血尿素氮的测定 - 360文档中心

实验十三血清尿素氮测定(脲酶—Berthelot比色法)

实验十三血清尿素氮测定（脲酶—Berthelot比色法）一、实验目的与要求1 了解血液尿素氮（BUN）在人体营养学上的生理学意义及其在代谢上的重要性。

2 掌握血液尿素氮测定方法及721分光光度计或AT648半自动生化多用仪的使用方法和现代生化检测试剂盒的应用。

二、实验原理尿素在脲酶作用下分解生成氨。

在碱性条件下，经次氯酸氧化生成的氯胺与苯酚被亚硝基铁氰化钠催化生成蓝色的靛酶。

其反应式为： CH2NH2N尿素O+HOH脲酶NH3彩+CHOH2N氨基甲酸O-2NH3+CO2氨NH3+OCl-NH2Cl+OH-次氯酸氨胺催化剂NH2Cl+OH+OH-Cl-+H2O+HONH2苯酚P胺基苯酚HONH2+OH-+O2==N——O-+H2O酚靛三、实验仪器与试剂1 仪器（1） AT648半自动生化分析仪1台；（2） 4孔恒温水浴锅1个；（3）振动摇床1台。

2 分组及仪器2人一组，每组仪器包括：（1）试管架1个；（2） 2ml试管10个；（3） 20μl微量加样器1个；（4） 1ml移液管1个；（5） 5ml移液管2个；（6）吸耳球1个；（7）搪瓷盘1个；（8）微量加样滴头；（9）吸水纸。

3 本试剂盒内含5种试剂：（1）脲酶（冻干） 2瓶（2） pH 8.0缓冲液：由乙二胺四乙酸二钠盐和磷酸氢二钾组成 1×46ml（3）显色剂Ⅰ：由苯酚和亚硝基铁氰化钠组成 1×225ml（4）显色剂Ⅱ：由氢氧化钠和安替福民组成 1×225ml（5）尿素氮标准液（20mg/dl） 2×2ml四、实验步骤1 血清（1）取脲酶一瓶，用23.0ml pH 8.0缓冲液溶解。

（2）于一系列试管中，按下表加入各溶液。

表131系列反应管中所加溶液的量空白管标准管样品管样品（μl）——20标准液（μl）—20—酶液（μl）0.50.50.5 （3）于37℃水浴中保温15min，然后各管分别加入显色剂Ⅰ和显色剂Ⅱ各2.5ml。

血清尿素氮的测定[方案]

血清尿素氮的测定【目的要求】1.了解血清尿素氮测定的方法及临床意义。

2.复习尿素的生成机理及其意义。

【实验原理】血清（或血浆）中的尿素，在尿素氮试剂的酸性环境中与二乙酰-肟（DAM）共沸后，可缩合成一红色化合物，称为fearon反应。

其颜色的深浅与血清（或血浆）中尿素的含量成正比，与同样处理的尿素氮标准液比色，即可测算出血清（或血浆）中尿素氮的含量。

【实验材料】1.器材刻度吸管（0.1ml、2ml、10ml）恒温水浴箱分光光度计2.试剂（1）待测血浆（2）尿素氮试剂（3）二乙酰-肟试剂（4）尿素氮标准液【操作步骤】取试管三支按下表操作1：4稀释血清（或0.1血浆）尿素氮标准液0.1（0.02mg/ml）蒸馏水0.1二乙酰-肟0.5 0.5 0.5尿素氮试剂 5.0 5.0 5.0 混匀，置沸水浴中加热15min，立即用自来水冷却5分钟。

分光光度计选用540nm波长，以空白管调零点，读取各管吸光度。

计算及结果分析尿素（mg%）×尿素氮标准液浓度*5(mg/ml；mg/100ml)【注意事项】1. 此法灵敏度高，用量极微（一般只需0.02ml血清即可）。

本实验是先将血清用生理水以1：4加以稀释再取0.1ml，故最后计算时，应乘以稀释倍数“5”2. 试剂中加入硫胺脲和镉离子，可增进显色强度和色泽稳定性，但仍有轻度褪色现象（小于5%/h）。

3. 此法操作简单，特异性强，不受其他非蛋白质含氮化合物如尿酸、肌酸等影响，但应控制好实验条件。

4. 吸管必须校正，使用时务必注意清洁干净，加量务必准确。

5.尿液中的尿素氮也可用此法进行测定。

由于尿液中尿素氮含量高，标本需用蒸馏水以1:50稀释。

如果呈色后吸光度仍超过本法的线性范围，还需将尿液再稀释，重新测定。

【思考题】。

测定血清尿素的实验报告

一、实验目的1. 掌握血清尿素测定的原理和方法。

2. 熟悉二乙酰-肟法测定血清尿素氮的实验操作。

3. 了解实验中可能出现的误差及其处理方法。

二、实验原理血清尿素氮（Blood Urea Nitrogen，BUN）是血液中尿素氮的浓度，是反映肾功能的重要指标。

尿素氮是蛋白质代谢的终产物，主要由肝脏产生，通过肾脏排泄。

二乙酰-肟法是一种常用的测定血清尿素氮的方法，其原理如下：在酸性反应环境中加热，尿素与二乙酰缩合，生成色素原二嗪，称为Feorin反应。

因为二乙酰不稳定，所以通常由反应系统中二乙酰-肟与强酸作用，产生二乙酰，二乙酰与尿素反应，综合生成红色的二嗪。

其颜色的深浅与血清中尿素含量成正比。

三、实验材料1. 试剂：- 碱性试剂：在三角烧瓶中加蒸馏水约100ml，然后加入浓硫酸44ml及85%H3PO466ml冷至室温，加入硫氨脲50mg及硫酸镉2g溶解后加蒸馏水稀释至1升，置棕色瓶放冰箱保存，可稳定半年。

- 二乙酰-肟溶液：称取二乙酰-肟20g，加蒸馏水约900ml溶解后，再用蒸馏水稀释至1升置棕色瓶中，贮存放于冰箱内可保存半年不变。

- 尿素标准贮存液（100mmol/L）：称取干燥纯尿素（MW60.06）0.6g，溶解于水中并稀释至100毫升，加0.1g叠氮钠防腐，置冰箱内稳定六个月。

- 尿素标准应用液（5mmol/L）：取5.0ml贮存液用去氨蒸馏水稀释至100ml。

2. 仪器：- 分光光度计- 离心机- 实验室试管四、实验步骤1. 标准曲线的绘制：- 取5支试管，分别加入0、0.5、1.0、1.5、2.0ml尿素标准应用液，用去氨蒸馏水稀释至5.0ml。

- 向每支试管中加入2.0ml碱性试剂，混匀。

- 将试管置于沸水中加热5分钟，取出冷却至室温。

- 以540nm波长，1cm光程，测定各管吸光度。

- 以尿素浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

2. 样品测定：- 取2支试管，分别加入0.5ml血清和0.5ml尿素标准应用液，用去氨蒸馏水稀释至5.0ml。

血清尿素氮测定的原理方法及临床意义

血清尿素氮测定的原理方法及临床意义
血清尿素氮（BUN）是反映肾脏排泄功能的一个重要指标，也是评价肾脏疾病和代谢紊乱的标准检查之一。

BUN的原理方法：
BUN是指血液中尿素的浓度，它的检测是通过测定血液中尿素的含量来完成的。

尿素
是蛋白质代谢的末端产物，经由肝脏转化生成后再经过肾脏排泄。

正常情况下，尿素在肾
小球滤过后主要在肾小管内被再吸收，防止其大量丢失。

血中尿素的浓度，受到肝脏合成、尿素的经肾脏的再吸收、肾脏排泄和肾脏灌注量的影响。

BUN的测定方法包括酶法、光度法、电化学法、液体色谱法等，其中光度法是目前应用最广泛的方法之一。

临床意义：
BUN的高低可以反映肾脏功能是否受到影响。

一般来说，BUN增高是肾功能受损的重要指标，包括急性肾损伤、肾衰竭、肾小球肾炎、肾盂肾炎、泌尿系梗阻等病态情况。

此外，由于肝脏是尿素生成最重要的器官，肝脏疾病如肝炎、肝硬化等也会影响BUN的测定结果。

对于临床医生而言，BUN的测定结果可以作为诊断和治疗的重要线索，也可以用来监测肾
脏疾病和代谢紊乱的治疗效果。

需要注意的是，BUN的测定结果还应考虑个体差异、摄入蛋白质的数量和质量等因素
的影响。

在诊断或监测疾病的过程中，应结合临床病史、身体检查和其他相关检查结果，
综合分析判断。

尿素氮测定

【注意事项】 1．试剂中加入硫氨脲和镉离子可增加显色强度和色泽的稳定性，还可消除羟胺的干扰，但仍有轻度退色现象，故应及时
比色。
2．尿液中尿素亦可用此法测定，但因尿液中尿素浓度较高，
需将尿液作50倍以上稀释后再行测定。
3．尿素浓度以前习惯用尿素氮表示，尿素分子中含有二个氮原子，因此1mmol/L尿素等于2 mmol/L尿素氮。世界卫生组织推荐使用尿素，并以mmol/L表示浓度单位，我国卫生部也已规定一律使用尿素，不再使用尿素氮一词。
响肾小球滤过的疾病，都可使血液尿素含量增高。
3) 肾后性疾病：所有使尿路阻塞的因素都可引起血液尿素含量增加，如前列腺肿大、尿路结石、尿道狭窄、膀胱肿瘤致尿道受压等。
2.血液尿素浓度降低较为少见，除婴儿、妊娠（血容量增加）及低蛋白高糖饮食
外，常见于严重肝病患者，如肝炎合并广泛性肝坏死、肝功能衰竭等。
取4只试管，具体操作按下表进行。加入物(ml) 空白管（B）标准管（S）测定管（人）测定管（牛）
血清
尿素标准应用液蒸馏水二乙酰一肟溶液尿素氮试剂
—
— 0.1 0.5 5.0
—
0.1 — 0.5 5.0
0.1
— — 0.5 5.0
0.1
— — 0.5 5.0
各管混匀后，置沸水中加热15min，取出置冷水中冷却后，分光光度计波长540nm，
【原理】
尿素与二乙酰在酸性环境中加热可缩合成红色的二
嗪衍生物，颜色深浅与尿素含量成正比。因二乙酰不
稳定，故通常用二乙酰一肟代替，它与强酸作用，产
生二乙酰。后者再与尿素反应，缩合生成红色的二嗪
衍生物。
＋ H2 O H 二乙酰一肟
双乙酰＋尿素

实验诊断学之肾脏功能的实验室检测

临床意义： 1.较早反映肾功能损害的敏感指标：可较早判断肾小球损害 2.评估肾功能损害程度：可作为观察肾移植成功与否的客观指标，移植成功，该指标逐步回升，发生排斥，则下降。
3.慢性肾衰失代偿后限制蛋白摄入的尺度。 4.慢性肾衰临床分型的参考：
血尿酸（UA）的测定
原理 UA是体内嘌呤代谢终产物，小部分经肝分解
方法和公式： 1.标准24小时留尿计算法：（1）3天低蛋白饮食，
禁食肉类，避免剧烈运动，（2）准确收集24 小时尿液，测尿量和尿肌酐浓度并计算分钟尿量，（3）同时采静脉血检测血肌酐浓度。 2.计算公式：C＝U×V／P
U：尿肌酐浓度，V：每分钟尿量，P：血浆肌酐浓度。 3.参考值：成人80－120ml/min
原理 2-M是体内有核细胞产生的一种小分子蛋白，正常人血中2-M浓度很低，可自由通过肾小球，然后在近端肾小管几乎被全部重吸收
参考值 1-2 mg/L
临床意义肾小球滤过功能下降时，β2-M水平升高
肾小管功能试验
（一）肾脏浓缩的稀释功能试验原理：肾脏的浓缩稀释功能主要是通过抗利尿激素（ADH）对髓袢，远曲小管，部分集合管起作用，调节水的重吸收来实现的，表现为尿量和尿比重的变化。因此在一定饮食条件下检测被检者尿量和尿比重的变化可以观察到肾脏的浓缩和稀释功能，来间接判断肾小管的功能状态。
3.肾前性少尿：当严重脱水，大量腹水，心功能衰竭，休克等血容量不足，肾血流灌注不足导致滤过率下降而少尿，BUN升高，但升高幅度较小，经扩容后尿量增加可自行下降。
4.组织蛋白分解增强：当高热，大面积烧伤，严重创伤，大手术后，甲亢，上消化道出血等。
血清肌酐测定
▪ 血浆肌酐种类：内源性和外源性 ▪ 血浆肌酐的代谢：大部分从肾小球滤过，不

尿素氮测定的标准操作规程

尿素氮测定的标准操作规程尿素氮测定（速率法）1：概述尿素是人体内蛋白氮代谢的终产物，它构成了血液中绝大部分的非蛋白氮。

尿素产生于肝脏，经过肾脏排泄至尿中，因此尿素的含量取决于蛋白质的摄入量，蛋白质分解代谢和肾功能。

2：标本的手收集新鲜并无甲状腺标本，血清或血浆样本均不甲状腺。

血浆样本就可以使用肝素或edta 抗凝。

样本在4摄氏度可以平衡7天。

献血前病人应当禁食12小时，收集静脉3ml,等待凝结后（最出色放到37摄氏度水浴箱内45分钟）通常为提抗凝剂的血液在30-60分钟心肌划出血清。

3000r/minVergt5-10分钟，分离出血清水泵。

不建议使用血浆标本。

3方法原理样品中的尿素在试剂中脲酶的催化下与水反应生成氨和二氧化碳，生成的氨与试剂中的酮戊二酸在谷氨酸脱氢酶的催化下产生谷氨酸，同时nadh被氧化为nad+，从而使340nm处的光吸收值下降。

通过监测340nm处光吸收值下降的速率，可计算出样品中尿素的浓度。

4剂来源，配置及储存试剂来源：试剂布局：试剂一和试剂二均为液体试剂，可以轻易采用。

投入使用后在2-8度可以平衡30天。

若试剂浑浊，或以蒸馏水为空白在340nm处的光吸收值高于1.0a,应予以弃置。

试剂储存：试剂贮藏储存2-8摄氏度可以平衡至标签右图失灵期。

5分析仪器cs-600b全自动生化分析仪6计算方法alt(u/l)=(a/min*tv*1000)(6.3*sv*p)式中tv=总反应体积sv=样本体积6.3=nadh在340nm处的毫摩尔消光系数p=比色杯光径（cm）7线性范围：本实验的线性范围：0----35mmol/l8参考范围：2.82---8.2mmol/l9失控控理1：立即重测同一质控品，如重测后结果仍不再允许范围，请进行下一步。

2：崭新上开一瓶质控Fanjeaux，重测失控项目，例如Duras的质控血清结果正常，那么原来质控血清可能将过期或在室温避免时间过长而变质，例如结果仍不再容许范围，则展开下一步。

二乙酰一肟法测定血清尿素(精)

3) 肾后性疾病：所有使尿路阻塞的因素都可引起血液中尿素含量增高，如前列腺肿大、尿路结石、尿道狭窄、膀胱肿瘤致使尿道受压等。
2．血尿素浓度降低除婴儿、孕妇以及低蛋白高糖饮食者外，常见于肝功能衰竭患者。
【注意事项】
1．试剂中加入氨基硫脲和镉离子，可增进显色强度和色泽稳定性，但仍有轻度褪色现象，(每小时小于5%)。煮沸显色经冷却后，应及时比色。
2．尿液中尿素也可用此法测定，但因浓度高，需先用去离子水作50倍以上稀释。
3．尿素浓度以前习惯用尿素氮mg/dl表示，因为一个尿素分子中有2个氮原子，所以1mmol尿素相当于28mg尿素氮 (1mmol/L尿素相当于2.8mg/dL尿素氮)；另外还有以尿素氮 mmol/L表示，则1mmol/L尿素＝2mmol/L尿素氮。世界卫生组织推荐尿素用mmol/L表示，我国卫生部临检中心也已规定一律使用此表示方法，不再用尿素氮一词。
【原理】本实验采用二乙酰一肟法测定血清尿素氮。二乙酰一肟法系根据双乙酰与尿素形成二嗪衍生物的有色复合物的显色反应。由于双乙酰本身不稳定，故用二乙酰一肟来代替，其反应式如下：
二乙酰在强酸条件下与尿素缩合成红色的4，5-二甲基-2氧咪唑化合物，颜色深浅与尿素含量成正比。因二乙酰不稳定，故由试剂中二乙酰一肟与强酸作用产生二乙酰。
3．二乙酰一肟法的主要干扰来自血清中存在的含氮化合物。很多其它化合物在结构中会有尿素的残基，如瓜氨酸、四氧嘧啶和尿囊素，虽然也会产生一种带颜色的产物，但这些化合物在血清中浓度很低，故很少引起明显的干扰。另一些其它的化合物在血清中浓度高，但这些色素的最大吸收峰不同，因此不产生明显干扰。胆红素达171μmol/L、血红蛋白达10g/L入物(ml) 空白管标准管测定管基础管回收管

血清尿素氮测定的原理

血清尿素氮测定的原理嘿，朋友们！今天咱们来聊一聊血清尿素氮测定这个事儿。

你可能会想，这血清尿素氮测定是啥玩意儿啊？为啥要测定它呢？先别急，听我慢慢给你说。

你看啊，咱们人体就像一个超级复杂又神奇的小宇宙。

身体里的各种物质就像小宇宙里的各个星球，都有着自己独特的作用和运行轨迹。

血清尿素氮呢，它就是这个小宇宙里比较重要的一个“小星球”。

那血清尿素氮是怎么来的呢？这就和咱们吃的东西有关啦。

咱们吃进去蛋白质，就像给身体这个大工厂送进去了原材料。

这些蛋白质经过身体里各种“小工人”（酶啊之类的物质）的加工，在肝脏这个大车间里就会产生尿素。

这尿素啊，就像是加工后的产品，会随着血液循环这个“运输大道”跑到肾脏那里去。

肾脏呢，就像一个超级精密的过滤器，它会把尿素过滤出来，然后排出体外。

这血清尿素氮其实就是血液里尿素所含的氮元素的量。

现在咱们就来说说这血清尿素氮测定的原理。

这就好比你要数清楚一个仓库里某种货物的数量一样。

不过，这个仓库就是咱们的血液，货物就是尿素氮。

目前啊，测定血清尿素氮有好几种方法呢。

有一种方法叫二乙酰一肟法。

这个方法可有趣了。

你可以把它想象成一场化学反应的小聚会。

在这个聚会里，二乙酰一肟就像一个超级活跃的小嘉宾，它会和尿素氮来一场特殊的“互动”。

在酸性的环境下，就像给这个聚会提供了一个特定的氛围一样，二乙酰一肟和尿素氮会发生反应，生成一种红色的化合物。

这红色的化合物就像聚会后出现的一个新标志一样。

然后呢，我们就可以通过比色的方法，就像比较颜色的深浅来判断这个红色化合物的多少，从而得出血清尿素氮的含量。

我给你打个比方啊，就像你看颜料混合后的颜色深浅来判断颜料量的多少一样。

这时候你可能会问，那这个方法准不准呢？其实啊，只要按照正确的操作流程来，这个方法还是挺靠谱的呢。

还有一种方法叫脲酶法。

这个脲酶啊，它可是尿素的“克星”。

脲酶就像一把专门开尿素这个锁的钥匙。

当脲酶遇到尿素的时候，就会把尿素分解掉。

这个过程就像拆积木一样，脲酶把尿素这个“大积木”拆成了氨和二氧化碳。

二乙酰一肟法测定血清尿素(精)

3) 肾后性疾病：所有使尿路阻塞的因素都可引起血液中尿素含量增高，如前列腺肿大、尿路结石、尿道狭窄、膀胱肿瘤致使尿道受压等。
2．血尿素浓度降低除婴儿、孕妇以及低蛋白高糖饮食者外，常见于肝功能衰竭患者。
【注意事项】
1．试剂中加入氨基硫脲和镉离子，可增进显色强度和色泽稳定性，但仍有轻度褪色现象，(每小时小于5%)。煮沸显色经冷却后，应及时比色。
混匀，置沸水浴加热12min，取出置冷水中冷却5min，以空白管调零，在540nm处读取各管吸光度。
尿素(mmol / L) A测定 5 A标准
【计算】【参考范围】血清尿素1.78～7.14mmol/L。【临床意义】 1．血液尿素浓度增高分生理性和病理性因素两方面。 (1) 生理因素：高蛋白饮食引起血清尿素浓度和尿液排出
二乙酰一肟法测定血二乙酰一肟法测定血清尿素清尿素目的要求目的要求掌握测定血清尿素氮的原理和方法并应用二乙酰一肟法测定不同鱼类的血清尿素氮含量和理解血中尿素氮含量变化的生理意义尿素是体内氨基酸分解代谢的最终产物之一
二乙酰一肟法测定血清尿素
【目的要求】
掌握测定血清尿素氮的原理和方法，并应用二乙酰一肟法测定不同鱼类的血清尿素氮含量和理解血中尿素氮含量变化的生理意义
【评价】
1．本法试剂单一，方法简便，但试剂具毒性和腐蚀性。在标本数量多时加热开始难以达到100℃，各管间受热温度也可能不一致，因而本法重复性不佳。若改善加热条件，如采用在水浴锅底部加置高约5mm的网垫，在网垫上加热显色，可使CV由不加网垫时的6.46%降至2.99%。
2．线性上限仅达7.14mmol/L；回收率为96%～102.1%。
量显著增高。血清尿素浓度男性比女性平均高0.3～ 0.5mmol/L，随年龄增加有增高倾向。成人日间生理变异平均为0.63mmol/L。 (2) 病理因素 1) 肾前性：最重要的原因是失水，因血液浓缩使肾血流量减少，肾小球滤过率减低而致血液尿素浓度增加。

尿素氮(BUN)检测

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尿素氮（BUN）检测
尿素氮（Blood urea nitrogen, BUN）是人体蛋白质代谢的主要终末产物，尿素氮构成了血液中绝大部分的非蛋白质氮，血液尿素氮是肾功能的主要指标之一。

采用靛酚蓝比色法进行检测，脲酶水解尿素产生的NH3-N，与次氯酸盐和苯酚反应生成蓝色靛酚，产物在630nm处有特征吸收峰，尿素氮的含量在一定范围内与吸光值呈正比，通过吸光值变化即可定量检测尿素氮的含量。

迪信泰检测平台采用生化法，可高效、精准的检测尿素氮含量变化。

此外，我们还提供其他氮代谢类检测服务，以满足您的不同需求。

生化法测定尿素氮样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。

周期：2~3周。

项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）。

2. 相关参数（中英文）。

3. 图片。

4. 原始数据。

5. 尿素氮含量信息。

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尿毒症诊断金标准

尿毒症诊断金标准
一、血肌酐测定
血肌酐是反映肾功能的重要指标之一，其浓度的变化可以反映肾脏损伤的程度。

当肾脏损伤到一定程度时，血肌酐浓度会升高。

因此，血肌酐测定是尿毒症诊断的常用方法之一。

二、血尿素氮测定
血尿素氮也是反映肾功能的重要指标之一，其浓度的变化可以反映肾脏的排泄功能。

当肾脏功能受损时，血尿素氮浓度也会升高。

因此，血尿素氮测定也是尿毒症诊断的重要方法之一。

三、尿液检查
尿液检查是尿毒症诊断的常用方法之一，通过对尿液的外观、比重、蛋白质、糖、酮体等指标的检测，可以初步判断肾脏的功能状况。

如果尿液中出现大量蛋白质、红细胞、白细胞等异常情况，可能提示肾脏受损或感染等病变。

四、肾脏超声检查
肾脏超声检查是一种无创、无痛、无辐射的检查方法，可以了解肾脏的大小、形态、结构等情况，从而评估肾脏的功能状况。

通过肾脏超声检查，可以发现肾脏是否存在异常，如肾结石、肾囊肿、肾积水等。

五、肾脏活检
肾脏活检是一种有创的检查方法，通过取肾脏组织进行病理学检查，可以明确诊断尿毒症的病因和病理类型。

肾脏活检对于明确尿毒症的病因和制定治疗方案具有重要意义。

血清尿素的实验报告(3篇)

第1篇一、实验目的1. 熟悉生物化学实验的基本操作步骤。

2. 掌握血清尿素测定的原理和方法。

3. 了解血清尿素在临床诊断中的意义。

二、实验原理尿素是哺乳动物体内蛋白质代谢的终产物，主要由肝脏合成，通过肾脏排泄。

血清尿素氮（BUN）是血液中尿素的浓度，是反映肾功能和体内氮代谢状况的重要指标。

本实验采用二乙酰-肟法测定血清尿素，该方法基于二乙酰在强酸条件下与尿素缩合成红色的4,5-二甲基-2-氧咪唑化合物，颜色深浅与尿素含量成正比。

三、实验材料1. 血清样本：采集受试者空腹静脉血，分离血清。

2. 试剂：二乙酰试剂、强酸试剂、显色剂、空白试剂等。

3. 仪器：分光光度计、移液器、试管等。

四、实验方法1. 样本处理：取血清样本100μl，加入1ml强酸试剂，充分混匀后室温放置10分钟。

2. 显色：加入2ml显色剂，充分混匀，室温放置10分钟。

3. 测定：以空白试剂为参比，于540nm波长下测定吸光度。

4. 结果计算：根据标准曲线计算血清尿素含量。

五、实验结果1. 标准曲线绘制：将不同浓度的尿素标准品按照实验方法进行测定，绘制标准曲线。

2. 血清尿素含量测定：将受试者血清样本按照实验方法进行测定，得到吸光度值，根据标准曲线计算血清尿素含量。

六、结果分析1. 血清尿素正常范围为3.2～7.1mmol/L。

本实验受试者血清尿素含量在正常范围内，说明受试者肾功能正常。

2. 血清尿素升高可能见于以下情况：- 肾脏功能受损：如急性肾功能衰竭、慢性肾功能衰竭、肾小球肾炎等。

- 蛋白质摄入过多或分解代谢增强：如发热、创伤、肿瘤等。

- 肾前性少尿：如严重脱水、充血性心力衰竭、肝肾综合征等。

3. 血清尿素降低可能见于以下情况：- 蛋白质摄入减少：如营养不良、消化系统疾病等。

- 肝脏功能异常：如肝功能衰竭、肝脏病变等。

- 肾小球滤过功能下降：如肾小球肾炎、肾病综合征等。

七、实验讨论1. 本实验采用二乙酰-肟法测定血清尿素，该方法操作简便、准确度高，是临床常用的测定方法。

血尿液尿素BUN测定

血、尿液尿素氮（BUN）测定1.实验原理Vitros BUN/UREA试剂是一种干燥，多涂层的，在透明的聚合物支撑基片上涂有分析成份的化学干片。

将一滴患者样品滴于干片上，分布层会使之均匀地分布。

水和非蛋白质成份进入下面的试剂层，与尿素酶反应生成氨。

半透膜只允许氨进入呈色反应层，与指示剂发生反应。

经过一段固定的孵育时间后，通过测定呈色剂的反射强度可间接求出尿素氮的含量。

测定方式：比色法波长：670nm测试时间和温度：37℃约５分钟反应过程：尿素酶非蛋白质成份＋水—————→氨+ 二氧化碳氨＋氨指示剂—————→呈色剂2. 标本：2.1 病人准备：血清无特殊要求。

要留取24小时尿样。

2.2 样品类型：血清；肝素锂/钠和EDTA抗凝血浆。

定时收集的，稀释后的尿样。

2.3 标本采集与处理：2.3.1 血清和血浆样品特别要注意的是：血清；肝素锂/钠和EDTA抗凝血浆；不要用氟化钠作防腐剂，因为氟会抑制尿素酶。

样品采集后4小时内要离心标本，吸出血清。

处理样品时要将其当成生物污染品。

2.3.2 尿液样品定时或随时采集的尿液，特别要注意的是：不能使用以下防腐剂：冰醋酸，浓盐酸，硼酸，硼粉或甲酸钠硼酸，样品在测试前要冷藏。

测试前将1份样品加20 份试剂级别的水进行稀释。

将测试结果乘以21，就得到原始样品中尿素氮的浓度。

冷藏的样品不能立即测试。

处理样品时要将其当成生物污染品。

3. 标本的存放：血清、血浆室温下最多1天；4～8℃冷藏最多5天；-18℃冷冻保存可长达6个月。

尿液样品在测试前要冷藏。

4. 标本的运输：样品要放在带盖的容器内以防污染和蒸发。

5. 标本拒收的标准：污染、抗凝剂、防腐剂不符合要求，标本放置时间过长。

6. 试验材料：6.1测试BUN所需的物品包括：Vitros化学定标物Kit1；Vitros特制质控液；Vitros 7%BSA稀释液。

强生厂家提供原装进口，试剂盒外包装上标明了测试项目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏温度。

检验科生化尿素氮测定的标准规程

尿素氮测定的标准规程【目的】体外检测血清中尿素氮（BUN）的含量。

【职责】1.实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP，室负责人监督落实。

2.本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。

【标本类型及实验前准备】1.受检者的准备病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。

体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。

注意有无应用影响测试项目的药物。

此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。

应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。

2.静脉采血除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。

体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。

在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。

【仪器设备】东芝TBA-FX8全自动生化分析仪，低速离心机一、检测原理本试剂采用由Talke和Schubert首先提出的酶学方法，为缩短和简化分析，计算基于Tiffany等的发现，即尿素浓度与固定时间间隔内的吸光度变化成正比。

其反应如下：尿素 + H2O−−→−尿素酶2NH3 + CO2NH3 + α-氧代戊二酸 + NADH−−→−GLDH谷氨酸 + NAD+注：GLDH为谷氨酸脱氢酶在上述反应中，酶反应速率与样本中尿素（尿素氮）的含量成正比。

在340 nm 处测定固定时间间隔内NADH吸光度下降的速率，即可测得样本中尿素（尿素氮）的浓度。

二、试剂1.试剂本科使用上海复星长征医学科学有限公司UREA试剂盒，为液体双试剂，各组分如下：试剂1（R1）α-氧代戊二酸7.5 mmol/L谷氨酸脱氢酶＞800 U/LNADH 0.35 mmol/L二磷酸腺苷 1.5 mmol/LTris缓冲液115 mmol/L试剂2（R2）Tris缓冲液115 mmol/L尿素酶＞40000 U/Lα-氧代戊二酸7.5 mmol/L2.校准要求2.1校准品：使用与试剂配套使用的复星长征临床化学校准血清（货号：4490050/4590050）对测定进行校准。