生化试剂的基础知识

生化试剂得基本知识
一、生化试剂得分类 (2)
（一）.......................................................................... 按照化学性质分类 (2)
（二）按照临床应用分类
2
二、反应速度特性 (2)
（一）.......................................................................... 终点法试剂 2
（二）动力学法试剂
3
三、显色原理 (4)
{—） NAD-NADH 与NADP-NADPH 系统 (5)
（二）p-NP 与p-NA 系统 (5)
（三）H2O2 偶联得指示系统
5
（四）.......................................................................... 抗原抗体反应指示系统.. (5)
（五）.......................................................................... 其它显色反应 6
四、性能评价方法 (6)
（一）主要性能指标：6
（二）性能评价方法 (6)
一、生化试剂得分类
（一）按照化学性质分类
1.酶类：包括ALIAST, ALP, ACP, r-GT u —HBDH,LDH,CK,CK—MB, u -AMY, MSO, ADA,ChE
等。

2.底物/代谢产物类:包括TG, TC,HDL-C, LDL-C,UA, UREA, Cr, Glu, TP,Alb,T-Bil,TBA,NH4+,
CO2 等.
3.无机离子类：包括Ca, P, Mg, Cl等。

4.特种蛋白类：包括apoAl, apoB,Lp （a）, C3,C4,PFB （B 因子）＞IgGJgAJgM 等。

（二）按照临床应用分类
1.无机离子:包括Ca, P, Mg, Cl等。

2.肝功能:包括ALL AST, r—GTALRMSOJ-Bil, D—Bil, TBA,TP, Alb 等.
3.肾功能:UA, UREA, Cr 等。

4.心肌酶谱：CK, CK—MB, LDH,a-HBDH,AS「MSO。

5.糖尿病：GLU等。

6.前列腺疾病:ACP, p-ACP等.
7.胰腺炎：« -AMY.
8.血脂：TC,TG, HDL-C,LDL—C,apoAl,apoB, Lp （a）。

9.痛风：UA.
10.有机磷中毒：ChEo
11.免疫性疾病:C3, C4, PFB （B 因子）,IgGJgAJgM, Kappa 链,Lambda 链。

二、反应速度特性
按照反应速度，可以分为终点法试剂与动力学试剂。

而动力学试剂又可再分为零级动力学法与
一级动力学法。

（-）终点法试剂
终点法，指经过一段时间（一般为几分钟）得反应，反应进行到完全，使全部底物（被测物）
转变成产物，称终点法，更确切地说应称平衡法，这就是最理想得分析类型。

如图（1）。

整个反应达到平衡，由于正向反应得平衡常数很大，可认为所有得被测定物已转变为产物，反
应液得吸光度不再增加（或降低），吸光度得增加（或降低）程度与被测定物得浓度成正比.
终点法对反应条件（如酶量、pH、温度）小得改变不敏感，只要这种改变不影响在一左时间内
反应达到平衡即可，就是最理想得反应模型。

图（1）
属于终点法得试剂主要有：
TG, TC, HDLCLDL—C, UA, Glu, TRAIb, T-Bil, D-Bil, Cr （氧化酶法）,NHf,C02 , Ca, P,Mg,CI, apoAl,apoB,Lp（a）,C3, C4,PFB（B 因子）,IgGJgAJgM 等.
（二）动力学法试剂
1.零级动力学法
零级动力学法，指反应过程中反应速度维持不变，达到最大，与底物浓度无关,因此，在整个反应过程中，反应物可以匀速地生成某个产物，导致被测泄溶液在某一波长下吸光度均匀地减小或增加，减小或增加得速度（AA/min）与被测物得活性或浓度成正比，主要用于酶活性得测定。

如图（2）。

实际上，由于底物浓度不可能足够大，随着反应得进行，底物消耗到一定程度后，反应速度不再维持不变，同样从启动反应到达到最大速度需要一宦时间。

因此，零级动力学法就是针对特立时间而言得，各试剂商对这段时间有严格规左。

图（2）
属于零级动力学法得试剂主要有：
ALT, AST,ALP, ACRr-Gl； a —HBDH,LDH,CK,CK—MB, a —AMY, MSO,ADA, ChE ,TBA 等.
2.一级动力学法
在一定得反应时间内，反应速度与底物浓度得一次方成正比，由于底物在不断得消耗，因此整个反应得速度在不断得减少，表现为吸光度得增加（或降低）速度越来越小，这类反应达到平衡得时间很长，理论上可以在任意时间段进行监测，但由于血清成份复杂，反应刚启动时反应较复杂，杂反应较多，经过一段延迟时间才能进入稳左反应期，必需在特左时间段内进行监测，各试剂商对这段时间有严格规立。

如图（3）.
在一固定时间间隔中，底物浓度得变化量正比于底物得初浓度，这就是一级反应得同性。

该段时间内吸光度得增加或降低与被测物得浓度成正比。

图（3）
属于一级动力学法得试剂主要有：
Cr （苦味酸法）,UREA（紫外监测法）
三、显色原理
显色系统主要有以下几种：
>NAD-NADH 与NADP-NADPH 系统
>p-NP与p-NA系统
>H2O2偶联得指示系统
>抗原抗体反应指示系统
>英它显色反应
（一）NAD—NADH 与NADP—NADPH 系统
NADH与NADPH在340nm有特征性吸收峰，而NAD与NADP在340nm无特征性吸收峰,利用其偶联得脱氢酶（工具酶）反应，根据340nm吸光度得变化，可以测左物质得浓度或活性。

作为该指示系统常用得工具酶有LDH、MDH、GLDH与G6PDH
目前利用此指示系统进行测泄得临床项目有：ALT、AST、CK、LDH、CK-MB. u —HBDH、
Glu、UREA、NH4+、C02 等。

（二）p-NP 与p—NA 系统
P-NP与p-NA在405nm有特征性吸收峰，根据405nm吸光度得变化，可以测立物质得浓度或活性.
目前利用此指示系统进行测左得临床项目有ALP、ACP、r-GT、AMY等。

（三）H2O2偶联得指示系统
H2O2在过氧化物酶得作用下，可使单一个或成对得无色得色素原氧化成有色得色素，导致某一波长吸光度得增加,因此可用来测定物质得浓度或活性
用于此指示系统得单一色素原有TMB、ABTS等;成对色素原有酚与4AA、MBTH与DMA 等。

目前利用此指示系统进行测定得临床项目有TC、TG、HDL-C、LDL—C、Glu、Cr、UA等。

（四）抗原抗体反应指示系统
特异性抗体与抗原（待测物质）在相应得缓冲环境下反应生成抗原抗体复合物，形成一左得浊度，导致特左波长透光率得改变。

在抗体过剩得前提下，改变程度与抗原浓度成正比。

目前利用此指示系统进行测定得临床项目有apoAk apoB、Lp（a）、IgG、IgA、IgM、C3、C4、CRP 等。

（五）英它显色反应
蛋白质中得肽键在碱性溶液中能与铜离子作用产生紫红色络合物，在一立浓度范仿I内颜色反应强度与蛋白质得浓度成正比。

用于TP得测立.
澳甲酚绿（BCG）在非离子去污剂Brij-35得存在下，可与白蛋白形成紧密结合得绿色复合物。

用于Alb得测圧。

重氮苯磺酸盐与胆红素生成红紫色偶氮胆红素。

用于总胆红素与直接胆红素得测定。

甲基麝香草酚兰（MTB）在碱性条件下可与Ca、Mg形成有色络合物。

用于Ca、Mg得测定。

四、性能评价方法
（-）主要性能指标：
1.稳定性:指在规左条件下经过一段时间得保存，仍能达到相应得性能指标，如试剂空白吸光度、线
性范围、灵敏度等。

2.反应灵敏度:指单位浓度（或活性）得测左物反应所产生得反应度，反应度越髙，灵敏度越大。

3.精密度:结果间相互符合得一致程度
4.准确度：与参考测泄程序结果得一致性
5.线性范围:在规左得重复性与线性偏差下，测得得浓度或活性值与设左得浓度或活性值之间得比
例关系得范用。

6.基质效应:基质指得就是样品中被分析物以外得组分.基质常常对分析物得分析过程有显著得干
扰，并影响分析结果得准确性。

例如，溶液得离子强度会对分析物活度系数有影响，这些影响与T•扰被称为基质效应（matrix effect）.
7.抗干扰性：
8.其它:试剂/样本比例、反应时间、价格等。

（二）性能评价方法
1.稳定性:连续观测，每日试验;热加速试验。

2.反应灵敏度：直接汁算单位浓度反应物得吸光度变化或变化率.
3.精密度:按照NCCLS EP5-A进行。

4.准确度:按照NCCLS EP9-A2进行。

5.线性范围：按照NCCLS EP6-A进行。

6.基质效应:通过回收试验确左
7.抗干扰性:按照NCCLS EP7-A进行。