生长与环境条件

物
它是保证微生物学研究正常进
的
行的关键。
生
长
第 七
➢ 微生物培养的常用器具及其 灭菌
章
试管、玻璃烧瓶、平皿(culture
dish，petri dish) 灭菌，不含
微
任何生物。
生
培养基在器皿中灭菌，也可单
独灭菌后加入无菌的器具中。
物
高压蒸汽灭菌
的
高温干热灭菌
生
长
第 七
防止杂菌污染 棉花塞，金 属、塑料及硅胶帽，空气通过，
➢ 大多数细菌、酵母菌，以及许
微 生
多真菌和单细胞藻类能在固体
培养基上形成孤立的菌落，
物
➢ 平板分离法利用固体培养基让 孤立的活微生物体生长、繁殖
的
形成菌落，形成便于移植的菌
生
落，进而得到纯培养。
长
什么是纯培养？p197
第
七
章
➢ 所谓平板，即培养平板 (culture plate)的简称，它是
指熔化的固体培养基倒入无
第 七 微生物的分离和纯培养 章 一．无菌技术
二．用固体培养基分离纯培养
微 三．用液体培养基分离纯培养 生 四．单细胞(单孢子)分离 物 五．选择培养分离 的 六．二元培养物 生 七．微生物的保藏技术 长
第
七
章 一、无菌技术
在分离、转接及培养纯培养物
微
时防止其被其他微生物污染的技
生
术被称为无菌技术( aseptic technique).
微
干燥，尤其是深度干燥是微
生 物
生物保藏技术中另一项经常 采用的手段。
的
➢ 沙土管保存和冷冻真空干燥 保藏是最常用的二项微生物
生
干燥保藏技术。
长
第
的
释样品悬液---涂布---培养---
生
单菌落
长
第
七
章 平板划线分离法
待分离材料---平行划线、
微
扇形划线或其他形式的连续
生
划线(微生物细胞数量将随
物
着划线次数的增加而减少， 并逐步分散开来)---培养---
的
单菌落。
生
长
第 稀释摇管法
七 • 对氧气更为敏感的厌氧性微生
章
物的分离则可采用稀释摇管培 养法进行。
微
菌平皿，冷却凝固后，盛有 固体培养基的平皿。
生 ➢ Koch建立的平板分离微生
物
物纯培养的技术简便易行， 100多年来一直是各种菌种
的
分离的最常用手段。
生
长
第
七 章
稀释倒平板法(pour plate method)
涂布平板法(spread plate
微
method)
生 平板划线分离法(streak
的
生
长
第 七 章
五、选择培养分离
微
通过选择培养进行微生物纯培养
生
分离的技术称为选择培养分离。
可利用选择培养基进行直接分离
物
或富集培养。
的 生
选择培养基？ 富集培养基？
长
第
七
➢ 利用选择培养基进行直接分离主要
根据待分离微生物的特点选择不同
章
的培养条件 ，得到纯培养物。
➢ 富集（选择）培养主要是指利用不
• 将一系列盛无菌琼脂培养基的
微
试管加热使琼脂熔化后，冷却
生
并保持在50℃左右，用这些试 管进行梯度稀释待分离材料，
物
试管均匀，冷凝，倾注一层灭
的
菌液体石蜡和固体石蜡的混合 物，将培养基和空气隔开。培
生
养后，菌落形成在琼脂柱的中
长
间，挑取和移植单菌落。
第
七
章 三、用液体培养基分离纯培养
接种物在液体培养基中依序稀释，
藏目的的不同，给微生物菌株以
微
特定的条件，使其存活而得以延
续。
生 ➢ 保藏技术的要求(不死亡，不污染，
物
不变异)
的 ➢ 菌种或培养物保藏的重要性
生
长
第 七 章
➢ 菌种保藏机构：中国微生物菌种
微
保藏委员会(CCCCM)，中国典
生
型培养物保藏中心(CCTCC)，美 国典型菌种保藏中心(ATCC)，
物
世界菌种保藏联合会(WFGC) 。
微
以达高度稀释的效果，使一支
生
试管中分配不到一个微生物。如
物
果稀释后的多数试管微生物不生 长，则有微生物生长的试管得到
的
的培养物可能就是纯培养物。
生
长
第 七 章
四、单细胞(单孢子)分离
采取显微分离法从混杂群体中 直接分离单个细胞或单个个体
进行培养以获得纯培养，称为
微
单细胞(单孢子)分离法。
生 难度 物 用途
章
微生物不能通过。
平皿是由正反两平面板互扣而
微
成，这种器具是专为防止空气 中微生物的污染而设计的。
生
物
的
生
长
第
七
章
➢ 接种操作技术
用接种环或接种针分离微生物，
微
或在无菌条件下把微生物由一
生
个培养器皿转接到另一个培养 容器进行培养。
物
微生物实验的所有操作均应在
的
无菌条件下进行。
生
长
第 七 二、用固体培养基分离纯培养 章 ➢ 菌落或菌苔
的
生
长
第 七
传代培养保藏 ➢ 常用的有琼脂斜面、半固体琼
章
脂柱及液体培养等。
➢ 选择使用适宜的培养基，并在
微
规定的时间内进行移种。
生
➢ 传代培养十分繁琐，容易污染， 特别是会由于菌株的自发突变
物
而导致菌种衰退，使菌株的形
的
态、生理特性、代谢物的产量 等发生变化 。
生
长
第 冷冻保藏
七 ➢ 使微生物处于冷冻状态，代谢
章
作用停止以达到保藏的目的。
➢ 微生物细胞对低温敏感，可用
微
速冻、快速升温和添加各种保 护剂等手段。
生 ➢ 液氮保藏或-70℃低温保藏。
物 ➢ 用普通冰箱冷冻保存菌种的效
的 生
果往往远低于低温冰箱，应注
意经常检查保藏物的存活情况， 随时转种。
长
第 七 干燥保藏法
章 ➢ 水分对各种生化反应和一切
生命活动至关重要，因此，
物
plate method)
的 稀释摇管法(dilution shake
生
culture method)
长
第
七 ➢ 稀释倒平板法
章
取样---系列稀释---混菌---培养 ---单菌落(可能是由一个细菌
细胞繁殖形成的)---挑取单菌
微
落，或重复操作---纯培养。
生 ➢ 涂布平板法
物
无菌平皿---无菌平板---稀
物的培养物称为混合培养物，
微
而如果培养物中只含有二种微 生物，而且是有意识地保持二
生
者之间的特定关系的培养物称
物
为二元培养物。
的
➢ 例如二元培养物是保存病毒的 最有效途径。
生
长
第 七 章 七、微生物的保藏技术
微
1. 传代培养保藏
生 物
2. 冷冻保藏
的
3. 干燥保藏法
生
长
第
七
章 ➢ 菌种保藏就是根据菌种特性及保
微
同微生物间生命活动特点的不同， 制定特定的环境条件，使仅适应于
生
该条件的微生物旺盛生长，从而使
物
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其在群落中的数量大大增加，人们 能够更容易地从自然界中分离到所
的
需的特定微生物。
生
➢ 富集（选择）条件 温度、pH、紫 外线、高压、光照、氧气、营养
长
第 七
六、二元培养物
章
➢ 只有一种微生物的培养物称为 纯培养物，含有二种以上微生