂生产的注射剂进行无菌检查。
3.责任：化验员有责任按本操作规程操作，并对检验结果负责。
4.定义：无菌检查法系指检查药品是否无菌的一种方法。
5.内容：5.1无菌操作设备：无菌操作室或超净工作台，无菌衣、口罩、帽子、消毒鞋、酒精灯等。
5.1.1无菌室分无菌操作室和缓冲间。
在缓冲间内应有洗手盆、干手器、无菌衣放置架及挂钩、拖鞋等。
无菌操作室应具有空气除菌过滤的层流装置，局部洁净度100级超净工作台。
缓冲间及操作室内均设置能达到空气消毒的紫外光灯和照明灯，操作室或工作台应保持空气正压。
5.1.2无菌室应每周和每次操作前用0.1％新洁尔灭或2％甲酚液擦拭操作台及可能污染的死角，开动无菌空气过滤器及紫外光灯杀菌1小时。
在每次操作完毕，同样用2％甲酚或0.1％新洁尔灭溶液擦拭工作台面，用紫外光灯杀菌半小时。
5.1.3无菌室的无菌程度检查：无菌室在消毒处理后，无菌试验前及操作过程中需检查空气中菌落数。
取直径90mm双碟，在接种室内点燃酒精灯，在酒精灯旁，以无菌操作，将双碟半开注入溶化的营养琼脂培养基约20ml，制成平板：在35-37℃预培养48小时，证明无菌后将3个平板以无菌方式带入无菌操作间的洁净区域左、中、右各放1个；打开碟盖扣置，平板在空气中暴露30分钟后将盖盖好，置35-37℃培养48小时，取出检查，3个平板上生长的菌落数相加总数不得超过10个。
无菌操作台面或超净工作台应定期请有关部门检测其洁净度，应达到100 级（一般用尘埃粒子计数仪），检测尘埃粒径≤5μm的粒数不得超过3.5个／升；空气流量应控制在0.75-1.0m3/s；细菌菌落数平均<1个，可根据无菌状况定期置换过滤器。
5.1.4无菌室内应准备好盛有消毒用5％甲酚的玻璃缸、酒精灯、火柴、镊子、75％酒精棉及拖鞋等。
5.2仪器、用具：5.2.1真空泵、恒温培养箱、生物显微镜、托盘天平（精度0.1g）、抽滤瓶（500ml）、三角瓶（100、500 ml）、移液管（1、10ml）、注射器（要求规格）、试管、双碟（9cm）、注射针、镊子、剪刀、白金耳、橡皮管、纱布、棉花（原棉）、不锈钢吸管筒、接种环、微孔滤膜（直径约5cm），孔径应在0.45±0.02μm )载玻片、洒精灯、取样勺、吸耳球、喷雾瓶。
5.2.2用具的包扎：5.2.2.1移液管在移液管上端管内,松松地塞进少许原棉,然后放入不锈钢灭菌筒内。
5.2.2.2试管在管口塞上纱布棉塞。
5.2.2.3无菌衣、裤、帽、口罩将洗净的衣裤、帽子、口罩配套后装入布袋，扎紧袋口，再用牛皮纸包好。
5.2.2.4注射器洗涤干净的注射器及注射针头装配好后，放入垫有纱布的带盖容器内一层层放好，上面盖上纱布，然后盖上容器的盖子，用牛皮纸包好。
5.2.2.5滤器将检验合格后微孔滤膜先有水中浸泡湿润，取出后固定在细菌过滤器的滤板上，滤板下、滤膜上均用耐高温垫圈垫好，上好滤器。
在灭菌前滤器的螺勿拧太紧，滤器上口用8层纱布及牛皮纸包扎，装妥后放入容器内，再将盛滤器的容器盖好盖子，用牛皮纸包扎。
5.2.3用具的灭菌：将包扎好的用具，在121±0.5℃蒸汽灭菌柜中灭菌30分钟，物品取出时切勿立即置冷处，以免急速冷却灭菌物品内蒸汽冷凝造成负压，易致染菌，应置温箱或或加温烘干。
5.3培养基、试剂：5.3.1一般采用商品干燥培养基，临用时按照使用说明书进行配制，需注意培养基的pH值应符合规定，否则必须校正后，灭菌使用。
使用前，按要求分装灭菌好的细菌培养基须经30-35℃培养48小时，真菌培养基须经20-25℃培养72小时，证明无菌生长后方可使用。
制备的需气菌、厌气菌培养基应半个月内用完，在供试品接种前，培养基指示剂氧化层的颜色不得超过培养基深度约1/5，否则须经水浴煮沸加热，只限加热一次。
5.3.2革兰氏碘液：先用3-5ml蒸馏水溶解2.0g碘化钾，再加入1.0g碘片，搅拌溶解后，加蒸馏水稀释至300ml，摇匀。
置密闭棕色瓶中备用。
5.3.3结晶紫染色液：将结紫1.0g溶解于20ml95%乙醇中后，与80ml1%草酸铵溶液相混合，静置48小时使用。
此液稳定，置密闭的棕色瓶中可储存数月。
5.3.4沙黄染色液：将0.2g沙黄溶解于10ml95%乙醇中，待完全溶解后再加蒸馏水至100ml。
5.3.5生理盐水：称取9g氯化钠，加水1000ml溶解，分装后于121±0.5℃湿热灭菌30分钟。
供作稀释剂用。
5.3.6 75%乙醇量取无水乙醇75ml,加水稀释至100ml，摇匀，即得。
5.3.7 0.1%新洁尔灭：量取5%新洁尔灭20ml，加水稀释至约1000ml，摇匀，即得。
5.4培养基灵敏度检查：5.4.1新购的干燥培养基或采用不同牌号原材料的新鲜培养基，其质量均应符合灵敏度检查要求。
(1)取藤黄微球菌[Micrococcus luteus CMCC（B） 28001］的营养琼脂斜面和白色念珠菌[Candida albicans CMCC（F）98001］的真菌培养基琼脂斜面的新鲜培养物，分别用0.9%无菌氯化钠溶液制成均匀的菌悬液；取生孢梭菌[Clostridium sporogenes CMCC（B）64941]不含琼脂的需气、厌气培养基新鲜培养物，用灭菌毛细管将其吸至灭菌离心管内，离心，弃去上清液，沉淀菌体用0.9%无菌氯化钠溶液制成均匀菌悬液。
然后以10倍系列稀释后，制成1ml 中含10-100个菌并计数。
(2)取藤黄微球菌、生孢梭菌的需气、厌气培养基新鲜培养物，白色念珠菌的真菌培养基琼脂斜面的新鲜培养物，取接种至霉菌培养基内，20-25℃用0.9% 无菌氯化钠溶液作10倍稀释，制成1ml中含10-100个菌并计数。
将藤黄微球菌的上述(1)或(2)的稀释液各1ml，分别接种至每管装量为9ml 的需气、厌气菌培养基3管，生孢梭菌的上述(1)或(2)的稀释液各1ml，分别接种至每管装量为12ml的需气、厌气菌培养基3管，白色念珠菌的上述(1)或(2)的稀释液各1ml，接种至每管装量为9ml的真菌培养基3管，以未接种的培养基作对照，按规定的温度培养5天并逐日记录结果。
结果判定：以每株菌接种后的培养基不得少于2管呈现生长，即该培养基的灵敏度检查符合要求。
5.4.2配制的培养基应在凉暗处保存，一般不得超过2周，临用前细菌和霉菌培养基分别经30-35℃和20-25℃培养不少于48小时和72小时，证明无菌生长后方可使用。
5.4.3需气菌、厌气菌培养基在试管中装量高度不得少于7Cm，其指示剂氧化层不得超过培养基深度的1／5，否则须经水浴煮沸10分钟，但只限加热一次。
无菌试验培养时间结束时，指示剂氧化层应不超过培养基深度的1／2。
5.5对照用菌液的制备：5.5.1试验用菌种、菌种的复苏、菌种的接种与保存等均应按照“抗生素微生物检定法”标准操作规程项下操作。
5.5.2金黄色葡萄球菌菌液用接种环取金黄色葡萄球菌[Staphy-lococcusaureus CMCC（B）26003]的营养琼脂斜面新鲜培养物少许，接种至营养肉汤培养基内，在30-35℃培养16-18小时后，用灭菌生理盐水稀释成1:106 5.5.3生孢梭菌菌液用接种环取生孢梭菌[CMCC（B）64941]的需气菌、厌气菌培养基新鲜培养物1白金耳，接种至相同培养基内，在30-35℃培养18-24小时后，用灭菌生理盐水稀释成1:106。
5.5.4白色念珠菌菌液用接种环取白色念珠菌[CMCC（F）98001]的真菌琼脂培养基斜面新鲜培养物1白金耳，接种至真菌培养基内，在20-25℃培养24小时后，用灭菌生理盐水稀释成1:105。
5.5.5上述制备的菌液，一般当日使用。
5.6进入无菌室的操作要点：5.6.1根据试验程序,将用具物品搬入缓冲间,打开紫外光灯和空气过滤装置并使其工作1小时以上。
5.6.2操作人员用肥皂水刷洗双手,关闭缓冲间紫外光灯,进入缓冲间内,关闭第一层门,用2%来苏尔或0.1%新洁尔灭溶液洗双手,用消毒毛巾擦干,换上无菌衣、帽、口罩及消毒鞋。
5.6.3关闭无菌室内紫外光灯，进入第二层门并将用具搬至无菌室内，关闭无菌室门。
5.6.4凡进入无菌室后不应再外出取物品，因此，在每次试验中所用物品必须计划好，并准备好备用物品。
从进入第一层门直至无菌室内，随操作人员的进入应喷雾2%来苏尔或0.1 %新洁尔灭溶液。
5.7检查法：5.7.1无菌检查法包括：直接接种法和薄膜过滤法。
前者适用于非抗菌作用的供试品；后者适用于有抗菌作用的或大容量的供试品。
5.7.2操作时，应先用0.1%新洁尔灭浸泡或擦拭容器表面后，以无菌的方法取内容物。
5.7.3凡无菌检查中，均应取相应溶剂和稀释剂同法操作，作阴性对照。
5.7.4供试品制备：用灭菌镊取出注射器，在火焰旁将针芯插入针管并安上针头，盖为橡皮塞时，用注射器在已消毒好的橡皮塞中心位置刺入吸取药液。
按规定须稀释或灭活的供试品，可直接或将瓶内供试液抽出至灭菌玻璃容器内进行灭活处理并稀释至规定的体积和浓度；抽取瓶中内容液体时，应将供试品倒置并使针头在液面下。
5.7.5直接接种法：按规定量取供试品，以无菌操作将该供试品分别接种于需气菌、厌气菌培养基6管，其中1管接种金黄色葡萄球菌液1ml，作阳性对照，另接种于真菌培养基5管。
轻轻摇动，使供试品与培养基混合。
需气菌、厌气菌培养基管置30-35℃、真菌培养基管置20-25℃培养7日。
在培养期间应逐日观察并记录是否有菌生长。
阳性对照管在24小时内应有菌生长，如在加入供试品后，培养基出现浑浊，培养7天后，不能从外观上判断有无微生物生长，可取该培养液适量转种至同种新鲜培养基中或斜面培养基上继续培养，细菌培养2日，真菌培养3日，观察是否再出现浑浊或斜面有无菌生长，或用接种环取培养液涂片，染色，用显微镜观察是否有菌。
5.7.6薄膜过滤法：将微孔滤膜过滤装置、抽滤瓶、排气管与真空泵相连，真空泵可置无菌室外。
取规定量供试品，按规定的方法处理后，加入0.9%无菌氯化钠溶液100ml中，混合后，通过装有孔径不大于0.45μm 的薄膜过滤器，减压抽干后，用0.9%无菌氯化钠溶液冲洗滤膜3次，每次至少100ml，取出滤膜分成3等份，分别加入上述二种培养基中，按规定温度和时间培养。
阳性对照管应根据供试品特性加入相应对照菌液1ml（抗细菌药物，以金黄色葡萄球菌为对照菌；抗厌氧菌药物，以生孢梭菌为对照菌；抗真菌药物，以白色念珠菌为对照菌）。
阳性对照管细菌应在培养24-48小时，真菌应在培养24-72小时有菌生长。
5.8结果判断：当阳性对照管显浑浊并确有菌生长，阴性对照管呈阴性时，可根据观察所得的结果判定：如需气菌、厌气菌及真菌培养基管均为澄清或虽浑浊但经证明并非有菌生长，均应判为供试品合格；如需气菌、厌气菌及真菌培养基管中任何1管显浑浊并确证有菌生长，应重新取2倍量供试品，分别依法复试，除阳性对照管外，其他各管均不得有菌生长，否则应判为供试品不合格。