兽医生物制品学
兽用生物制品的种类、现状及发展
一 、兽医生物制品与生物制品学的概念
（一）、兽医生物制品：
指利用微生物、寄生虫及其组分或代谢产物、免疫应答产物制备的，用于动物传染病、寄生虫病或其他疾病的预防、诊断和治疗的一类生物制剂。
思考：
你能想到哪些生物制品？
（二）、兽医生物制品学：
1、概念
兽医生物制品学：指在微生物、免疫学和传染病学基础上，采用生物学、生物化学、生物工程学等的技术和方法，研究和制备生物制品的一门应用科学。
（一）预防用生物制品----疫苗
疫苗的概念： 用于人工主动免疫、以预防疾病的一类生物制品，称为疫苗。 由病原微生物、寄生虫等完整病原或其组分或代谢产物等制成，具有良好免疫原性。
常规疫苗： 类毒素和亚单位苗 生物技术疫苗
灭活苗（细菌、病毒、寄生虫） 活疫苗（细菌、病毒、寄生虫）
基因工程苗 核酸疫苗 抗独特型疫苗 合成肽苗
Ag
Ab1 （Id）
Ab2 （抗Id）
Ab3
6、抗独特型疫苗 独特型（Id）——免疫球蛋白分子（Ig）V区上的特异性抗原决定簇（表位群）称为独特型（idiotype， Id ）。
抗独特型抗体（AId）是针对抗体分子V区上的特异抗原表位群（称为独特型）的抗抗体。AId与原来抗原的决定簇分子互为“内影像”关系，可模拟抗原结构和功能，可诱导机体产生抗病原体的特异性免疫应答，而可以作为一种新型疫苗。 即所谓抗独特型疫苗。
多价苗和多联苗 多价苗——同种病原微生物多种型或毒株制成的疫苗(例如大肠杆菌K88K99二价苗) 多联苗——不同种病原微生物联合制成的疫苗 例:猪瘟-猪丹毒-猪肺疫三联苗 犬瘟热/腺病毒/传染性肝炎/副流感/细小病毒/。 钩端螺旋体六联苗 特点:一针防多种病，节约人力、物力
（二）治疗用生物制品
兽医生物制品名词解释
兽医生物制品名词解释
兽医生物制品是指用于预防、治疗或控制动物疾病的生物制剂。
它们通常由生物来源制成，包括病毒、细菌、寄生虫、真菌、毒素和血清等。
这些制品可以用于家畜、家禽、宠物和其他动物的健康管理。
兽医生物制品的种类很广泛，其中最常见的包括疫苗、抗生素、抗菌药物、抗寄生虫药物和免疫血清。
疫苗是一种预防措施，通过引入微生物或其成分来激活动物的免疫系统，从而使其产生对特定疾病的免疫力。
抗生素和抗菌药物则用于治疗感染性疾病，可以杀灭或抑制病原体的生长和繁殖。
抗寄生虫药物则用于预防和治疗寄生虫感染，如蠕虫和寄生虫。
免疫血清是从动物体内提取的免疫物质，用于提供短暂的被动免疫保护。
除了以上常见的兽医生物制品，还有一些新兴的技术和产品在不断发展和应用中。
例如，基因工程技术可以用于生产特定的疫苗，从而提高其效果和安全性。
生物制剂也可以通过注射、口服或外用等不同途径进行给药，以适应不同动物的需求和特点。
兽医生物制品在动物健康管理中起着至关重要的作用。
它们可以预防疾病的发生，减少疾病传播的风险，提高动物的生产性能和健康水平。
同时，兽医生物制品的研发和应用也需要符合相关法规和标准，以确保其安全性和有效性。
总之，兽医生物制品是一类用于动物健康管理的生物制剂，包括疫苗、抗生素、抗菌药物、抗寄生虫药物和免疫血清等。
它们在预防、治疗和控制动物疾病方面发挥着重要作用，为保障动物健康和促进农业发展做出了重要贡献。
兽医生物制品学ppt课件
巢式PCR示意图
3.反向PCR(IPCR):
反向PCR用于扩增已 知序列两端的未知 DNA片段，因此一对 引物与常规PCR一样 与已知序列互补但是 方向却是相反的。 IPCR步骤主要包括酶 切、自身连接还化、 扩增和序列分析。
四、聚合酶链反应（PCR）
PCR技术是DNA体外扩增技术，以单链DNA为模 板，在DNA聚合酶的作用下引物沿5‘→3’方向不断延 伸，利用4种dNTP合成新的互补DNA链，然后在高 温下变性为单链，再在低温下使引物DNA片段与其复 性，并在DNA聚合酶的作用下开始新一轮DNA合成。 经如此反复循环（变性－退火－延伸）30~60次左右 就可在短时间内将目的DNA扩增数百万倍。PCR技术 为疾病诊断提供了简便、快速、特异、敏感的检测手 段，适于检测不宜分离培养或含量极微的样品中病原 体特定基因片段的有无，或分析不同样品中此片段的 异同。 为了检测RNA样品可以先进行反转录，然后进行 PCR扩增DNA，这就是RNA的反转录－聚合酶链反应 （RT－PCR）。PCR与酶切图谱分析和分子杂交技术
免疫标记法
抗杂交体标记法：在杂交过程中作为探针的核酸 与其互补的核酸能形成杂交体，杂交体本身具有 一定抗原性，因而可用抗杂交体的抗体并结合带 标记的第二抗体对杂交体进行检测 半抗原标记法：通过对已知核酸片段做一定的修 饰，在探针的某些部位连接半抗原，探针通互补 核酸片段 杂交后，与半抗原的特异性抗体结合， 再通过结合带标记的第二抗体对形成的杂交体进 行检测。
斑点杂交
1、原理及步骤：提取病毒、细菌、Cell DNA ↓ 点样品至膜、干燥、固定 ↓ 探针、DNA变性、杂交 ↓ 洗膜、放射自显影 2、应用： ↓ 1）混合样品DNA 结果分析
兽用生物制品的种类、现状及发展
常规疫苗：
灭活苗（细菌、病毒、寄生虫） 活疫苗（细菌、病毒、寄生虫）
类毒素和亚单位苗
基因工程亚单位苗
基因工程苗 核酸疫苗 生物技术疫苗 抗独特型疫苗
基因工程活载体苗 基因缺失苗 转基因植物疫苗
合成肽苗
1、常规疫苗
（1）灭活苗（死苗）：
指用免疫原性优良的病原微生物（包括标 准强毒株和免疫原性优良的弱毒株），经人工 大量培养后将其杀死，但保留其免疫原性，并 加入佐剂制成的疫苗，称为灭活苗。
4、核酸疫苗（基因疫苗或DNA疫苗）
A、提取目的基因 B、与质粒重组 C、重组质粒直接接种动物（肌肉注射、皮下注射、
基因枪轰击接种） D、重组质粒转入动物皮肤、肌肉细胞 E、表达抗原，产生免疫
(5)合成多肽疫苗
用人工合成的方法制备含有保护性 抗原决定簇的多肽，并连接于载体蛋 白上，所制成的疫苗。
2、兽医生物制品学的研究内容：
（1）生物制品的生物学：
（1）生物制品本身的特性及其与动物机体间的关系 （2）研究生物制品的安全性与有效性 （3）生物制品在疾病的预防、诊断、治疗中的原理、方
法与意义
（2）生物制品的工艺学：
研究生物制品的制作工艺，以保证生物制品质量的 优良性
学习本课程的意义
兽医生物制品在动物传染病、寄生虫病等 疾病的预防、诊断、治疗中有着极其重要 的作用，是保障动物个体和群体健康的重 要工具，因此兽医生物制品学是我们畜牧 兽医工作者应掌握的一门重要课程，对我 们今后的工作非常有用。
（4）转基因植物疫苗
使植物表达外源基因，并通过对其大面积播种、 收获，达到生产疫苗目的的新技术。
目前，在转基因植物中表达的、用于疫苗研究的病原基 因主要有：
大肠杆菌热敏肠毒素B亚单位（ＬT-B）基因、 霍乱弧菌毒素B亚单位(CTB)基因、 乙肝表面抗原(HBsAg)基因、 猪传染性胃肠炎病毒S糖蛋白(TGEV-S)基因、 狂犬病病毒糖蛋白(G蛋白)基因、 口蹄疫病毒VPI基因等。其中研究得最多的是LT-B。
【西大2017版】[0886 ]《兽医生物制品学》网上作业及课程考试复习资料(有答案]
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1：[论述题]名词解释题1. 诱变剂2. 油乳佐剂3. 兽医生物制品质量4. 基因工程苗5. 乳化剂6. 卵黄抗体7. 无特定病原体动物8. 兽医生物制品9. 冻干10. 免疫原性参考答案：1. 诱变剂：某些化学药物可引起微生物DNA核甘酸碱基发生改变，从而使该微生物遗传性状产生变化，这类物质为诱变剂。
2. 油乳佐剂：是一类由油类物质和乳化剂按一定比例混合形成的佐剂。
3. 兽医生物制品质量：是兽医生物制品的安全性、有效性和可接受性的直接的或间接的综合反映。
4. 基因工程苗：是指用重组DNA技术研制的疫苗，包括重组亚单位苗、活载体苗、基因缺失疫苗以及核酸疫苗。
5. 乳化剂：在乳剂体系中，位于分散相和连续相间的界面活性物质称为乳化剂。
6. 卵黄抗体：用抗原多次反复注射产蛋禽后，被注射禽的血清和蛋黄内可产生相应的高效价抗体，由被注射禽蛋黄中提取的相应抗体，称为卵黄抗体，可用于相应疾病的预防和治疗。
7. 无特定病原体动物：指动物体内外不含有特定的微生物和寄生虫的动物。
8. 兽医生物制品：是依据免疫学原理，利用微生物、寄生虫及其代谢产物或免疫应答产物制备的一类物质，专供疫病诊断、治疗或预防所用。
9. 冻干：是冷冻真空干燥的简称，又称冷冻干燥，它是物质干燥的一种方法。
10. 免疫原性：指能刺激机体产生抗体和致敏淋巴细胞的特性。
1：[填空题]1. 将矿物油（白油）75%～85%，乳化剂15%～25%，混合后经除菌过滤而制成的佐剂称为。
2. 生物途径选育弱毒株时，常用的育成路线有、、。
3. 兽医生物制品企业常用的灭菌与净化设备有、、、等。
4. 主要的细菌抗原有、、、等。
5. 按疫苗抗原的性质和制备工艺，疫苗可分为、和。
6. 在兽医生物制品上，适用的细胞培养方法通常有、转瓶培养、悬浮培养、微载体培养等.7. 病毒增殖的方式主要有、、。
8. 按生物制品的性质，其可分为、、、、、。
9. 冻干保护剂通常由、和三部分组成。
西南大学21春[0886]《兽医生物制品学》在线作业答案
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单项选择题
1、制作新城疫油乳剂灭活苗时，用于新城疫病毒液灭活的甲醛浓度为（）。
.3%
.1%
.0.01%
.0.1%
2、下列关于强菌（毒）种的叙述，不正确的是（）。
.可直接用于诊断制品、抗病血清、灭活疫苗、弱毒疫苗的制造。
.用作人工弱毒株的原始毒种
.用于微生物、免疫学及动物传染学等研究
.常从疾病流行地区的典型患病动物体内分离
3、下列不属于生物制品有效性范畴的是（）。
.用于预防疾病应有效
.用于治疗疾病应有效
.用于诊断和监测应准确
.用于畜禽副反应低
4、下列不能用于增殖病毒的是（）。
.动物
.禽胚
.细胞
.培养基
5、下列关于弱毒疫苗株的叙述中，不正确的是（）。
.可由微生物自然强毒株通过物理、化学或生物途径选育。
.具有良好的免疫原性和遗传特性。
.也可从自然界筛选具有良好免疫原性的自然弱毒株。
.彻底丧失了对原宿主动物的致病力。
6、下列属于异源疫苗的是（）。
.猪瘟兔化弱毒兔体组织活疫苗（预防猪瘟）
.麻疹疫苗（预防犬瘟热）
.鸡新城疫I系活疫苗（预防鸡新城疫）
.鸡传染性法氏囊病低毒力活疫苗（预防鸡传染性法氏囊病）。
09第九章 诊断制剂(兽医生物制品学)
特异性检测：以新制菌素与标准菌素，对10匹健康马作点眼试验， 用量为2~3滴，5匹马左眼点标准菌素，右眼点新制菌素，另5匹马相反， 点眼后3、6、9、24h检查，全部试验马对两种菌素须均无反应。
阳性血清的 各种稀释度
1:10 1:25 1:50 1:75 1:100
1:10
0 0 10 20 40
抗原稀释度
1:50 1:100 1:150 1:200 1:300 1:400 1:500
补 体 结 合 反 应 结 果（溶 血，%）
0
0
0
0
10
20
40
0
0
0
0
10
30
60
0
0
0
10 20
40
60
第九章 诊断制剂
利用微生物、微生物提取物或动物血清等材料制成的，用于传染病、 寄生虫病血清学和变态反诊断应用的制品，称为诊断用生物制剂 (diagnosticum)，也称为诊断液。主要包括诊断抗原、诊断抗体(血清)和标 记抗体等三大类。
诊断生物制剂用于诊断的原理，是基于抗原和抗体能特异性结合这一 基本特性，故诊断中可以用已知抗原检测未知抗体，或用已知抗体检测未 知抗原。
(2)制造要点
将种子菌液接种肝汤琼脂培养基上37C培养2～7天,或液体通气培养36h，用 0.5%石炭酸生理盐水洗下培养物，70～80C水浴中加热灭菌lh，离心去上清， 菌体悬浮于0.5%石炭酸生理盐水，再离心沉淀洗一次。菌体悬浮于0.5%硫酸水 溶液中，121C加热30～40min，促使菌体水解。室温或冰箱放置12～24h，吸 取上清液，用NaOH液调整为pH6.8～7.0，再静置沉淀未水解部分。上清液用蔡 氏滤器过滤后75～80C加温热，凯氏法测定总氮量(用标准水解素作对照)，用灭 菌蒸馏水稀释滤液，使其最终总氮量为0.4～0.5mg/ml(或与标准的水解素相同)。
新版兽医生物制品学
（4）合成肽疫苗
• 合成肽疫苗是一种仅含抗原决定簇的小肽; • 即用人工方法按天然蛋白的氨基酸顺序合成
保护性短肽，然后与载体蛋白连接后加佐剂 所制成的疫苗。
（5）转基因植物可食疫苗
• 利用分子生物学技术，将病原微生物的抗原 基因导入植物，并在植物中表达出活性蛋白;
• 人或动物食用含有该种抗原的转基因植物， 激发肠道免疫系统，从而产生针对相应病原 微生物的免疫能力。
目的基因表达
以获得的表达产物作为免疫原制成的疫苗， 称为基因工程亚单位疫苗。
例如： • 大肠杆菌菌毛基因工程亚单位疫苗 • 口蹄疫基因工程亚单位疫苗 • 乙型肝炎基因工程亚单位疫苗
（2）基因工程活疫苗
基因工程技术
病原微生物
删除其致病基因或部分片段
获得毒力丧失或降低的毒株
减毒彻底、不易力返祖、安全 遗传性能更稳定
血液制品(白蛋白、丙种球蛋白)
其他生物制品 —— 非特异性免疫制品(干扰素、胸腺肽)
微生态制品(促菌生)
2、按制备方法分类
普通制品 —— 利用一般生产方法制备的，
未经浓缩、纯化处理
精 制 品 —— 将原材料用物理或化学方法去除无效成分,
并进行适当浓缩
单价制剂 —— 只利用一种微生物的单一血清型
多价制剂 —— 利用一种微生物的若干血清型
第十三章 畜禽防疫
第一章 兽医生物制品概述
生物制品技术
• 是一种既古老而又充满时代信息的技术， 并与生命健康息息相关。
一、兽医生物制品的概念
根据免疫学原理，以微生物、寄生虫及其代 谢产物或免疫应答产物，以及动物组织等生物 材料为原料，通过生物学、生物化学或生物工
程学等方（法加b工i制o备lo的g一类ic生a物l制）剂。
兽医生物制品学.doc
兽医生物制品学：是以预防兽医学和生物工程学理论为基础，研究动物传染病和寄生虫病的免疫预防、诊断和治疗用生物行制品的制造理论和技术、生产工艺、制品质量检验与控制及保藏和使用方法，以增强动物机体特异性和非特异性免疫力，及时准确诊断动物疫病，并给予特异性治疗，防止疫病传播的综合性应用学科。
兽医生物制品：是根据免疫学原理，利用微生物、寄生虫及其代谢产物或免疫应答产物制备的一类物质，专供相应的疫病诊断、治疗或预防之用。
疫苗：凡接种动物后能产生自动免疫和预防疾病的一类生物制剂均称为疫苗，包含细菌性疫苗、病毒性疫苗和寄生虫行疫苗。
兽医生物制品学的应用：免疫预防；诊断；治疗生物制品安性质分类：疫苗、类毒素、诊断制品、抗病血清、微生物制剂、副免疫制品。
疫苗安抗原的性质和制备工艺分为：活疫苗、死疫苗、基因疫苗活疫苗与死疫苗的优缺点比较：活疫苗可以在免疫动物体内繁殖，能刺激机体产生全面的系统免疫反应和局部免疫反应；免疫力持久，有利于清除局部野毒；产量高，生产成本低。
但是该类疫苗残毒在自然界动物群体内持续传递后有毒力增强和返祖危险；有不同抗原的干扰现象；要求在低温、冷暗的条件下运输和储存。
死疫苗不能在免疫动物体内繁殖，比较安全，不发生全身性副作用，无毒力返祖现象；有利于多价或多联等混合疫苗；制备稳定，受外界环境影响小，有利于保存和运输。
但该类疫苗生产成本高，需多次免疫。
而且一般只能诱导机体产生体液免疫和免疫记忆，故常需用佐剂或携带系统来增强其免疫效果。
灭活：指破坏微生物的生物学活性、繁殖能力和致病性，但尽可能不影响其免疫原性。
或指破坏诊断血清或待检血清中的补体活性，以避免补体对诊断试验的干扰作用。
用于灭活微生物的化学试剂或药物。
微生物致弱：是指通过各种方法使病原微生物的致病性降低或丧失，但其它生物学活性以及免疫原性并未发生本质性改变。
灭活剂：用于灭活微生物的化学试剂或药物灭活剂的种类：1.甲醛溶液2.常用烷化剂：3.苯酚：4.结晶紫甲基青莲甲紫5.β-丙酰内酯影响灭活作用的因素（1）灭活剂特异性（2）微生物种类与特性（3）灭活剂浓度（4）灭活剂温度（5）灭活时间（灭活时间与灭活剂浓度和作用温度密切相关）（6）酸碱度（在微酸性时灭活速度慢，抗原性保持较好；碱性时灭活速度快，担抗原性易受破坏（7）有机物存在。
第一章 绪论(生物制品)
二、兽医生物制品的分类与命名原则
二、兽医生物制品的分类与命名原则
动物经反复多次注射同抗原后，
（二） 免疫 血清
血清中产生大量抗此种抗原的抗体， 高免血清 采集血液分产生免疫力快,但持续期
二、兽医生物制品的分类与命名原则
（三）诊断液（诊断制剂）
利用微生物、寄生虫及其代谢产物， 或者含有特异性抗体的血清制成的，供诊
第一章 绪论
本章内容
兽医生物制品学的概念 兽医制品的分类
我国兽医生物制品发展的历史与成就
兽医生物制品学的发展前景
一、兽医生物制品学的概念
生物制品：
利用微生物、寄生虫及其组分或代谢产物或免疫 应答产物制备的一类物质，用于传染病或其他有关疾 病的预防、诊断和治疗的生物制剂。
生物制品：WHO定义：效价或安全性检定仅凭物理 化学的方法或技术不足以解决问题而必须采用生
断动物传染病及寄生虫或检查动物免疫状
态以及鉴定病原微生物的生物制品。
二、兽医生物制品的分类与命名原则
（四）其他生物制品
1 非特异性免疫活性因子：白细 胞介素、干扰素、转移因子、 胸腺因子以及其他免疫增强剂。 血液制品：血浆、白蛋白、丙 种球蛋白、纤维蛋白原、胎盘 球蛋白。
2
二、兽医生物制品的分类与命名原则
瘤苗 基因工程苗 合成肽苗 抗独特型疫苗
基因工程苗： 合成肽苗： 抗独特性疫苗： 寄生虫疫苗： 灭活苗： 类毒素： 利用基因工程技术， 活苗： 常规疫苗： 一般灭活苗：菌,毒种 瘤苗： Nisonoff提 A..寄生虫病的危害, 1981年 按照病原微生物 取出微生物中编码保护 细菌的外毒素， 经大量培养后,灭活而 主要指弱毒活疫 由细菌、病毒、 出设想,用AB2 免疫动 以手术或活体检 慢性,不易察觉但损 保护性抗原决定簇 亚单位苗： 生态制剂： 性抗原肽段的基因，再 成。 用适当浓度（0.3— 苗，人工诱变获得 物 ， 必 然 产 生 AB3 。 立克次氏体、螺 失严重。 的氨基酸序列，人 将此基因与质粒等载体 查取出的肿瘤组织， 脏器灭活苗:利用病、 由正常微生物所 利用微生物的一 0.4%）的甲醛溶液 AB3和AB1一样能中和 的弱毒株或筛选的 死动物的含病原微生物 重组，导入受体菌或细 旋 体、支原体等 B.复杂的生活史,抗 工合成含有保护性 经射线、抗癌药物 制成的生物制品。 种或几种亚单位或 感染因子，用ＡＢ２作 脱毒而成的生物制 天然弱毒株或者失 脏器制成 胞，使之在受体菌或细 原复杂,高度多变. 抗原决定簇的短肽 完整微生物制成 为抗独特型疫苗，可以 或甲醛处理灭活后 亚结构制成的疫苗。 自家灭活苗：从病、死 品。经盐析、浓缩 去毒力的无毒株所 胞内高效表达，产生大 C.网尾线虫疫苗、 并连接于载体蛋白 激发对相应病原体的免 的疫苗。 动物分离培养病原体大 所制成的疫苗。 制成精制类毒素。 量保护性肽段，加佐剂 制成的. 疫力． 量培养制成的灭活苗 球虫疫苗 上所制成的疫苗
03第三章 生物制品的菌种与毒种(兽医生物制品学)
菌种和毒种在保存、传代和使用过程中，受各种因素影响而变异， 因此保证其遗传性状稳定是保证生物制品质量的重要因素之一。
微生物种是以群体形式存在，遗传学纯一性和相对稳定性是指群体变异幅度 必须有严格的限制。为保持种的纯一和相对稳定，生产生物制品的菌、毒种应通 过定期传代、筛选、检定等工作进行控制。
初选依据包括: ①细菌菌落特征变异，如菌落大小、形状，色泽、粗糙或 光滑称荧光等；②病毒蚀斑的变异；③对温度敏感性变异；④对药物敏感性变 异；⑤对营养要求变异，如对氨基酸的特殊需要；⑥对宿主动物易感性变异。 我国经过长期研究，育成了一些弱毒株作为疫苗种毒生产疫苗，在控制和消灭 动物疫病中发挥了重要作用。
例如，鸡新城疫出LaSota弱毒株和D10，是分别从自然鸡群和鸭群中分离 到的，然后再通过克隆、挑选等途径育成。鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒FC126株 即分离于火鸡，对鸡无致病性，其抗原性与鸡马立克氏病病毒一致。然而，微 生物自发突变率往往很低，形成具有稳定遗传性状的过程比较长，因此获得的 机率不高。
2.弱毒菌种和毒种的选育途径
弱毒菌（毒）种的选育
自然弱毒株的分离
人工诱变致弱
同源动物 (如NDV LaSota株)
异源动物 (如HVT FC126株)
化学途径
物理途径
生物途径
亚硝基胍 醋酸铊 洗衣粉
高温 紫外线
非易感动物 鸡胚、细胞
杂交减毒
1.自然弱毒株的选育
自然弱毒株又称自发突变毒株，由自然强毒株在自然因素作用下因 遗传基因突变形成了与祖代性状(特别是致病力和抗原性)不尽相同的生 物株。这些自然因素，如异种非易感动物、温度、日光、干燥、紫外线 等都可能是导致细菌和病毒自发突变的原因。因此，人们往往有意或无 意地从自然中分离、筛选和育成一些弱毒菌(毒)株，作为兽医生物制品 的种毒。
《兽医生物制品学实验》教学大纲
F109-10714-0
大纲修订人：王先炜
大纲审定人：姜 平
546
动物医学院本科课程教学大纲
《兽医生物制品学实验》教学大纲
一、基本信息
课程名称 英文名称 总学时 实验项目数 预修课程
课程简介
兽医生物制品学实验
课程编号
Experiment Technique of Veterinary Biologics
课程类型
36
学分
12 验证性实验个数
综合性实验个数
12
兽医微生物学、兽医免疫学
合计
学时
3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 36
四、实验内容及教学要求
实验一 细菌种子繁殖和规模化培养 本实验教学要求：了解细菌规模化培养的基本原理和基本操作方法；掌握细菌种子繁殖的基本过程和方法。 本实验重点、难点：一级、二级细菌种子的制备和细菌规模化培养。 实验二 鸡胚孵化和新城疫病毒增殖
545
动物医学院本科课程教学大纲
本实验教学要求：掌握鸡胚孵化的基本方法，鸡胚尿囊腔途径和绒毛尿囊膜途径接种病毒及其收获方法。 本实验重点、难点：鸡胚尿囊腔途径和绒毛尿囊膜途径接种病毒及其收获方法。 实验三 细胞培养 本实验教学要求：进一步认识和体会影响细胞培养的主要因素；学习和掌握鸡胚成纤维细胞的培养方法和细胞传 代培养的方法 本实验重点、难点：鸡胚成纤维细胞的制备和培养。 实验四 免疫佐剂的制备 本实验教学要求：掌握适用于不同灭活疫苗的白油佐剂的制备方法；了解用铝粉加烧碱合成法制备氢氧化铝胶的 方法。 本实验重点、难点：白油佐剂和弗氏佐剂的配制 实验五 生物制品的无菌检验、纯粹检验和活菌技数 本实验教学要求：学习和掌握生物制品无菌检验、纯粹检验和活菌计数的方法。 本实验重点、难点：生物制品无菌检验、纯粹检验和活菌计数。 实验六 病毒半数致死量和感染量测定 本实验教学要求：学习和掌握细胞半数感染量（TCID50）的测定方法，了解病毒鸡胚半数致死量（EID50）的测定 方法。 本实验重点、难点：生物制品无菌检验、纯粹检验和活菌计数。 实验七 生物制品的外源病毒检验 本实验教学要求：掌握禽类病毒活疫苗中外源性病毒的检测方法 本实验重点、难点：新城疫病毒活疫苗中外源性病毒的检测 实验八 冻干制品的物理性状检验及真空度和剩余水分的测定 本实验教学要求：学习冻干生物制品质量检验的内容和要求；认识冻干制品的物理性状；掌握冻干制品真空度和 剩余水分检测的原理和方法。 本实验重点、难点：冻干制品剩余水分和真空度的测定。 实验九 灭活疫苗的物理性状检验及甲醛和柳硫汞含量的测定 本实验教学要求：以油乳剂灭活疫苗为例，认识灭活疫苗特有的物理性状；掌握灭活疫苗的甲醛和柳硫汞含量测 定的原理和方法。 本实验重点、难点：灭活疫苗的甲醛和柳硫汞含量测定方法 实验十 兔病毒性出血症组织灭活疫苗的制备和检验 本实验教学要求：了解并掌握兔病毒性出血症组织灭活疫苗的制备方法，了解兔病毒性出血症组织灭活疫苗的检 验方法。 本实验重点、难点：兔病毒性出血症组织灭活疫苗的制备方法 实验十一 鸡新城疫病毒 HA 抗原的制备 本实验教学要求：熟练掌握 NDV 鸡胚培养和 HA 抗原的制备方法。 本实验重点、难点：鸡新城疫病毒 HA 抗原的制备方法。 实验十二 鸡传染性法氏囊病 AGP 抗原的制备和检验 本实验教学要求：了解鸡传染性法氏囊病 AGP 抗原的制备原理、方法和应用，掌握鸡传染性法氏囊病 AGP 抗原 的检验方法。 本实验重点、难点：鸡传染性法氏囊病 AGP 抗原的制备、检验。
兽医生物制品学 心得体会1000字
兽医生物制品学心得体会1000字第一篇兽医生物制品学是一门以实验动物学、生物化学、兽医微生物学、动物免疫学、预防普医学、生物工程学为支撑的综合性生物技术。
兽医生物制品学的内容包括疫苗，诊断液，免疫制品的研究、制造、检验等理论和操作技术。
兽医生物制品学的理论内容极其抽象，试验技术要求极其严格。
试验内容包括细菌和病毒的分离、培养、纯化、鉴定，免疫血清的制备与纯化技术等，还包括生物制品的纯净检验、效力检验、安全检验、物理性状检验、防腐剂和重金属检验、生物制品生产和研究单位污水的检验等。
现有的传统实验教学存在许多问题，如实验条件不具备、实验内容多、师资水平有限等，导致实验课上部分实验课程是教师给学生讲整个实验过程，学生只操作其中的部分内容，这样就造成学生对实验产生片面的认识，不利于对知识的把握，影响了学生技能的培养与提高。
目前，兽医生物制品技术没有实验指导书，其试验内容又与兽医微生物学、动物免疫学、预防兽医学相互交叉，而普医生物制品技术的理论和实验内容又是上述各学科的有机统-一。
强化实验教学过程中学生的生物安全意识，在兽医生物制品的研发和生产过程中，生物安全意识非常重要，要想做到安全就必须培养学生的无菌意识，学生无菌观念和无菌操作基本技能的培养是实验教学的关键环节。
从实验的准备工作中体会无菌意识，在实验教学准备工作中，让学生亲自按照各种器材使用性能的不同按要求进行灭菌。
在细菌和病毒等的培养、鉴定和免疫血清的制备、鉴定等实验操作过程中，让学生严格按无菌要求进行操作，体会无菌对实验结果的重要性。
从实验过程中掌握灭菌技术，灭菌有很多方法和要求:玻璃器材、金属器材既可采用高温高压流通蒸汽灭菌，也可采用高温干热灭菌，有些金属器材还可采用火焰灭菌或化学药品灭菌;使用布匹、纸张、棉花、纱布等包扎的器材、橡胶制品、棉制的无菌操作服、-.些耐高温的溶液等必须进行高温高压流通蒸汽灭菌;含有蛋白质、酶、抗生素的一些细胞培养液必须使用无菌膜过滤除菌;无菌操作室或超净工作台要使用紫外线照射或甲醛熏蒸、臭氧发生器灭菌并通人正压无菌过滤空气。
兽医生物制品学课件
利用微生物、寄生虫及其代谢产物， 或者含有特异性抗体的血清制成的，供诊 断动物传染病及寄生虫或检查动物免疫状 态以及鉴定病原微生物的生物制品。 诊断抗原：变态反应性抗原:纯蛋白衍生物 结核菌素（PPD）、布氏杆菌水解素。 血清反应性抗原 ：布氏、炭疽、鸡白痢等。
3.诊断血清：
多用抗原免疫羊、兔或其他动物制成
二、生物制品生产的申报与审批 1、实验室实验 2、田间实验 3、中间实验 4、区域实验 5、申报
6、审批 7、新制品试生产 8、申请转为正式生产 9、经兽药评审委员会再评价后，建设列 入规程的，发给正式生产批准文号
第四节 我国兽医生物制品事业的概况与成 就 ★ 1951 年 ， 成 立 了 兽 医 生 物 制 品 监 察 所 （1982年改名中国兽药监察所）。 ★猪瘟兔化弱毒苗属世界领先地位， ★马传贫弱毒苗、牛瘟疫苗、鸭瘟疫苗、 小鹅瘟疫苗、仔猪副伤寒苗属国际水平。 ★与发达国家相比仍有许多不足。
二、生物制品菌毒种的一般要求
1、来源（历史）清楚 ，资料完整 由中监所或中监所委托分管的单位负责 供应 2、生物学特性比较典型 菌、毒种的形态特征，培养特性， 对动物的病原性特点，引起细胞病变的 特征 生物化学、免疫学及血清学特性
3、血清型相符 与疫苗使用区的流行病原相符 4、遗传性状稳定
（1）灭活苗（死苗）
一般灭活苗：菌、毒种经大量培养后， 灭活而成。 脏器灭活苗:利用病、死动物的含病原微 生物脏器制成 自家灭活苗：从病、死动物分离培养病原 体大量培养制成的灭活苗
（2）活苗(弱毒苗)
主要指弱毒活疫苗，人工诱变获得的弱毒 株或筛选的天然弱毒株或者失去毒力的无 毒株所制成的 同源疫苗（homologous vaccines）用所要 预防的病原体制成。 异源疫苗(heterogenous vaccines)：火鸡疱 疹病毒疫苗、鸽痘病毒、麻疹苗
兽医生物制品学第三章灭活剂保护剂和免疫佐剂
三、影响灭活作用的因素
1、灭活剂特异性：石炭酸对真菌和病毒效果差，甲醛 最常用。 2、微生物种类和特性 3、灭活剂浓度（一定要适合） 4、灭活温度（具体不同病原体或毒素，其灭活时间和 温度不一致） 5、灭活时间 6、灭活PH值 7、有机物存在
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第二节 保护剂（稳定剂）
保护剂：又称稳定剂（stabilizer） ，是指一类能防止生 物活性物质在冷冻真空干燥时受到破坏的物质。（指对疫 苗生产、血清制备等） 保护剂用途（不同用途加不同保护剂, 主要针对活的微生 物或细胞）
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一些常用的冷冻干燥保护剂
分类
保护剂
复合物 糖类 盐类 醇类 酸类 聚合物
脱脂乳、明胶、蛋白质、蛋白胨、糊精、血清、甲基纤维素等 蔗糖、乳糖、麦芽糖、葡萄糖、果糖等 乳酸钙、谷氨酸钠、氯化钠、氯化钾、醋酸铵、硫代硫酸钠等 山梨醇、甘油、甘露醇、肌醇、木糖醇等 柠檬酸、酒石酸、氨基酸等 葡聚糖、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)等
佐剂（旧概念）：当一种物质先于抗原或与抗原混合或同 时注射于动物体内，能非特异性地改变或增强机体对该抗 原的特异性免疫应答,发挥其辅佐作用的物质.
以前作为佐剂使用时没有免疫原性，但现在有所改变，如 IL-2是佐剂和IL-8一类细胞因子佐剂却不一样, 具有免疫调 节和免疫增强作用,单独使用时却具有免疫原性。
毒素（TT）等；脂磷壁酸（LTA）；维生素B12等。
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氢氧化铝胶 (铝胶）
合成方法: （1）用铝粉加烧碱合成法
2Al(OH)3+12H2O+3H2SO4→Al2(SO4)3·18H2O A12(SO4)3·18H2O+6NaOH→2Al(OH)3+2Na2SO4+18H2O
兽医生物制品试题答案
«兽医生物制品学»试题标准答案一、简述常规疫苗的种类、特点答：常规疫苗主要分为两大类：灭活疫苗和活疫苗1．灭活疫苗：是将含有细菌或病毒的材料利用物理的或化学的方法进行处理，使其失去感染性或毒性而保留其免疫原性，接种机体后能产生自动免疫，预防疫病的一类生物制品。
一般由标准强毒或免疫原性优良的弱毒株作为菌（毒）种制成。
优点：①安全，不存在反组反强、散毒、从而造成新疫源的危险。
②易于保存、运输，不需要低温保存及特殊的运输条件。
③疫苗稳定，便于制备多价或多联苗。
④对母源抗体的干扰作用不敏感。
缺点：①产生免疫力慢，不适宜用于紧急接种，由于灭活苗不能在体内增殖和复制，所以产生免疫力慢，接种后２—３周，不适宜紧急预防。
②免疫途径受限制，一般必须注射。
③不加佐剂的灭活苗免疫效果较差，免疫期短。
原因：由于灭活过程的影响，抗原成分受到一定程度的破坏。
④不产生后部免疫；主要激发体液免疫，引起细胞介导免疫的能力较弱。
⑤用量大、价格较贵。
（２）活苗：是利用通过人工诱变获得的弱毒株或筛选出的自然弱毒株所制成的疫苗。
弱毒株对原宿主动物丧失治病力，或只因起亚临床感染，但仍保持良好的免疫原性和遗传特性。
优点：①产生免疫力快。
②可采用多种途径进行免:③可引起较为全面的免疫应答反应:④生产成本低，价格低廉。
缺点：①具有毒力返强、返祖的危险性：②部分疫苗存在着残余毒力问题：③存在不同抗原间及母源抗体的干扰问题：④要求在低温、冷暗条件下运输、储存；⑤疫苗污染的危险：在生产过程中造成其它病毒的污染。
二、单价疫苗、多价疫苗和多联疫苗有何不同？答：单价苗：利用同一种微生物菌（毒）株或同一种微生物中的单一血清型菌（毒）株的培养物所制备的疫苗。
单价苗对单一血清型病原体所致的疾病有免疫保护功能。
但在有多种血清型病原体所致的疾病中仅对相应型有保护作用，而不能使免疫动物获得安全有效的免疫保护。
多价疫苗：指用同一种微生物中的若干血清型菌（毒）株的培养物而制备的疫苗。
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兽医生物制品学第一讲绪论一、兽医生物制品学的概念1、兽医生物制品学（veterinary biologicology）以预防兽医学和生物工程学理论为基础，研究动物传染病和寄生虫病的免疫预防、诊断和治疗用生物性制品的制造理论和技术、生产工艺、制品质量检验与控制及保藏和使用方法，以增强动物机体特异性和非特异性免疫力，及时准确诊断动物疫病，并给予特异性治疗，防止疫病传播的综合性应用学科。
2、兽医生物制品(veterinary biologics)是根据免疫学原理，利用微生物、寄生虫及其代谢产物或免疫应答产物制备的一类物质，专供相应的疫病诊断、治疗或预防之用。
二、兽医生物制品学的应用：免疫预防、诊断、治疗1、免疫预防：18-19世纪,牛瘟在法国和南美引起大量牛只死亡；牛肺疫曾在亚非地区包括我国广泛流行；1956年周泰冲、袁庆志等研制成功的中国系（C系）猪瘟兔化弱毒疫苗。
口蹄疫多价灭活疫苗已被成功应用，特别是口蹄疫在欧洲的控制和扑灭、其中部分应归功于O型、A型、C型口蹄疫三价灭活疫苗的有效应用。
2、诊断：猪瘟、猪伪狂犬病、鸡新城疫及传染性法氏囊病等ELISA抗体检测试剂盒已在普遍使用。
3、治疗：有些动物传染病的免疫血清、痊愈血清和卵黄抗体等生物制品具有帮助动物机体杀死、抑制或消除病原体的致病作用。
三、生物制品的发展史（一）经验时期时间：十一世纪-1798年主要事件：1、十一世纪我国的“痘症防御法”。
2、1400年，我国甘肃牧区的“灌花”预防牛瘟。
（二）实验时期时间：1798年-1945年主要事件：1、1798年Jenner（秦纳）：天花疫苗的由来及效果的研究。
2、疫苗技术研究：1881－1885Pasteur(巴斯德）培养鸡霍乱陈旧物、高温培养炭疽、兔体传代狂犬病毒，首创弱毒疫苗。
1886Salmon首创灭活技术并培育成功灭活疫苗。
1888外毒素的脱毒技术，研制成功类毒素。
1890 德国人Behring和日本人北里（Kitasato）将白喉外毒素注射给动物，发现抗毒素。
这是第一次用人工被动免疫的方法治疗疾病的病例。
荣获1901年诺贝尔奖3、免疫技术：相继建立凝集实验（1896，Gruber and Durham)、沉淀实验（1897，Kraus）、补体结合反应（1900,Bordet and Gengou）。
4、免疫机理：①细胞免疫学说－研究白细胞、吞噬细胞。
②体液免疫学说－研究抗体、补体。
（三）近代时期时间：1930年－1960年。
主要事件：1、1930年，Tiselius和Kabat电泳鉴定抗体是γ-球蛋白2、1959年，Porter和Edelman对抗体结构进行了研究，证明是四肽链组成，借二硫键连接在一起3、建立了更多的免疫学技术：间接血凝实验、凝胶扩散实验、免疫标记技术。
（四）分子生物学时期时间：1960年－现在主要事件：1、20世纪70年代，日本的利根川进等应用分子杂交技术证明并克隆出Ig分子V区和C区基因。
1987年诺贝尔医学奖2、1975年，英国剑桥Kohler和Milstein发明了杂交瘤技术与丹麦人耶那共获1984年诺贝尔医学奖（生物导弹）1994年以来，已经有13种单克隆抗体通过FDA的批准在临床上应用于抗肿瘤、抗凝血反应以及治疗各种免疫系统疾病3、分子生物学的兴起，从基因水平揭示了抗体多样性产生的机制（麦克林托克与转移基因）4、20世纪80年代早期兴起基因工程抗体5、1994年美国Cell Genesys公司和Genpharm国际公司宣布转基因小鼠作为生产全抗体的载体问世。
四、兽医生物制品的分类（一）按生物制品性质分类1.疫苗（vaccine）2.类毒素（toxoid）3.诊断制品（diagnostic preparation）4.抗病血清（antiserum）5.微生态制剂（probiotics）6.副免疫制品（paraimmunity prepariations）（二）按生物制品制造方法和物理性状分类1.普通制品2.精制生物制品3.液状制品4.干燥制品5.佐剂制品———————————————————————————————————————TIPS:一、疫苗（vaccine）1、凡接种机体后能产生自动免疫和预防疾病的一类生物制剂均称为疫苗。
●细菌性菌苗●病毒性疫苗●寄生虫性虫苗●治疗性疫苗（肿瘤、过敏和一些传染性疾病）●生理调控疫苗（如促进生长和控制生殖等）2、根据疫苗抗原的性质和制备工艺，疫苗又分为：活疫苗（live vaccine ）、死疫苗（killed vaccine ）、基因疫苗（genetic vaccine ）。
（一种疫病究竟以哪类疫苗最为有效可行，取决于该疫病特点，包括流行病学、病原理化特性、致病机理和免疫特点以及各种技术手段是否可行。
）二、类毒素（toxoid ）1、又称脱毒毒素，是指细菌生长繁殖过程中产生的外毒素，经化学药品（甲醛）处理后，成为无毒性而保留免疫原性的生物制剂。
2、于类毒素中加入适量磷酸铝或氢氧化铝等吸附剂吸附的类毒素即为吸附精制类毒素。
三、微生态制剂（probiotics ）1、又称益生素、活菌制剂或生菌剂。
2、是用非病原性微生物，如乳酸杆菌，醋样芽胞杆菌、地衣芽胞杆菌或双歧杆菌等活菌制剂，口服治疗畜禽正常菌群失调引起的下痢。
3、饲料添加剂。
——————————————————————————————————————— 五、生物制品命名原则1. 一般采用“动物种名+病名+制品名称”的形式2. 共患病一般可不列动物种名3. 由两种以上的病原体制成的一种疫苗，命名采用“动物种名+若干病名+×联疫苗“的形式。
4. 由两种以上血清型制备的一种疫苗，命名采用“动物种名+病名+若干型名+×价疫苗”的形式。
六、我国兽医生物制品的历史与成就● 1930建立实业部青岛商品检验局青岛血清制造所和1931建立上海商品检验局血清制造所● 50年代初，建立9个兽医生物制品厂，组建了国家兽医药品监察所，制定多种生物制品的制造和检验规程。
● 牛瘟兔化弱毒苗，牛肺疫兔化弱毒苗● 马传贫驴白细胞活疫苗 （哈兽研 沈荣显院士） ● 80年代以来，禽用疫苗发展迅速 ● 研制了多种疾病的灭活疫苗● 基因工程技术应用到疫苗研究领域● 除疫苗外的其它兽医生物制品的研究拓宽了兽医生物制品的领域 ● 大型冷冻干燥机为高质量生物制品国产化创造了物质条件 ● 诊断技术和制品发挥重要作用活疫苗(live vaccine) 弱毒疫苗(attenuated vaccine)基因缺失疫苗(gene deleted vaccine) 基因工程活载体疫苗(genetic engineering live vector vaccine) 病毒抗体复合物疫苗(virus-antibody complex vaccine) 死疫苗 (killed vaccine) 基因疫苗(genetic vaccine)：又称DNA 疫苗或核酸疫苗 灭活疫苗(inactivated vaccine)化学合成亚单位疫苗(chemical subunit vaccine) 基因工程亚单位疫苗(genetic engineering subunit vaccine) 抗独特型抗体疫苗(anti-idiotype vaccine)●到2001年，我国兽医生物制品共有188种，灭活苗56种，活疫苗57种，抗血清7种，诊断制品61种，其它制品7种。
●规范了兽医生物制品生产、组织管理制度●建立了兽医生物制品的管理、监督检察机构●逐渐制定和完善了兽医生物制品的行政法规七、兽医生物制品学的发展前景●传统疫苗仍占主导地位，多联多价疫苗更受青睐●改进疫苗质量，提高免疫效果，研究和开发新出现传染病的疫苗倍受关注●以分子生物技术为基础，研制新型疫苗是新世纪疫苗研究的一个主导方向●常规诊断试剂标准化、新诊断技术实用化●微生态制剂、寄生虫虫苗与鱼用疫苗的研制将拓宽兽医生物制品的范围●加快兽医生物制品GMP建设，迎接WTO新挑战●进一步完善法规，加强兽医生物制品管理第二讲抗原（antigen，Ag）§1、抗原的概念1.概念：能刺激机体免疫系统启动免疫应答，并能与相应的免疫应答产物在体内或体外发生特异性结合的物质，即抗原。
2. 特性（1）免疫原性（2）免疫反应性———————————————————————————————————————相关名词术语：●半抗原：只有免疫反应性，而无免疫原性的小分子物质。
如药物、多糖、类脂等。
●载体：赋予半抗原具有免疫原性的蛋白质分子，即为载体。
●半抗原结合某些蛋白质抗原（完全抗原）●载体(Carrier，C) ：大分子，Pro.等●半抗原(Hapten，H)：H1、H2、H3 ……●完全抗原(Ag) = C + nH ———————————————————————————————————————§2、影响抗原分子免疫原性的因素一、异物性1.抗原与自身成分相异（异种物质、异体物质）2.未与宿主胚胎期免疫细胞接触过的自身物质。
（隔绝的自身成分和修饰的自身成分）二、理化状态（1）化学性质：●天然抗原多为大分子有机物。
一般蛋白质是良好的抗原。
●多糖及多肽也具有一定的免疫原性。
（2）分子量大小：要求分子量一般在10.0kD以上。
（3）化学结构的复杂性：必须有较复杂的化学组成和特殊的化学基团（要含有大量的芳香族氨基酸）。
（4）物理状态：聚合状态的蛋白质较其单体免疫原性强，颗粒性抗原强于可溶性抗原。
（5）分子结构和易接近性：● 分子结构是指抗原分子中一些特殊化学基团的立体构象。
● 易接近性是指抗原表面这些特殊的化学基团与淋巴细胞表面相应受体相互接触的难易程度。
● 易接近性常与这些化学基团在抗原分子中分布的部位有关。
三、机体因素● 遗传、年龄、生理状态、个体差异等因素 ● 抗原进入机体的方式和途径也有关 四、抗原进入机体的方式抗原进入机体的数量、途径、两次免疫间的时间间隔、次数以及免疫佐剂类型等都影响 机体对抗原的应答。
§3、 抗原的特异性与交叉反应● 特异性既表现在免疫原性上，也表现在免疫反应性上。
● 特异性的物质基础是抗原表位或抗原决定簇。
一、表位或抗原决定簇 1、概念表位（epitope ）或抗原决定簇（antigenic determinant ）是指存在于抗原分子中决定抗原特异性的特殊化学基团。
其性质、数量和空间构象决定了抗原的特异性。
2、3、表位是免疫细胞识别的标志及免疫反应具有特异性的物质基础。
§4、医学上重要的抗原物质 一、病原微生物及其代谢产物● 各种病原微生物的化学组成复杂，是含有多种抗原决定簇的复合物。