实验一 还原糖和总糖的测定-3,5-二硝基水杨酸比色法
实验二十还原糖和总糖含量的测定—35-二硝基水杨酸比色定糖法
实验二十还原糖和总糖含量的测定—3、5-二硝基水杨酸比色定糖法目的要求1、掌握3，5-二硝基水杨酸比色法定糖的原理及方法。
2、用3，5-二硝基水杨酸定糖法测定山芋粉中的总糖及还原糖。
3、熟悉721型光电比色计的原理及使用方法。
实验原理3，5-二硝基水杨酸在强碱溶液中与还原糖在沸水浴中共热后被还原成棕红色的氨基化合物，在一定范围内，还原糖的量和反应液的颜色强度呈比例关系，利用比色法可测知样品的含糖量。
该方法是半微量定糖法，操作简便，快速，杂质干扰较少。
试剂和器材1.试剂（1）6mol/L盐酸溶液、10%氢氧化钠溶液、碘化钾-碘溶液（碘试剂）、酚酞指示剂、85%乙醇。
（2）3，5-二硝基水杨酸试剂（又称DNS试剂）：甲液——溶解6.9g结晶酚于15.2ml 10%氢氧化钠中，并稀释至69ml，在此溶液中加入6.9g亚硫酸氢钠。
乙液——称取255g酒石酸钾钠，加到300ml 10%氢氧化钠中，再加入880ml 1%的3，5-二硝基水杨酸溶液。
将甲液与乙液相混合即得到黄色试剂，贮于棕色试剂瓶中，在室温下，放置7～10d以后使用。
（3）0.2%葡萄糖标准液：准确称取200mg分析纯的葡萄糖（预先在70℃干燥至恒重），用少量蒸馏水溶解后定容至100ml，冰箱保存备用。
2.器材试管和试管架、碱滴定管（50ml）、铁架台、滴定管夹、移液管（1ml，2ml）、移液管架、容量瓶（100ml）、铜水浴锅、玻璃漏斗、烧杯、铁三脚架、量筒（10ml、100ml）、电热恒温水浴、煤气灯、玻璃棒、白瓷板、721型分光光度计。
操作方法1.葡萄糖标准曲线的制定取9支刻度试管（25ml）或血糖管，分别按下表顺序加入各种试剂：DNS试剂1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5（ml）加热均在沸水浴中加热5min冷却立即用流动冷水冷却蒸馏水（ml）21.5 21.5 21.521.521.521.521.521.5 21.5 将上述各管溶液混匀后，在721型分光光度计上进行比色测定，用空白管溶液调零点，记录光密度值,以葡萄糖浓度为横座标，光密度值为纵座标绘制出标准曲线。
DNS比色法测定还原糖和总糖
DNS⽐⾊法测定还原糖和总糖还原糖和总糖的测定(3,5-⼆硝基⽔杨酸⽐⾊法)⼀、实验⽬的1、掌握还原糖和总糖测定的基本原理2、学习⽐⾊法测定还原糖的操作⽅法和分光光度计的使⽤⼆、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本⽅法。
还原糖是指含有⾃由醛基或酮基的糖类。
单糖都是还原糖，双糖和多糖不⼀定是还原糖，例如乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是⾮还原糖。
利⽤各种糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来。
对⾮还原性的双糖和多糖，可⽤酸⽔解法使其降解成还原性单糖进⾏测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量(常以葡萄糖含量计)。
还原糖在碱性条件下加热可被氧化成糖酸及其它产物，⽽氧化剂3,5-⼆硝基⽔杨酸则被还原为棕红⾊的3-氨基-5-硝基⽔杨酸。
在⼀定范围内，还原糖的量与棕红⾊物质颜⾊的深浅成正⽐关系，利⽤分光光度计在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖⽔解为单糖时，每断裂⼀个糖苷键需加⼊⼀分⼦⽔，所以在计算多糖含量时应乘以系数0.9。
三、实验材料和试剂1、实验材料⾯粉2、实验试剂①1mg/ml葡萄糖标准液准确称取80℃烘⾄恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于⼩烧杯中，加少量蒸馏⽔溶解后，转移到100ml容量瓶中，⽤蒸馏⽔定容⾄100ml，混匀，4℃冰箱中保存备⽤。
②3,5-⼆硝基⽔杨酸(DNS)试剂将6.3g DNS和262ml 2M NaOH溶液，加到500ml含有185g酒⽯酸钾钠的热⽔溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏⽔定容⾄1000ml，贮于棕⾊瓶中备⽤。
③碘-碘化钾溶液：称取5g碘和10g碘化钾，溶于100ml蒸馏⽔中。
④酚酞指⽰剂：称取0.1g酚酞，溶于250ml 70%⼄醇中。
⑤6M HCl和6M NaOH各100ml。
四、实验器材具塞璃玻刻度试管：20ml×11 ⼤离⼼管：50ml×2烧杯：100ml×1 三⾓瓶：100ml×1容量瓶：100ml×3 刻度吸管：1ml×1；2ml×2；10ml×1恒温⽔浴锅沸⽔浴离⼼机扭⼒天平分光光度计五、操作步骤1、制作葡萄糖标准曲线取7⽀具塞刻度试管编号，按表1分别加⼊浓度为1mg/ml的葡萄糖标准液、蒸馏⽔和DNS试剂，配成不同浓度的葡萄糖反应液。
总糖和还原糖的测定
朗伯－比尔（Lambert-Beer）定律
朗伯－比尔定律是比色分析旳基本原理， 这个定律是有色溶液对单色光旳吸收程度与 溶液及液层厚度间旳定量关系。此定律是由 朗伯定律和比尔定律归纳而得。
A或D=㏒I0/I
A或D＝光吸收或光密度
I0 ＝入射光强度 I ＝透射光强度
三、试剂和器材
试剂：
DNS试剂 葡萄糖原则溶液 ； 6M HCl；碘－碘化钾溶液； 6M NaOH；0.1% 酚酞指示剂。
材料
藕粉，玉米淀粉
器材
容量瓶,试管，移液管，量 筒，胶头滴管，漏斗
50℃水浴，沸水浴，分光 光度计等。
四、操作环节
1.葡萄糖原则曲线制作 2.还原糖旳提取
藕粉改为称1.0克，50℃水浴20min浸出， 水浴锅中进行 3.总糖旳水解及提取 玉米淀粉测总糖，沸水浴20min酸水解，电 磁炉中进行 4.样品含糖量旳测定
试验三 总糖和还原糖旳测定
——3,5二硝基水杨酸(DNS)法
一、目 旳
掌握还原糖和总糖旳测定原理 掌握分光光度计旳使用
二、原 理
还原糖：指具有自由醛基或酮基旳糖类
单糖: 不能被水解成更小分子旳糖,单糖都是还原糖 葡萄糖, 果糖
寡糖: 最主要旳是双糖：Maltose（麦芽糖 ）,Sucrose（蔗糖） Lactose（乳糖 ） 但Sucrose不是还原糖 多糖: 能水解成多种单糖分子,如淀粉,糖原和纤 维素
样品旳透射比或吸光度值。样品读数三遍，取平均值。 7).使用分光光度计时带测定样品、洗瓶、废液杯、笔和本。
移液器旳使用手法，两档位
吸液
放液
八、思索题
1.比色时为何要设计空白管？
3,5-二硝基水杨酸比色法-还原糖和总糖的测定
3,5-二硝基水杨酸比色法-还原糖和总糖的测定3,5-二硝基水杨酸比色法是一种常用的测定还原糖和总糖含量的方法。
本文将介绍该方法的操作步骤、原理及注意事项。
一、操作步骤1. 样品制备：精确称取适量糖样品，加入足量去离子水稀释至1 mL，摇匀。
2. 试剂制备：(1) Na2CO3试液：称取0.5 g Na2CO3加入50 mL去离子水中，溶解并稀释至1 L。
(2) 3,5-二硝基水杨酸(DNS)重量浓度为1 g/L的甲醛溶液：按比例称取适量DNS和甲醛，在去离子水中稀释制成重量浓度为1 g/L的甲醛溶液。
3. 测定步骤：(1) 取3个试管，编号为A、B、C，并进行空白对照。
将A、B、C试管分别加入0.1 mL 样品，每个试管中加入相同量的0.9 mL去离子水。
在空白试管中加入相同量的去离子水代替样品。
(2) 在A试管中加入0.5 mL Na2CO3试液，摇匀。
(3) 将B试管浸于沸水中加热3-5分钟，使其中的还原糖完全还原。
(4) 在A、B两样品试管中加入0.5 mL甲醛溶液，摇匀并置于60℃水浴上加热10分钟。
(6) 加入1.5 mL水后，在空白对照试管和样品试管中均加入0.5 mL DNS溶液，摇匀。
(7) 在95℃水浴加热10分钟，并立即冷却至室温。
(8) 测量吸光度值，通过标准曲线计算样品中还原糖或总糖含量。
二、原理还原糖或总糖与Na2CO3在典型的碱性条件下发生醛基反应，把碳水化合物中的亲电基转化为醛基，再将其还原为对应的醇，生成糖醇和尿素等。
然后，在碱性条件下，醛基与3,5-二硝基水杨酸(DNS)反应，发生环化，生成糖醛酸化合物，这些化合物在pH9.0以下表现为桥形分子，具有紫色的吸收峰。
在高温条件下，DNS与糖醛酸化合物相结合，形成柿子色化合物，进一步增加吸收光的强度。
还原糖或总糖的含量可以通过比较样品的吸光度值和标准曲线来测定。
三、注意事项1. 避免试管附着并确保试管内部表面干净。
3,5-二硝基水杨酸法测定山楂片中还原糖和总糖含量
3,5-二硝基水杨酸法测定山楂片中还原糖和总糖含量3,5-二硝基水杨酸法是一种常用的测定还原糖和总糖含量的方法，其原理基于还原糖在酸性条件下与3,5-二硝基水杨酸反应生成红色化合物，而总糖则在强硫酸存在下加热分解，生成由葡萄糖和六碳糖等组成的还原糖，在酸性条件下与3,5-二硝基水杨酸反应生成红色化合物。
具体操作步骤如下：1. 取一定质量的山楂片粉末，加入适量的蒸馏水，加热水浴至沸腾，过滤，将过滤液冷却至室温。
2. 取0.2 ml 过滤液，加入2 ml 3,5-二硝基水杨酸溶液，摇匀后在60摄氏度恒温水浴中反应10分钟，然后放冷。
3. 吸收液的吸光度在515 nm处测定，还原糖含量的计算公式为：还原糖含量（%)= (As–A0)/(有效光程×C×0.88)×100，其中As为样品吸光度，A0为空白试剂吸光度，有效光程为1 cm，C为样品初始体积，0.88为还原糖的摩尔吸光系数。
4. 取剩余过滤液，加入相当于5倍于样品初始体积的浓硫酸，浸于沸水中煮2小时，浸于水中冷却，并用蒸馏水将瓶口水洗入容量瓶，摇匀。
5. 取0.1ml 还原糖水样稀释液加入容量瓶，加入相当于5倍于样品初始体积的浓硫酸，摇匀后加入适量的蒸馏水到刻度线，摇匀后离心。
6. 取0.1 ml 离心上清液，加入2 ml 3,5-二硝基水杨酸溶液，摇匀后在60摄氏度恒温水浴中反应10分钟，然后放冷。
7. 吸收液的吸光度在515 nm处测定，总糖含量的计算公式为：总糖含量（%)= (As–A0)/(有效光程×C×0.88)×100，其中As为样品吸光度，A0为空白试剂吸光度，有效光程为1 cm，C为样品初始体积，0.88为还原糖的摩尔吸光系数。
总之，3,5-二硝基水杨酸法是一种稳定可靠的方法，能够准确测定山楂片中的还原糖和总糖含量，为山楂片的质量控制提供了重要的参考。
实验一 总糖和还原糖的测定
实验一总糖和还原糖的测定（3，5-二硝基水杨酸法）171850044钱诗晨一、实验目的掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用3，5-二硝基水杨酸法测定还原糖的方法。
二、实验原理单糖和某些寡糖含有游离的醛基或酮基，有还原性，属于还原糖；而多糖和蔗糖等属于非还原性糖。
利用多糖能被酸水解为单糖的性质可以通过测定水解后的单糖含量对总糖进行测定。
还原糖在碱性条件下被氧化成糖酸及其他产物，3，5-二硝基水杨酸（DNS）则被还原为红棕色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈橘红色，在540nm处一定浓度范围内还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量和总糖的含量。
三、实验器材1.面粉2.试管3.吸管4.水浴锅5.电炉6.紫外可见分光光度计7.PH试纸8.容量瓶9.量筒、研体、三角烧瓶、玻璃漏斗10.电子分析天平面粉里含多糖淀粉，遇碘变蓝四、实验试剂1.标准葡萄糖溶液（1.0mg/ml）：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，溶于蒸馏水并定容至100ml，混匀，4℃冰箱中保存备用。
2.3，5-二硝基水杨酸（DNS）试剂:将6.3gDNS和262ml2mol/L NaOH溶液，加到500ml含有185g酒石酸甲钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000ml贮于棕色瓶中备用。
3.6mol/L HCl:取250ml浓HCl(35%~38%),用蒸馏水稀释到500ml。
4.6mol/L NaOH：称取24g NaOH溶于蒸馏水并稀释至100ml。
5.碘—碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。
五、实验操作1.葡萄糖标准溶液曲线的制作取干净试管6支，按表7进行操作。
以吸光度为纵坐标，各标准液浓度（mg/ml）为横坐标作图得标准曲线2.样品中还原糖的提取和测定准确称取1.0g红薯粉，加蒸馏水约10ml，在研体中磨成匀浆，转入三角烧瓶中，并用约30ml的蒸馏水冲洗研体2~3次，洗出液也转入三角烧瓶中。
生 化 实 验
(3) 0.10mo1/L醋酸溶液100mL
(4) 0.01mo1/L醋酸溶液50mL
（5）0.5%酪蛋白溶液（以0.01M NaOH作溶剂）100ml
（6）0.01%溴甲酚绿指示剂
（7）0.02mo1/L氢氧化钠溶液100ml
（8）0.02mo1/L盐酸溶液100ml
1.00N醋酸溶液（ml）2.4————
0.1N醋酸溶液（ml）—4.01.0——
0.01N醋酸溶液（ml）———2.50.62
酪蛋白醋酸钠溶液（ml）1.01.01.01.01.0
溶液的最终pH3.24.14.75.35.9
沉淀出现的情况
（2）静置约20分钟，观察每支试管内溶液的混浊度，以“—、＋、＋＋、＋＋＋、＋＋＋＋”符号表示沉淀的多少。根据观察结果，指出哪一个是酪蛋白的等电点。
茚三酮反应分为两步，第一步是氨基酸被氧化形成CO2。
NH2和醛，水合茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是所
形成的还原型茚三酮同另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成
有色物质。此反应的适宜pH为5—7，同一浓度的蛋白质或氨基酸
在不同pH条件下的颜色深浅不同，酸度过大时甚至不显色。
(13) 2％氯化钡溶液150mL
四、实验操作
1、蛋白质的盐析
中性无机盐(硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等)的浓溶液能析出蛋白质。盐的浓度不同，析出的蛋白质也不同。如球蛋白可在半饱和硫酸铵溶液中析出，而清蛋白则在饱和硫酸铵溶液中才能析出。由盐析获得的蛋白质沉淀，当降低其盐类浓度时，又能再溶解，故蛋白质的盐析作用是可逆过程。
4、有机溶剂沉淀蛋白质
取1支试管，加入2mL蛋白质溶液，再加入2mL 95％乙醇，混匀，观察沉淀的生成。
实验一35二硝基水杨酸比色法还原糖和总糖的测定
实验一还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法一、实验目的掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
三、实验材料、主要仪器和试剂1．实验材料小麦面粉；广范pH试纸。
2．主要仪器（1）大试管：2×20cm×14（2）烧杯：100mL×3（3）三角瓶：100mL×1（4）容量瓶：100mL×3（5）移液管：1mL×3；2mL×2；10mL×4（6）吸耳球、玻璃棒（7）恒温水浴锅（8）漏斗、滤纸（9）白瓷缸、电炉（10）精度天平（11）分光光度计3．试剂（已制备）（1）1mg/mL葡萄糖标准液准确称取90℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。
（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂将6.3g 3,5-二硝基水杨酸（DNS）和2mol\L NaOH溶液262mL，加到500mL含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g重蒸酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中，7-10天后才能使用。
还原糖和总糖的测定
生物化学综合实验报告题目：3，5—二硝基水杨酸比色法测定还原糖和总糖姓名：学号：同组成员：分院(系）：专业班级：指导教师:完成日期：年月日1。
实验目的用比色法测定山芋中还原糖和总糖含量2。
实验原理先用已知浓度的葡萄糖标准溶液与DNS反应测其分光度，制得标准曲线，在测山芋中糖与DNS反应后的分光度A从而得其总糖和还原糖含量。
3。
实验仪器和试剂试剂：1g/L葡萄糖标准液、3,5-二硝基水杨酸、6mol/L HCl，6mol/L NaOH仪器:25，100ml容量瓶、1，5ml吸量管、50ml移液管、100ml 量筒、试管、滴管、离心管、玻璃棒、洗耳球、100ml容量瓶、比色皿离心机、分光光度计、恒温水箱4。
实验步骤一、取六只比色管向其中加入葡萄糖标液0、0。
2、0。
4、0.6、0。
8、1.0毫升在加入蒸馏水2。
0、1.8、1。
6、1。
4、1.2、1.0毫升，最后向其中各加入DNS试剂1。
5毫升混合均匀后100摄恒温水浴5min，冷却后加入蒸馏水至25ml刻度线，用1号样调零，测其分光度，制得标准曲线。
二、还原糖提取：取3g山芋粉，加入30ml水，搅匀后在50摄水中保温20min，离心，取滤液,用100ml容量瓶定容得还原糖待测液.总糖提取：取0.2克山芋粉，加入试管中吸取5ml HCL溶液，8ml蒸馏水搅匀,100摄下恒温水浴30min，冷却,NaOH调节PH至中性,离心,滤液用100ml容量瓶定容，得总糖待测液.测定时取5支比色管分别加入还原糖0、1。
0、1。
0、0、0毫升，总糖0、0、0、0.5、0。
5毫升,蒸馏水2。
0、1。
0、1。
0、1。
5、1。
5毫升,DNS试剂1.5毫升100摄恒温水浴5min后冷却，稀释至25毫升用一号管调节分光度为0，测总糖和还原糖的分光度.5数据处理葡萄糖标准曲线表管号0 1 2 3 4 5 含糖总量（mg）0 0.2 0。
4 0。
6 0。
8 1 葡萄糖标液(ml）0 0.2 0.4 0。
实验一35二硝基水杨酸比色法还原糖和总糖的测定
百度文库- 让每个人平等地提升自我实验一还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法一、实验目的掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以。
三、实验材料、主要仪器和试剂1．实验材料小麦面粉；广范pH试纸。
2．主要仪器（1）大试管：2×20cm×14（2）烧杯：100mL×3（3）三角瓶：100mL×1（4）容量瓶：100mL×3（5）移液管：1mL×3；2mL×2；10mL×4（6）吸耳球、玻璃棒（7）恒温水浴锅（8）漏斗、滤纸（9）白瓷缸、电炉（10）精度天平（11）分光光度计3．试剂（已制备）（1）1mg/mL葡萄糖标准液准确称取90℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。
（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂将3,5-二硝基水杨酸（DNS）和2mol\L NaOH溶液262mL，加到500mL含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g重蒸酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中，7-10天后才能使用。
番薯还原糖和总糖含量的测定
番薯还原糖和总糖含量的测定却志群;易文奇;陈纪鹏;吴姜澳【摘要】为了测定比较不同品种番薯的含糖量,以两种番薯品种(紫心番薯、白心番薯)为材料,利用3,5-二硝基水杨酸(DNS)比色法分别测定其还原糖和总糖的含量.结果表明,紫心番薯的还原糖含量是11.69％,白心番薯的还原糖含量为7.94％,还原糖含量紫心番薯高于白心番薯;而它们的总糖含量分别为:21.30％、16.05％,紫心番薯的总糖含量仍高于白心番薯的总糖含量.为不同品种番薯后期的合理加工利用提供参考.【期刊名称】《宜春学院学报》【年(卷),期】2016(038)012【总页数】4页(P85-88)【关键词】3,5-二硝基水杨酸(DNS);番薯;总糖;还原糖【作者】却志群;易文奇;陈纪鹏;吴姜澳【作者单位】宜春学院生命科学与资源环境学院,江西宜春336000;宜春学院化学与生物工程学院,江西宜春336000;宜春学院生命科学与资源环境学院,江西宜春336000;宜春学院生命科学与资源环境学院,江西宜春336000【正文语种】中文【中图分类】S565.4番薯 (学名:Ipomoea batatas(L.)Lam.)属管状花目，旋花科一年生草本植物，又名红玉、甘薯等。
它富含蛋白质、果胶、纤维素等多种营养物质，有预防肺气肿、保护心脏、抗癌等功效，被人们称为“抗癌大王”和“长寿食品”［1］。
随着现代社会食品观念由“饱餐型”向“营养型”的转变，番薯日渐受到人们的青睐，需求量也日益增加，市场上呈现周年供应的现象。
番薯中糖含量的高低，直接影响其口味和营养价值［2］。
同时，其还原糖含量的高低更影响后期地加工，比如:番薯片和番薯饼干制作中，番薯自身还原糖含量太高是不利于其加工和改造的。
另外，在社会经济不断发展的背景下，人们的生活水平得到了进一步的提高，糖的摄入量也成为人们生活中一个关注点。
科学研究显示，过量摄入糖分易引起肥胖、龋齿以及糖尿病等，食物含糖量测定工作的重要性日益凸显。
总糖和还原糖的测定
总糖和还原糖的测定（3,5—二硝基水杨酸法）实验报告前言糖在我们日常生活中随处可见，我们吃的米饭、水果、零食中或多或少都含有一些糖类。
同时，糖也是我们维持机体运动所必不可少的物质，没有了它，就没有了能量的来源。
我们这次便走进实验室探索糖类的奥秘。
本次实验我们将用3,5—二硝基水杨酸法测定总糖和还原糖中的含糖量。
本次实验中，我们除了要掌握还原糖和总糖的测定基本原理还要学习比色法测定还原糖的操作方法以及分光度法测定的原理和方法。
首先，让我们一起来了解一下它们的测定方法吧。
还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
一、实验目的1、掌握还原糖和总糖的测定的基本原理2、学习比色法测定还原糖的操作方法3、学习分光光度法测定的原理和方法二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
还原糖和总糖的测定3,5-二硝基水杨酸比色法
还原糖和总糖的测定3,5-二硝基水杨酸比色法一、目的掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
二、原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
三、实验材料、主要仪器和试剂1. 实验材料小麦面粉；精密pH 试纸。
2. 主要仪器（1）具塞玻璃刻度试管：20mL×11（2）大离心管：50mL×2（3）烧杯：100mL×1（4）三角瓶：100mL×1（5）容量瓶：100mL×3（6）刻度吸管：1mL×1；2mL×2；10mL×1（7）恒温水浴锅（8）沸水浴（9）离心机（10）扭力天平（11）分光光度计3. 试剂（1）1mg/mL 葡萄糖标准液准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL 容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。
（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂将6.3gDNS 和262mL 2M NaOH 溶液，加到500mL含有185g 酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。
实验一-3--5--二硝基水杨酸法测定总糖和还原糖
实验一3, 5 -二硝基水杨酸法测定总糖和还原糖1、实验目的：掌握还原糖和总糖测定的基本原理掌握比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
2、实验原理：在NaOH和丙三醇存在下，3,5-二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。
在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。
3、实验步骤：（一）葡萄糖标准曲线制作1. 取6个试管，按下表加入1.0mg/ml葡萄糖标准液和蒸馏水2. 向各试管中分别加入DNS试剂1 ml，充分混合，放入沸水浴中加热煮沸2 min 进行显色，取出试管放入盛有冷水的烧杯中迅速冷却。
3.向各管中分别加入8 ml蒸馏水，充分混合。
4.以空白管（0号管）做对照，于540nm 波长下调0，然后测定各管的OD 值。
5.以光吸收值作为纵坐标，葡萄糖含量为横坐标，绘制标准曲线。
如果该直线不通过零点，必须重做。
（二）还原糖的制备1. 称取2g玉米粉，把它放入一个100ml的三角瓶中，然后加入20~30ml蒸馏水，搅拌均匀。
2. 把三角瓶放于一个50℃水浴中保温30 min，不时搅拌。
3. 拿出三角瓶，将三角瓶内含物转入50ml的容量瓶中：过滤，定溶，充分混合，滤出液即为还原糖提取液。
(三) 样品总糖的水解和提取1. 取1g玉米粉，放在100ml三角瓶中，加15ml水溶解，再加10ml 6mol/L 盐酸，混匀。
2. 将三角瓶置于沸水浴中加热煮沸30 min。
3.取出1~2滴置于白瓷板上，加1滴I-KI溶液检查水解是否完全。
如已水解完全，则不呈现蓝色。
4.拿出三角瓶，冷却，过滤，滤出液即为总糖提取液。
5.加入3-5滴酚酞指示剂，混匀，用6mol/L的NaOH中和至溶液呈微红色。
将中和后的溶液转入100 ml的容量瓶中定容。
（四）样品中含糖量的测定1. 取5支试管，编号，按下表向每支试管中加入试剂。
实验一还原糖和总糖含量的测定
实验一还原糖和总糖含量的测定（3,5-二硝基水杨酸比色法）一．目的1.掌握还原糖定量测定的基本原理；2.学习比色定糖法的基本操作；3.熟悉分光光度计的使用方法。
二．原理在碱性的条件下，还原糖与3,5-二硝基水杨酸共热，3,5-二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸（棕红色物质）,还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成一定的比例关系，在540nm波长下测定棕红色物质的消光值，查对标准曲线并计算，便可分别样品中还原糖和总糖的含量。
三．仪器.试剂和材料1.仪器：（1）25ml刻度试管（2）玻璃漏斗（3）三角瓶（4）100ml容量瓶3个（5）刻度吸管（1ml,2ml,3ml）（6）恒温水浴（7）沸水浴（8）电子天平（9）分光光度计2.试剂；（1）1mg/ml葡萄糖标准液（2）3,5-二硝基水杨酸试剂（3）碘碘化钾溶液（4）酚酞指示剂（5）6ml/L HCI （6）6ml/L NaOH3.材料：食用面粉四．操作步骤将各管摇匀，在沸水中加热5min，取出后立即放入盛有冷水的烧杯中冷却至室温，再以蒸馏水定容至25min，用试管塞塞住试管口，颠倒混匀。
在540nm波长下，用0号试管调零，分别读取1~6号管的吸光度。
以吸光度为纵坐标，葡萄样毫克数为横坐标，绘制标准曲线。
2.样品中还原糖和总糖含量的测定（1）样品中还原糖的提取：准确称取3g使用面粉，放在100ml三角瓶中，先以少量蒸馏水调成糊状，然后加50ml蒸馏水，搅匀，置于50℃恒温水中保温20min，使还原糖浸出。
过滤，用20ml蒸馏水定容至刻度，混匀，作为还原糖待测液。
（2）样品中总糖的水解和提取：准确称取1g使用面粉。
放在100ml的三角瓶中，加入10ml 6mol/L HCI及15ml蒸馏水，置于水浴中加热水解30min。
待三角瓶中水解液冷却后，加入1滴酚酞指示剂。
以6mol/LNaOH中和至微红色，过滤，再用少量蒸馏水冲洗三角瓶及滤纸，将滤纸全部收集砸100ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，混匀。
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实验一还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法一、目的与要求
掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
二、实验原理
还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，如乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540 nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
三、实验材料、主要仪器和试剂
1．实验材料小麦面粉(1000 g)
2．主要仪器（1）具塞玻璃刻度试管：20 mL×11 （2）滤纸（3）烧杯：100 mL×2 （4）三角瓶：100 mL×1 （5）容量瓶：100 mL×3 （6）刻度吸管：1mL×1；2 mL×2；
10 mL×1 （7）恒温水浴锅（8）煤气炉（9）漏斗（10）天平（11）分光光度计
3．试剂
（1）1mg/mL葡萄糖标准液
准确称取80 ℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100 mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100 mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100 mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。
（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂
3,5－二硝基水杨酸（DNS）试剂：称取6.5 g DNS溶于少量热蒸馏水中，溶解后移入1000 mL容量瓶中，加入2 mol/L氢氧化钠溶液325 mL，再加入45 g丙三醇，摇匀，冷却后定容至1000 mL。
（3）碘-碘化钾溶液：称取5 g碘和10 g碘化钾，溶于100 mL蒸馏水中。
（4）酚酞指示剂：称取0.1 g 酚酞，溶于250 mL 70%乙醇中。
（5）6 M HCl 和6 M NaOH 各100 mL 。
（分别取59.19 mL 37 %浓盐酸和24克NaOH 定容至100mL ）
四、操作步骤
1. 制作葡萄糖标准曲线
取7支20 mL 具塞刻度试管编号，按表1分别加入浓度为1 mg/mL 的葡萄糖标准液、蒸馏水和3,5-二硝基水杨酸（DNS ）试剂，配成不同葡萄糖含量的反应液。
表1 葡萄糖标准曲线制作
管 号 1mg/mL 葡萄糖标准液
（mL ） 蒸馏水（mL ） DNS （mL ）
葡萄糖含量（mg ） 光密度值 （OD 540nm ）
0 0 2 1.5 0 1 0.2 1.8 1.5 0.2 2 0.4 1.6 1.5 0.4 3 0.6 1.4 1.5 0.6 4 0.8 1.2 1.5 0.8 5 1.0 1.0 1.5 1.0 6
1.2
0.8
1.5
1.2
将各管摇匀，在沸水浴中准确加热5 min ，取出，用冷水迅速冷却至室温，用蒸馏水定容至20 mL ，加塞后颠倒混匀。
调分光光度计波长至540 nm ，用0号管调零点，等后面7~10号管准备好后，测出1～6号管的光密度值。
以光密度值为纵坐标，葡萄糖含量（mg ）为横坐标，在坐标纸上绘出标准曲线。
葡萄糖含量（mg ）
光密度值
2. 样品中还原糖和总糖的测定
（1）还原糖的提取
准确称取3.00 g食用面粉，放入100 mL烧杯中，先用少量蒸馏水调成糊状，然后加入50 mL蒸馏水，搅匀，置于50 ℃恒温水浴中保温20 min，不时搅拌，使还原糖浸出。
过滤，将滤液全部收集在100 mL的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，即为还原糖提取液。
（2）总糖的水解和提取
准确称取1.00 g食用面粉，放入100 mL三角瓶中，加15 mL蒸馏水及10 mL 6 M HCl，置沸水浴中加热水解30 min, 取出1～2滴置于白瓷板上，加1滴I-KI溶液检查水解是否完全。
如已水解完全，则不呈现蓝色。
水解毕。
冷却至室温后加入1滴酚酞指示剂，以6 mol/L NaOH溶液中和至溶液呈微红色，并定容到100 mL，过滤取滤液10 mL于100 mL容量瓶中，定容至刻度，混匀，即为稀释1000倍的总糖水解液，用于总糖测定。
（3）显色和比色
取4支20 mL具塞刻度试管，编号，按表2所示分别加入待测液和显色剂，将各管摇匀，在沸水浴中准确加热5 min，取出，冷水迅速冷却至室温，用蒸馏水定容至20 mL，加塞后颠倒混匀，在分光光度计上进行比色。
调波长540 nm，用0号管调零点，测出7～10号管的光密度值。
表2 样品还原糖测定
管号还原糖待测
液（mL）
总糖待测
液（mL）
蒸馏水
（mL）
DNS
（mL）
光密度值
（OD540nm）
查曲线葡萄
糖量（mg）
平均值
70.5 1.5 1.5
80.5 1.5 1.5
911 1.5
1011 1.5
五、结果与计算
计算出7、8号管光密度值的平均值和9、10管光密度值的平均值，在标准曲线上分别查出相应的葡萄糖毫克数，按下式计算出样品中还原糖和总糖的百分含量(以葡萄糖计)。
还原糖（%）= 查曲线所得葡萄糖毫克数
×
提取液总体积
测定时取用体积
×100 =
样品毫克数
总糖（%）= 查曲线所得水解后葡萄糖毫克数×稀释倍
数×0.9×100 =
样品毫克数
六、注意
1. 标准曲线制作与样品测定应同时进行显色，并使用同一空白调零点和比色。
2. 面粉中还原糖含量较少，计算总糖时可将其合并入多糖一起考虑。
七、思考题
1.在样品的总糖提取时，为什么要用浓HCl处理？而在其测定前，又为何要用NaOH中和？
2.标准葡萄糖浓度梯度和样品含糖量的测定为什么应该同步进行？比色时设0号管有什么意义？
3. 绘制标准曲线的目的是什么？。