(完整版)无菌检测标准操作规程(培养法)

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无菌试验操作检验规程

1 范围适用于本规程规定的医疗器械的无菌试验方法。

无菌检查法系用于检杳要求无菌的医疗器械、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。

若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。

本试验系将医疗器械或其浸提液接种于培养基内，以检验供试品是否有细菌和真菌污染。

2 引用标准GB/T 14233.2-2005 医用输液、输血、注射器具检验方法。

第2部分:生物学试验方法。

《中华人民共和国药典（2015年版）》菌片标准按生物菌片供应商提供的方法进行3器材及试剂3.1器材:a)试管b)酒精灯c)75%乙醇棉d)灭菌刻度吸管(1mL)e)灭菌平皿(9cm)f）勺锥形瓶g)三角烧瓶h)灭菌剪刀、镊子i)恒温培养箱j)生化培养箱k)高压蒸汽灭菌器l)电热千燥箱3.2培养基及试剂:a)流体硫乙醇酸盐培养基b)改良马丁培养基c)营养琼脂培养基3.3稀释液、冲洗液及其制备方法:3.3.1 质量浓度为9g/L的无菌氯化钠溶液;3.3.2 0.1%蛋白胨水溶液:取蛋白胨1.0g，加水1000mL，微温溶解，滤清，调节pH值至7.1 ± 0.2，分装、灭菌。

3.3.3 pH7.0氯化钠一蛋白陈缓冲液:取磷酸二氢钾3.56g、磷酸氢二钠7.23g,氯化钠4.30g、蛋白胨1.0g，加水1000mL，微温溶解、滤清、分装、灭菌。

4实验操作:4.1实验前准备:4.1.1培养基要求:用于培养需(厌)气菌和真菌的培养基的制备、培养基灵敏度检查及其他各项要求应符合《中国药典(二部)》附录中《无菌检查法》的规定。

培养基可按药典的处方制备，也可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基。

制备后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。

制备好的培养基应保存在2～25℃、避光的环境。

培养基若保存于非密闭容器中，一般在三周内使用;若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。

4.1.2器具灭菌:与供试液接触的所有器具应采用可靠方法灭菌，置压力蒸气灭菌器内121℃30min,或置电热干燥箱内160℃——2h。

无菌检查法标准操作规程

无菌检查法标准操作规程目的：建立无菌检查的基本操作，为无菌检查人员提供正确的操作规程。

2.依据：《中华人民共和国药典》2000年版二部。

3.范围：本标准适用于QC无菌检查的操作。

4. 职责：QC无菌检查人员对本标准的实施负责。

5.程序：5.1. 定义：无菌检查法：系指检查药品、无菌器具及适用于药典要求无菌检查的其它品种是否无菌的一种方法。

5.2. 无菌操作室应具有空气除菌过滤的层流装置，局部洁净度100级或放置同等级别的超净工作台，室内温控（18~26）℃及除湿装置，操作室或工作台应保持空气正压。

5.2.1. 无菌室的清洁与消毒应符合QC洁净室清洁、消毒规程（SOP ZL0014）。

5.2.1.无菌室无菌程度的检查应符合规定：见沉降菌监测规程（SOP ZL0006）、悬浮粒子监测规程（SOP ZL0005）。

实验设备及用具：5.3.1.电热干燥箱、电热手提式压力蒸汽灭菌器、电热恒温培养箱、试管、注射器、针头、试管架、刻度吸管、手术剪、手术镊、砂轮、注射器盒、搪瓷托盘、双碟、75%酒精棉球、无菌工作服（衣、裤、帽、口罩等）。

5.3.2.微孔滤膜：直径50mm、孔径0.45μm，应符合规定。

5.3.3.除菌滤器：除菌滤器采用的是HTY-2000型全封闭式薄膜过滤器。

5.3.4. 所有进入无菌室的物品必须经过消毒或灭菌，应严格按照进入QC无菌室物品清洁、消毒、灭菌规程（SOP ZL0015）进行操作。

5.4. 稀释剂：灭菌注射用水。

5.5. 培养基：5.5.1.需气菌、厌气菌培养基（流体硫乙醇酸盐培养基）；真菌培养基。

5.5.2. 培养基的使用，配制、管理及灵敏度检查应按照培养基管理规程（SMP ZL0036）、培养基灵敏度检查规程（SOP ZL0019）、培养基配制规程（SOP ZL0016）进行操作。

5.6. 对照用菌液：5.6.1. 金黄色葡萄球菌（Staphyoccus sureus）菌液：取金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26 003]的营养琼脂斜面新鲜培养物1白金耳，接种至营养肉汤培养基内，在30~35℃培养16~18小时后，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至每1ml中含10~100个菌。

无菌检验标准操作规程(最全)

无菌检验标准操作规程一、目的无菌检验是指检查经灭菌方法处理后的医疗器械(具)、植入物品、敷料等是否达到无菌标准的一种方法。

临床部门不应常规进行无菌检验，如有需要，可联系当地疾病预防控制中心派专人来采样检测。

二、试验前准备1．无菌检验应在洁净度为100级以上的洁净实验室内实施，并证实该实验室各项指标符合GB50073—2001《洁净厂房设计规范》、GB／T16292～16294—1996《医药工业洁净室(区)悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》等相关要求，且在有效期范围之内。

2．按卫生部《消毒技术规范》(2002年版)制备无菌检验用洗脱液、需氧一厌氧培养基与真菌培养基(见附)。

3．在无菌检验前三日，分别在需氧一厌氧培养基与真菌培养基内各接种1ml洗脱液，分别置30～35℃与20～25℃：培养72h，应无菌生长。

4．阳性对照管菌液制备：(1)在检验前一天取金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]的普通琼脂斜面新鲜培养物，接种一环至需氧一厌氧培养基内，在30～35℃培养16～18h 后，用0．9％无菌氯化钠溶液稀释至10～100cfu／ml(可通过比浊法或稀释后用1m1接种平板来确认)。

(2)取生孢梭菌[CMCC(B)64941]的需氧菌、厌氧菌培养基新鲜培养物一接种环种于相同培养基内，于30～35℃培养18～24h后，用0.85％无菌氯化钠溶液稀释至10～100cfu／ml。

(3)取白念珠菌[CMCC(F)98001]真菌琼脂培养基斜面新鲜培养物一接种环种于相同培养基内，于20～25℃培养24h后，用0．85％无菌氯化钠溶液稀释至10～100cfu／ml。

三、样本制备根据检样的类型与大小，以及带孔(腔)与否，可以按照以下不同的方法进行制备。

1．敷料类等非管道类样品：取2个包装内的样本，剪成约10mm×30mm 大小的样片21片，接种需氧一厌氧菌培养管5管与真菌培养管2管。

每培养管含培养基40m1，各接种3片样片。

无菌检查操作规程(doc 8页)

无菌检查操作规程(doc 8页)1.目的：建立无菌检查的标准操作规程，确保检验结果的准确性。

2.范围：适用于本厂质监科化验室对本厂生产的注射剂进行无菌检查。

3.责任：化验员有责任按本操作规程操作，并对检验结果负责。

4.定义：无菌检查法系指检查药品是否无菌的一种方法。

5.内容：5.1无菌操作设备：无菌操作室或超净工作台，无菌衣、口罩、帽子、消毒鞋、酒精灯等。

5.1.1无菌室分无菌操作室和缓冲间。

在缓冲间内应有洗手盆、干手器、无菌衣放置架及挂钩、拖鞋等。

无菌操作室应具有空气除菌过滤的层流装置，局部洁净度100级超净工作台。

缓冲间及操作室内均设置能达到空气消毒的紫外光灯和照明灯，操作室或工作台应保持空气正压。

5.1.2无菌室应每周和每次操作前用0.1％新洁尔灭或2％甲酚液擦拭操作台及可能污染的死角，开动无菌空气过滤器及紫外光灯杀菌1小时。

在每次操作完毕，同样用2％甲酚或0.1％新洁尔灭溶液擦拭工作台面，用紫外光灯杀菌半小洗涤干净的注射器及注射针头装配好后，放入垫有纱布的带盖容器内（饭第3页/共7页盒）一层层放好，上面盖上纱布，然后盖上容器的盖子，用牛皮纸包好。

5.2.2.5滤器将检验合格后微孔滤膜先有水中浸泡湿润，取出后固定在细菌过滤器的滤板上，滤板下、滤膜上均用耐高温垫圈垫好，上好滤器。

在灭菌前滤器的螺勿拧太紧，滤器上口用8层纱布及牛皮纸包扎，装妥后放入容器内，再将盛滤器的容器盖好盖子，用牛皮纸包扎。

5.2.3用具的灭菌：将包扎好的用具，在121±0.5℃蒸汽灭菌柜中灭菌30分钟，物品取出时切勿立即置冷处，以免急速冷却灭菌物品内蒸汽冷凝造成负压，易致染菌，应置温箱或或加温烘干。

5.3培养基、试剂：5.3.1一般采用商品干燥培养基，临用时按照使用说明书进行配制，需注意培养基的pH值应符合规定，否则必须校正后，灭菌使用。

使用前，按要求分装灭菌好的细菌培养基须经30-35℃培养48小时，真菌培养基须经20-25℃培养72小时，证明无菌生长后方可使用。

无菌技术操作规范(精选)

无菌技术操作规范(精选)无菌技术操作规范(精选)无菌技术在现代医学和生物科学中扮演着重要的角色，它用于细胞培养、微生物实验以及手术等领域，帮助保持实验环境的纯净和减少病原体的传播。

为了确保无菌技术操作的准确性和有效性，下文将介绍一些关键的无菌操作规范。

一、实验前准备在进行无菌实验之前，必须做好充分的准备工作。

首先，工作区域必须清洁整齐，并经过消毒处理。

使用消毒剂擦拭所有的工作台面、器械、培养皿和试管等。

同时，确保操作者身穿无菌手套和实验服，以减少人体污染。

二、操作前检查在进行无菌操作之前，必须检查所有操作所需器材的无菌状态，包括培养皿、培养基和培养液等。

检查培养皿是否有裂纹、污染或已经褪色。

检查各种培养基和培养液是否超过保存期限或者已经变质。

三、细胞接种和分装在细胞接种和分装过程中，必须严格遵循无菌操作规范。

首先，将需要操作的细胞培养物置于无菌工作台上，将培养皿轻轻打开。

然后，将培养物从培养皿中提取出一定数量的细胞悬液，使用无菌材料进行分装到需要的培养皿中。

操作完成后，确保培养皿盖子紧密关闭，减少外界的污染。

四、灭菌操作在实验室中，灭菌操作是十分重要的环节，它能有效地杀灭病原菌和杂菌，确保实验结果的可靠性。

一般来说，有两种常用的灭菌方法：湿热灭菌和化学灭菌。

湿热灭菌是将操作器械放入高温高压的蒸汽器中进行灭菌。

化学灭菌则是使用消毒剂如酒精、漂白粉等对器材进行处理。

五、防止交叉污染为了避免交叉污染的发生，必须保持操作区域的干净和整洁，并严格分区。

每个区域必须配备相应的器材，且不可随意混用。

擦拭工作台面和器材时，应使用不同的工具和消毒纸，防止不同区域之间的污染。

六、无菌技术操作中常见问题及解决方法在无菌操作中，有一些常见问题需要注意。

例如，培养皿无法密封、培养液发霉或者无法成功进行细胞接种等。

面对这些问题，操作者应当保持冷静，并及时进行问题排查和解决。

可以更换培养皿或培养液，确保器械和培养物的无菌状态，以保证实验结果的准确性。

无菌检查法标准操作规程

每次操作时，均应取相应溶剂和稀释剂、及冲洗液同法操作，作为阴性对照。 4.1.3 实验完毕
将废液和实验物品及已操作完毕的含培养基的集菌培养器等移至传递窗并拿出，擦拭工作台面，检查电源是否关闭，是否有遗留物品等。按照《人员进出实验室的净化更衣规程》脱掉无菌服并装入配套的袋中，开启无菌室紫外灯半小时，将无菌服送至特定的洗衣机进行清洗灭菌。实验完毕的样品按照《检验用样品管理规程》进行销毁处理。 4.1.4阳性对照
关闭紫外灯10分钟后，进入缓冲间，按照《人员进出实验室的净化更衣规程》进入，并按照此规程穿戴无菌服、口罩。
4.操作
4.1薄膜过滤法 4.1.1操作前准备
检查无菌室电源和仪器是否完好，标示状态卡是否正确，是否有前次遗留物品及废液等，戴上无菌手套将供试品及所需物品移入无菌操作室，开启超净工作台并擦拭工作台面。 4.1.2操作 4.1.2.1根据药液性质选用不同型号的培养器，对于普通药液选用型号
菌检查法的要求。（2）回顾无菌试验过程，发现有可能引起微生物污染的因素。（3）供试品管中生长的微生物经鉴定后，确证是因无菌试验中所
使用的物品和（或）无菌操作技术不当引起的。试验若经确认无效，应重试。重试时，必须重新取同量供试品，依
法重试，若无菌生长，判供试品符合规定；若有菌生长，判供试品不符合规定。
否无菌的一种方法。若供试品符合无菌检查法的规定,仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。无菌检查法包括薄膜过滤法和直接接种法。 1.2 检验数量
指一次检验所用供试品最小包装容器的数量。除另有规定外，按表 1规定的最少检验数量进行，最少检验数量不包括阳性对照试验的供试品用量。采用薄膜过滤法，应增加1/2的最小检验数量做阳性对照用；采用直接接种法，增加每个培养基容器接种的样品量作为阳性对照用。

无菌检验操作规程

无菌检验操作规程无菌检验操作规程一、目的和适用范围为了保证实验室无菌检验的准确性和可靠性，规范无菌检验操作，并确保实验室工作人员的安全和健康，特制定本操作规程。

本操作规程适用于实验室进行无菌检验的所有工作，包括培养基制备、无菌器具处理、样品采集和处理、培养方法等方面。

二、基本要求1. 实验室应具备无菌检验所必需的设施和设备，并保持良好的清洁卫生环境。

2. 实验室工作人员应严格按照操作规程进行操作，并保持良好的个人卫生习惯。

3. 实验室应保证培养基的质量，确保无菌性和适用性。

4. 实验室应建立必要的记录和档案，对无菌检验的结果进行及时记录和分析。

三、无菌器具处理1. 确保无菌器具的质量，每批次器具在使用前应进行质量检验。

2. 器具的清洗和消毒应在专门的消毒台上进行，使用无菌的工具和材料。

3. 清洗器具时应使用无菌特效洗涤剂，并充分冲洗干净。

消毒时应使用适当浓度的消毒剂，消毒时间应符合标准要求。

4. 清洗后的器具应存放在无菌柜或密封的袋子中，以防再次污染。

四、样品采集和处理1. 采集样品前，要对采样器具进行清洁和消毒处理，并使用无菌容器保存样品。

2. 采样时要保持无菌采样器具的封闭性，避免外界环境的污染。

3. 对于液体样品，应在无菌操作台上进行，严禁倒杯操作。

对于固体样品，应在无菌条件下处理。

4. 样品采集完成后，应及时将采样器具和容器送到实验室，并妥善保存，以防止再次污染。

五、培养基制备1. 制备培养基的操作应在无菌操作台上进行，工作台面应经过清洁和消毒处理。

2. 使用的培养基应经过质量检验，确保无菌性和适用性。

3. 制备培养基时，要注意保持操作的无菌性，避免污染。

4. 制备完成的培养基应标明名称、批号和有效期，并妥善保存，避免污染和变质。

六、培养方法1. 培养前要将培养基及所需器具放置在无菌操作台上，以使其达到与环境相同的温度。

2. 培养时要保持培养器具的密封性，避免外界空气和微生物的污染。

3. 培养容器的开启和关闭要快速，并尽量避免与空气接触时间过长。

无菌检查法标准操作规程

直接接种法取符合直接接种法培养基用量要求的硫乙醇酸盐流体培养基8管，分别接入小于100 cfu的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各2管，取符合直接接种法培养基用量要求的改良马丁培养基4管，分别接入小于100 cfu的白色念珠菌、黑曲霉各2管。其中1管接入每支培养基规定量的供试品量，另1管作为对照，按置规定的温度培养3～5天。
非水溶性制剂供试品取规定量，混合，加入适量的聚山梨酯80或其它适宜的乳化剂及稀释剂使其乳化，接种至各管培养基中。或直接接种至含聚山梨酯80或其它适宜乳化剂的各管培养基中。
敷料供试品取规定数量，以无菌操作拆开每个包装，于不同部位剪取约100mg或1cm×3cm的供试品，接种于足以浸没供试品的适量培养基中。
同时应采用直接接种法进行包装中所配带的无菌针头的无菌检查。
具有导管的医疗器具(输血、输液袋等)供试品取规定量，每个最小包装用50～100ml冲洗液分别冲洗内壁，收集冲洗液于无菌容器中，然后照水溶液供试品项下方法操作。同时应采用直接接种法进行包装中所配带的针头的无菌检查。
注：①无菌十四烷酸异丙酯的制备采用薄膜过滤法过滤除菌。选用孔径为0.22μm的脂溶性滤膜，在140℃干热灭菌2小时。
根据供试品的特性，可选用其他经验证过的适宜的溶液作为稀释液、冲洗液。如需要，可在上述稀释液或冲洗液的灭菌前或灭菌后加入表面活性剂或中和剂等。
4.7方法验证试验
当建立产品的无菌检查法时，应进行方法的验证，以证明所采用的方法适合于该产品的无菌检查。若该产品的组分或原检验条件发生改变时，检查方法应重新验证。
1.目的
建立要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料、及其他品种是否无菌的一种检查方法。
2.范围
适用于无菌检验。
3.职责
检验员按本规程操作，质量控制部主管监督本规程的实施。

无菌检查.操作规程

无菌检查.操作规程无菌检查是指对无菌状态的物品、器械、培养基等进行检查，以确定其是否具有无菌性的一种操作。

无菌检查主要是为了保证医疗器械和药品的质量，防止传播致病菌和交叉感染。

下面是无菌检查的操作规程，共1200字。

一、仪器与试剂准备1. 玻璃器皿：无菌检查中常使用的玻璃器皿应先清洗，然后用高压蒸汽高温灭菌。

确保玻璃器皿表面没有任何污物和细菌。

2. 培养基：根据需要选择适当的培养基，如营养琼脂、肉膏琼脂等。

使用前应检查培养基包装是否完好，是否过期，如有问题应废弃，以免影响检测结果。

3. 培养皿：无菌培养皿应提前准备好，如果有无细菌培养基的培养皿，最好优先选择使用。

4. 培养皿贴壁：无菌贴壁是为了避免液体滴入培养皿内引起细菌污染，使用前应检查贴壁是否完好。

5. 双口试管：用于无菌培养物的传递，提前准备好。

二、人员准备工作1. 手部卫生：进行无菌检查前，操作人员应进行手部卫生，包括洗手和消毒。

先用流动水清洗手部，然后使用75%酒精进行消毒。

2. 穿戴无菌操作服：无菌检查需要穿戴无菌操作服，操作服要求干净、整洁，且经过高温蒸汽灭菌。

穿戴手套前，应先检查手套是否完整、无损。

3. 工作台表面消毒：将工作台表面用70%酒精进行擦拭消毒，确保无菌操作环境。

三、操作步骤1. 取一份待检物品：如医疗器械或药品，然后进行外观检查。

确保物品包装完好，无明显损伤和破损。

2. 打开培养皿：将培养皿的盖子拉开一些，方便后续操作。

3. 将待检物品放入培养皿：用镊子或无菌力ps，将待检物品放入培养皿内，尽量避免让待检物品直接接触培养皿的边缘。

4. 培养皿倒置：将培养皿倒置放于工作台上，检查物品是否有菌落生成。

5. 灭菌培养皿口：用长火柴将培养皿上的边缘逐一燃烧，防止细菌飞溅和传播。

6. 检查结果：观察培养皿上是否有菌落生成。

如果有菌落，则证明待检物品不符合无菌要求；如果无菌皿上没有菌落生成，则证明待检物品具有无菌性。

7. 结果记录：将无菌检查结果记录在检验记录表格上，包括待检物品的名称、批号、检查日期等信息。

(完整版)无菌检验标准操作规程(SOP)

目的:制定无菌检验标准操作规程，确保检验操作正确。

范围:本标准适用于本公司大容量注射剂无菌检验操作。

责任者：质管部、化验室主任、QC检验员内容:1、标准依据：《中国药典》2010年版二部附录XI H.2、简述：无菌检查方法系用于检查药品是否无菌的一种方法.检查项目包括需气菌、厌气菌及真菌检查.若供试品符合该项检查方法的有关规定,仅表明了在该检验条件下未发现微生物污染。

3、环境要求：该项检查应在环境洁净度万级（C级）背景下的局部百级（A级）的单向流区域内或隔离系统中进行。

其全过程必须严格遵守无菌操作.防止微生物污染，但所采取的措施不得影响供试品中微生物的检出.操作前环境洁净度应经验证。

日常检验需对试验环境进行监控.5、方法验证：进行该项检查前应按照《无菌检查方法验证规程》确认该方法的适用性。

4、人员要求:无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术培训。

6、检验数量及检验量：6。

1、接种每种培养基所需的最少检验数量：2％或10个（取较少者），供试品无菌检查若采用薄膜过滤法，应增加1/2的最小检验数量作阳性对照用；若采用直接过滤法,应增加供试品无菌检查时每个培养基容器接种的样品量作阳性对照用。

6。

2、每支供试品接入每种培养基的最少量:半量(100ml≤V≤500ml），采用薄膜过滤法时，检验量应不少于直接接种的供试品总接种量，只要供试品特性允许，应将所有容器内的全部内容物过滤.7、细菌培养温度为30~35℃，真菌培养温度为23~28℃。

8、仪器用具：垂直层流超净工作台、生化培养箱、电热恒温水浴箱、显微镜、手提灭菌器、离心机、双碟、试管、三角瓶、刻度离心管、注射器（针头)、剪刀、镊子、注射器盒、75％酒精棉球、紫外光灯365nm、真空泵、HTY智能全封闭集菌仪、一次性使用集菌培养器.9、消毒剂配制：9。

1、75%乙醇溶液（配制酒精棉球用).9。

2、0。

2％新洁尔灭溶液（配制消毒棉球用）。

9。

3、2％来苏尔溶液(配制消毒棉球用）。

无菌检查标准操作规程

无菌检查标准操作规程1 目的明确无菌检查法的过程，保证产品质量。

2 适用范围使用薄膜过滤法或直接接种法，检查要求无菌的产品及其原、辅料等是否无菌。

3 定义无。

4 职责与权限检验员：按本标准判定产品质量并出具报告。

负责人：监督执行情况，审批最终结果。

5 内容及流程5.1 实验说明5.1.1 TSB为“胰酪大豆胨液体培养基”。

5.1.2 所用材料及用具（待检品、菌株除外）应经过灭菌处理；检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。

5.1.3 直接接种法适用于无法用薄膜过滤法进行无菌检查的供试品。

5.2 检验量最少检验量（生物制品原液或半成品）：每个容器（每个容器制品）的取样量为总量的0.1%或不少于10mL，每开瓶一次，应如上法抽验。

5.3 实验材料与用具5.3.1 待检品（供试品）。

5.3.2 菌悬液（浓度≤100cfu/mL）：应根据供试品特性选择阳性对照菌。

①无抑菌作用及抗革兰阳性菌为主的供试品，以金黄色葡萄球菌作对照；②抗革兰阴性菌为主的供试品，以大肠埃希菌作对照；③抗厌氧菌的供试品，以生孢梭菌作对照；④抗真菌的供试品，以白色念珠菌作对照。

5.3.3 薄膜过滤法：无菌封闭式薄膜过滤器、无菌滤膜（孔径≤0.45μm，直径约50mm）、pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、硫乙醇酸盐流体培养基（400mL/瓶）、TSB培养基（400mL/瓶）、无菌吸头、移液器。

5.3.4 直接接种法：0.9%无菌氯化钠溶液、硫乙醇酸盐流体培养基（15mL/支）、TSB培养基（10mL/支）、无菌吸头、移液器。

5.4 薄膜过滤法5.4.1 供试品处理：打开包装前，先用75%乙醇对供试品容器表面进行彻底消毒，再以无菌操作拆开每个包装。

如有需要可将供试品混合不少于100mL的稀释液中再进行操作。

5.4.2 润湿：取10mL pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液注入滤筒，过滤，使整个滤膜表面湿润。

无菌检查法标准操作规程

取出其中作为阳性对照的管，按阳性对照菌选择原则加入相应的对照菌液，无抑菌作用及抗革兰氏阳性菌为主的供试品，以金黄色葡萄球菌为对照菌；抗革兰氏阴性菌为主的供试品，以大肠埃希菌为对照菌；抗厌氧菌的供试品，以生孢梭菌为对照菌；抗真菌的供试品，以白色念珠菌为对照菌。阳性对照试验的菌液制备同培养基灵敏度检查阳性对照试验。培养相应时间后应生长良好。大容量非抗菌作用的供试品，薄膜
瓶（支），测PH值为：
。
灭菌温度及时间：
配制培养基批号：
灭菌后培养基数量：
指示带：
配制人：
灭菌人：
复核人：
日期：
培养基领用使用
日期入库数量领用数量剩余数量领用人保管人备注
（瓶/ 支）
（瓶/ 支）
（瓶/ 支）
1.3.1若每袋供试品装量按规定足够接种两份培养基，则应分别按下表进行培养基接种：
中国药典
欧洲药典
硫乙醇酸盐流体培养基硫乙醇酸盐流体培养基
改良马丁培养基
大豆酪蛋白消环境洁净度C级下的局部洁净度A级的单向流空气区域。
3.实验前准备
3.1 紫外灯和空气净化系统：空气净化装置在实验前1小时开启，紫外灯在实验前至少1个小时开启。 3.2 供试品
批出厂产品最少检验数量
供试品
柜产量 N（袋）
接种每种培养基所需的最少检验数量
≤100
10%或4袋（取较多者）
注射剂
100＜N≤500 10袋
大体积注射剂（＞ 100ml）
＞500
2%或20袋（取较少者） 2%或10袋（取较少者）
1.3 检验量指一次试验所用供试品总量（g或ml）。采用薄膜过滤法时，检验量不应少于直接接种法供试品的总量，只要供试品的特性允许，应将所有容器内的全部内容物过滤。1000ml及以下规格产品，容器的内容物全部过滤。1000ml以上，半量过滤。

(完整版)无菌检测标准操作规程(培养法)

起草人：起草日期：审核人：审核日期：批准人：批准日期：武汉仝干生物科技有限公司Wuhan Togo Biotechnology Co.,Ltd1、目的建立无菌检测的基本操作，为无菌检测人员提供正确的操作规程。

通过无菌检验后，确保产品能够达到无菌的要求。

2、适用范围适用于我公司进行细胞质量检验的技术人员。

3、内容3.1 简述：无菌检测系用于检查细胞是否无菌的一种方法。

检查项目包括需氧菌、厌氧菌及真菌检查。

若供试品符合该项检查方法的有关规定，仅表明在该检验条件下未发现微生物污染。

3.2 环境要求：该项检查应在环境洁净度万级背景下的局部百级的单向流区域内或隔离系统中进行。

其过程必须严格遵守无菌操作，日常检验需对试验环境进行监控。

3.3人员要求：无菌检测人员应具备微生物及检验专业知识，并经过无菌检验培训。

4、无菌检验前的准备4.1器具灭菌、消毒试验过程中与供试品接触的所有器具必须采用可靠方法灭菌，可置高压灭菌锅内121℃蒸汽灭菌30分钟后使用（根据灭菌效果验证决定灭菌参数）。

所有的灭菌物品不应超过2周即用毕，否则应重新灭菌。

凡检验中使用的器材无法灭菌处理的，使用前必须经消毒处理，如无菌检验室的电子天平，工作台面等，可采用消毒剂浸泡或擦拭。

器具的灭菌、消毒后必须做好标识，标明灭菌、消毒时间和使用有效期。

4.2人员、物料进入无菌检验室开启紫外灯或臭氧发生器进行空间灭菌处理，消毒时间不得少于30分钟。

人员进入无菌检验室需在一更区脱去一般区工作鞋，换无菌检验室工作鞋，并在二更区穿戴无菌服、口罩和手套，口罩掩住口鼻，帽子包裹所有头发。

进入无菌检验室的所有培养基、供试品等需将外包装在传递窗拆除后，查看所有进入无菌检验室的器具上的灭菌、消毒标识，是否在有效期内，符合要求的于传递窗进行表面紫外消毒，传入无菌检验室。

5、无菌检验室操作要求1）人员进入后，首先进一步消毒擦拭工作台面。

2）全过程必须严格执行无菌操作，防止微生物污染。

无菌检验操作规程

2、检验依据：《中国药典》2020 版1101无菌检查法。

3、仪器、设备无菌室、生化培养箱（30~35℃）、生化培养箱（20~25℃）、手提式高压灭菌锅、电子天平、试管架、大试管、电热恒温干燥箱、手术镊、剪刀、75%酒精棉、灭菌棉球、酒精灯、移液管（ 1~3ml 可以每支产品用一个移液管,共需要11 支）、无菌服、口罩等。

4、无菌室环境要求：4.1 无菌检验应在环境洁净度10000 级下的局部百级的单向流空气区域内进行。

4.2 缓冲区与外界环境、无菌检验室与缓冲区之间空气应保持正压，阳性对照室与缓冲区之间空气应保持负压。

无菌检验室与室外大气之间静压差应大于 10Pa。

无菌检验室的室温应保持18~26℃，相对湿度,45~65%。

4.3 无菌检验室的单向流空气区、工作台面及受控环境应定期按洁净室区悬浮粒子、沉降菌及风速和换气次数检测规程进行监测。

4.4 无菌检验过程中应同时检查超净工作台单向流空气中的菌落数,每次操作时在层流空气所及台面的左中右置3 个营养琼脂平板,暴露30min，于30~35℃培养48 小时,菌落数平均应不超过1CFU/平板。

5、器具灭菌、消毒：5.1 灭菌：试验过程中与供试品接触的所有器具必须采用可靠方法灭菌。

可经电热干燥箱 160℃以上干烤2 小时或置压力蒸汽灭菌器内121℃蒸汽灭菌30 分钟后使用（根据灭菌效果验证决定灭菌参数）。

所有的灭菌物品存放不应超过2 周，否则应重新灭菌。

5.2 消毒：凡检验中使用的器材无法灭菌处理的，使用前必须经消毒处理,如无菌检验室的试管架、电子天平、工作台面、工作人员的手、橡胶吸头等,可采用消毒剂浸泡或擦拭。

消毒剂应每月更换以防止产生耐药菌株。

5.3 标识：器具的灭菌、消毒后必须做好标识，标明灭菌、消毒时间和使用有效期。

5.4 人员、物料进入无菌检验室5.4.1 开启紫外线灯或臭氧发生器进行空间灭菌处理,消毒时间不得少于30min。

5.4.2 物料进入无菌检验室流程5.4.2.1 脱包：进入无菌检验室的物品若有双重包装的,需将外包装在传递窗(缓冲间)拆除后传入试验室。

无菌检验操作规程

无菌检验操作规程一、目的为了确保实验室在进行无菌检验的操作过程中能够遵守规范的操作步骤，确保检验结果的准确性和可靠性，减少样品污染的可能性。

二、适用范围本操作规程适用于实验室进行各类无菌检验的操作。

三、操作要求1.操作人员必须熟悉相关实验室操作规程，并接受实验室培训。

2.操作人员需穿戴符合规定的个人防护设施，包括无菌手套、实验服、口罩等。

3.所有实验器材和试剂必须提前进行验证和校准，保证其符合要求。

4.操作人员在操作前应仔细阅读相关操作规程，并进行适当的实验准备。

5.实验室内应保持洁净，防止灰尘和杂质的进入。

6.操作结束后，操作人员应及时清理操作台面和实验器材，保持工作区域的清洁。

四、操作步骤1.洗手1.1操作人员必须在进入实验室前先洗手，使用无菌肥皂或洗手液彻底清洁双手。

1.2洗手后使用干净、无菌的纸巾或风干器将双手擦干。

2.穿戴个人防护装备2.1操作人员在操作无菌检验前，必须穿戴干净的无菌手套，并检查手套是否有破损。

2.2操作人员在操作过程中应佩戴干净的实验服，并系好服装。

2.3操作人员应佩戴口罩以避免口腔呼出的微生物污染样品。

3.操作台面清洁3.1操作人员应在操作前将操作台面进行清洁消毒，使用适合的消毒剂进行擦拭。

3.2擦拭过程中应注意力度不宜过大，以免损坏操作台面。

4.检验样品处理4.1操作人员应将待检验的样品收集在无菌容器中，并尽可能保持样品的不受污染。

4.2操作人员在取样时应避免对样品的二次污染，掌握合适的取样方法。

5.培养基的制备5.1操作人员必须使用无菌技术进行培养基的制备。

5.2操作人员在制备培养基时要仔细控制各类试剂的加入量，避免污染。

6.培养基接种6.1操作人员在接种培养基前必须进行灭菌处理，保证无菌状态。

6.2操作人员应采用无菌技术将样本转移到培养基中，并尽可能避免空气污染。

7.培养条件控制7.1操作人员在对培养基接种后，应根据实验要求对培养条件进行控制，如温度、湿度、光照等。

无菌检查标准操作规程

范围：无菌检查法包括直接接种法和薄膜过滤法。

前者适用于非抗菌作用的供试品，后者适用于有抗菌作用的或大容量的供试品。

职责：检验室对本规程的实施负责正文：1.操作前准备1.1试验设备、仪器用具1.1.1开放式滤器、真空泵、抽滤瓶1.1.2恒温培养箱(30℃~35℃)、生化培养箱(20℃~25℃)恒温水浴1.1.3高压蒸汽灭菌器、电热恒温干燥箱(250℃)1.1.4显微镜1.1.5玻璃器皿：试管、锥形瓶、量筒、培养皿(φ90mm)、刻度吸管(1、5、10ml)、注射器(5、10、20、30ml)、针头——洗净、晾干，用牛皮纸包扎严密，121℃蒸汽灭菌30分钟。

1.1.6手术镊、剪——160℃～180℃干烤2h。

1.2供试品等的处理供试品试验用盘、试管架等进入无菌室之前用消毒剂擦试。

1.3按无菌衣服的着装程序穿戴好无菌衣、帽、鞋。

2.检查2.1直接接种法2.1.1供试品的制备，按规定量取供试品混合。

2.1.2接种——取备妥的供试品，以无菌操作将该供试品分别接种于需、厌气菌培养基6管，其中1管接种金黄色葡萄球菌对照用菌液1ml作阳性对照，另接种于真菌培养基与5管，轻轻摇动，使供试品与培养基混合。

2.1.3培养——需、厌气菌培养基管置30-35℃培养箱中培养7日、真菌培养基管置20-25℃培养箱中培养7日，在培养期间应观察并记录是否有菌生长，阳性对照管在24小时内应有菌生长，如在加入供试品后，培养基出现浑浊，培养7天后，不能从外观上判断有无微生物生长，可取该培养液适量转种至同种新鲜培养基中或斜面培养基上继续培养，细菌培养2日真菌培养3日，观察是否再出现浑浊或斜面有无菌生长，或用接种环取培养液涂片、染色，用显微镜观察是否有菌。

——有轻微抑菌性的供试品可加入扩大量的每种培养基中，使供试品稀释至不含抑菌活性的。

2.2薄膜过滤法2.2.1抽滤——按该药品项下规定的方法处理后，加入0.9%无菌氯化钠溶液或其他适宜的溶液至少100ml的适当容积的容器中混合后，通过装有孔径不大于0.45μm的薄膜过滤器，然后用0.9%无菌氯化钠溶液或其他适宜的溶液冲洗滤膜至阳性对照菌正常生长为度。

无菌检查标准操作规程

无菌检查标准操作规程无菌检查法是检查要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料及要求无菌的其他物品是否染有活菌的一种方法。

事实上，若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现细菌和真菌污染。

无菌检查法有薄膜过滤法、直接接种法两种方式。

细菌培养温度32.5℃±2.5℃，真菌培养温度25.5℃±2.5℃。

1 无菌检查的环境无菌检查的所有操作均需在严格控制微生物污染的环境下进行，操作环境的无菌保证程度将直接影响无菌检查用洁净室（区）环境的稳定性，确保检查结果的可考性，对洁净室（区）的环境质量采取合理的控制措施和评价方法是必要的。

无菌检查应在环境洁净度10000级和局部洁净度100级的单向留空气区域内或隔离系统中进行，其全过程笔削严格遵守无菌操作，防止微生物污染。

单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。

隔离系统按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。

无菌室应采光良好、避免潮湿、远离厕所及污染区。

面积一般不超过10m2，不小于5m2；高度不超过2.4m。

由1～2个缓冲间、操作间组成（操作间和缓冲间的门不应直对），操作间与缓冲间之间应具备灭菌功能的样品传递箱。

在缓冲间内应有洗手盆、毛巾、无菌衣裤放置架及挂钩、拖鞋等，不应放置培养箱和其他杂物；无菌室内应六面光滑平整，能耐受清洗消毒。

墙壁与地面、天花板连接处应呈凹弧形，无缝隙，不留死角。

操作间内不应安装下水道。

无菌操作室应具有空气除菌过滤的单向流空气装置，操作区洁净度100级或放置同等级别的超净工作台，室内温度控制18～26℃，相对湿度45%～65%。

缓冲间及操作室内均应设置能达到空气消毒效果的紫外灯或其他适宜的消毒装置，空气洁净级别不同的相邻房间之间的静压差应大于5Pa，洁净室（区）与室外大气的静压差大于10Pa。

无菌室内的照明灯应嵌装在天花板内，室内光照应分布均匀，光照度不低于300lx。

无菌检查操作规程

无菌检查操作规程无菌检查是一种非常重要的操作，它用于检测无菌状态下的物品或环境是否存在微生物污染。

无菌检查操作规程的编写对于保障实验室和生产环境的洁净度以及产品的质量至关重要。

下面是一个1200字以上的无菌检查操作规程的示例：一、目的本操作规程的目的是规范无菌检查操作的步骤和要求，确保无菌状态下的物品或环境不受微生物污染。

二、适用范围本操作规程适用于实验室和生产环境中进行的无菌检查操作。

三、术语定义1.无菌：指没有含有活的微生物的状态。

2.无菌状态下的物品或环境：指通过严格的操作和控制，确保物品或环境中没有微生物的存在。

3.微生物污染：指物品或环境中存在无菌状态下不应该存在的微生物。

四、操作要求1.操作前准备(1)检查无菌检查设备和器材的完好性和清洁度，确保无菌检查设备和器材不受污染。

(2)准备好所需的培养基和培养液，确保培养基和培养液的质量符合要求。

(3)检查工作区的洁净度，确保工作区处于洁净状态。

2.操作步骤(1)双手消毒：先保持双手清洁干净，然后涂抹适量的酒精手消毒剂，按照正确的双手消毒方法进行双手消毒。

(2)无菌装具准备：使用酒精棉球或火焰灯进行灭菌处理，确保无菌装具的无菌状态。

(3)物品准备：将待检物品放置在清洁、无菌的工作区，并进行表面消毒处理。

(4)无菌条件下操作：在无菌条件下进行操作，避免物品再次受到污染。

(5)取样：使用无菌吸管或无菌棉签取样，注意避免取样器具受到污染。

(6)培养基接种：将取样液均匀涂布于无菌培养基上，确保接种均匀。

(7)培养：将接种的培养基放置于适宜的温度和湿度条件下进行培养。

(8)结果记录：根据培养基上微生物生长的情况，记录结果。

3.操作注意事项(1)操作前必须了解无菌检查的操作流程和要求，保证操作的准确性和可靠性。

(2)操作过程中要保持无菌条件，避免物品受到污染。

(3)操作完毕后要对无菌装具进行正确的处理，以确保无菌装具的再次使用。

(4)操作完毕后必须对工作区进行清洁和消毒处理，保证工作区的洁净度。

无菌检测标准操作规程(培养法)

通过无菌检验后，确保产品能够达到无菌的要求。

2、适用范围适用于我公司进行细胞质量检验的技术人员。

3、内容3.1 简述：无菌检测系用于检查细胞是否无菌的一种方法。

检查项目包括需氧菌、厌氧菌及真菌检查。

若供试品符合该项检查方法的有关规定，仅表明在该检验条件下未发现微生物污染。

3.2 环境要求：该项检查应在环境洁净度万级背景下的局部百级的单向流区域内或隔离系统中进行。

其过程必须严格遵守无菌操作，日常检验需对试验环境进行监控。

3.3人员要求：无菌检测人员应具备微生物及检验专业知识，并经过无菌检验培训。

所有的灭菌物品不应超过2周即用毕，否则应重新灭菌。

凡检验中使用的器材无法灭菌处理的，使用前必须经消毒处理，如无菌检验室的电子天平，工作台面等，可采用消毒剂浸泡或擦拭。

器具的灭菌、消毒后必须做好标识，标明灭菌、消毒时间和使用有效期。

4.2人员、物料进入无菌检验室开启紫外灯或臭氧发生器进行空间灭菌处理，消毒时间不得少于30分钟。

人员进入无菌检验室需在一更区脱去一般区工作鞋，换无菌检验室工作鞋，并在二更区穿戴无菌服、口罩和手套，口罩掩住口鼻，帽子包裹所有头发。

5、无菌检验室操作要求1）人员进入后，首先进一步消毒擦拭工作台面。

2）全过程必须严格执行无菌操作，防止微生物污染。

无菌检查法标准操作程序

1目的建立一个无菌检查法标准操作程序，保证实验的准确性、可靠性。

2范围适用于原料、辅料及成品的无菌检查。

3职责微生物检验员遵照执行。

4内容无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。

若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。

无菌检查应在无菌条件下进行，试验环境必须达到无菌检查的要求，检验全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。

单向流空气区、工作台面及环境应定期按医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法的现行国家标准进行洁净度确认。

隔离系统应定期按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。

日常检验还需对试验环境进行监控。

4.1 培养基硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需氧菌的培养；胰酪大豆胨液体培养基用于真菌和需氧菌的培养。

4.1.1 培养基的制备及培养条件培养基可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基或成品培养基。

配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。

制备好的培养基应保存在2〜25°C、避光的环境，若保存于非密闭容器中，一般在3 周内使用；若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。

4.1.1.1 硫乙酵酸盐流体培养基胰酪胨15. 0g 氯化钠 2. 5g酵母浸出粉 5. 0g 新配制的0. 1 % 刃天无水葡萄糖 5.0g 青溶液 1.0mlL-胱氨酸0. 5g 琼脂0. 75g硫乙醇酸钠0.5g 水1000ml(或硫乙醇酸）（0.3ml)除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节p H 为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节p H , 使灭菌后在25℃的p H 值为7.1 土0.2。

分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培养基氧化层（粉红色)不超过培养基深度的1/2。