流式细胞术在免疫学中的应用

［１２］ 李 留 芝 ，付 华 ，魏 贵 明 ．认 知 行 为 治 疗 对 ２ 型 糖 尿 病 伴 抑 郁 症 状 患者的疗效观察［Ｊ］．国 际 护 理 学 杂 志，２００８，２７（３）：２ ９４２－２ ９９６
［１３］ 张贵敏．新的认知行为疗法 在 焦 虑、抑 郁 障 碍 孕 妇 中 应 用 效 果 研 究 ［Ｊ］．中 华 现 代 护 理 杂 志 ，２００９，１５（９）：８３８－８４０
流式细胞仪的基本工作原理是采用激光作为激发光源， 利用荧光染料与单克 隆 抗 体 结 合 的 标 记 技 术，通 过 计 算 机 系 统对流动的单个细胞或微粒的多个参数信号进行数据资料处 理，从而对目的细胞或微粒进行详细的分 析。ＦＣＭ 常 用 的 荧 光染料有 ＦＩＴＣ（异 硫 氰 酸 荧 光 素）、ＰＥ（藻 红 蛋 白）、ＰＩ（碘 化 丙啶）等，常用的标记方法为直接免疫荧光染色和间接免疫 荧 光染色，采用的是抗 原 抗 体 特 异 性 结 合 的 原 理。 直 接 免 疫 荧 光法多用于对细胞表 面 标 志 的 染 色 分 析，选 用 单 克 隆 荧 光 抗 体 ，直 接 与 相 应 抗 原 反 应 。 每 检 查 一 种 抗 原 就 需 要 制 备 一 种
治疗后期的重点则是由注意病人在对待特殊问题时所具有的 假 设 转 向 改 变 被 病 人 当 作 普 遍 规 律 的 假 设 上 来 。 ［１６］
参 考 文 献 ［１］ 徐俊冕，季 建 林．认 知 心 理 治 疗 ［Ｍ］．贵 阳：贵 州 教 育 出 版 社，
１９９９：６－１０ ［２］ Ｈｏｌｌｏｎ，Ｓ．Ｄ．＆Ｂｅｃｋ，Ａ．Ｔ．Ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ ａｎｄ Ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ－Ｂｅｈａｖｉｏｒ－
ａｌ Ｔｈｅｒａｐｉｅｓ，ｉｎ Ｇａｒｆｉｅｌｄ，Ａ．Ｌ．＆ Ｂｅｒｇｉｎ，Ａ．Ｅ．（ｅｄｓ．）Ｈａｎｄ－ ｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｓｙｃｈｏｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｃｈａｎｇｅ（３ｒｄ ｅｄｉｔｉｏｎ）［Ｊ］． Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，１９８６：４４３－４８２ ［３］ 许又新，吕秋云．现代心理 治 疗 手 册 ［Ｍ］．北 京：北 京 医 科 大 学 与 中 国 协 和 医 科 大 学 联 合 出 版 社 ，１９９７：４０－６１ ［４］ 刘燕，高哲石．抑郁障 碍／／郑 瞻 培，高 哲 石．精 神 科 疾 病 临 床 治 疗 与 合 理 用 药 ［Ｍ］．北 京 ：科 学 技 术 出 版 社 ，２００７：５６－７８ ［５］ 刘玥，李庆安，姚文林，等．认 知 疗 法 和 电 刺 激 治 疗 脑 梗 死 后 抑 郁 的 疗 效 观 察 ［Ｊ］．中 国 医 学 创 新 ，２０１０，７（５）：６３－６４ ［６］ 李丽，赵明芳．认知行为疗法 在 脑 卒 中 抑 郁 患 者 康 复 过 程 中 的 作 用 ［Ｊ］．蚌 埠 医 学 院 学 报 ，２００９，３４（３）：２１４－２１５ ［７］ 王 骞 ，谢 守 付 ，姜 季 妍 ．认 知 行 为 治 疗 对 老 年 抑 郁 症 病 人 的 生 活 质 量 影 响 研 究 ［Ｊ］．医 学 社 会 学 ，２００９，３０（３）：３７－３８
【关 键 词 】 流 式 细 胞 术ｅｔｒｙ，ＦＣＭ）是二十世 纪 ７０ 年 代 发展起来的，是一项 集 激 光 技 术、电 子 物 理 技 术、光 电 测 量 技 术、计算机技术以及细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为 一 体的新型技术，能够对 处 在 快 速 直 线 流 动 状 态 中 的 细 胞 或 微 球进行多参数的、快速的定量分析和分选，且能保持细胞及 细 胞 器 或 微 粒 的 结 构 及 功 能 不 被 破 坏 ，通 过 荧 光 探 针 的 协 助 ，它 不但可以定量检测细 胞 膜、细 胞 质 和 细 胞 核 中 的 各 种 细 胞 成 份，而且可以研究细 胞 的 各 种 功 能 状 态，如 细 胞 增 殖、细 胞 凋 亡等，广泛应 用 于 科 研 和 临 床 。 本 文 仅 对 ＦＣＭ 在 免 疫 学 中 的应用做一简要综述。 １ 流 式 细 胞 术 原 理
［１０］ 李 林 芳 ，王 鸿 雁 ．认 知 行 为 干 预 对 更 年 期 抑 郁 症 ３２ 例 的 效 果 分 析 ［Ｊ］．中 国 民 康 医 学 ，２００８，２０（２３）：２ ８３９－２ ８４０
［１１］ 金妹，时美芳，邹卫英，等．认 知 疗 法 对 脊 髓 损 伤 患 者 抑 郁 情 绪 的 影 响 ［Ｊ］．护 理 与 康 复 ，２００８，７（１１）：８０９－８１０
齐 齐 哈 尔 医 学 院 学 报 ２０１２ 年 第 ３３ 卷 第 ５ 期
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诊断疾 病，指 导 临 床 治 疗 。ＦｕｍｉｈｉｔｏＹｏｓｈｉｉ等［１］对 １８ 例 吉 兰 －巴雷综 合 征 （ＧＢＳ）患 者 发 病 初 期 血 液 进 行 检 测 则 发 现， ＣＤ３＋、ＣＤ４＋ 和 ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ＋Ｔ 细 胞 较 健 康 对 照 组 增 加，经过血浆 置 换 治 疗 后，这 种 淋 巴 细 胞 亚 群 的 改 变 趋 于 正 常。正常状态下 ＣＤ４＋／ＣＤ８＋ 一 般 为 ２／１，但 是 当 患 有 类 风 湿性关节炎等自 身 免 疫 性 疾 病 时 ，使 用 ＦＣＭ 检 测 二 者 的 比 值就会升高［２］；当患有艾滋 病 或 者 其 它 肿 瘤 时 ，使 用 ＦＣＭ 检 测二者的比值就会下降［３］。淋巴细胞亚群的绝对计数可用 于 疾病的 诊 断 和 治 疗 中，如 艾 滋 病 患 者 的 血 液 中 ＣＤ４＋Ｔ 细 胞 ＜２００个／μｌ，而仅有 ＨＩＶ 感 染 而 未 发 病 者，则 ＣＤ４＋Ｔ 细 胞 ＞２００个／μｌ，淋巴细胞亚群 的 绝 对 计 数 是 实 验 室 检 测 发 展 的 趋势。ＦＣＭ 与传统的免 疫 荧 光 抗 体 染 色 后 再 用 荧 光 显 微 镜 观察，或用细胞 免 疫 组 化 方 法 染 色 后 用 普 通 显 微 镜 观 察 １００ －２００个细胞 相 比，其 结 果 更 为 真 实 和 客 观，更 具 有 指 导 意 义。
２．２ 淋巴细胞功能分 析 淋 巴 细 胞 表 面 抗 原 的 检 测 不 能 完 全了解淋巴细胞的功 能，需 要 对 细 胞 内 细 胞 因 子 或 体 外 培 养 细胞后进行相关指标测定。检测细胞因子的方法有酶连免疫 斑点法、有 限 稀 释 分 析 法、ＲＴ－ＰＣＲ 法、原 位 免 疫 组 化 法、 ＥＬＩＳＡ 法等。每种方法 都 有 自 己 的 特 点，但 相 比 较，ＦＣＭ 更 有优势。ＦＣＭ 不仅可检 测 细 胞 群 中 单 个 细 胞 分 泌 的 特 有 或 共表达的不同因子，确定产生细胞因子的阳性细胞的百分 率， 而且可同时确定阳性 细 胞 的 表 型，是 一 种 可 以 在 单 细 胞 水 平 研究细胞因子的 有 效 方 法［４］。ＦＣＭ 可 在 同 一 细 胞 内 同 时 检 测两种不同的细胞因 子，也 可 用 多 参 数 流 式 细 胞 术 对 胞 内 多 种细胞因子进 行 测 定。 目 前，在 临 床 上 利 用 ＦＣＭ 检 测 细 胞 内细胞因子（ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｃｙｔｏｋｉｎｅ，ＩＣＫ）来反映淋巴细胞的 免 疫功能，尤其是 Ｔ 细 胞 的 功 能。 例 如 ＨＩＶ 选 择 性 地 作 用 于 宿主的 ＣＤ４＋Ｔ 细胞，使 之 大 量 耗 竭，用 ＦＣＭ 检 测 ＣＤ４＋Ｔ 细胞产 生 的 细 胞 因 子 可 间 接 反 映 ＣＤ４＋Ｔ 细 胞 的 免 疫 功 能。 传统的形态法、氚 标 胸 腺 嘧 啶 核 苷 （３Ｈ－ＴｄＲ）掺 入 法、ＭＴＴ 比色法等均不能反映不同 Ｔ 细 胞 亚 群 的 增 殖 状 态，而 用 活 细 胞染料羧基荧光素 乙 酰 乙 酸 琥 珀 酰 亚 胺 酯 （ＣＦＳＥ）标 记 淋 巴 细胞，结合流式细胞术可有效检 测 出 不 同 Ｔ 细 胞 亚 群 对 不 同 刺 激 剂 的 增 殖 反 应 以 及 增 殖 动 力 学 变 化［５］。 范 艳 莹 等［６］用 ＣＦＳＥ 标记结合流 式 细 胞 术 研 究 人 外 周 血 ＮＫ 细 胞 分 裂、增 殖和杀伤功能。金 齐 力 等［７］用 流 式 细 胞 术 检 测 人 γδＴ 细 胞 对 Ｍｔｂ感染 ＴＨＰ－１细 胞 的 细 胞 毒 活 性，并 观 察 ＩＬ－１５ 对 人 γδＴ 细胞杀伤 Ｍｔｂ感染 ＴＨＰ－１ 细 胞 的 细 胞 毒 活 性 的 影 响。
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流式细胞术在免疫学中的应用
郭术俊
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｑｉｑｉｈａｒ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２０１２，Ｖｏｌ．３３，Ｎｏ．５
·高教研究·
【摘要】 流式细胞术是一项多学科知识综合应 用 的 复 杂 技 术，是 以 流 式 细 胞 仪 为 检 测 手 段 的 新 技 术 。 与 常 规 免 疫 学 方 法 相 比 ，分 析 方 法 简 便 、迅 速 、精 确 ，直 观 性 强 ，在 免 疫 学 领 域 有 着 广 泛 的 应 用 。
［１４］ 毕希名，徐以琳，毕玉．认知行为治疗［Ｊ］．青岛医药 卫 生，２００４， ３６（４）：２４８－２５０
［１５］ 叶建国，陈军，史琼，等．森田 疗 法 与 认 知 行 为 疗 法 的 比 较 分 析 ［Ｊ］．医 学 与 哲 学 （人 文 社 会 医 学 版 ），２００７，２８（３）：６０－６１
［１６］ 钱铭怡．认知疗法／／见：沈 渔 邨．精 神 病 学 ［Ｍ］．第 ４ 版．北 京： 人 民 卫 生 出 版 社 ，２００１：６２７－６３０
随着单克隆抗体技术、荧光色素化学等技术的发展，正 像 免疫学作为一种不断 发 展 的 学 科 和 技 术 手 段 延 伸 到 生 物 、医 学及其他领域一样，流式细胞术也以它的快速、灵活和定量 的 特点，广泛地被应用于免疫学理论研究和临床实践的各方 面， 包括淋巴细胞及其亚群测定、淋巴细胞功能检测、白血病免 疫 分型、移植免疫 和 自 身 免 疫 性 疾 病 相 关 ＨＬＡ 抗 原 分 析 中 的 应用等。 ２．１ 淋巴细胞及其亚群测定 ＦＣＭ 通过检测 淋 巴 细 胞 表 面 抗原，可以将不同的淋巴细胞亚群区分开，计算它们之间的 比 例，甚至可以绝对计数。经常测 定 的 淋 巴 细 胞 亚 群 包 括 Ｔ 淋 巴细胞（ＣＤ３＋），Ｔ 辅 助 细 胞 （ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ８－ ），Ｔ 抑 制 细胞 （ＣＤ３＋ＣＤ４－ＣＤ８＋ ），Ｂ 淋 巴 细 胞 （ＣＤ１９＋ 或 ＣＤ２０ ＋），ＮＫ 细 胞 （ＣＤ３－ＣＤ１６＋ＣＤ５６＋ ）等。 通 过 检 测 淋 巴 细 胞 表 面 标 志 ，可 了 解 在 不 同 情 况 下 机 体 的 免 疫 功 能 状 态 ，辅 助