药学论文

TCDCANa的合成及抗茵抗炎作用研究

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摘要：以鹅去氧胆酸( CDCA) 和牛磺酸为基本原料合成了牛磺鹅去氧胆酸钠(TCDANa ) ，以萃取和重结品法提纯,收率为 6 3 . 4 ％，ω ( T C D C A N a ) ≥9 2 % , T LC和I R法确定了其结构。并将牛磺鹅去氧胆酸钠与鹅去氧胆酸钠( CDCANa ) 进行了抗菌、抗炎和镇咳对比实验。药效实验结果为:TCDCANa和CDCANa 均具有抗革兰阳性菌作用 (抑菌环直径分别为 2 .46± 0.08 cm 和 1.91 ± 0.13 cm ) ,抗炎作用抑制率分别为( 79.1 ±25.4) ％和 (71.2 ±23.1 ) ％，镇咳作川减咳率分别为(29.1±5.6 ) ％和(18.2±6.8 ) ％，牛磺鹅去氧胆酸钠与鹅去氧胆酸钠存在显著性差异。药效文验表明，TCDCANa具明显的镇咳、平喘和抗菌作用,作用慢于CDCANa。

关键词：牛磺鹅去氧胆酸；抗菌；抗炎；中药现代化

前言

牛磺鹅去氧胆酸{ TCDCA，2-[ 3 α，

7α-dihydroxy-24-oxo-5β—cholan-24-y1)amino]ethanesulfonic acid}是鸡、鸭、鹅等动物胆汁的主要有效成分之一，其质量占鸡胆汁中胆汁酸的 8 0 ％，也是蛇胆的主要胆汁酸[1-3]成分之一。它是由鹅去氧胆酸 ( C D C A， 3α- 7α- dihydroxy- 5β- cholan- 2，4- oicacid)的羧基与牛磺酸(taurine，2 – aminoethanesulfonic acid ) 的氨基以酰胺键相连而成的一种结合型胆汁酸( conjugated bile acids) 。据文献报道[1,3-5]，新鲜的动物胆汁中几乎不含游离型胆汁酸，但是由于肝胆疾病或贮存方法不当也可引起TCDCA分解为游离型的CDCA。它们均具有一定的抑菌、抗炎、镇咳等作用，在传统医学上，鸡胆汁用于治疗呼吸系统疾病，如小儿百日咳、气管炎、肺炎等，而且疗效确切。

由于T C D C A N a亲水性强，不易从胆汁巾分离提取，要得到高纯度产品，以往只能用硅胶柱层析法，该法只适用于实验室制备少量高纯度样品，难以实现工业化生产。为此，我们用化学合成的方法制备了TCDCANa，以萃取和重结晶相结合的方法，未经硅胶柱层析即可得到纯度较高的产品，并以TLC及IR法对其结构进行了表征,探讨了TCDCANa 的抗菌、抗炎和镇咳作用。

1 材料与方法

1.1 实验用品

1.1 试剂及药品：

鹅去氧胆酸(粗品) 、可待因注射剂( 1 5 g／ L ) 、磷钼酸、氨茶碱注射剂( 100 g ／ L ) 、乙酰胆碱磷酸可待因、牛磺鹅去氧胆酸钠（对照品）、无水乙醇、甲醇、乙酸乙酯、石油醚( 3 0～6 0℃) 、氯甲酸乙酯、正三丁胺、氢氧化钠、碳酸氢钠均、牛磺酸、盐酸、硅胶G、

NaCl 、乙醚、丙酮、小金黄色葡萄球菌标准株和大肠埃细菌标准株、NaOH、盐酸、NaHCO

3、

白鼠

1.1.2 仪器

FTIR红外光谱仪 ( Spectrum One，Perking—Elmer Co．，America )，KBr压片机、二道生理记录仪、蒸馏烧瓶、烧杯、电炉、铁架台、铁圈、天平、量筒、PH计、水浴锅、干燥箱、玻璃棒、抽滤器、打耳器

2实验方法及过程

2.1 TCDCANa的合成和精制[8-10]

2.1.1 TCDCANa的合成

将5.0g( 0.0127 mol)CDCA溶于60 mL THF中，加入3.0 m L正三丁胺，搅拌使其充分溶解，在 0 ℃滴入1.65 mL氯甲酸乙酯，搅拌15 min，缓慢加入含1.75g (0.014 mol ) 牛磺酸的NaOH水溶液，控制滴加速度，防止反应过于剧烈而冲料，15 min内加完。然后，在室温下继续搅拌6h，溶液依次用 1 mol／L盐酸，饱和 NaHCO

水溶液洗涤，最后用饱和NaCl

3

水溶液洗至pH=8，过滤，洗涤沉淀，收集滤液，减压蒸馏至糖浆状，得黄色TCDCANa浓缩液。

2.1.2 TCDCANa的精制

浓缩液先每次用16mL 乙酸乙酯充分搅拌混匀后，用分液漏斗分离，共进行3次，酯层供回收乙酸乙酯用。然后，向水层乙酸乙酯中滴加浓盐酸约0.5 m L，至p H= 5～ 6为止。加入 16mL乙酸乙酯，强烈搅拌10min后收集滤液，分出水层，再用16 m L乙酸乙酯萃取两次，收集水层装入 250ml烧瓶中减压蒸干。将干燥物用32mL无水乙醇溶解，置于8 5℃水浴中加热，使呈轻微回流状态，并保持15min左右，撤去热源，稍冷后过滤，分别收集不溶物( 主要是牛磺酸) 和滤液。向滤液中加入其体积1.5倍的乙酸乙酯，允分搅拌后密封，置冰箱中冷却1到2小时，抽滤，收集沉淀，用冷乙醚洗涤 2次( 每次用5 m L左右) ，抽干将全部沉淀溶

于14 mL C (NaOH)=0.2 mol／L的甲醇溶液，室温下搅拌 1 0m i n，若有不溶物过滤除去，溶液减压(≤4 5℃) 回收4～ 6 mL甲醇，将浓缩液冷却片刻，加入浓缩液 3倍体积的乙醚，搅匀后用塑料薄膜密封，置冰箱中(一5 ℃)静置过夜。第二天抽滤，收集沉淀，抽干再用8 mL 冷乙醚分2次洗涤，抽干，将沉淀置 100m L烧杯中，加入10 mL 【V(丙酮)：V（乙醚）=2：1】的混合溶液充分搅拌后，过滤抽干，置真空干燥器中减压干燥 2 d ，再移至真空干燥箱中（≤4 5℃) 干燥至近于恒重即可。用薄层硅胶色谱( TLC ) 检测【V( 氯仿) ：V ( 甲醇) ：V ( 水)=65：28：4】，除主斑点外，无其他可见斑点，ω( TCDCANa)≥92％。得TCDCANa 4.2g ，收率 63.4％。

2.2 TLC检查

硅胶G吸附剂，以质量浓度为 1 g／L的样品的甲醇液点样5 微克，以【V ( 氯仿) ： V ( 甲醇) ： V ( 水)= 6 5 ： 2 8 ： 4 】的混合液为展开剂，展开l5cm，ω( 磷钼酸)=5％的乙醇液为显色剂，于110℃显色 10min。

2.3 TCDCANa的药效作用[1.11]

TCDCANa用上法合成精制，所得产品ω( TCDCANa ) ≥92％。实验动物为小白鼠( 昆明种)，体重18～22 g，雌雄兼用，饲养室温度( 2 5±2 )℃，按性别分笼，自由饮水、进食。统计学方法采用 t 检验分析。

2.4 体外抗菌作用

2.4.1 茵液制备

分别取金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌接种于L B培养基中， 3 7℃振荡培养 6～8 h ，菌液浓度分别为9.0×105 CFU／mL和6.0×105 CFU／mL，备用。

2.4.2 检测TCDCANa体外抗茵作用

采用K—B法(新华I号滤纸，打孔器制备纸片直径为6 mm,每片药量500 微克，另取无菌水滤纸片作阴性对照，以青霉素滤纸片作阳性对照用无菌棉签将上述菌液均匀涂布于 LB固体培养基上，在每个平板表面贴验试纸片、阴性对照纸片和阳性对照纸片。然后将贴好纸片的平板置 3 7℃温箱中培养 18～24 h，观察结果。用数显游标卡尺测量抑菌环的直径(包括贴片)，并记录测量数据。实验重复4次。

2.4.3 检测TCDCANa抗炎作用

采用二甲苯致炎法，选取(26±2 )g的雌性健康小鼠48只，随机分成4组。按表2所示剂量灌胃，每天两次，给药6 d，于最后一次给药后 1h，用0.05 mL的二甲苯将小鼠右耳致