中国南海红树林内生真菌ZZF42次级代谢产物的研究

选择好的分离条件纯化
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5
实验与讨论
前期准备工作 —— 重蒸溶剂、查阅文献等
（07.11——07.12）
菌株培养发酵
（08.01——08.03）
培养菌种
配制 培养液200L
接菌
发酵 40天
收菌
培养液：60℃下 200L 5L
EA 萃取5次
EA 提取物
菌体 晒干
MO浸泡 一个月
MO 提取物
分离、鉴定代谢产物
甲醇提取物
展开剂：20%EA-PE
甲醇相
正己烷相
脂肪酸甘油酯 脂肪酸
硫酸-甲醇甲酯化
菌体：用甲醇浸泡
GC-MS
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16
RT: 5.47 - 39.55 100
24.76
90
80
Relative Abundance
70 29.92
60
50
29.64 40
30
20
24.06
30.58
10
21.27
27.45 4.26
18
结论
红树林内生真菌ZZF42菌体的低极性代谢产物甲 酯化后含有八种成分，分别为：α-柏木烯、十四酸 甲酯、十五酸甲酯、(9Z)-十六碳烯酸甲酯、十六 酸甲酯、（9E，12E）-十八二烯酸甲酯、(9Z)-十 八烯酸甲酯、十八酸甲酯。
一般认为，低极性部分 = 脂肪酸/脂肪酸酯
可能还有其它物质，如萜类等。
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8
EI-MS
环（甘-苯丙）二肽
环（苯丙-苯丙）二肽
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9
500
6.639 6.665
6.802 6.828
7.003 7.026
7.160 7.185 7.208 7.241 7.261
400
H NMR分析（溶于氘代DMSO） 1
300
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红树林内生真菌代谢产物
包括生物碱类 (杂环生物碱、
大环生物碱等)，大环内酯，
环肽类，醌类，萜类，聚
醚类，甾醇类，多糖类，
不饱和脂肪酸等。 可编辑ppt
3
从红树林内生真菌ZZF42已发现的代谢产物：
1-甲基-β-咔啉
N-甲基-1-甲基-β-咔啉
4-羟基-α-苯乙酸
吲哚-3-乙酸
4-甲氧基-8-羟基-喹啉 环-（苯丙-酪）二肽
7.837 7.869 7.909 8.131
9.196
200 600
ppm (t1)
7.50
500
100
2000
400 0
300
1500
7.00
200
6.50
δH 6.81～6.83(d, J=8.1)
100
6.64～6.67(d, J=8.1)
1000
0
9.50
9.00
8.50
8.00
ppm (t1)
序 保留时间 号 t/min
化合物
1 13.08
α-柏木烯
2 19.96
十四酸甲酯
3 21.27
十五酸甲酯
4
24.06 (9Z)-十六碳烯酸甲酯
5 24.76
十六酸甲酯
6 29.64
（9E，12E）十八二烯酸甲酯
7 29.92 (9Z)-十八烯酸甲酯
8 30.58
十八酸甲酯
分子量
分子式
204
C15H24
—
环 （ 苯 丙 酪 ） 二 肽 的 裂 解 途 径
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14
结论
❖
环（苯丙-酪）二肽
环（苯丙-苯丙）二肽 环（甘-苯丙）二肽
混合组分先送质谱分析，可基本确定其成分，
再根据个人经验或查阅文献，能找出有效的 分离条件（展开体系），如此，既提高效率， 又能防止微量成分的损失。
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15
关于菌体代谢产物中低极性部分的讨论
据此可看出，红树林内生真菌F42能产生结构独特、骨架
新颖并具有生物活性的代谢产物，而产物中被分离鉴定
出的化合物还比较少，故该菌具有进一步研究的潜力。
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4
研究思路
微生物大量培养
培养物收获
传
代谢产物分离
创
统
时间长，损耗大
新
途
纯组分
混合组分
途
径
结构鉴定
是否新化合物
MS
GC-MS
径
组分信息获知
药理活性测试
中国南海红树林内生真菌ZZF42 次级代谢产物的研究
报告人：吴春燕 学号：04328040 专业：应用化学（化学生物学） 导师：刘岚 副教授
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1
报告提纲
选题意义
国内外研究现状
研究思路
实验及讨论
结论
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2
选题意义
海洋真菌是海洋微生物的一个重要 分支。从海洋真菌分离出的次级代谢 物中约70％－80％具有生物活性。
242
C15H30O2
256
C16H32O2
268
C17H32O2
270
C17H34O2
294
C19H34O2
296
C19H36O2
298
C19H38O2
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相似度
858 871 848 829 833 831
825 847
相对含量 （%） 0.85
0.54 1.00 3.86
39.78 22.75
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19
致谢
❖ 本论文是在导师刘岚副教授的悉心指导下完成的。刘老师对实验进 展十分关注，从理论上和实践上给予了我非常深入细致的教导。是 刘老师的信任和支持使我有了许多锻炼的机会，从学习灭菌接菌、 过柱分离到核磁培训、测试、解谱，是刘老师的精心栽培使我的实 验技术和科学素养都上升到一个新的高度。刘老师拥有渊博的专业 知识，严谨的治学态度和勤奋踏实的科研作风，是我将来学习工作 中的楷模。在此，衷心感谢刘老师对我的谆谆教诲和深切关怀！
13.08
19.96
0
10
15
20
25
30
35
Time (min)
红树林内生真菌ZZF42菌体代谢产物低极性部分
硫酸-甲醇酯化后的可G编C辑/ppMt S总离子流色谱图
NL: 1.92 m/z= 33.0 507. MS 0805 liula
17
红树林内生真菌ZZF42菌体代谢产物低极性部分 硫酸-甲醇酯化后的化学成分及其相对含量
APCI：大气压状态下进行的化学电离 MS2：母离子和子离子的关系
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APCI-MS2 分离、鉴定
12
APCI-MS2
样品的（+）APCI全扫描质谱图
母离子m/z 311.1的二级全扫描质谱图
母离子m/z 295.1的二级全扫描质谱图
母离子m/z 205.1的二级全扫描质谱图
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13
-100
500
δH 9.19(brs)
0
ppm (t1)
10.0
可编辑ppt5.0
0.0
10
可编辑ppt
11
如果真的存在环（苯丙-酪）二肽， 它为什么不能被EI检测出来？
EI源要求固、液态样品汽化后再进入离子源， 因此不适合难挥发和热不稳定的样品。
环（苯丙-酪）二肽：mp 291～293℃ 难挥发化合物
（08.03——08.05）
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6
关于培养液中代谢产物的讨论
PE:EA=1∶2
（体积比）
洗脱得到的组
碘 缸
分经反复柱
显
层析、薄层
色
制备色谱纯 化，得到:
浅黄色粉末
Rf ≈ 0.25
Rf ≈ 0.70
展开剂：EA 展开剂：10%MO-
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EA
7
EI-MS: RT=1.65s及RT=2.38s处各存在一个峰