无菌检查操作规程2015 (1)
GMP-无菌检查操作规程
1.目的：建立无菌检查的标准操作规程，确保检验结果的准确性。
2.范围：适用于本厂质监科化验室对本厂生产的注射剂进行无菌检查。
3.责任：化验员有责任按本操作规程操作，并对检验结果负责。
4.定义：无菌检查法系指检查药品是否无菌的一种方法。
5.内容：5.1无菌操作设备：无菌操作室或超净工作台，无菌衣、口罩、帽子、消毒鞋、酒精灯等。
5.1.1无菌室分无菌操作室和缓冲间。
在缓冲间内应有洗手盆、干手器、无菌衣放置架及挂钩、拖鞋等。
无菌操作室应具有空气除菌过滤的层流装置，局部洁净度100级超净工作台。
缓冲间及操作室内均设置能达到空气消毒的紫外光灯和照明灯，操作室或工作台应保持空气正压。
5.1.2无菌室应每周和每次操作前用0.1％新洁尔灭或2％甲酚液擦拭操作台及可能污染的死角，开动无菌空气过滤器及紫外光灯杀菌1小时。
在每次操作完毕，同样用2％甲酚或0.1％新洁尔灭溶液擦拭工作台面，用紫外光灯杀菌半小时。
5.1.3无菌室的无菌程度检查：无菌室在消毒处理后，无菌试验前及操作过程中需检查空气中菌落数。
取直径90mm双碟，在接种室内点燃酒精灯，在酒精灯旁，以无菌操作，将双碟半开注入溶化的营养琼脂培养基约20ml，制成平板：在35-37℃预培养48小时，证明无菌后将3个平板以无菌方式带入无菌操作间的洁净区域左、中、右各放1个；打开碟盖扣置，平板在空气中暴露30分钟后将盖盖好，置35-37℃培养48小时，取出检查，3个平板上生长的菌落数相加总数不得超过10个。
无菌操作台面或超净工作台应定期请有关部门检测其洁净度，应达到100 级（一般用尘埃粒子计数仪），检测尘埃粒径≤5μm的粒数不得超过3.5个／升；空气流量应控制在0.75-1.0m3/s；细菌菌落数平均<1个，可根据无菌状况定期置换过滤器。
5.1.4无菌室内应准备好盛有消毒用5％甲酚的玻璃缸、酒精灯、火柴、镊子、75％酒精棉及拖鞋等。
5.2仪器、用具：5.2.1真空泵、恒温培养箱、生物显微镜、托盘天平（精度0.1g）、抽滤瓶（500ml）、三角瓶（100、500 ml）、移液管（1、10ml）、注射器（要求规格）、试管、双碟（9cm）、注射针、镊子、剪刀、白金耳、橡皮管、纱布、棉花（原棉）、不锈钢吸管筒、接种环、微孔滤膜（直径约5cm），孔径应在0.45±0.02μm )载玻片、洒精灯、取样勺、吸耳球、喷雾瓶。
2015版药典表面微生物检测操作规程
题目：洁净区（室）表面微生物监测标准操作规程编码：颁发部门：质量部起草：日期：2015年月日修订日期：年月日审核：日期：2015年月日生效日期：2016年月日批准：日期：2015年月日发放份数：版次：第1版分发部门：质量部、中心化验室1.目的：建立表面微生物测试标准操作规程，保证测试人员操作规范化、标准化。
2.范围：适用于洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物量的测试。
3.责任：表面微生物检测员。
4.内容：4.1基本概念：4.1.1菌落:细菌培养后,由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落,简称CFU.通常用个数表示。
4.1.3表面微生物菌落数:规定面积的洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面，用接触平皿法或擦拭法检测的微生物的菌落数目，以个/皿表示。
4.2测试原理:本测试方法利用接触平皿法或擦拭法收集洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物，经若干时间，在适宜的方法和条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板培养皿中的菌落数来评定洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。
4.3测试方法：4.3.1使用的仪器设备和培养基:高压消毒锅:使用时应严格按照操作规程进行。
恒温培养箱:必须定期对培养箱的温度计进行检定。
培养皿:一般采用φ90mm×15mm玻璃培养皿。
使用前将培养皿置于160℃干热灭菌120min。
接触碟：一般采用φ55mm无菌接触碟。
培养基:胰酪大豆胨琼脂培养基。
将培养基加热熔化，冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。
待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入32℃恒温培养箱中培养72小时若培养基平皿上确无菌落生长即可供采样用，制备好的培养基平皿应在2-8℃的坏境中存放。
洁净区微生物测试点选择表面微生物监测的采样点数目及其布局根据以下几个方面设置：空调系统验证的结果房间的用途与产品的距离人流物流方向如何布点：对于同一洁净区，每个相同的取样物体在其不同的地方采2个样。
实验室无菌操作规章制度
实验室无菌操作规章制度第一章总则第一条为了保证实验室的无菌环境，确保实验结果的准确性和可靠性，保障实验人员的健康安全，本规章制度制定。
第二条本规章适用于实验室中进行无菌操作的所有人员。
第三条实验室无菌操作须遵循的原则：预防为主、保持清洁、无菌操作。
第四条领导者和员工应熟悉本规章制度，严格遵循，确保实验室无菌操作的有效执行。
第五条各级领导应定期组织对实验室无菌操作进行检查，及时发现问题并进行整改。
第二章无菌操作规范第六条所有进行无菌操作的人员应接受相关无菌操作培训，理解和掌握无菌操作的基本原理和技能。
第七条在进行无菌操作前，应先进行各种无菌器具和培养基的无菌检测，确保其无菌。
第八条进行无菌操作的操作台面应干净整洁，不得堆放零碎物品。
第九条操作人员应保持手部的洁净，应在无菌操作前进行手部清洗，并穿戴无菌手套。
第十条操作人员不得随意触碰头发、鼻子、眼睛等面部区域，以免污染实验物品。
第十一条实验中产生的废弃物应及时处理，不得堆放在操作台上。
第十二条操作人员应经常做好无菌悬浮液的制备工作，使用前应进行无菌检测。
第十三条操作人员应熟练掌握好无菌操作技术，确保操作的准确性和精确度。
第十四条在无菌操作中，操作人员应遵守规定的操作顺序和步骤，不得擅自更改。
第三章物品的无菌处理第十五条所有进入实验室的培养基、耗材等物品须经过无菌处理，严禁使用已过期的耗材。
第十六条进行无菌操作的工具（如镊子、移液器等）应经过严格的无菌处理，使用前应进行无菌检测。
第十七条样品的取样和采集必须在无菌条件下进行，严禁直接用手取样。
第四章无菌操作的个人防护第十八条在实验室进行无菌操作时，操作人员应配戴无菌手套，能一对一更换。
第十九条操作人员在无菌操作时应穿戴无菌工作服、帽子等防护用具，避免污染操作区域。
第二十条操作人员应在无菌操作台上进行操作，严禁跨越操作台、或将物品放置在操作台外。
第二十一条实验室内空气质量应符合相关标准，操作人员不得在无菌操作中吸烟或吃东西。
无菌检验标准操作规程(最全)
无菌检验标准操作规程一、目的无菌检验是指检查经灭菌方法处理后的医疗器械(具)、植入物品、敷料等是否达到无菌标准的一种方法。
临床部门不应常规进行无菌检验，如有需要，可联系当地疾病预防控制中心派专人来采样检测。
二、试验前准备1．无菌检验应在洁净度为100级以上的洁净实验室内实施，并证实该实验室各项指标符合GB50073—2001《洁净厂房设计规范》、GB／T16292～16294—1996《医药工业洁净室(区)悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》等相关要求，且在有效期范围之内。
2．按卫生部《消毒技术规范》(2002年版)制备无菌检验用洗脱液、需氧一厌氧培养基与真菌培养基(见附)。
3．在无菌检验前三日，分别在需氧一厌氧培养基与真菌培养基内各接种1ml洗脱液，分别置30～35℃与20～25℃：培养72h，应无菌生长。
4．阳性对照管菌液制备：(1)在检验前一天取金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]的普通琼脂斜面新鲜培养物，接种一环至需氧一厌氧培养基内，在30～35℃培养16～18h 后，用0．9％无菌氯化钠溶液稀释至10～100cfu／ml(可通过比浊法或稀释后用1m1接种平板来确认)。
(2)取生孢梭菌[CMCC(B)64941]的需氧菌、厌氧菌培养基新鲜培养物一接种环种于相同培养基内，于30～35℃培养18～24h后，用0.85％无菌氯化钠溶液稀释至10～100cfu／ml。
(3)取白念珠菌[CMCC(F)98001]真菌琼脂培养基斜面新鲜培养物一接种环种于相同培养基内，于20～25℃培养24h后，用0．85％无菌氯化钠溶液稀释至10～100cfu／ml。
三、样本制备根据检样的类型与大小，以及带孔(腔)与否，可以按照以下不同的方法进行制备。
1．敷料类等非管道类样品：取2个包装内的样本，剪成约10mm×30mm 大小的样片21片，接种需氧一厌氧菌培养管5管与真菌培养管2管。
每培养管含培养基40m1，各接种3片样片。
医疗器械无菌检查操作规程
医疗器械无菌检查操作规程1.目的建立无菌检查的标准操作规程，确保检验结果的准确性。
2。
适用范围本规程适用于本公司质管部对本厂生产的一次性微波消融针的无菌检测。
3.职责质量部负责实施。
4.内容4。
1检验依据4。
1.1产品注册标准4。
1.2《中华人民共和国药典2015年版》无菌检查法4.2仪器、设备超净工作台、电热干燥箱、恒温培养箱、压力蒸汽灭菌器、集菌仪、电子天平、PH计、冰箱、恒温水浴锅、酒精灯、三角烧瓶,接种环、镊子，试管架，大试管若干等。
4。
3培养基及稀释液4.3。
1需气菌、厌气菌培养基:硫乙醇酸盐流体培养基；4。
3.2 霉菌培养基：大豆酪蛋白肉汤培养基；4。
3.3 培养基的无菌性检查每批配制的培养基均应进行无菌性检查（可与产品无菌检验同步进行）。
检查时，每批培养基随机取不少于5支(瓶）培养14天,应无菌生长；4.3。
4稀释液pH7。
0 氯化钠—蛋白胨缓冲液，9g/L无菌氯化钠溶液;4.4无菌检验室的环境要求（1）无菌检验应在环境洁净度10000级下的局部百级的单向流空气区域内进行。
(2）缓冲区与外界环境、无菌检验室与缓冲区之间空气应保持正压，阳性对照室与缓冲区之间空气应保持负压.无菌检验室与室外大气之间静压差应大于10Pa.无菌检验室的室温应保持18～26℃，相对湿度:45～65%。
(3) 无菌检验室的单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的监测.(4）无菌检验过程中应同时检查超净工作台单向流空气中的菌落数：每次操作时在层流空气所及台面的左中右置3个TSA琼脂平板，暴露30min，于30~35℃培养48小时，菌落数平均应不超过1CFU/平板。
4.5无菌检验前的准备4。
5.1 器具灭菌、消毒可经压力蒸汽灭菌器内121℃蒸汽灭菌30分钟后使用。
4。
5。
2 人员、物料进入无菌检验室开启紫外线灯或臭氧发生器进行空间灭菌处理，消毒时间不得少于30min。
无菌检查法标准操作规程
将废液和实验物品及已操作完毕的含培养基的集菌培养器等移至 传递窗并拿出，擦拭工作台面，检查电源是否关闭，是否有遗留物品 等。按照《人员进出实验室的净化更衣规程》脱掉无菌服并装入配套 的袋中，开启无菌室紫外灯半小时，将无菌服送至特定的洗衣机进行 清洗灭菌。实验完毕的样品按照《检验用样品管理规程》进行销毁处 理。 4.1.4阳性对照
关闭紫外灯10分钟后，进入缓冲间，按照《人员进出实验室的净化 更衣规程》进入，并按照此规程穿戴无菌服、口罩。
4.操作
4.1薄膜过滤法 4.1.1操作前准备
检查无菌室电源和仪器是否完好，标示状态卡是否正确，是否有前 次遗留物品及废液等，戴上无菌手套将供试品及所需物品移入无菌操作 室，开启超净工作台并擦拭工作台面。 4.1.2操作 4.1.2.1根据药液性质选用不同型号的培养器，对于普通药液选用型号
菌检查法的要求。 （2）回顾无菌试验过程，发现有可能引起微生物污染的因素。 （3）供试品管中生长的微生物经鉴定后，确证是因无菌试验中所
使用的物品和（或）无菌操作技术不当引起的。 试验若经确认无效，应重试。重试时，必须重新取同量供试品，依
法重试，若无菌生长，判供试品符合规定；若有菌生长，判供试品不符 合规定。
否无菌的一种方法。若供试品符合无菌检查法的规定,仅表明了供试品 在该检验条件下未发现微生物污染。无菌检查法包括薄膜过滤法和直接 接种法。 1.2 检验数量
指一次检验所用供试品最小包装容器的数量。除另有规定外，按表 1规定的最少检验数量进行，最少检验数量不包括阳性对照试验的供试 品用量。采用薄膜过滤法，应增加1/2的最小检验数量做阳性对照用； 采用直接接种法，增加每个培养基容器接种的样品量作为阳性对照用。
医疗器械产品无菌检验操作规程
医疗器械产品无菌检验操作规程随着医疗技术的不断发展，医疗器械在诊疗中的作用越来越重要。
在医疗器械的生产过程中，无菌是一个非常重要的环节。
本文将介绍医疗器械产品无菌检验的操作规程，以确保医疗器械的安全和可靠性。
一、无菌检验的重要性医疗器械在使用过程中与人体直接接触，如不具备无菌性，会引起严重的感染问题。
因此，无菌检验是确保医疗器械产品质量的重要环节。
只有通过无菌检验，才能保证医疗器械的无菌性，从而有效地减少感染的风险。
二、无菌检验操作规程（一）准备工作1. 确保检验环境的洁净度：无菌检验需要在无菌条件下进行，因此应确保检验环境的洁净度。
工作区域应进行深度清洁，并使用有效的空气过滤系统和洁净工作台。
2. 准备必要的无菌材料：无菌检验操作所需的材料包括无菌培养基、培养皿、观察镜等。
这些材料应该在使用前进行无菌处理，并且要保持密封。
3. 检查设备和工具的完好性：确保所使用的设备和工具没有损坏或者污染。
损坏或污染的设备和工具可能影响无菌检验的准确性和有效性。
（二）无菌检验操作步骤1. 样品采集：根据具体要求，采集待检样品。
样品采集应在无菌条件下进行，以避免外界污染。
2. 样品处理：将样品置于无菌室内进行处理。
首先，应对样品外表进行目测观察，排除明显可见的外部污染。
然后，将样品放入无菌培养皿中，采用湿敷法、浸润法等方法进行培养基的接种。
3. 培养：将培养皿放入恒温培养箱中，设置适当的温度和培养时间。
在培养过程中，需要定期观察培养皿内的情况。
4. 结果判断：根据培养结果，判断样品是否具备无菌性。
常见的无菌检验结果包括阳性、阴性和疑似阳性。
阳性结果表示样品中存在微生物生长，即不符合无菌要求；阴性结果表示样品无细菌生长，满足无菌要求；疑似阳性结果需要进行进一步的确认和处理。
5. 结果记录和报告：将检验结果进行详细记录，并根据需要制作无菌检验报告。
报告中应包括样品标识、检验结果、检验日期等信息，以便后续跟踪和管理。
产品无菌检查操作规程(含表格)
产品无菌检查操作规程（ISO13485-2016/YYT0287-2017）1.0目的规范产品无菌检查过程，使无菌检查操作、控制等符合ChP2015规定。
2.0适用范围适用于产品的无菌检查操作和控制。
3.0引用/参考文件ChP2015实用药品微生物检验检测技术指南《微生物实验室管理规程》《菌种管理规程》《培养基管理规程》《工作环境控制程序》4.0职责微生物QC负责根据本规程执行产品无菌检查，QA负责实施监督并参与OOS调查。
5.0程序5.1术语和定义无菌检查系用于检查药品药典要求的医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。
若供试品符合无菌检查的的规定，仅表明供试品在该检验条件下未发现微生物污染。
5.2环境无菌检查区域应该符合B＋A的要求，环境应该定期进行监测，监测的频率及要求参照《微生物实验室管理规程》和《工作环境控制程序》执行。
5.3仪器与设备电子天平、高压蒸汽灭菌锅、生化培养箱、霉菌培养箱、试管、镊子、酒精灯等。
5.4培养基硫乙醇酸盐流体培养基、胰酪大豆胨液体培养基、pH7.0NaCl-蛋白胨缓冲液或无菌生理盐水。
5.5菌种因产品无抑菌作用，选择以金黄色葡萄球菌作为阳性对照菌。
5.6无菌检查操作5.6.1方法选择因产品为胶原黏膜，不溶于冲洗液，无法进行过滤，选择直接接种法进行无菌检查。
5.6.3抽样量与检验量5.6.3.1抽样量每个灭菌批应该对其中的不同生产批单独抽样检测。
产品批量抽样数量≤100 10%或4件（取较多者）100＜N≤200 10件＞500 2%或20件（取较少者）5.6.3.2检验量供试品采用无菌操作均分为两份。
2015年版微生物限度检验操作规程.
青岛**有限公司文件目的建立微生物限度检查操作规程，规范操作，保证结果的准确性。
范围成品、辅料、内包装袋及纯化水的检验。
责任品管部微生物限度检验人员内容概述：本检验操作规程依据中国药典2015年版四部《通则1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法》和《通则1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法》进行检查。
微生物计数法一、计数方法1．微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。
2、计数方法本法包括平皿法、薄膜过滤法。
3、计数培养基适用性检查和供试品计数方法适用性检查供试品微生物计数中所使用的培养基应进行适用性检查。
供试品的微生物计数方法应进行方法适用性试验，以确定采用的方法适合于该产品的微生物计数。
4、菌种及菌液的制备4.1试验用菌株的传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0袋），并采用适宜的菌种保藏技术进行保藏。
计数培养基适用性检查和计数方法适用性试验见表1。
4.2菌液制备按表1规定培养各试验菌株。
取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的新鲜培养物，用PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液；取黑曲霉的新鲜培养物加入3-5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。
采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管中，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的黑曲霉孢子悬液。
菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2-8℃，可在24小时内使用。
黑曲霉孢子悬液可保存在2-8℃，在验证过的贮存期内使用。
表1 试验菌液的制备和使用4.3阴性对照为确认试验条件是否符合要求，应进行对照试验，阴性对照试验应无菌生长。
4.4培养基适用性检查按照表1规定，接种不大于100cfu的菌液至胰酪大豆胨液体培养基或胰酪大豆胨琼脂培养基平板或沙氏葡萄糖琼脂培养基平板，置规定的条件下培养。
无菌实验室操作规程
无菌实验室操作规程引言概述：无菌实验室是进行微生物学研究和实验的重要场所，其操作规程对于实验结果的准确性和可靠性至关重要。
本文将详细介绍无菌实验室操作规程的五个部分。
一、实验室准备1.1 清洁与消毒：无菌实验室应定期进行清洁和消毒，确保实验环境的无菌状态。
清洁应使用无菌纱布和无菌溶液，消毒则应选择适当的消毒剂，如酒精或过氧化氢。
1.2 实验器材准备：在进行实验前，必须确保实验器材的无菌状态。
实验器材应经过高温高压灭菌或使用无菌过滤器过滤，确保无菌操作的可靠性。
1.3 个人防护：进入无菌实验室前，实验人员应穿戴适当的个人防护装备，包括无菌手套、口罩和实验服。
这些装备能有效减少外界微生物的污染，保证实验的无菌性。
二、无菌技术操作2.1 消毒操作：在进行无菌实验前，必须进行适当的消毒操作。
这包括用酒精或火焰对实验台面、实验器材和手术刀进行消毒处理，以杀灭表面的微生物。
2.2 灭菌操作：在进行培养基、培养皿等实验材料的制备时，必须进行灭菌操作。
常见的灭菌方法包括高温高压灭菌、紫外线辐射灭菌等，确保实验材料的无菌性。
2.3 采样操作：在进行微生物采样时，必须采取严格的无菌操作。
这包括用无菌棉签或无菌吸管进行采样，避免外界微生物的污染。
三、培养基制备与使用3.1 培养基配制：在制备培养基时，必须按照一定比例将培养基粉末与无菌蒸馏水混合，并进行高温高压灭菌，以确保培养基的无菌性。
3.2 培养基使用：使用培养基时，必须采取无菌技术进行操作。
这包括使用无菌吸管或无菌移液器取出适量的培养基，并将其均匀涂布在培养皿上。
3.3 培养基保存：未使用完的培养基应保存在冰箱或低温冷藏室中，避免细菌的生长和污染。
同时，应定期检查培养基的无菌性，确保其质量。
四、细胞培养操作4.1 细胞传代：在进行细胞培养时，必须进行细胞传代操作。
这包括将细胞从旧培养皿中取出，用无菌吸管或无菌移液器转移到新的培养皿中，以保持细胞的健康和纯度。
4.2 细胞培养液更换：细胞培养液应定期更换，以保持培养液的无菌性和营养成分的充足。
无菌实验室操作规程
无菌实验室操作规程标题：无菌实验室操作规程引言概述：无菌实验室是进行微生物实验和培养的重要场所，严格的操作规程能够确保实验结果的准确性和可靠性。
本文将详细介绍无菌实验室操作规程，帮助实验人员正确操作，避免污染和误操作。
一、实验室准备1.1 确保实验室环境无菌：实验室内应经常进行消毒，保持空气清洁，避免微生物污染。
1.2 准备实验材料：提前准备好所需的培养基、试剂和器具，确保其无菌。
1.3 检查设备状态：检查培养箱、平台振荡器等设备是否正常运转，确保实验顺利进行。
二、个人操作规范2.1 穿戴实验服和手套：进入实验室前需穿戴干净的实验服和手套，避免外部微生物污染。
2.2 洗手消毒：进入实验室后，及时洗手并进行消毒，避免手部细菌污染实验物品。
2.3 避免交叉污染：每次操作前应更换手套，避免不同实验之间的交叉污染。
三、培养基制备3.1 精确称量：按照配方准确称量培养基成分，确保培养基质量准确。
3.2 消毒处理：将配制好的培养基装入试管或培养皿中，进行高温高压消毒处理，杀灭其中的微生物。
3.3 冷却保存：待培养基冷却后，放置在无菌条件下保存，避免污染。
四、微生物接种4.1 操作迅速：在无菌条件下，迅速将微生物接种到培养基上，避免空气中的细菌污染。
4.2 合理布局：将接种好的培养皿放置在培养箱中，合理布局，避免交叉污染。
4.3 注意观察：定期观察培养皿内微生物的生长情况，及时调整培养条件。
五、实验室清洁5.1 定期消毒：实验室设备和台面等应定期进行消毒，避免细菌滋生。
5.2 清洁整理：实验结束后，及时清洁实验台面和设备，保持整洁。
5.3 废弃物处理：实验后的培养皿、试管等废弃物应按规定进行处理，避免细菌外泄。
结论：无菌实验室操作规程对实验结果的准确性和可靠性起着至关重要的作用，实验人员应严格按照规程操作，确保实验过程的无菌性和准确性。
微生物限度检测方法验证操作规程(2015年版)
微生物限度检测方法验证操作规程1 目的确认所采用的方法适合于该产品的微生物限度检测。
2 依据《中国药典》2015版。
3 范围所有需进行微生物限度检测的产品。
4 责任4.1验证小组负责检验方法验证/确认方案的起草、验证/确认方案的实施。
4.2验证委员会负责验证/确认方案的审批，验证/确认结论的审核。
5 程序5.1 由验证小组提出验证申请，验证方案编制完成后，填写《确认和验证方案审批表》，经验证小组会签，报验证委员会审核，由生产负责人和质量负责人批准后，验证方案编制人对验证小组其余人员进行培训后，方可按验证方案试验。
5.2 试验完成后及时编制验证报告，并填写《验证报告审批表》，经验证小组会签，报验证委员会审核，由生产负责人和质量负责人批准后，验证报告结论才可实施。
6 内容6.1 概述通过验证以确认所采用的方法适合于该产品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的测定及控制菌的检查。
根据样品特性制订检验方法和检验条件，按制定的方案进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标准。
若符合，按验证的方法和条件进行产品的微生物限度检查；若不符合，重新建立制订检验方法和检验条件，再进行验证，直至验证结果符合设立的验证标准。
6.2 需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数方法的验证6.2.1 验证用菌株铜绿假单胞菌[CMCC（B）10 104]金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26 003]枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63 501]黑曲霉[CMCC（F）98 003]白色念珠菌[CMCC（F）98 001]6.2.2 验证用菌液制备6.2.2.1接种铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌与枯草芽孢杆菌至胰酪大豆胨液体培养基中，于30～35℃培养18～24小时。
取上述培养物各1ml，用0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液制成适宜浓度的菌悬液，备用。
6.2.2.2 接种白色念珠菌至沙氏葡萄糖液体培养基中，于20～25℃培养2～3天。
中国药典2015年版药品无菌检查操作规程
Table of Contents目录1.PURPOSE 目的 (2)2.SCOPE 范围 (2)3.REFERENCE 参考资料 (2)4.DEFINITIONS 定义 (2)5.AUTHORITY/RESPONSIBILITY 权责 (2)6.PROCEDURE 程序 (2)7.REVISON RECORDS 修订记录: (4)8.ATTACHMENT 附件: (4)1. PURPOSE目的本规程规定了实验室无菌检测程序。
2. SCOPE范围适用于xxx公司产品的无菌检验。
3. REFERENCE参考资料3.1 《中国药典》2015年版四部 1101 无菌检查法4. DEFINITIONS定义4.1 无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。
若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。
5. AUTHORITY/RESPONSIBILITY权责5.1 QE人员负责取回具有代表性的样品并送至实验室。
5.2 经培训合格的微生物人员按规定进行检验。
6. PROCEDURE程序6.1 透析器的无菌检查图16.1.1 见图1，将三支样品用无菌管路串联，两头分别连接盐水瓶和集菌培养器。
6.1.2 集菌仪设定在220R。
用1500ml无菌含0.1%聚山梨酯80的PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗。
6.1.3 冲洗液流到滤筒并浸没滤膜后，可以开始过滤。
一边冲洗样品，一边过滤，使液面维持在一定的高度（保持滤膜的浸没状态，如有必要，可以加、拔滤筒上方的塞子），直到所有冲洗液冲洗完毕。
6.1.4 待所有冲洗液过滤完毕，塞住滤筒底部。
6.1.5 往其中一个滤筒注入约100ml TSB，另外两个滤筒各注入约100ml FTM。
用夹子夹住各滤筒顶部的软管，然后剪断软管。
将软管的断口插入滤筒顶部呼吸器的接口。
6.1.6 将其中一管FTM从滤筒顶部的软管处用1ml的无菌注射器注入0.1ml的金黄色葡萄球菌悬液（<100cfu）作为阳性对照。
无菌技术操作规程及评分标准
6. 套，拇指对合，将一手伸入手套内戴好，手指插入 5 3
穿脱 另一手套翻边内戴好，双手对合交叉调整手套位置
无菌 。②脱无菌手套：一手捏住另一手套腕部外面，翻转
手套
脱下，再将脱下手套的手插入另一手套内将其往下 反转脱下；将用过的手套放入医用垃圾袋内；洗手
5
3
。
21 21 21 21 21 21 10
未检查尺码/外包装/ 有效期降1级，手套被 污染降2级
脱手套时手被污染降2 级，脱手套后未洗手 降2级
1.整体要求：严格三查七对制度及无菌操作原则，操作熟 练，程序正确，动作轻柔、节力
10
7
5
2
质量 （15 2.垃圾分类放置处理 分）
3210
3.操作时间：6分钟
2211
违反无菌原则不得 分，未查对降2级，操 作不熟练降1级
未检查外包装降2级， 未检查指示胶带/有效 期降1级
开包违反无菌原则降2 级，未注明开包日期 及时间/未签名降1级
持物钳污染降2级，持 物筒未及时封盖/持物 钳使用不当降1级
①检查气管切开包名称正确，包装完好，无污染、 破损、潮湿，包外灭菌指示胶带变色合格、在灭菌 5 3 2 1 有效期内；
未检查外包装降2级， 未检查指示胶带/有效 期降1级
10
7
5
2
2.准备：选择清洁、宽畅的操作环境，固定治疗车，距离 四周墙面30厘米以上。
5
3
2
1
衣帽、鞋袜不整齐者 每项降1级
物品放置不规范降2 级，少一件用物降1级 未洗手/未戴口罩降2 级，未检查物品有效 期/未检查治疗车台面 降1级 治疗车距离墙面过近 降2级，未评估环境/ 未固定治疗车降1级
微生物限度检查操作规程(中国药典2015版四部通则)
一、范围：本标准规定了微生物限度的检查方法和操作要求；适用于检品需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数、控制菌的检查。
二、引用标准：《中国药典》2015年版(通则1105-1106)三、目录1．微生物限度标准2．设备、仪器及用具3．消毒液、稀释剂、试液及培养基4．检查总则（通则1105：非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法，通则1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法）5．微生物计数法检查6．控制菌检查法7．实验技术8. 附件1．微生物限度标准非无菌药用原料及辅料的微生物限度标准*未做统一规定。
(1)．“—”为不得检出。
(2)．目测霉变者以不合格论。
说明：1．“—”为每100 cm中不得检出。
2．目测霉变者以不合格论。
3．“无”为标准依据或无相应规定。
2．设施、仪器及用具2.1、设施：2.1.1．微生物限度检查室及相关设施：微生物计数试验环境应符合微生物限度检查的要求。
检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
单向流空气区域、工作台面及环境应定期进行监测。
2.1.2．其他设备：高压蒸汽灭菌器；细菌培养箱（30~35℃）；霉菌培养箱（25~28℃）；电炉（或其他适宜的加热装置）；恒温水浴；电热干燥箱（250~300℃）；电冰箱。
生化试剂储存箱。
2.2仪器及器皿2.2.1．菌落计数器；显微镜（1500X）；电子天平或药物天平（感量0.1g）；pH系列比色计。
2.2.2．玻璃器皿：锥形瓶（250~300ml，内装玻璃珠若干）、研钵（玻璃或陶瓷制，∮10~12cm）、培养皿（∮9 cm）、量筒（100 ml）、试管（18×180mm）及塞、吸管（1ml分度0.01，10 ml分度0.1）、载玻片、盖玻片、玻璃消毒缸（带盖）。
2.2.3新购的玻璃器皿的清洁：先用流水冲洗，浸泡于1%~2%盐酸（工业用）液中约2~6小时，除去游离碱质，再用流水冲洗。
用于化学分析的玻璃仪器，需用重铬酸钾清洁液浸泡数分钟后，再用流水冲洗，最后以纯化水涮洗2~3次，晾干备用。
医疗器械产品无菌检验操作规程
医疗器械产品无菌检验操作规程一、目的：为了保证医疗器械产品的无菌性，减少感染的风险，确保器械在使用前不会对患者产生任何不良影响。
二、适用范围：适用于医疗器械产品的无菌检验操作。
三、设备与工具：1.灭菌器：包括高压蒸汽灭菌器和乙烯氧化物灭菌器。
2.无菌室：应具备无菌室必备的设备，如无菌工作台、超净台和灭菌器等。
3.操作工具：包括手套、无菌棉签、无菌剪刀、无菌镊子等。
四、检验步骤：1.准备工作：(2)检查设备与工具的正常工作状态，如灭菌器是否正常运行，无菌室的洁净程度等。
(3)检查器械包装是否完好无损，无破损、打开或湿润的情况。
2.环境准备：(1)打开无菌室，确保无菌室内外的卫生环境。
(2)将要检验的医疗器械产品放置在无菌工作台上，避免与非无菌物品接触。
3.无菌检验操作：(1)佩戴手套并将其消毒，确保双手干净。
(2)打开器械包装，注意保持包装内物品的无菌性。
(3)使用无菌棉签、无菌剪刀或无菌镊子等工具检查器械的外观，如有任何异常，应及时记录并报告。
(4)若器械需要使用前进行灭菌处理，则将其放入灭菌器中进行灭菌，按照灭菌器的操作规程进行处理。
(5)灭菌完成后，将器械取出并放置在无菌工作台上，等待其冷却。
(6)冷却后，使用无菌棉签或其他无菌工具进行取样，采样点应包括器械的各个部位。
(7)采样完成后，将无菌棉签放置在含有营养物质的培养基中，进行菌落培养。
(8)培养基培养一定时间后，观察培养基上是否有菌落生长，如有则说明器械不符合无菌要求。
5.清洁与记录：(1)清洁无菌工作台和使用的工具，保持无菌室的清洁。
(2)进行记录，包括器械的名称、批号、灭菌方式、采样结果等。
六、注意事项：1.操作者应注意个人的清洁和卫生，保证双手清洁且戴好手套。
3.在操作过程中，应尽量避免对器械进行过多的接触，以免造成污染。
4.检查无菌室的洁净程度并及时清理，保持其无菌环境。
七、附录：无菌检验操作记录表器械名称：批号：灭菌方式：采样结果：日期：时间：。
无菌检查标准操作规程
无菌检查标准操作规程无菌检查法是检查要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料及要求无菌的其他物品是否染有活菌的一种方法。
事实上，若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现细菌和真菌污染。
无菌检查法有薄膜过滤法、直接接种法两种方式。
细菌培养温度32.5℃±2.5℃，真菌培养温度25.5℃±2.5℃。
1 无菌检查的环境无菌检查的所有操作均需在严格控制微生物污染的环境下进行，操作环境的无菌保证程度将直接影响无菌检查用洁净室（区）环境的稳定性，确保检查结果的可考性，对洁净室（区）的环境质量采取合理的控制措施和评价方法是必要的。
无菌检查应在环境洁净度10000级和局部洁净度100级的单向留空气区域内或隔离系统中进行，其全过程笔削严格遵守无菌操作，防止微生物污染。
单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。
隔离系统按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。
无菌室应采光良好、避免潮湿、远离厕所及污染区。
面积一般不超过10m2，不小于5m2；高度不超过2.4m。
由1～2个缓冲间、操作间组成（操作间和缓冲间的门不应直对），操作间与缓冲间之间应具备灭菌功能的样品传递箱。
在缓冲间内应有洗手盆、毛巾、无菌衣裤放置架及挂钩、拖鞋等，不应放置培养箱和其他杂物；无菌室内应六面光滑平整，能耐受清洗消毒。
墙壁与地面、天花板连接处应呈凹弧形，无缝隙，不留死角。
操作间内不应安装下水道。
无菌操作室应具有空气除菌过滤的单向流空气装置，操作区洁净度100级或放置同等级别的超净工作台，室内温度控制18～26℃，相对湿度45%～65%。
缓冲间及操作室内均应设置能达到空气消毒效果的紫外灯或其他适宜的消毒装置，空气洁净级别不同的相邻房间之间的静压差应大于5Pa，洁净室（区）与室外大气的静压差大于10Pa。
无菌室内的照明灯应嵌装在天花板内，室内光照应分布均匀，光照度不低于300lx。
无菌检查操作规程
BI无菌检查操作规程编号：版本：编制：日期：审定：日期：批准：日期：生效日期：管理部门：发放部门：生产部 质管部 工程部 研发部 PMC 采购部 仓库 营销中心 人事行政中心 财务部1、目的本作业指导书规定了BI无菌试验的标准操作规程，以指导检验员按规定的作业标准进行操作。
2、范围适用于用BI无菌试验,包括片状和自含式的BI。
3、职责检验相关人员对该规程负责。
4、仪器设备及试剂4.1恒温培养箱4.2高压蒸汽灭菌器4.3超净工作台4.4酒精灯4.5 营养肉汤/TSB、酒精4.6夹子,镊子,剪刀,记号笔,试管架。
5、操作步骤5.1自含式BI的无菌试验5.1.1灭菌循环结束后,2小时之内将PCDS（BI）取出并进行无菌试验(若不能马上进行无菌试验,需将BI 放入冰箱中冷藏,但必须在48小时之内进行无菌试验).5.1.2打开PCDS(BI)包装袋,取出里面的BI,保持BI竖直且塑料盖朝上,然后用夹子住塑料管,轻轻用力,使塑料管内的安瓿破裂,使安瓿内的培养基与塑料管内的载体接触,接着用手指轻轻弹塑料管,使培养基与载体充分浸润。
5.1.3将上述BI竖直放到35±2℃(或根据产品说明书的培养条件)的培养箱中培养48小时,每24小时观察并记录培养结果。
5.2片状BI的无菌试验5.2.1灭菌循环结束后,2小时之内将PCDS（BI）取出并进行无菌试验(若不能马上进行无菌试验,需将BI 放入冰箱中冷藏,但必须在48小时之内进行无菌试验)。
5.2.2将PCDS（BI）取出后，将外包装纸塑袋和培养基放到传递窗中,用消毒液喷在袋子上进行紫外灯消毒30分钟。
5.2.3消毒30分钟后将BI和培养基转入超净工作台，培养基试管用记号笔编号,所编的号与BI外包装带上的编号需一致。
5.2.4打开外包装袋,取出里面的BI,撕开BI内层包装,将菌片直接投放入装有10mL无菌的TSB的试管中,将试管盖及口子在酒精火焰上消毒后盖上。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
无菌检查操作规程1.目的建立无菌检查标准操作规程，确保检查结果准确、可靠。
2.使用范围本公司无菌产品的无菌检查3.职责质量部QC4.依据2015版《中国药典》通则1101GB/T 19973.2-2005（ISO11737-2:1998）《疗器械的灭菌微生物学方法第2部分：确认灭菌过程的无菌试验》GB/T 14233.2-2005《医用输液、输血、注射器具检验方法第2部分：生物学试验方法》5.内容5.1.无菌检查环境保障5.1.1.无菌检査的所有操作均需在严格控制微生物污染的环境下进行，即无菌检査应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中进行。
5.1.2.操作环境的无菌保障程度将直接影响无菌检查结果，为了保证无菌检查用洁净室（区）环境的稳定性，确保检查结果的可靠性，对洁净室（区）的环境定期监测并采取合理的措施保证洁净环境符合要求。
5.1.3.无菌检查全过程必须严格遵守无菌操作，防止微生物污染。
5.1.4.洁净区的温度、湿度等参数必须符合相应洁净级别的要求。
5.1.5.无菌检查操作还需要对检查环境进行监控，5.2.培养基、稀释液、缓冲液5.2.1.硫乙醇酸盐流体培养基，市售培养基干粉。
除另有规定，接种后应置30~35℃培养。
5.2.2.胰酪大豆胨液体培养基，市售培养基干粉。
接种后应置20~35℃培养。
5.2.3.中和或灭活用培养基，按上述硫乙醇酸盐流体培养基或胰酪大豆胨液体培养基的处方及制法，在培养基灭菌或使用前加入适宜的中和剂、灭活剂或表面活性剂，其用量同方法适用性试验。
5.2.4.胰酪大豆胨琼脂培养基，市售培养基干粉。
5.2.5.沙氏葡萄糖液体培养基，市售培养基干粉。
5.2.6.沙式葡萄糖琼脂培养基，市售培养基干粉。
5.2.7.PH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液，市售培养基干粉。
5.2.8.0.9%无菌氯化钠溶液。
5.2.9.培养基使用性检查无菌检査用的硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基等应符培养基的无菌性检査及灵敏度检査的要求。
本检查可在供试品的无菌检査或与供试品的无菌检査同时进行。
5.2.9.1.无菌性检查：每批培养基随机取5支（瓶），按各培养基规定的温度下培养14天，应无菌生长。
5.2.9.2.灵敏度检查5.2.9.2.1.菌种：培养基灵敏度检查所用的菌株传代数不得超过5代(从菌种存中心获得的干菌种第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以证试验菌株的生物学特性。
金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26 003]铜绿假单胞菌[CMCC(B)10 104]枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63 501]生孢梭菌[CMCC(B)64 941]白色念珠菌[CMCC(F)98 001]黑曲霉[CMCC(F)98 003]5.2.9.2.2.菌液制备：接种金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌的培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，接种生孢梭菌的培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30〜35℃培养18〜24小时；接种白色念珠菌的培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20〜25℃培养24〜48小时，上述培养后的新鲜培养物用PH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌化钠溶液制成每lml菌数小于100cfu(菌落形成）的菌悬液。
接种黑曲霉的培养物至沙氏葡萄糖琼脂面培养基上，20〜25℃培养5〜7天，加人3〜5 ml 0.05%(ml/ml) 聚山梨酯80的pH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。
然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用0.05% (ml/ml)聚山梨醋80的pH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成每lml孢子数量小于100cfu的孢子悬液。
菌悬液若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2〜8 ℃在24h 内使用。
黑曲霉孢子悬液存在2〜8℃，在验证过的贮存期内用。
5.2.9.2.3.培养基接种：取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基7支，分别接种小于100cfu的色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌各2支，另1支不接种作为空白对照，培养3天；取每管装量为9ml的胰酪大豆胨液体培养基7支，分别接种小于100cfu的草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接种作为空白对照，培养5天。
逐日观察结。
5.2.9.2.4.结果判定：空白管应无菌生长，加菌的管生长良好，说明该培养基灵敏度符合规定。
5.3.方法试用性试验进行产品无菌检查时，应进行方法适用性试验，以确认所采用的方法适合于产品的无菌检查。
若检验程序或产品发生化可能影响检验结果时，应重新进行方法适用性试验。
方法适用性试验按“5.4供试品的无菌检查”的规定及下列要求进行操作。
对每一试验菌应逐一进行方法。
5.3.1.菌种及菌液的制备：大肠埃希菌[CMCC(B)44 102]外，金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉的菌株及菌液制同“5.2.9.2培养基灵敏度检查”。
大肠埃希菌的菌液制同金黄色葡萄球菌。
5.3.2.薄膜过滤法：每种培养基规定接种的供试品总量按薄膜过滤法过滤，冲洗，在最后一次的冲洗液中加入小于100cfu试验菌，过滤。
加硫乙醇酸盐流体培养基或胰酪大豆胨液体培养基至滤筒内。
另取一装有同体积培养基的容器，加入等量试验菌，作为对照。
置规定温度下培养，培养时间不得超过5天，各试验菌同法作。
5.3.3.直接接种法：取符直接接种法培养基用量要求的硫乙醇酸盐流体培养基6管，分别接入小于100cfu的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、生孢梭菌各2管，取符直接接种法培养基用量要求的胰酪大豆胨液体培养基6管，分别接入小于100cfu的枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2管。
其中1管接入每支培养基规定的供试品接种量，另1管作对照，置规定的温度培养，培养时间不得超过5天。
5.3.4.结果判断：与对照管比较，如供试品各容器中的试验菌均生长良好，则说明供试品的检验量在检验条件下无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计，照此检査方法和检查条件进行供试品的无菌检查。
如供试品的任一容器中的试验菌生长微弱、缓慢或不生长，则说明供试品的检验量在检验条件下有抑菌作用，应采用增加冲洗量、增加培养基的用量、用中和剂或灭活剂、更换滤膜品种等方法，消除供试品的抑菌作用，并重新进行方法适用性试验。
方法适用性试验与供试品的无菌检查同时进行。
5.4.供试品无菌检查无菌检査法括薄膜过滤法和直接接种法。
只要供试品性质允许，应采用薄膜过滤法。
供试品无菌检查所采用的检查方法和检验条件应与方法适用性试验确认的方法相同。
无菌试验过程中，若需用面活性剂、灭活剂、中和剂等试剂，应证明其有效性，且对微生物无毒性。
5.4.1.检验数量：除另有规定外，按表1规定。
5.4.2.检验量：即接种量，除另有规定外，按表2规定。
5.4.3.阳性对照：应根据供试品特性选择阳性对照菌：无抑菌作用及抗革兰氏阳性菌为主的供试品，以金色葡萄球菌为对照菌；抗革兰氏阴性菌为主的供试品，以大肠埃希菌为对照菌；抗厌氧菌的供试品，以生孢梭菌为对照菌；抗真菌的供试品，以白色珠菌为对照菌。
阳性对照试验的菌液制同“5.2.9.2培养基灵敏度检查”，加菌量小于100cfu，供试品用量同供试品无菌检查时每份培养基接种的样品量。
阳性对照管培养72小时内应生长良好。
5.4.4.阴性对照：供试品无菌检查时，应取相应溶剂和稀释液、冲洗液同法操作，作为阴性对照。
阴性对照不得有菌生长。
5.4.5.供试品的处理及接种培养基操作时，用适宜的消毒液对供试品容器面进行彻消毒，如供试品容器内有一定的真空度，可用适宜的无菌器材(如带有除菌过滤的针头向容器内导入无菌空气，再按无菌操作启开容器取出内物。
5.4.5.1.薄膜过滤法：薄膜过滤法一般应采用封闭式薄膜过滤。
无菌检査用的滤膜孔径应不大于0.45um，直径约50mm。
根据供试品及其溶剂的特性选择滤膜材质。
使用时，应保证滤膜在过滤前后的完整性。
5.4.5.1.1.水溶性供试品：水溶性供试液过滤前应先将少量的冲洗液过滤，以润湿滤膜。
取规定量，直接过滤，或混至含不少于100ml适宜的稀释液的无菌容器中，混匀，立即过滤。
如供试品有抑菌作用，须用冲洗液冲洗滤膜，冲洗数一般不少于3次（每滤膜每次冲洗量一般为100ml，且冲洗量不得超过1000ml，以避免滤膜上的微生物受损伤），所用的冲洗量、冲洗方法同方法适用性试验中确定的。
除生物制品外，一般样品冲洗后，1份滤器中加人100ml硫乙醇酸盐流体培养基，1份滤器中加入100ml胰酪大豆胨液体培养基。
5.4.5.1.2.非水溶性供试品：取规定量，直接过滤；或混合溶于适量含聚山梨酯80或其他适宜乳化剂的稀释液中，充分混合，立即过滤。
用含0.1%〜1 %聚山梨酯80的冲洗液冲洗滤膜至少3次。
加入含或不含聚山梨酯80的培养基。
接种培养基照水溶液供试品项下的方法作。
5.4.5.1.3.具有导管的医疗器具（输血、输液袋等）供试品：取规定量，每个最小装用50〜100ml冲洗液分别冲洗内壁，收集冲洗液于无菌容器中，然后照水溶液供试品项下方法作。
同时应采用直接接种法进行装中所配带的针头、针管的无菌检査。
5.4.5.2.直接接种法：直接接种法适用于无法用薄膜过滤法进行无菌检査的供试品，即取规定量供试品分别等量接种至硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基中。
除生物制品外，一般样品无菌检查时两种培养基接种的瓶或支数相同。
除另有规定外，每个容器中培养基的用量不得大于接种到该容器中的供试品体积的10倍，同时，硫乙醇酸流体培养基每管装量不少于15ml，胰大豆胨液体培养基每管装量不少于10ml。
供试品检査时，培养基的用量和髙度同方法适用性试验中确定的。
5.4.5.2.1.灭菌医用器具供试品：取规定量，必要时应将其拆散或切成小碎段，等量接种于各管以浸没供试品的适量培养基中。
5.4.6.培养及观察：将上述接种供试品后的培养基容器分别按各培养基规定的温度培养14天；培养期间应逐日观察并记录是有菌生长。
如在加入供试品后或在培养过程中，培养基出现浑浊，培养14天后，不能从外观上判断有无微生物生长，可取该培养液适量转种至同种新鲜培养基中，培养3天，观察接种的同种新鲜培养基是否再出现浑浊；或取培养液涂片，染色，镜检，判断是否有菌。
5.4.7.结果判断5.4.7.1.阳性对照管应生长良好，阴性对照管无菌生长，供试品管都无菌生长，则供试品符合规定。
5.4.7.2.阳性对照管应生长良好，阴性对照管无菌生长，供试品管中有任意一管有菌生长，则供试品不符合规定。
5.4.7.3.阳性对照管应生长良好，阴性对照管无菌生长，供试品管浑浊，经确凿无菌生长，则供试品符合规定；经确证有菌生长，则供试品不符合规定。