细胞生物学小鼠细胞培养实验报告
小鼠干细胞实验报告
一、实验目的本研究旨在探讨小鼠干细胞的生物学特性及其在组织再生和疾病治疗中的应用。
通过体外培养和观察小鼠干细胞，分析其增殖、分化和迁移能力，为干细胞在临床治疗中的应用提供理论依据。
二、实验材料与仪器1. 实验材料：（1）小鼠脾脏、骨髓等组织；（2）DMEM/F12培养基、胎牛血清、青霉素、链霉素；（3）小鼠成纤维细胞；（4）表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子；（5）流式细胞仪、细胞培养箱、倒置显微镜等。
2. 实验仪器：（1）流式细胞仪；（2）细胞培养箱；（3）倒置显微镜；（4）超净工作台；（5）离心机。
三、实验方法1. 小鼠干细胞分离（1）取小鼠脾脏、骨髓等组织，用眼科剪剪成1mm³大小的组织块；（2）将组织块放入DMEM/F12培养基中，加入Ⅰ型胶原酶，37℃消化1小时；（3）用200目尼龙网过滤，收集细胞悬液；（4）用离心机离心，弃去上清液，用DMEM/F12培养基重悬细胞。
2. 小鼠干细胞体外培养（1）将细胞悬液接种于培养瓶中，放入细胞培养箱，37℃、5%CO2条件下培养；（2）每3天更换一次培养基，观察细胞生长情况。
3. 小鼠干细胞表型鉴定（1）用流式细胞仪检测细胞表面标记，如CD29、CD44、CD45等；（2）用倒置显微镜观察细胞形态。
4. 小鼠干细胞增殖实验（1）取对数生长期的干细胞，以1×10⁵个/孔的密度接种于96孔板；（2）每24小时更换一次培养基，观察细胞增殖情况；（3）计算细胞增殖倍数。
5. 小鼠干细胞分化实验（1）将干细胞接种于培养皿中，加入表皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子，诱导细胞分化；（2）观察细胞形态和生物学特性，如神经细胞、成骨细胞等。
6. 小鼠干细胞迁移实验（1）将干细胞接种于培养皿中，加入细胞迁移实验试剂；（2）观察细胞迁移情况，记录细胞迁移距离。
四、实验结果1. 小鼠干细胞分离成功，细胞生长旺盛，呈梭形、椭圆形等；2. 表型鉴定结果显示，小鼠干细胞表面表达CD29、CD44、CD45等干细胞标记；3. 小鼠干细胞增殖实验结果显示，细胞增殖倍数为10倍；4. 小鼠干细胞分化实验结果显示，细胞可分化为神经细胞、成骨细胞等；5. 小鼠干细胞迁移实验结果显示，细胞迁移距离为1.5mm。
细胞小鼠实验报告模板
实验名称：细胞小鼠模型建立及功能研究一、实验背景[简要介绍实验的目的、意义及研究背景]二、实验材料1. 细胞株：[细胞名称及来源]2. 小鼠：[小鼠品系、性别、年龄、体重]3. 试剂：[详细列出所有试剂名称及规格]4. 仪器：[详细列出所有仪器名称及型号]三、实验方法1. 细胞培养a. 将细胞接种于含10%胎牛血清的DMEM培养基中，置于37℃、5%CO2培养箱中培养。
b. 细胞生长至80%融合时，进行传代培养。
2. 小鼠模型建立a. 将小鼠随机分为实验组和对照组，每组10只。
b. 实验组给予特定处理（如基因敲除、药物干预等），对照组给予等量的生理盐水。
c. 观察并记录小鼠的生长发育、行为变化等指标。
3. 细胞功能研究a. 通过分子生物学技术（如RT-qPCR、Western blot等）检测细胞相关基因和蛋白表达水平。
b. 通过细胞功能实验（如细胞增殖、细胞凋亡、迁移、侵袭等）评估细胞功能。
四、实验结果1. 细胞培养a. 细胞生长良好，呈典型铺路石状排列。
b. 传代培养后，细胞生长状态良好。
2. 小鼠模型建立a. 实验组小鼠生长发育正常，行为无明显异常。
b. 对照组小鼠生长发育正常，行为无明显异常。
3. 细胞功能研究a. 实验组细胞中相关基因和蛋白表达水平与对照组相比，存在显著差异。
b. 实验组细胞功能与对照组相比，存在显著差异。
五、讨论1. [分析实验结果，讨论实验目的和意义]2. [与其他研究进行比较，探讨本实验的优势和局限性]3. [展望未来研究方向]六、结论[总结实验结果，得出结论]七、参考文献[列出所有参考文献，格式规范]八、附录[如有需要，可附上实验原始数据、图片等][注：本模板仅供参考，具体实验内容和结果需根据实际情况进行调整]。
小鼠卵细胞实验报告
一、实验目的1. 掌握小鼠卵细胞的采集、培养和成熟方法。
2. 观察卵细胞在培养过程中的形态变化和成熟程度。
3. 为后续胚胎发育实验提供成熟的卵细胞。
二、实验原理小鼠卵细胞培养成熟是胚胎发育研究的基础，通过体外培养和成熟，可以观察到卵细胞从生发泡到成熟卵细胞的全过程。
本实验采用小鼠卵巢组织，通过体外培养，使卵细胞在适宜的培养条件下完成成熟过程。
三、实验材料1. 小鼠卵巢组织：雌性小鼠，体重20-25g。
2. 培养基：卵细胞培养液（CO2饱和）。
3. 仪器设备：超净工作台、显微镜、解剖显微镜、培养皿、移液器、剪刀、镊子等。
四、实验步骤1. 采集小鼠卵巢组织：将雌性小鼠麻醉后，剖腹取出卵巢组织。
2. 处理卵巢组织：将卵巢组织置于超净工作台，用剪刀剪成小块，放入培养皿中。
3. 卵细胞采集：用镊子轻轻挑取生发泡，将其置于培养皿中。
4. 卵细胞培养：将采集到的卵细胞放入CO2饱和的培养液中，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。
5. 观察卵细胞成熟：每隔24小时观察卵细胞形态变化，记录成熟程度。
6. 取成熟卵细胞：当卵细胞达到成熟程度时，用移液器将卵细胞收集到另一培养皿中。
7. 实验结束：将收集到的成熟卵细胞进行后续实验或保存。
五、实验结果1. 卵细胞采集：成功采集到生发泡，其中含有一定数量的初级卵母细胞。
2. 卵细胞培养：在培养过程中，观察到卵细胞逐渐从生发泡状态发育为成熟卵细胞。
3. 卵细胞成熟：经过48小时的培养，大部分卵细胞达到成熟程度，出现第一极体。
六、实验分析1. 本实验成功采集到小鼠卵巢组织中的初级卵母细胞，为后续实验提供了充足的卵细胞资源。
2. 在卵细胞培养过程中，观察到卵细胞逐渐成熟，说明本实验所采用的方法对卵细胞成熟具有促进作用。
3. 实验结果表明，小鼠卵细胞在体外培养条件下可以成熟，为胚胎发育研究提供了技术支持。
七、实验总结1. 本实验成功实现了小鼠卵细胞的采集、培养和成熟，为后续胚胎发育实验奠定了基础。
细胞生物学小鼠细胞培养实验报告
广州大学综合设计性实验报告学院生命科学学院课程细胞生物学实验实验项目细胞培养实验题目小鼠肝细胞的原代培养专业生物技术年级、班别生技142姓名徐嘉宽学号1414300030任课教师陈鲲细胞培养——小鼠细胞的原代培养摘要目的探讨体外分离和培养小鼠肾、脑、心肌细胞的方法。
方法采用脱臼法处死新生小鼠，结合酶消化法和组织块法对新生小鼠肾、脑、心肌细胞进行了体外分离、培养。
（用眼科剪把新生小鼠心肌细胞组织剪成小于1mm³大小的植块，然后用胰蛋白酶消化5~10min，最后将心肌组织块接种于培养瓶中进行体外培养。
脑和肾直接进行组织块培养。
）结果比较成功地进行了原代肾、脑、心肌细胞培养，并进行了形态学观察。
结论采用该方法能够实现对小鼠心肌、肾、脑细胞的体外原代培养，较好观察到心肌、脑、肾细胞的形态。
关键词原代培养小鼠细胞组织块法酶消化法1前言初步了解动物细胞原代培养的基本方法、原理和基本操作过程，初步掌握无菌操作方法。
学习植块培养法、营养液的配置及酸碱度的调节。
细胞培养是当前细胞生物学乃至整个生命科学研究与生物工程中最基本的实验技术。
当前，细胞培养技术广泛应用于分子生物学、遗传学、免疫学、肿瘤学、细胞工程等领域，已发展成为一种重要的生物技术。
了解动物细胞培养的技术的基本操作过程，观察体外培养细胞的生长特征，并对原代培养有一个基本概念。
结合酶消化法和组织块法通过无菌操作培养新生小鼠细胞。
2实验原理原代细胞培养是指直接从动物体内获取的细胞、组织或器官，经体外培养后，直到第一次传代为止。
这种培养，首先用无菌操作的方法，从动物体内取出所需的组织（或器官），用植块培养法或酶解法，在人工培养下，使其不断地生长及繁殖。
细胞培养是一种操作繁琐而又要求十分严谨的实验技术。
要是细胞能在体外长期生长，必须满足两个基本要求：一是供给细胞存活所必须的条件，如适量的水、无机盐、氨基酸、维生素、葡萄糖及其有关的生长因子、氧气、适宜的温度，注意外环境酸碱度与渗透压的调节。
细胞生物学实验-小鼠肝细胞原代培养
小鼠肝细胞原代培养小鼠肝细胞原代培养实验目的：1.了解并掌握原代细胞培养的相关原理2.了解并掌握小鼠肝细胞原代培养的方法实验器材：二氧化碳培养箱、光学显微镜、无菌操作台、恒温水浴锅、酒精灯、培养皿、烧杯、镊子、酒精棉、离心管、电动移液器、移液管、细胞计数板、幼鼠、DMEM培养基、胎牛血清、青霉素、链霉素、0.125％胰蛋白酶（含0.1%胶原酶）、D-Hanks或者PBS等。
原代培养是从供体中取得组织或细胞后在体外进行的首次培养。
原代培养不仅是建立各种细胞系的第一步，也是从事组织或细胞培养工作人员应熟悉和掌握的最基本的技术。
原代培养的组织或者细胞的生物学特性没有发生很大变化，仍具有二倍体遗传物质，最接近和反映体内生长特性，很适合作药物测试、基因表达测试、细胞分化等实验研究。
原代培养是获取细胞的主要手段，但原代培养的组织由多种成分组成，比较复杂，即使同一类型细胞如成纤维样细胞或上皮样细胞，细胞间也存在很大差异。
如果供体不同，即使组织类型、部位相同，个体差别也可以在细胞上反映出来。
因而原代细胞的部分生物学特征尚不稳定，如要做较为严格的对比性实验研究，还需要对原代培养的细胞进行短期传代后再进行（需要注意的是有些细胞在传代后可能会发生一些生物学特性的变化）。
一般采用2-5代的细胞进行实验。
当然特殊情况和一些终端分化细胞如神经细胞、巨噬细胞、心肌细胞除外。
原代培养的方法很多，最基本和最常用的为组织块原代培养法和离散细胞原代培养法（消化法）。
组织块原代培养：组织块原代培养法是原代细胞培养常用的基本方法，适用于各种组织的原代培养，特别是难以消化的组织，组织块原代培养法操作程序简单，培养前不经过酶液处理，细胞损伤较小。
但由于培养过程中细胞移动受到较大限制，完成原代培养所需的时间较长。
组织块培养的程序一般为：1.组织块修整：将组织块用平衡缓冲液反复冲洗，然后在灭菌的培养皿中剪碎至碎块的直径小于1mm3。
2.贴壁：将组织块间隔（小块之间的间隔为1cm）放在培养皿中，培养基需要浸没组织块底部但不能使组织块浮起。
小鼠的体外实验报告
一、实验目的本实验旨在通过体外培养小鼠细胞，观察细胞在不同条件下的生长情况，分析细胞增殖、分化及凋亡等相关生物学行为，为进一步研究小鼠细胞生物学特性提供实验依据。
二、实验材料1. 小鼠胚胎成纤维细胞（CRL-1658）；2. DMEM培养基（高糖）；3. 胎牛血清；4. 0.25%胰蛋白酶；5. PBS缓冲液；6. CO2培养箱；7. 倒置显微镜；8. 流式细胞仪；9. 试剂盒及相关仪器。
三、实验方法1. 细胞培养：将小鼠胚胎成纤维细胞接种于6孔板，每孔加入2 mL含10%胎牛血清的DMEM 培养基，置于CO2培养箱中，37℃、5%CO2条件下培养。
2. 细胞传代：当细胞贴壁生长至约80%时，用0.25%胰蛋白酶消化细胞，按1:3比例传代。
3. 实验分组：将细胞分为实验组和对照组，实验组给予不同浓度的实验药物处理，对照组给予等体积的溶剂处理。
4. 细胞形态观察：利用倒置显微镜观察细胞在不同处理条件下的形态变化。
5. 细胞增殖检测：采用CCK-8法检测细胞增殖情况，每组设3个复孔。
6. 细胞凋亡检测：采用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况，每组设3个复孔。
7. 细胞周期分析：采用PI染色法检测细胞周期分布，每组设3个复孔。
8. 流式细胞仪检测：对细胞进行流式细胞仪检测，分析细胞增殖、凋亡及周期分布情况。
四、实验结果1. 细胞形态观察：实验组细胞在给予不同浓度实验药物处理后，细胞形态发生明显变化，与对照组相比，细胞生长速度减慢，细胞皱缩、变圆，部分细胞出现凋亡现象。
2. 细胞增殖检测：CCK-8法结果显示，实验组细胞增殖明显低于对照组，且随着实验药物浓度增加，细胞增殖抑制作用增强。
3. 细胞凋亡检测：Annexin V-FITC/PI双染法结果显示，实验组细胞凋亡率明显高于对照组，且随着实验药物浓度增加，细胞凋亡率升高。
4. 细胞周期分析：PI染色法结果显示，实验组细胞周期分布发生改变，S期细胞比例降低，G2/M 期细胞比例升高，说明实验药物处理可抑制细胞增殖，促进细胞周期阻滞。
原代细胞培养 实验报告
细胞生物学实验报告原代细胞培养1.实验目的：了解原理代细胞培养的基本方法，初步掌握无菌操作的方法。
2.实验用品：（1）仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管、微量移液管、培养皿、离心机、注射器、L型针头（2）实验药品：蒸馏水、75%酒精溶液、PBS溶液、细胞培养液（3）实验材料：小鼠3.实验原理：（1）动物细胞培养：从动物体内取出体细胞，在体外模拟体内环境在无菌、适宜温度和一定的营养条件下，使之生存、生长、繁殖，并维持其结构和功能的方法。
原代细胞培养：直接从体内获取细胞组织或器官进行体外培养至第一次传代培养为止。
细胞培养至一定程度后，需再做培养。
及培养的细胞分散后，从一个容器以一定比例转移到另一容器扩大培养。
代数：传代培养累计次数（2）细胞培养的条件①气体条件：有一定的O）（小于空气中浓度）和CO2（5%）②无菌环境：培养用品应高温灭菌，培养液应无菌处理，操作应在超净工作台无菌操作。
③最适温度：36～37℃为最适温度，30～37℃细胞可进行代谢，4℃细胞可存活数天。
④渗透压：一般为260～320mmol/l （人血浆一般为290mmol/l）⑤营养条件：含细胞生长必须的有机物，氨基酸、维生素、无机盐、辅助物等。
培养基中不含生长因子，因此，必须在培养基中加入小牛血清。
⑥最适pH：7.0～7.4（中和细胞代谢废物与酸性气体环境）（3）贴壁生长与不贴壁生长①贴壁生长：来自于实体组织的细胞多贴壁生长。
贴壁生长的细胞进行传代培养更换培养皿时有以下步骤：首先，应轻晃培养皿并弃去上清液（去除死细胞），再用胰蛋白酶处理（细胞成片收缩，变圆），倾斜培养皿，用滴管吸去多余酶液，然后用滴管吸取PBS溶液吹打细胞并离心，最后，加入新的培养液，按比例分入培养皿中。
②不贴壁生长：造血细胞、癌细胞等。
半量换液法：吸取1/2培养液到新的培养皿中，再离心，取下层细胞，分入多个培养皿中。
4.实验步骤：（1）用断头法处死小鼠，置于解剖盘中。
细胞生物学实验报告[2]
![细胞生物学实验报告[2]](https://img.taocdn.com/s3/m/1ec1501d770bf78a642954ce.png)
细胞生物学实验报告细胞生物学实验报告细胞生物学实验报告细胞生物学实验报告小鼠脾细胞原代培养姓名：杜旭学号：202*00230155系年级：202*级临七一班同组者：赵伟日期：202*/4/25【实验目的】⒈学习并掌握动物细胞培养的无菌操作技术。
⒉了解原代细胞培养的基本方法及操作过程。
⒊学习细胞计数及营养液的配制。
【实验原理】⒈细胞原代培养原代细胞培养是指直接从动物体内获取的细胞、组织和器官，经体外培养后，直到第一次传代为止。
这种培养，首先用无菌操作的方法，从动物体内取出所需的组织（或器官），经消化，分解成单个游离细胞，在人工培养下，使其不断的生长及繁殖。
细胞培养是一种操作繁琐而又要求十分严谨的实验技术。
要使细胞能在体外长期生长，必须满足两个基本要求：一是供给细胞存活所必须的条件，如适量的水、无机盐、氨基酸、维生素、葡萄糖及其有关的生长因子、氧气、适宜的温度，注意外环境酸碱度与渗透压的调节。
二是严格控制无菌条件。
⒉细胞死活鉴定死活细胞的鉴定方法有很多种，常用的有染色法和仪器分析法。
染色法是常用的细胞死活鉴定方法，简便，易于操作。
不同的死活细胞鉴定方法有各自不同具体的反应机理，但无论采用何种办法，都是利用了死活细胞在生理机能和性质上的差异。
染色法分化学染色法和荧光染色法，根据染色机理的不同，染料或使死细胞着色，或使活细胞着色。
●死活细胞在生理机能和性质上的差异主要包括：☆死活细胞细胞膜通透性的差异：活细胞的细胞膜是一种选择性膜，对细胞起保护和屏障作用，只允许物质选择性的通过；而细胞死亡之后，细胞膜受损，通透性增加。
常用的以台盼蓝鉴别细胞死活的方法就是利用了这一性质。
台盼蓝，又称锥蓝，是一种阴离子型染料，不能透过完整的细胞膜。
所以经台盼蓝染色后只能使死细胞着色，而活细胞不被着色。
甲基蓝有类似的染色机理。
植物细胞的质壁分离也可鉴定死活。
☆死活细胞在代谢上的差异：是采用美蓝染料鉴定酵母细胞死活的依据。
美蓝是一种无毒染料，氧化型为蓝色，还原型为无色。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
广州大学综合设计性实验报告学院生命科学学院课程细胞生物学实验实验项目细胞培养实验题目小鼠肝细胞的原代培养专业生物技术年级、班别生技142 姓名徐嘉宽学号 1414300030 任课教师陈鲲细胞培养——小鼠细胞的原代培养摘要目的探讨体外分离和培养小鼠肾、脑、心肌细胞的方法。
方法采用脱臼法处死新生小鼠，结合酶消化法和组织块法对新生小鼠肾、脑、心肌细胞进行了体外分离、培养。
（用眼科剪把新生小鼠心肌细胞组织剪成小于1mm³大小的植块，然后用胰蛋白酶消化5~10min，最后将心肌组织块接种于培养瓶中进行体外培养。
脑和肾直接进行组织块培养。
）结果比较成功地进行了原代肾、脑、心肌细胞培养，并进行了形态学观察。
结论采用该方法能够实现对小鼠心肌、肾、脑细胞的体外原代培养，较好观察到心肌、脑、肾细胞的形态。
关键词原代培养小鼠细胞组织块法酶消化法1前言初步了解动物细胞原代培养的基本方法、原理和基本操作过程，初步掌握无菌操作方法。
学习植块培养法、营养液的配置及酸碱度的调节。
细胞培养是当前细胞生物学乃至整个生命科学研究与生物工程中最基本的实验技术。
当前，细胞培养技术广泛应用于分子生物学、遗传学、免疫学、肿瘤学、细胞工程等领域，已发展成为一种重要的生物技术。
了解动物细胞培养的技术的基本操作过程，观察体外培养细胞的生长特征，并对原代培养有一个基本概念。
结合酶消化法和组织块法通过无菌操作培养新生小鼠细胞。
2实验原理原代细胞培养是指直接从动物体内获取的细胞、组织或器官，经体外培养后，直到第一次传代为止。
这种培养，首先用无菌操作的方法，从动物体内取出所需的组织（或器官），用植块培养法或酶解法，在人工培养下，使其不断地生长及繁殖。
细胞培养是一种操作繁琐而又要求十分严谨的实验技术。
要是细胞能在体外长期生长，必须满足两个基本要求：一是供给细胞存活所必须的条件，如适量的水、无机盐、氨基酸、维生素、葡萄糖及其有关的生长因子、氧气、适宜的温度，注意外环境酸碱度与渗透压的调节。
二是严格控制无菌条件。
3实验用品3.1器材解剖剪、镊1套；眼科剪7把、眼科镊6把；吸管直、弯头各7支，2 ml刻度吸管5支；吸管胶头：小18个、大6个；细胞培养瓶5个；青霉素瓶及瓶塞：6个（其中一个用于分装胰酶液）；培养皿(用于解剖取材)：大、小各1套。
烧杯：5～10ml 2个、100 ml 1个。
用于无菌操作：解剖镊1把，广口瓶大、小各1个（装消毒棉球），医用棉花、纱布，有盖白瓷盘1个、消毒盒3个、牛皮纸、棉绳。
小培养皿(装盖玻片)1个。
3.2试剂3.2.1清洗用液：5%稀盐酸、1%稀盐酸、2%NaOH、洗洁精、单蒸水、三蒸水、清洗液（用浓硫酸和重铬酸钾配制、全班共用）等。
3.2.2消毒剂（用前配制）：甲醛、高锰酸钾、新洁尔灭、75%酒精、碘酒、过氧乙酸等。
3.2.3 培养用液：3.2.3.1 细胞培养用液（每大组100mL，用100mL盐水瓶装）：经过滤过的F10 （RPMI1640）培养基占80~90%、经过滤除菌的小牛血清占10~20%,加入经过滤除菌、终浓度各为100国际单位的抗菌素。
3.2.3.2细胞消化液（每小组1青霉素瓶，约5mL）：经过滤除菌的0.25%胰蛋白酶或EDTA—胰蛋白酶液。
3.2.3.3平衡盐溶液：不含钙、镁离子的Hank液：每组约50mL，用50（或100）mL 盐水瓶装。
3.3 材料新生白小鼠4实验方法4.1技术路线清洗玻璃仪器,胶塞→制备消毒棉球→包装分装培养液用液用品→消毒分装培养用液用品→分装培养用液→包装原代培养接种用品→实验时的准备工作如小组所示→在小组其他成员已打开腹腔的基础上切取小鼠肾（心肌、脑）组织块→洗去血污→剔除多余成份→剪成小于1mm³大小的植块→接种→贴壁→培养→观察和记录4.2实验步骤a)玻璃仪器的初步清洗、开始培育小白鼠（第一批雌鼠与雄鼠混养、观察记录阴道口的情况等）b)继续培养乳鼠（第二批雌鼠与雄鼠混养、观察记录阴道口的情况等），玻璃仪器的清洗（清洗液浸泡）、胶制品的清洗。
c)继续培养乳鼠（常规饲养工作）、完成清洗工作（包括各类物品）、制备消毒用棉球、包装分装培养用液用品。
d)继续培养乳鼠（常规饲养工作、留意小鼠的出生）、消毒分装培养用液用品、分装培养用液、包装原代培养接种用品。
e)消毒原代培养接种用品f)细胞原代培养(1)洗手操作者用洗涤剂刷洗双手→自来水冲净→新洁尔灭浸泡→进入无菌室(2)准备工作：［1］操作者于超净台内用酒精棉球消毒双手，待酒精稍干后，然后用酒精棉球消毒工作面。
［2］去掉Hank液、细胞培养液、酶液的包装纸。
［3］打开试管、吸管胶头包装，将试管插（尽量斜插）入试管架［4］取出需用的吸管（直、弯吸管各一支，刻度吸管一支）套上胶头，试管一支，插入相应的试管中。
［5］打开培养皿以及解剖工具手持端的包装(3)处死小鼠(脱臼法)→消毒（放入含75%酒精的烧杯中浸泡数秒）。
将以处死消毒的小鼠转移至超净工作台内的培养皿盖内，背部朝上。
培养皿倒扣于包装纸上待用。
(4)解剖取肾：用酒精棉球擦拭背部，在腰部后缘用解剖镊提起皮肤，用解剖剪呈倒T形剪开皮肤，再用解剖剪剪开腰部两侧肌肉，用眼科剪拿出2个肾脏置于无菌培养皿中。
(5)用Hank液洗涤皮肤组织2次，吸去Hank。
(6)剪碎组织块：换另一套眼科剪将组织块剪成小于1mm³的组织块（大小尽量一致）。
用Hank液洗涤，弃Hank液。
(7)酶消化：将胰蛋白酶液加入装有组织块的青霉素瓶中，盖紧盖子，置超净工作台内中消化5—10min，知道组织块变松软、粘稠状，颜色略变白色为止。
(8)将培养液直接加入盛有胰蛋白酶和皮肤组织块的青霉素瓶中，利用其中的牛血清终止酶消化的作用，弃去酶液和培养液的混合液。
加入培养液重复此操作2—3次。
(9)取一培养瓶，在培养瓶的上面做好标志（在瓶侧注明班、组别、姓名、材料名称等信息）(10)用培养液湿润的吸管小心吸取组织块,轻轻吹出到培养瓶的培养瓶面内,按照一定的间隔和形式用弯吸管将植块排列好(11)翻转培养瓶（培养面在上方），加入4ml的培养液。
(12)将培养皿加盖封口,送入37度恒温箱内,静置（加入的培养液不浸泡植块，不从瓶口流出）(13)按相同的方法取出心脏和脑组织，清洗后直接植块培养。
(14)4小时后，待组织块充分贴壁后，翻转培养瓶使植块浸于培养液中且不漂浮；(15)观察至于37度培养的细胞，需逐日进行观察，主要观察：［1］培养物是否被污染，如培养液变为黄色且混浊，表示该瓶被污染。
［2］细胞生长与培养液颜色的变化，如培养液变为紫红色，一般细胞生长不好。
可能是瓶塞未盖紧或营养液pH过高。
［3］培养液若变为桔红色，一般表示细胞生长良好。
经过1～2天培养后，若细胞生长情况较差或培养液变红了，则可换一次营养液。
换液时也要注意无菌操作（若经过1～2天培养后,若细胞生长情况较差或培养液变红,则需换液。
无菌室的准备工作如小组方案中所示：1)从37摄氏度培养箱中取出培养瓶，于超净工作台内吸去全部旧培养液；2)用平衡盐溶液轻缓漂洗培养物1～2次,弃平衡盐溶液；3)加入与换液前相同的量的培养液；4)放回原来的培养箱继续培养。
若经2～3天后，细胞营养液变黄，此时表示细胞已生长。
每日观察结果用文字记录，换液也需记录，在整个培养过程的不同阶段（最少在前、中、后阶段）置倒置显微镜下观察细胞生长情况并拍照记录。
5结果5.1.图片展示图一：小鼠肾细胞图二：小鼠肾细胞5.2.结果分析(1)小鼠肾细胞培养肾脏细胞在培养1d后，明显看出细胞开始向组织块四周扩散，既有新生的细胞也有游离的组织块碎片。
翻转组织块能发现更多游离的细胞。
图一二中发亮的细胞即为有活力的肾细胞(梭形)。
失去活力的细胞呈黑色或形状不规则。
图三：小鼠神经细胞图四：小鼠神经细胞（2）小鼠脑细胞培养小鼠脑组织块培养，在初始几天并没有发现游离的神经细胞，待培养液颜色变黄（证明细胞有生长）且换培养液后，把脑组织块翻转，在显微镜下发现有一比较明显的神经细胞（如图四所示）。
图五：小鼠心肌细胞图六：小鼠心肌细胞（3）小鼠心肌细胞培养小鼠心肌细胞采用了酶消化法培养，培养1d后，视野中充满长条纤维状物体，其中大部分为失去活力的心肌纤维细胞，呈黑色。
有活力的心肌纤维形态如图五六所示，半透明，中间有条纹间隔。
因为心肌细胞生长缓慢，视野中所看到的均为游离的组织块分离出来的细胞。
6 结果分析与讨论本实验结合酶消化法和组织块法成功地培养出小鼠肾细胞，并且相对单一采用酶消化法或者组织块法细胞贴壁生长的速度要大大提高了。
原因是因为皮片经胰蛋白酶消化后，表皮很容易从真皮上分离下来。
此时基底细胞联接较松散，把组织块放置于培养瓶中培养时，基底细胞即可轻易地游离到培养液中，然后在培养瓶底部进行贴壁生长。
而单纯的组织块培养没有经过酶消化，单个的细胞不易从组织块上脱落，因此细胞游离出来贴壁生长的速度比较慢。
因此，通过该实验证明，经过酶消化进行的组织块培养的这种方法是一种改良后的细胞培养的方法，此方法培养的细胞不仅细胞贴壁生长速度快，而且细胞生长的状态也很好。
而小鼠心肌细胞和神经细胞生长速度及其缓慢，适合组织块培养，可以互相提供细胞生长所需的环境，在实验中观察到的有活力的细胞都是从原组织块分离出来的细胞。
用酶消化法培养可能会导致细胞无法存活。
在实验过程中要时刻注意污染，把培养瓶从培养箱中拿出来和放回去都要把手消毒，显微镜下观察时要把瓶身用酒精擦一遍，防止有脏东西沾在瓶身影响观察。
Welcome !!! 欢迎您的下载，资料仅供参考！。