高压灭菌锅仪器使用记录(微生物二)
(完整版)高压灭菌锅验证方案
高压灭菌锅验证方案1 目的通过验证试验提供足够的数据和文件依据，证明质检中所使用的高压灭菌锅以及其灭菌程序对各种不同物品灭菌过程的可靠性和重现性。
2 范围质量管理部高压灭菌锅（设备编号：Sbnzk-JQ-02301）。
3 验证小组成员及职责质量管理部负责验证的实施及准备工作；质量管理部(QC)负责检测工作；设备部负责设备的正常运转；质量管理部(QA)负责组织验证工作和结果评价。
3.1 验证委员会：质量受权人、主管副总经理、质量管理部经理、设备部经理。
3.2 验证工作小组：质量管理部、设备部有关人员为验证工作小组成员。
4 验证依据4.1 《中华人民共和国药典》。
4.2 《药品生产验证指南》。
4.3 仪器标准操作规程及使用说明书。
5 概述本灭菌器是一种可编程序控制器进行程序控制的新型湿热灭菌设备。
高压灭菌锅采用饱和蒸汽灭菌，工作温度105℃～135℃任意设定，灭菌时间在1～250分钟内任意设定。
5.1 设备基本情况：设备编号：Sbnzk-JQ-02301 设备名称：高压灭菌锅型号：HVE-50型生产厂家：HIR AYAMA使用部门：质量管理部购货日期：2000.11 安装位置：质量管理部微生物培养室。
6 验证前准备6.1 温度检测用设备6.1.1 校准的无线热电偶（10个），测量范围在0℃～135℃之间。
该高压灭菌锅的空载热分布、满载热穿透试验用无线热电偶进行温度检测。
6.2 微生物挑战试验用菌片该设备进行满载热穿透试验同时进行微生物挑战试验，微生物挑战试验所需要的菌片为军事医学科学院消毒检测中心出产的嗜热脂肪杆菌芽胞，含菌数量为5×105-5×106 cfu/片。
6.3 确认相关规程和文件7 验证内容7.1 预确认：7.1.1 设备技术指标审核对设备技术指标的适用性进行审查并作出书面评价。
审查时必须依据工艺技术要求和公司实深圳市赛百诺基因技术有限公司SOP-A05-040际情况进行。
微生物学实验讲义
实验二实验器具的灭菌一、实验目的1.学习并初步掌握和各种实验器具的包扎及高压蒸汽灭菌的方法。
2.了解其他灭菌方法。
二、基本原理高压蒸汽灭菌法可杀灭包括芽胞在内的所有微生物，是灭菌效果最好、应用最广的灭菌方法。
其基本原理是：在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加，在0.1MPa的压力下，锅内温度达121℃，在此温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。
三、器材1、高压蒸汽灭菌锅2、牛皮纸3、棉绳4、仪器和其他用具四、操作步骤1、包扎将各种实验器具进行合理规范包扎后，要用牛皮纸覆盖，最后用棉绳系紧。
2、加热烧开待高压锅内的水烧开，将包扎好的器具放入锅内的桶内，最后放入高压锅。
3、升压完全排除锅内空气后，关闭放弃阀，待压力上升到0.1MPa时，开始计时，维持压力0.1~0.15MPa 20分钟。
4、减压，取出器具到达保压时间后，即可切断电源，压力降到0.5MPa时，可缓慢放出蒸汽，注意不要使压力降低太快，以致引起激烈的减压沸腾，使容器中的液体四溢。
当压力降到零后，才能开盖。
五、思考题（1）、你认为那些环节会影响高压灭菌的效果？如果影响，请简述其中最关节的环节是什麽？实验三牛肉膏蛋白胨培养基的配制—、目的要求1、明确培养基的配制原理2、通过对基础培养基的配制，掌握培植基的一般方法和步骤。
二、基本原理牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下：牛肉膏 3.0g蛋白胨10.0gNaCI 5.0g水1000mIpH 7.4～7.6三、器材1、溶液和试剂牛肉膏，蛋白胨，NaCI,琼脂，1 moI/L NaOH, 1 moI/L HCI。
2、仪器和其他用品试管，三角瓶，烧杯，量筒，破棒，培养基分装器，天平，牛角匙，高压蒸气灭菌锅，pH试纸（pH5.5～9.0），棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。
四、操作步骤1、称量按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨，NaCI放入烧杯中。
无菌操作技术(二)
实验步骤
8.灭菌：将上述培养基以0.1MPa，121℃，20min 高压蒸汽灭菌。
实验目的
1.学习掌握培养基的配制原理，同时
通过对几种培养基的配制掌握配
制
培养基的一般方法和步骤。
2.了解高压蒸汽灭菌的原理和应用范 围，学习高压蒸汽灭菌的操作技术。
3.证实实验室环境与人体表面存在微 生物，体会无菌操作的重要性。
实验目的
4.熟练掌握从固体培养物和液体培养 物中转接微生物的无菌操作技术，熟知各 种菌种保藏方法，以及各个方法的特点和 区别。
实验步骤
五、细菌制片及简单染色 1.涂片 取一块载玻片，用记号笔平均分为两个区域并标 记；各滴一小滴生理盐水于两个区域中央；用接 种环无菌操作分别由枯草芽孢杆菌营养琼脂斜面 和金黄色葡萄球菌营养琼脂斜面挑取适量菌苔， 将沾有菌苔的接种环置于载玻片的生理盐水中涂 抹，使菌悬液在载玻片上形成均匀薄膜。若用液 体培养基涂片，可用接种环蘸取1~2环菌液直接 涂于载玻片上。
实验步骤
3.实验室环境的检查 ①将标有“空气1”的平板在实验室打开皿盖， 使琼脂培养基表面完全暴露在空气中；将另一个 标有“空气2”的平板放在已灭菌的无菌操作箱 （室）内，打开皿盖，1h后盖上两个皿盖。 ②取出灭菌湿棉签，在实验台面擦拭约2cm2的范 围，然后将棉签从平板的开启出伸进平板表面， 在E区滚动一下，立即闭合皿盖，放回棉签。用 同样的方法将擦拭了门旋钮的棉签在F区进行滚 动接种，将沾有灰尘的棉签在G区接种。将灭菌 棉签在H区接种。
微生物工程实验报告
实验1 培养基的配制和灭菌一、目的要求1.了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。
2.了解几种灭菌方法，掌握高压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。
3.熟悉菌种分离筛选的前期准备工作及操作方法。
4.每2人一组，每人一份实验报告。
二、实验材料1.药品：酵母粉、蛋白胨、氯化钠、琼脂、葡萄糖、KNO3、MgSO4•7H2O、FeSO4•7H2O、1N HCl、1N NaOH2.设备：高压蒸汽灭菌锅、紫外线灭菌灯、75%酒精棉。
3.材料：天平、药匙、电炉、pH 试纸、烧杯、量筒、5mL、10mL 注射器、玻璃棒、试管、培养基、吸管、移液器（1mL 0.2mL）、牛皮纸、线绳、标签等。
三、实验内容(一) 培养基的配制1．培养基的配制方法和步骤1)称量：按照配方正确称取所需药品放于烧杯中。
2)溶化：在烧杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶解。
3)调pH 值：用1N NaOH 或1N HCl 调pH，用pH 试纸对照。
4)加琼脂溶化：加热过程要不断搅拌，可适当补水。
5)分装：注意不要污染试管塞或纱布。
6)包扎成捆：用记号笔注明何种培养基。
7)灭菌：在高压锅中， 115 °C 高温灭菌30min。
2．培养基的配制A.富集培养基（液体）：海水2216E 液体培养基（g/L）：蛋白胨5.0，酵母粉1.0，海水1L，pH 8.0。
取50mL 分装250mL 三角瓶后，8 层纱布封口，外包1层牛皮纸，121℃，高温灭菌20min。
B. 2216E 斜面（固体）：海水2216E 液体培养基中加入2%的琼脂粉，加热溶化琼脂，每支试管内。
加入3mL，121℃高温灭菌20min，灭菌后摆斜面。
C. 无菌生理盐水和保种液：生理盐水： NaCl 0.85% 蒸馏水配制。
每支试管加入5mL，盖上试管帽、包扎、121°C 高温灭菌20min。
保种液：生理盐水，加25%甘油D. 碳源优化培养基：以海水2216E 液体培养基（蛋白胨0.5%，酵母粉0.1%，磷酸铁0.01%，人工海水，pH7.6）为基础，碳源分别是：葡萄糖、蔗糖、甘油、柠檬酸钠、乳糖，每种碳源的添加量为1%。
实验八高压蒸汽灭菌锅的使用
8.灭菌结束
关电源，将排汽排水阀向左旋转，排除蒸汽， 当压力表上压力指示针指到0时，方可启盖取 出灭菌物品 压力：156KPa，水蒸气的温度：250℃，时间：45'，热原质（Pyrogen）:热原质即菌体中的脂多糖
当连锁灯亮时，显示容器密封到位 干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。 第六步结束后，进入自动灭菌程序，当锅内压力达到约0. 消毒（disinfection) 是指杀死病原微生物、但不一定能杀死细菌芽孢的方法。 当连锁灯亮时，显示容器密封到位 第六步结束后，进入自动灭菌程序，当锅内压力达到约0. 将手轮向左旋转数圈，使锅盖向下压紧锅体，以确保密封开关处处于接通状态。 第六步结束后，进入自动灭菌程序，当锅内压力达到约0. 压力：156KPa，水蒸气的温度：250℃，时间：45'，热原质（Pyrogen）:热原质即菌体中的脂多糖 压力：147KPa，水蒸气的温度：121℃，时间：15～30min ，各种微生物和它们的孢子或芽孢 一般认定115℃-121. 第六步结束后，进入自动灭菌程序，当锅内压力达到约0.
实验八高压蒸汽灭 菌锅的使用
主要内容
1. 高压蒸汽灭菌锅的用途 2. 高压蒸汽灭菌锅工作原理 3.高压蒸汽灭菌锅的结构 4. 使用与操作方法 5. 维护与保养 6.故障分析与排除
1.1 高压蒸汽灭菌锅的用途
高压蒸汽灭菌锅用途广，适用于医疗卫生事业、 科研、农业等单位；对医疗器械、敷料、玻璃 器皿、溶液培养基等进行消毒灭菌，也适用于 高原地区作蒸餐设备和企事业单位制取高质量 饮用水，也可作为制取高温蒸汽源设备，是微 生物学实验中最常用的灭菌方法。
6.设定温度和时间
按一下确认键，按动增加键，将温度设定在 121度，再按动一下确认键，按动增加键,设 定时间为20分钟，最后再按确认键，温度和 时间设定完毕
灭菌锅的实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 理解灭菌锅的工作原理和操作流程。
2. 掌握高压蒸汽灭菌技术，确保实验材料的无菌性。
3. 学习使用灭菌锅进行实验操作，提高实验室无菌操作技能。
二、实验原理灭菌锅是一种用于高温高压条件下杀灭微生物及其芽孢、孢子的设备。
其工作原理是利用高温高压蒸汽产生的高温高压环境，使微生物蛋白质变性、酶失活，从而杀死微生物。
三、实验材料1. 试剂：无菌蒸馏水、琼脂、牛肉膏、蛋白胨、氯化钠等。
2. 仪器：灭菌锅、高压蒸汽灭菌器、培养皿、试管、移液管、酒精灯、火柴等。
四、实验方法1. 培养基制备：按照实验要求，将牛肉膏、蛋白胨、氯化钠等试剂加入无菌蒸馏水中，搅拌均匀，煮沸消毒后，加入琼脂，继续煮沸至琼脂完全溶解，冷却后分装至无菌培养皿中。
2. 接种：将待分离的微生物接种于制备好的培养基上，用无菌镊子将接种环在酒精灯上灼烧，待冷却后，将接种环蘸取少量待分离的微生物，轻轻涂抹于培养基表面。
3. 灭菌锅操作：a. 将接种好的培养皿放入灭菌锅中，关闭锅盖，确保密封良好。
b. 将灭菌锅加入适量的水，使水面与三角搁架相平。
c. 打开高压蒸汽灭菌器，调节温度至121℃，压力至0.1MPa。
d. 灭菌30分钟后，关闭高压蒸汽灭菌器，自然冷却至室温。
e. 打开灭菌锅，取出培养皿，观察菌落生长情况。
五、实验结果经过高压蒸汽灭菌处理后，接种于培养基上的微生物被有效杀灭，培养基表面无菌落生长。
六、实验讨论1. 灭菌锅是一种高效、安全的灭菌设备，广泛应用于实验室、医院、食品加工等行业。
2. 高压蒸汽灭菌技术是实验室无菌操作的重要手段，可有效防止微生物污染。
3. 在实验操作过程中，应注意以下几点：a. 确保实验材料、仪器和操作场所的无菌性。
b. 严格遵守操作规程，避免交叉污染。
c. 使用无菌工具，避免污染培养基。
七、实验总结本次实验成功掌握了灭菌锅的操作方法，了解了高压蒸汽灭菌技术的原理和应用。
通过实验，提高了实验室无菌操作技能，为今后的实验研究奠定了基础。
微生物实验室质量控制准则
培养基配制用蒸馏水的控制
对于蒸馏水器来说：按设备说明，定期清洁离 子交换器和更换离子交换材料。
检测要求：西欧标准为微生物检验用蒸馏水的 特定电导率＜0.5ms/m；细菌数＜50cfu/ml。我 们日常用的标准为 ＜10ms/m，未见有细菌指 标。
检测频率：1次/每月。 蒸馏水定点供应，并做好相应的质量控制，记
培养基配制原料，试剂质量控制
培养基的配制程序（一）
不同的培养基配制的程序有所不同，但一般培 养基配制程序主要有以下7个步骤、调配、融化、 矫正pH、澄清过滤、分装、灭菌及鉴定 。
注意点：配制时注意各类成分的用途。 pH测定干燥培养基在工厂生产时，对培养基PH
进行了一定的调试，在实际工作中，由于配制 的环境、配制所用的溶剂（蒸馏水）PH等条件 有所不同，都会对所用的培养基PH要有所影响。 因此对于干燥培养基配制，同样需要进行PH测 验。
小计量容器日常使用检查可每周进行一次， 包括容器的完整性。并做好相应的记录。
pH计
pH计使用前应用标准液进行校准。
缓冲液使用有效期：PH4.00 约1年
PH7.00 约6个
月
pH9.00 约6个
月
pH计的维护：电极外表的定期清洗；
复。
电极敏感性检测及极性恢
净化工作台的控制
水平流净化工作台工作区域，要求洁净度 为100级。空气沉降30min，细菌数＜1个 /皿。垂直流净化工作台，细菌数＜0.49 个/皿.
高压灭菌锅温度波动范围：110，115和 121±2℃。
高压灭菌锅校准周期一般在半年。
干燥灭菌箱温度控制
干燥灭菌箱日常工作记录中应包括以下信息： 开始的时间、到达灭菌温度时的时间、取出的 时间（或关闭时间）。
微生物学实验-1培养基的制备与高压蒸汽灭菌
2. 放回内层锅，并装入待灭菌物品。 放回内层锅，并装入待灭菌物品。
3. 加盖，并将盖上的排气软管插入内层锅的 加盖， 排气槽内。 排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相 对的两个螺 栓。
4. 通电加热，待冷空气完全排尽后，关上排气 通电加热，待冷空气完全排尽后， 阀。当锅内压力升到所需压力时，控制热源，维 当锅内压力升到所需压力时，控制热源， 持压力至所需时间。本实验用 持压力至所需时间。本实验用0.1Mpa，121.5℃， ， ℃ 20min灭菌。 灭菌。 灭菌 5. 灭菌所需的时间到后，关闭电源，让灭菌锅 灭菌所需的时间到后，关闭电源， 内温度自然下降，当压力表降至“ 时 内温度自然下降，当压力表降至“0”时，打开排 气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。 气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。 6. 将取出的灭菌培养基放入 ℃温箱培养 将取出的灭菌培养基放入37℃温箱培养24h， ， 经检查若无杂菌生长，即可待用。 经检查若无杂菌生长，即可待用。
6. 加塞 在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞，以 在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞， 阻止外界微生物进人培养基内而造成污染， 阻止外界微生物进人培养基内而造成污染，并保 证有良好的通气性能。 证有良好的通气性能。 7. 包扎 在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时 在棉塞外包一层牛皮纸， 冷凝水润湿棉塞，其外再用绳子扎好。 冷凝水润湿棉塞，其外再用绳子扎好。注明培养 基名称、组别、配制日期。 基名称、组别、配制日期。 8. 灭菌 将上述培养基以 0.103 MPa 121℃ ， ℃ 20min高压蒸汽灭菌。 高压蒸汽灭菌。 高压蒸汽灭菌
高压蒸汽灭菌
实验目的
了解高压蒸汽灭菌的基 本原理及应用范围。 本原理及应用范围。 学习高压蒸汽灭菌的操 作方法。 作方法。
实训二 微生物实验常用灭菌和消毒方法
实训二微生物实验常用灭菌和消毒方法一、实验目的1、学习微生物实验常用灭菌消毒方法；2、掌握高压蒸汽灭菌法、干热灭菌法等常用灭菌方法；3、熟悉灭菌消毒过程中的注意事项。
二、实验原理消毒是指杀灭或清除传播媒介上病原微生物，但不一定杀灭芽孢，使其达到无害化的处理。
灭菌是指杀灭或清除传播媒介上所有微生物，包括芽孢。
灭菌方法通常分为：（1）加热灭菌；（2）过滤除菌；（3）射线灭菌和消毒；（4）化学药剂灭菌和消毒。
以下介绍几种微生物实验常用灭菌消毒方法。
（一）干热灭菌干热灭菌是指利用干热空气杀灭微生物，一般在电烘箱中进行。
由于蛋白质在干燥无水的情况下不容易凝固，干热灭菌所需温度较湿热灭菌高，时间也较湿热灭菌长。
一般须在140℃左右保持恒温3-4h，方能达到灭菌的目的。
干热灭菌适用于空玻璃器皿的灭菌，凡带有橡胶的物品和培养基，都不能进行干热灭菌。
烘箱内装入物品应留有空隙，以利于空气流动，否则箱内受热不均，部分物品灭菌不彻底。
（二）高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌是一种湿热灭菌方法，是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。
待锅内冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热。
由于此时水蒸气无法排出，增加了灭菌锅内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度，导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌目的。
高压蒸汽是最有效的灭菌法，能迅速地达到完全彻底灭菌的效果。
一般在121℃灭菌15-30min，所有微生物包括芽孢在内都可杀死。
在同一温度下，湿热杀菌效果比干热好，因为微生物细胞蛋白质在湿热情况下更易凝固。
高压蒸汽灭菌锅有立式和卧式两种。
各种微生物的营养体在100℃温度下半小时即可被杀死，而其芽孢和孢子在这种条件下却不会失去生活力。
间歇灭菌就是根据这一原理进行的。
间歇灭菌是保持100℃，30min杀死培养基内杂菌的营养体，然后将含有芽胞和孢子的培养基在温箱内或室温放置24h，使芽孢和孢子萌发为营养体，再用100℃处理30min，再放置24h。
高压灭菌锅的验证报告记录
高压灭菌锅的验证报告记录高压灭菌锅的验证报告记录————————————————————————————————作者：————————————————————————————————日期：立式压力蒸汽灭菌锅YXQ-LS-75G仪器验证报告验证报告审批表程序审批部门签名日期起草第三B组2013.2.28 审核班主任2013.03.11 批准系主任-- 立式压力蒸汽灭菌锅YXQ-LS-75G仪器验证报告目录1.概述2.验证目的3.验证依据及采用文件4.验证内容4.1.设计确认4.2.安装确认4.3.运行确认4.4.性能确认5.再验证周期6.验证报告审批1.概述本消毒器是利用高压高温湿热蒸汽杀菌，用于微生物限度检查用培养基、器皿及污染物过期菌种等灭活，灭菌条件设定为121℃，15min。
2.验证目的通过验证确认立式压力蒸汽灭菌器能达到设备性能指标，满足检验需求。
验证结果必须证明生产中采用的灭菌过程对经过灭菌的物品能够保证残存微生物污染的概率或可能性低于10-63.验证依据及采用文件《药品生产验证指南》《药品生产质量管理规范》《中华人民共和国药典》2010年版二部4.验证内容4.1设计确认容积：75L灭菌工作温度：109℃~135℃设定温度时间：4~120分钟；设定干燥时间范围：15~240；电源：220V±10V,50Hz；灭菌加热功率：3.5KW干燥加热功率：1KW额定工作压力：0.212Mpa；额定工作温度：135℃；工作坏境：温度5℃~40℃;相对湿度：≤ 80%RH;设备安全类别：I类；毛重：60kg(75L)4.2安装确认4.2.1资料档案名称存放处使用说明书实训楼615办公室档案存放处（高压灭菌器）备料清单实训楼615办公室档案存放处（高压灭菌器）合格证实训楼615办公室档案存放处（高压灭菌器）开箱验收记录实训楼615办公室档案存放处（高压灭菌器）设备卡实训楼615办公室档案存放处（高压灭菌器）检验人：日期：2013.2.28复核人：日期：2013.2.284.2.2安装确认序号项目标准检测结果是否符合要求1 立式压力蒸汽灭菌锅YXQ-LS-75GYXQ-LS-75G YYXQ-LS-75G符合2 出厂编号有有符合3 出厂日期有有符合4 数量1台1台符合5 装箱单有有符合6 合格证有有符合7 使用说明书有有符合8 第三方质量检验书有有符合9 保修卡有有符合10 设备完整性、牢固性无缺陷、无松动无缺陷、无松动符合11 表面裂痕、焊缝无裂痕、打磨光滑无裂痕、打磨光滑符合12 表面划痕无划伤、碰痕无划伤、碰痕符合13 各种零部件，备品备件齐备齐备符合14 破裂管线无破裂、接口可靠无破裂、接口可靠符合15 松脱电线联接紧固、无松脱联接紧固、无松脱符合16 电源220V 50HZ 220V 50HZ 符合17 环境温度5℃～40℃；相对湿度≤80%RH 5℃～40℃；相对湿度≤80%RH符合18 安装的环境背景化验室化验室符合检验人：日期：2013.2.28复核人：日期：2013.2.284.3运行确认4.3.1仪表校正1.校正的温度指示、传感器、温度记录仪的读数值与标准电偶指示值之间的误差应≦+0.5℃。
化验室微生物理化指标检测项目操作步骤
4
进入生产车间操作时，使用75%酒精对工作服/手部消毒
计算公式
结晶紫中性红胆盐琼脂 平板计数琼脂
高压灭菌锅/药品灭菌
高压灭菌锅/器具灭菌
工作服/75%酒精
空气质量 沉降
手部/工作服 涂抹
5
空皿打开后按照沉降点位置放置10-15分钟，然后按照先后顺序盖好 皿器收起来，并做好沉降点位置标识在皿器上
空皿/可擦拭记号笔
8
将取好的样带回化验室无菌室进行试验
9
从取好样的试管中，吸1ml无菌水移入空皿中
培养皿/移液管/吸头
10
倒入琼脂15-20ml在培养皿中，倒完后立即盖好稍微摇匀即可（需要 在酒精灯上操作）
琼脂/培养皿/酒精灯
11 待琼脂完全凝固后，翻过来放入36±1℃恒温培养箱中，培养120小时
36±1℃培养箱
12
5
镊子将棉签取出，在操作人员手部（掌心/手指）/工作服/设备进行 擦拭
6
范围尽量将手指/手掌工作服/设备部位都擦拭到位，擦拭完后将棉签 塞回试管内
盖好橡胶塞前将手部接触部分的棉签棒折掉，把折掉不需要的棉签棒
7
丢弃垃圾桶，做好涂抹人员姓名/工作服/设备部位标识在皿器上
工作服/75%酒精 镊子/试管/棉签
13
待琼脂完全凝固后，翻过来放入36±1℃培养箱中，培养48小时
培养时间到了后取出，查看平板上的菌群数量并计数
14 计算公式：两个培养皿菌群的生长个数之和，除以2乘以稀释倍数等
于结果，并及时记录
1
药品配制根据马铃薯葡萄糖琼脂说明进行配制，配制药品的水使用无 菌水（蒸馏水1000ml+氯化钠8.5g）
3
辅助器具：剪刀、镊子、移液管、空皿
细菌生长现象的观察及高压灭菌器的使用实验报告
细菌生长现象的观察及高压灭菌器的使用实验报告一、目的要求1.掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。
2.掌握培养基的配置原则和方法。
3.掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。
二、基本原理牛肉膏蛋白胨培养基：是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。
由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。
高压蒸汽灭菌：主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。
将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。
待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气阀继续加热。
此时蒸汽不溢出，压力增大，沸点升高，获得高于100度的温度导致菌体蛋白凝固变性，而达到灭菌的目的。
三、实验材料1、药品：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol或L的NaOH和HCl溶液。
2.、仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。
3其他物品：药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花等。
四、操作步骤（一）玻璃器皿的洗涤和包装1、玻璃器皿的洗涤玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。
将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中。
用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。
移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馏水冲洗。
洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。
2、灭菌前玻璃器皿的包装（1）培养皿的包扎：培养皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套培养皿包成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。
包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。
（2）移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花（勿用脱脂棉），它的作用是避免外界及口中杂菌进入管内，并防止菌液等吸入口中。
塞入此小段棉花应距管口约0.5厘米左右，棉花自身长度约1到1.5厘米。
塞棉花时。
可用一外围拉直的曲别针、将少许棉花塞入管口内。
棉花要塞得松紧适宜，吹时以能通气而又不使棉花滑下为准。
高压锅灭菌锅操作及维护规程
文件编号SOP- HW-008-00高压灭菌锅操作及维护规程页码1/3主管部门：编制人：审核人：批准人：设备部−−−−−−分发部门设备部、质量部、生效日期−−1目的制定高压灭菌锅操作规程，以达到安全使用与保证灭菌效果的目的。
2范围本规程适用于我司压力蒸汽灭菌锅的使用操作过程与维护保养过程。
3职责3.1设备部负责对实验室设备进行年度校验。
3.2实验室微生物检验员负责照此规程进行操作和设备的日常维护保养工作。
4操作程序4.1堆放将待灭菌的物品予以妥善包扎，各包之间留有空隙，这样有利于高压蒸汽的穿透。
提高灭菌效果。
4.2加水在外桶内体注入清水，水位一定要超过电热管2厘米以上（但不宜过多），连续使用时，必须在每次操作前补足上述水位，以免烧坏电热管和发生意外。
4.3密封灭菌物品堆放后，盖上锅盖时将放汽软管插入储物桶内侧的半圆槽内，对准上下法兰的螺栓槽，然后以对称的方式，同时拧紧同一直线上得两个螺母（拧紧时尽量使螺栓松紧一致）；打开放汽阀。
4.4加热插上电源插头，确认放汽阀的小扳手打开，随着加热温度升高，桶内空气遇热膨胀，从放汽阀逸出。
按动座圈上带指示灯的电源开关，指示灯亮，即开始加热。
4.5灭菌当放汽阀内有较急的蒸汽喷出时（沸腾5min后，或者是排出的气体竖直上升约0.8m的高度），将放汽阀小扳手置回原位，关闭放气阀。
此时压力指示表指针会随着加热逐渐上升。
当压力到达所需范围时，开始计算灭菌时间，并使之维持恒温恒压。
各种灭菌物所需的时间压力和温度参数如表1表1带灭菌物品分类灭菌所需时间饱和蒸汽相对温度（℃）器皿类30121-126瓶装溶液类30121-126备注：如果培养基有灭菌参数要求，则需要按照其要求进行时间和温度的设定。
4.6冷却。
灭菌操作规程(清晰整齐)
灭菌操作规程一、微生物检验器皿的包扎1、目的杀菌前的准备工作2、所用器具(1)、棉花(2)、橡胶塞(3)、牛皮纸或报纸(4)、棉绳3、操作方法(1)、试管：塞上棉塞，然后用牛皮纸或报纸把试管头包扎起来。
做乳糖胆盐培养基时，将试管头塞上专用塑料塞放入铁丝框。
(2)、吸移液管：将吸移液管一头塞上棉塞，然后单支或几只用纸包起来，或用盒装。
(3)、三角瓶、抽滤瓶：将三角瓶（抽滤瓶）口用棉塞塞好，或塞上橡胶塞，然后用牛皮纸把塞头部包起来。
(4)、玻璃洗瓶：将玻璃洗瓶瓶口用棉塞或橡胶塞塞好，用牛皮纸把塞头部包起来。
(5)、磁性漏斗：用牛皮纸或报纸将磁性漏斗整个包扎起来。
(6)、平皿：10 个为一组，用牛皮纸包裹或盒装。
二、高压蒸汽灭菌1、适用范围本法适用耐湿热器具的灭菌如：(1)、易分解的、耐热性的培养基(2)、耐热性好的玻璃器皿(3)、橡胶(4)、耐热性塑料2、原理利用1.5kgf/cm2，121℃的饱和蒸汽，灭菌20分钟。
4、仪器和设备高压灭菌锅5、操作方法(1)、包装a.装入培养基的（箱）瓶用螺旋盖盖上，容器用棉塞塞住，再用牛皮纸包扎。
螺旋盖应微松。
b.在瓶中的培养液不要超过1L，否则灭菌不彻底。
c.容器的上部应留有足够的空间，以便产生气泡。
d.器具用牛皮纸包裹，放入灭菌袋中。
e.器具的组合和包裹应允许灭菌蒸汽接触所用物品。
f.各类器具装入釜内时，相互间要留有空隙以使蒸汽自由流动。
(2)、高压杀菌a.在灭菌器内加入适量的水（不得低于釜底指示横片，露出加热盘管），放入需灭菌物品，盖上内盖，拧紧外盖上的螺栓。
拧紧时要注意对称的进行，否则容易造成漏气。
b.开始加热前，将排气阀打开。
c.待温度上升至100 oC 时（即当所有的冷空气已排出时），关闭放汽阀门，使压力上升至1.05kgf/cm2（15 磅/英吋2），在此压力下维持20 分钟。
注意：加热时间不要过长，但也不要低于指定的20分钟。
(3)、断开电源。
(4)、排气阀关闭的状态下，让釜内压力自然下降。
(word完整版)微生物检测用高压蒸汽灭菌锅灭菌效果验证2010
生产厂家：江苏省江阳市液化石油气设备厂出厂日期：2001年6月出厂检验单位：无锡市锅炉压力容器检验所检验证书编号：R2001214安装地所：微生物限度检测室本设备是利用饱和蒸汽对物品进行迅速而可靠的消毒灭菌设备，主要用于微生物限度检验所用玻璃器皿、稀释液、培养基等的灭菌，需对其灭菌效果进行验证。
二、目的：在设定温度、压力及灭菌时间条件下，被灭菌物品是否达到无菌。
三、范围：本验证方案适用于LS-B35L立式灭菌器四、验证组织机构1、验证委员会：主任公司质量负责人2、验证小组：组长：质量监控部负责人、生产技术部设备主管3、责任：验证委员会负责再验证文件的审核批准工作，生产技术部负责压力表、温度表的校验，质量监控部负责验证具体工作及验证的评定工作。
五、验证内容：1、排气时间的验证1.1微生物限度检验所需玻璃器皿、培养基等灭菌采用的是高压蒸气灭菌，药典要求121℃、30min。
高压灭菌效果与冷空气的排出是否完全有关，冷空气存在时，同一压力下温度值要小，而排气时间与锅内物品的多少有关，在本次实验中将锅内物品的量设为定量（物品放满）。
将排气时间设为10分钟、15分钟、20分钟、25分钟。
1.2 在LS-B35L灭菌器内放置灭菌的玻璃器皿及培养基，并在灭菌锅上部、中部、下部各放置一支压力蒸汽灭菌生物指示剂，排气10min，关闭排气阀，锅上温度上升至t=121℃，P=0.11kpacm-2、保温30分钟，降温取出灭菌物体及生物指示剂，将生物指示剂置于56-60℃培养24-48小时，另取一支未经灭菌的生物指示剂一起培养，作为阳性对照。
1.3结果判断：根据颜色判断灭菌效果，培养后生物指示剂全部保持紫色则灭菌合格，如有一支由紫色变为黄色则为不合格，对照管由紫色变为黄色为该指示剂有效。
1.3 同法再进行三次试验，排气时间分别为15分钟、20分钟、25分钟，观察生物指示剂颜色变化。
结论：检验人：复核人：检验日期：1.4排气时间验证结论：评价人：评价日期：2．重现性验证2.1实验方法：根据上述试验结论选择排气时间，重复三次灭菌过程，生物指示剂放置位置同1.2项下要求，验证灭菌效果的重现性。
微生物试验中高压蒸汽灭菌锅的使用方法
②低温间隙灭菌（巴斯德灭菌法）：将物品先用60~80℃加热（或煮沸）1h，然后置20~25
℃保存24h（或常温过夜），使其中残存的芽孢萌发成繁殖体，再用以上条件灭菌，如此反复三次。本法适用于不耐高温或高温下易变质的物品，但很费时。
常压灭菌还可以是射线灭菌，化学灭菌，巴氏消毒等方法。
一个过滤器的使用时间应根据品种验证后确定，一般不应超过8小时。
5）辐射灭菌法 辐射有两种类型：一种是电磁波辐射，如紫外线、红外线、微波；一种是电离辐射，如可引起被照射物电离的X射线、γ射线。
①紫外线：紫外光波长在136~390nm之间，其中260nm左右能破坏核酸，杀菌作用最强。另外，空气中的氧受紫外线照射后，可微量转变为臭氧共同起杀菌作用。紫外线消毒的效果与光源的功率、光源与被照射物的距离、照射时间、温度和湿度等因素有关。我国规定紫外灯照射强度在距离1m处不低于70μW/cm2（以紫外线测强仪测定）。在操作面上要求强度达40μW/cm2以上。一般每10m2装30W灯管1支，工作前开30~60min。
紫外线对眼、皮肤有损坏，照射过程中产生的臭氧对眼、鼻腔有刺激，臭氧过多时使人头晕、胸闷、血压下降。
②红外线：通过加热碳化硅板产生的辐射热能，由空气传导加热灭菌。如红外线烤箱，温度可达180℃左右。热效应特点是由表及里。
③微波：微波灭菌主要是因其热效应。微波加热升温快，温度高且均匀，杀菌作用强。热效应特点是由里及表。不同性质的物品吸收微波的能力不同，其热效应和消毒效果也不同。
微生物实验室操作规范及其仪器的使用
微生物实验室操作规程1.工作人员加强有菌观念，无菌操作。
工作人员加强有菌观念，无菌操作。
2.每日工作前用紫外线照射实验室半小时以上。
3.入室前应穿工作服，并做好实验前的各项准备工作。
4.实验室内应保持肃静，不准吸烟、吃东西及用手触摸面部。
尽量减少室内活动，以免引起风动，无关人员禁入。
5.非必要物品禁止带入实验室，必要资料和书籍带入后，应远离操作台。
6.做好标本的登记、编号及试验记录。
未发出报告前，请勿丢弃标本。
7.标本处理及各项试验应在操作间进行，接种环用完后应立即火焰灭菌，沾菌吸管、玻片等用后应浸泡在消毒液内。
8.实验时手部污染，应立即用过氧乙酸消毒或浸于 3%来苏儿溶液中 5-1010分，再用肥皂洗手并冲洗干净；如误入口内，应立即吐出，并用 1:1000高锰酸钾溶液或 3%双氧水漱口，根据实际情况服用有关药物。
9.实验过程中，如污染了实验台或地面，应用 3%来苏儿覆盖其上半小时，然后清洗；如污染工作服，应立即脱下，高压灭菌。
10.使用后的载玻片、盖片、平皿、试管等用消毒液浸泡，经煮沸后清洗或丢弃。
试管等用消毒液浸泡，经煮沸后清洗或丢弃。
11.所有微生物培养物，不管标本阳性或阴性均用消毒液浸泡后，经煮沸消毒，才能清洗或丢弃。
12.取材、最好采用一次性工具，不能采用一次性工具者，每次取材前均应彻底消毒。
13.若出现着火情况，应沉着处理，切勿慌张，立即关闭电闸，积极灭火。
易燃物品（如酒精、二甲苯、乙醚和丙酮等）必须远离火源，妥善保存。
14.工作结束时检查电器、酒精灯等是否关闭，观察记录培养箱、冰箱温度及工作情况，用浸有消毒液的抹布将操作台擦拭干净，并将试剂、用具等放回原处，清理台面，未污染的废弃物扔进污物桶，有菌废弃物应送高压灭菌后处理。
15.离室前工作人员应将双手用消毒液消毒，并用肥皂和清水洗净。
16.爱护仪器设备，遵守仪器使用规范，经常清洁，注意防尘和防潮。
每天观察培养箱、冰箱、干燥箱的温度，并做好记录。
微生物限度检查操作规程
微生物限度检查标准操作规程正文：一、目的：规范微生物限度检查的标准操作，确保所采用的微生物限度检验方法准确，试验结果可靠。
二、范围：适用于本公司各种样品的微生物限度检查。
三、职责：质量中心化验员负责本规程的执行。
质量中心管理人员负责本规程执行情况的监督检查。
四、内容：1.试验条件1.1试验环境检验必须在环境洁净度C级下的局部A级的单向流空气区域内进行。
1.2试验仪器、用具、培养基按照3.1.1 与3.2.1项下准备。
2.供试液的制备供试液若需加热时，应均匀加热，且温度不应超过45℃。
供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小时。
常用供试液制备方法如下：2.1.液体供试品取供试品10ml，加入pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为1：10的供试液。
油剂可加入适量的无菌聚山梨酯80使供试品分散均匀。
水溶性液体制剂也可用混合的供试品原液作为供试液，例如：纯化水、注射用水、饮用水、药液类、各验证项下微生物样品。
2.2.固体、半固体或黏稠性供试品取供试品10g，加入PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为1：10的供试液。
必要时加适量的无菌聚山梨酯80，并置水浴中适当加温使供试品分散均匀(例如无水葡萄糖、氯化钠、乳酸钠溶液等)。
2.3内包材供试品供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小时。
2.3.1内包膜、塑料输液袋取单层膜50cm2，剪碎，置于无菌锥形瓶内，加入pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml，振摇1分钟，静置10分钟，即得供试液。
2.3.2 软管取软管26cm（表面积100cm2），剪碎，置于无菌锥形瓶内，加入pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml，振摇1分钟，静置10分钟，即得供试液。
2.3.3加药塞、输液塞、口管、口盖、聚异戊二烯塞芯取供试品按表面积100cm2（加药塞9个、输液塞4个、口管4个、口盖9个、聚异戊二烯塞芯17个），置于无菌锥形瓶内，加入pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml，振摇1分钟，静置10分钟，即得供试液。
微生物工程实验指导
微生物工程实验指导适用生物技术专业食品与生物工程学院2008.1实验一 发酵实验用玻璃器皿灭菌前的包扎方法一、目的：学习发酵实验用玻璃器皿在灭菌前的包扎工作，并了解灭菌后的使用方法。
二、原理：为保持发酵实验用玻璃器皿灭菌后的无菌状态，需要对它们灭菌前进行包扎，这些工作看起来简单，但如操作不当或不按操作规程去做，则会影响实验结果，甚至会导致实验的失败。
三、材料和设备5ml吸管30只，9cm培养皿 10套，120*12mm试管 120只，250ml三角瓶30个，脱脂棉0.5斤，天然棉0.5斤，8层纱布30块，线绳。
四、方法1、洗涤1 新器皿应用2﹪盐酸浸泡数小时再洗涤。
2 琼脂块不能倒入下水道。
3 含菌培养基一般先煮再洗。
4 洗涤后玻璃器皿上水应均匀湿润而无条纹和水珠。
2、包扎① 平皿的包扎：10个一包。
前9个方向一致，最后一个反放，用纸卷成卷，也可放在特制铁桶中灭菌。
② 吸管的包扎：在吸管尾部塞入少许脱脂棉，脱脂棉长约1cm，距管口约0.5cm，以防止在使用时造成污染。
脱脂棉松紧适当，多余的棉花可用火焰烧掉。
每支吸管用约6cm宽纸条，吸管头部包衬双层纸，以30－45º卷起，吸管尾部用剩余纸条打成一结，防止散开，标上容量。
使用时，从吸管中间凝断包扎纸带，抽出吸管。
③ 试管的包扎：用天然棉做成棉塞，紧贴管臂，松紧适宜，棉塞要实，2/3塞进管口。
也可用硅胶塞。
十只一把，外加牛皮纸，扎好。
脱脂棉易吸水，可能造成染菌。
④三角摇瓶的包扎：用8层纱布（大小适宜），塞入瓶口2/3，瓶外部分揪成一团，再用一层牛皮纸或两层报纸把纱布遮严（以免打湿），包扎，用绳子系成活扣。
使用时，去掉包扎纸，拿去纱布，接种后，将纱布塞进瓶口，纱布四角拉下，用绳子系成活扣。
五、作业体会这样做有哪些好处？实验二 灭菌技术及其应用一、目的：掌握干热灭菌和高压蒸汽灭菌的原理和操作。
二、原理：灭菌的基本原理是通过加热使微生物体内蛋白质凝固变性，从而达到灭菌目的。