细胞工程-简答、论述

简答

1.何为单倍体的培养

答:主要是指花药培养,即将花药在工人培养基上进行培养,从小孢子直接发育成胚状体.然后长成单倍体植株;或通过愈伤组织诱导分化出芽和根,最终长成植株.

2.植物组织培养基的主要成份包括哪些？植物细胞培养基的组成？

答：无机盐类、碳源、植物生长激素、有机氮源、天然物质、支持物质

3.植物单细胞的制备方法

答：机械法、酶解法和愈伤组织诱导法

4.植物单细胞培养方法？

答：平板培养发、看护培养法与饲养层培养、液体静置培养法、细胞悬浮培养法。

5.植物细胞的保存方法？

答：继代培养保存法、低温保存法和冰冻保存法。

6.植物悬浮培养细胞的同步方法？

答：物理方法：提及选择法、冷处理法

化学方法：饥饿法、抑制法、有丝分裂法

7.植物细胞的特性？

答：比微生物细胞大；以非均相集合细胞团存在；生长周期长。

8.植物细胞悬浮培养生长和增殖有哪几个阶段？

答：延迟期、对数生长期、直线生长期、减缓期、静止期和衰亡期。

9.影响植物细胞培养的因素？

答：细胞遗传性；培养的环境条件、PH、通气、营养盐、前体、生长调节剂、搅拌和混合、光照

10.怎样建立植物细胞的两相培养？/植物细胞的两相培养有哪两相？

答：在培养体系中加入水溶性或脂溶性的有机物或者具有吸附作用的多聚化合物，使培养体系形成上下两相，细胞在水相中生长，合成的次生代谢物转移到有机相中。

11.★简述（植物细胞）悬浮培养具有的优点？

答：1）可以增加培养细胞与培养液的接触面，促进营养的吸收

2）可带走培养物产生的有害代谢产物，避免高浓度集聚对细胞的伤害。

3）保证良好的单混合状态，从而获得良好的气体传递效果。

12.★简述原生质体的特征？

答：原生质体无细胞壁障碍，可以方便的进行有关遗传操作，并可以对膜、细胞器进行基础研究；具有全能性，并能进行人工培养发育成完整植株；原生质体适合进行诱导融合形成杂种细胞。

13.植物原生质体的鉴定与活力测定方法？

答：植物原生质体的鉴定：1）低渗爆破法；2）荧光染色法。

植物原生质体活力测定方法：1）染色法2）胞质环流法3）渗透压变化；4）氧电极法。

14.★简述利用培养的植物细胞诱发和筛选突变体的优点？

答：通过植物组织或细胞培养可以获得大量的可供选择的各种变异的群体，这些群体的生长容易控制；在很短时间内完成突变体的筛选；在变异的细胞中选择突变体有利于在分子水平上研究突变机制。

15.简述由外植体或单个细胞形成愈伤组织需经过的三个步骤？

答：启动期（或诱导期）：主要是指细胞或原生质体准备分裂的时期，需要采用合适的

诱导剂；

分裂期：即开始分裂并不断增生子细胞的过程；

分化期：细胞内部开始发生一系列形态和生理上的变化，分化出形态和功能不同的细胞

16.简述用于培养和其他细胞工程研究的原生质体的主要来源?

答：主要来自于各种植物的叶片/根尖;也有来自于花粉,尤其是适合制备单倍体的原生质体;也可以从组织培养产生的愈伤组织中获得.

17.体外培养的动物细胞根据其生长方式,可分为哪几种类型?

答：体外培养的动物细胞根据其生长方式,可分为贴附型细胞/上皮型细胞/游走型细胞/多形型细胞和非贴附型细胞.

18.动物细胞培养的特点?

答：1)细胞之间连接复杂2)无细胞壁,比微生物细胞大;3)倍增时间长4)需氧量少5)以聚集体形式存在;6)原代细胞繁殖50袋左右即退化死亡.

19.动物细胞培养的培养办法?

答：被称为微量培养法,是现代体外培养技术最为常用的方法之一.具体做法是将培养细胞接种在培养板的孔内,然后在二氧化碳培养箱内培养.最常用的培养板有6/24/96孔板,后者最为常用.一般都是一次性使用

20.体外培养动物细胞生长的增殖有哪几个阶段?/动物细胞培养过程分哪几个阶段? 答：1)原代培养期2|)传代期4)衰退期

21.动物细胞体外培养的常用培养基和细胞消化液有几类?

答：常用培养基:天然培养基、合成培养基、无血清培养基

细胞消化液：胰蛋白酶溶液和乙二胺四乙酸钠溶液

22.动物细胞培养中贴壁培养的优点？

答：1）比较容易更换培养基

2）容易采用灌注培养，从而达到提高细胞密度的目的

3）更有效的表达同一产品

4）可以方便的调节培养液和细胞比例

5）易于观察细胞生长状况

23.无血清培养基根据其成分分为哪三类？

答：1）不含蛋白质，只有成分已知的小分子物质和带微粒元素的聚合物，价格便宜，适用于某些确立的细胞系。

2）含有大分子物质，使用的细胞株较多，但成本较高，大多无血清培养基属于此

类。

3）所含成分不完全清楚，以成分简单、成本低而适用于大规模生产使用。

24.动物细胞培养必须的溶液？

答：平衡盐水、培养基pH调整液、细胞消化液、抗生素溶液

25.动物细胞之间的连接形式有哪些？

答：紧密连接、间隙连接、隔壁连接、中间连接、桥粒连接

26.在细胞分离技术中，常采用的细胞分离技术有哪些？

答：1）梯度沉降分离法：主要是根据细胞大小不同分离细胞。

2）等密度沉降分离法：主要是根据细胞密度不同来分离细胞。

3）流式细胞仪分离法：主要是根据细胞免疫荧光法使荧光体与细胞膜表面抗原结合，利用特殊仪器进行检测分离不同种类的细胞。

27.常用抗体检测方法有哪些？

答：1)ELISA 用于可溶性抗原(蛋白质)、细胞核病毒等抗体检测.

2)RLA 用于可溶性抗原、细胞抗体检测。

3)FACS 用于检查细胞表面抗原的抗体检测。

4)IFA 用于细胞核病毒抗体的检测。

28.胚胎干细胞的鉴定方法？

答：碱性磷酸酶染色；特异性表面抗原（SSEA-1）免疫荧光标记