厌氧细菌的培养
关于厌氧菌培养方法的探讨
关于厌氧菌培养方法的探讨啤酒有害菌是纯生啤酒生产中微生物检验最重要的一项指标，如何对啤酒进行有效的厌氧菌(即有害菌)检测意义重大。
影响厌氧菌检验的因素很多，其中最重要的是能否达到厌氧菌培养所需的厌氧环境。
本文结合作者多年的工作经验，对厌氧培养箱法培养厌氧菌进行初步探讨1 常见的厌氧菌培养方法1．1 最古老的方法：蜡烛耗氧法此法利用蜡烛燃烧消耗封闭容器里的氧气，产生二氧化碳，在封闭容器内形成厌氧环境。
此法产生的厌氧环境很难得到保证，培养过程不方便操作。
1．2 置换法通过真空泵使二氧化碳气体从厌氧罐底部进入，二氧化碳比重比氧气大，迫使氧气上浮，随着二氧化碳气体的逐渐充满氧气从顶部排出，在厌氧罐里形成厌氧环境。
使用此方法，成本较低+佩操作繁琐，厌氧程度不能得到有效保证。
1．3 厌氧盒，罐法厌氧盒，罐法是利用吸氧剂把厌氧盒，罐中的氧气吸收，使其达到无氧状态。
由于厌氧盒容量一般较小，此法厌氧环境能够保证，但不能满足大生产需要；另吸氧剂成本较高。
1．4 厌氧培养箱法通过真空泵先将箱内氧气抽出，充人氮气和混合气，使箱内形成厌氧环境。
此厌氧环境在正静隋况下可一直保持。
每次使用时只需置换过渡间的空气，实现与培养箱内的互通，进行样品的放置或取出等操作。
2 厌氧培养箱法简单介绍2．1 初始厌氧环境的形成为了严格保证厌氧环境，一般采取20次抽真空和充N2过程进行初始化。
2．2 样品放置的步骤在样品放置过程中．可以采用三次抽真空，两次N2清洗交替进行，使厌氧培养箱内的氧气含量低于l％。
在厌氧菌培养过程中，适当保持培养箱内的厌氧气体压力，使形成轻微正压，以保证厌氧环境。
2．3 使用要点由于厌氧培养所需的时间比较长，一个厌氧培养箱内又不可能只培养一个时期的样品，这就牵涉到不同时期样品的进出。
在放、取样品进厌氧培养箱时，都要先通过过渡间，只有过渡问的外门开启接触到外界空气，在样品进入过渡间后．经过平衡清洗程序使厌氧环境得到控制，而培养箱中存有的少量氧气可通过催化剂吸收。
厌氧培养方法
厌氧性细菌的分离培养法厌氧菌需有较低的氧化—还原势能才能生长 (例如破伤风梭状芽孢杆菌需氧化—还原电势降低至 0.11V 时才开始生长 )，在有氧的环境下，培养基的氧化—还原电势较高，不适于厌氧菌的生长。
为使培养基降低势，降低培养环境的氧压是十分必要的。
现有的厌氧培养法甚多，主要有生物学，化学和物理学 3 种方法，可根据各实验室的具体情况而选用。
1．生物学方法培养基中含有植物组织 (如马铃薯、燕麦、发芽谷物等 )或动物组织 (新鲜无菌的小片组织或加热杀菌的肌肉、心、脑等 ) ，由于组织的呼吸作用或组织中的可氧化物质氧化而消耗氧气(如肌肉或脑组织中不饱和脂肪酸的氧化能消耗氧气，碎肉培养基的应用，就是根据这个原理 )，组织中所含的还原性化合物如谷胱甘肽也可以使氧化—还原电势下降。
另外，将厌氧菌与需氧菌共同培养在一个平皿内，利用需氧菌的生长将氧消耗后，使厌氧菌能生长。
其方法是将培养皿的一半接种吸收氧气能力强的需氧菌(如枯草杆菌 )，另一半接种厌氧菌，接种后将平皿倒扣在一块玻璃板上，并用石蜡密封，置37恒温箱中培养2~3d 后，即可观察到需氧菌和厌氧菌均先后生长。
2．化学方法利用还原作用强的化学物质，将环境或培养基内的氧气吸收，或用还原氧化型物质，降低氧化—还原电势。
此法系用连二亚硫酸纳 (Sodium hydrosulphite) 和碳酸钠以吸收空气中的氧气，其反应式如下：Na2S204 十Na2C03十O2 一→ Na2SO4十Na2SO3 十C02取一有盖的玻璃罐，罐底垫一薄层棉花，将接种好的平皿重叠正放于罐内 (如系液体培养基，则直立于罐内 )，最上端保留可容纳 1~2 个平皿的空间 (视玻罐的体积而定 )，按玻罐的体积每1000cm3 空间用连二亚硫酸纳及碳酸钠各 30g，在纸上混匀后，盛于上面的空平皿中，加水少许使混合物潮湿，但不可过湿，以免罐内水分过多。
若用无盖玻罐，则可将平皿重叠正放在浅底容器上，以无盖玻罐罩于皿上，罐口周围用胶泥或水银封闭 (如图１－５ )。
厌氧细菌丁酸梭菌的培养实验指导书
厌氧细菌丁酸梭菌的培养实验指导书一、实验目的1.了解氧对厌氧微生物生长的影响及其原理；2.学习厌氧微生物的培养方法，使学生对工业微生物的培养方法有较全面的认识，提高学生动手能力及综合素质。
二、基本原理分子氧对好氧微生物和厌氧微生物都有毒害作用，因为在有分子氧存在的条件下，会在微生物胞内生成超氧阴离子，对细胞有毒害作用。
对于好氧微生物，由于能合成超氧化物歧化酶和过氧化氢酶，剧毒的超氧阴离子先被超氧化物歧化酶转化成毒性较低的过氧化氢，过氧化氢再被过氧化氢酶迅速分解，从而消除其对微生物细胞的毒害作用。
而厌氧微生物不能合成这些酶，不能将超氧阴离子和过氧化氢迅速转化掉，细胞易被杀伤，故厌氧微生物在有氧时不能生长。
因此，在培养厌氧微生物时，需要消除环境中的氧气并降低培养基的氧化还原势。
消除氧气的方法有物理、化学和生物方法，或它们的综合使用。
简单地介绍如下：(1).通无氧气体。
向厌氧微生物培养的小环境和培养基中通入无氧气体，如高纯氮气和二氧化碳，即可基本驱除其中的氧气。
(2).添加还原剂。
向培养厌氧微生物的培养基中添加还原剂，如半胱氨酸和硫化钠，可消除其中的氧，降低培养基的氧化还原势。
(3).碱性焦性没食子酸法。
焦性没食子酸与碱溶液作用后形成易被氧化的碱性没食子盐，能通过氧化作用而形成黑、褐色的焦性没食子橙，从而除掉密封容器中的氧。
该法操作简单，无需特殊和昂贵的设备，但其除氧速度较慢。
对于一些厌氧要求较高的微生物，如产甲烷菌，单一的除氧方法无法达到其生长所需的厌氧程度，常需结合两种除氧方法。
如对培养基进行除氧，制作预还原培养基时，常先向培养基中通高纯氮气，先去除培养基中的绝大部分的氧后，再往培养基中添加适量的还原剂，即可制成高度无氧的预还原培养基。
厌氧微生物的培养方法有多种，主要是在培养过程中避免使菌与氧气接触，下面介绍几种常用的方法：(1).深层穿刺培养法。
在试管中倒入适当高度的预还原固体培养基，凝固后穿刺接菌种，用胶塞封口。
厌氧培养的规范化操作
泰兴市人民医院检验科微生物室 刘鸿丽
概述: 厌氧菌感染通常是内源性的， 存在于人体的各个部位，病种遍及 临床各科。各种器官和组织都可以 发生厌氧菌感染，大部分是与需养 菌混合感染。常规细菌培养阴性， 很有可能是厌氧菌感染。因此，进 一步分离鉴定病原菌对感染的诊断、 治疗有重要意义。
厌氧菌鉴定流程 转种需氧培养 ↓ 35℃18-24h
转种厌氧培养 ↓ 35℃48~72h
↓ ↓ ↓ 阳性 阴性 阳性 ↓ ↓ ↓ 做需氧菌鉴定 考 虑 厌 氧 菌 ↓ 菌落革兰色染色、触酶试验、API20A鉴定 报告 报告菌种名或厌氧菌未生长
2.具体采样要求
1）从正常无菌部位或通过严格无菌操作采取，如血 液、胸腔液、腹腔液、心包积液、CSF、关节液以及 通过外科无菌手术或穿刺抽得脓液，或通过特殊技 术如纤维支气管镜取得下呼吸道标本及由阴道后窟 窿穿刺抽得盆腔脓液等。采集和运输过程中应避免 接触空气，及时送检。 2）经口吐出的痰不能避免咽喉部正常菌群感染，不 适宜做厌氧菌培养。可用纤维支气管镜采集。人工 气道如气管切开或气管插管患者，可用吸痰管理经 人工气道口插收标准
1）使用不合格的容器：有渗漏、污染或非无菌 的容器。
2）申请单不符合要求：无姓名、住院/门诊号，
无检验目的，检验目的与标本不符合。
3）标本不符合要求：未与空气隔绝，要求做厌
氧菌培养，经口吐出的痰要求做厌氧菌培养。采
样至送检超过2小时而未用运用培养基等。
4.样品的处理
厌氧菌在适当的培养基上，经35℃、厌氧环境 （80%N2、10%H2、10%CO2）下孵育48~72小时,经涂 片染色、菌落特征、耐氧试验、生化反应等作出 鉴定。
检验流程
1.流程图
厌氧细菌的培养及应用方法
厌氧细菌的培养及应用方法简介厌氧细菌，是一类在无氧环境下生长和繁殖的微生物。
它们具有重要的应用价值，被广泛用于环境修复、发酵工业以及医学领域等各个方面。
本文将介绍厌氧细菌的培养方法以及其在不同领域的应用。
，是一类在无氧环境下生长和繁殖的微生物。
它们具有重要的应用价值，被广泛用于环境修复、发酵工业以及医学领域等各个方面。
本文将介绍厌氧细菌的培养方法以及其在不同领域的应用。
厌氧细菌的培养方法厌氧细菌的培养方法相较于其他微生物的培养略有不同，需要提供无氧环境，满足其生长和繁殖的需求。
下面介绍几种常用的厌氧细菌培养方法：1. 封闭式培养法：将厌氧细菌接种于装有适宜培养基的培养瓶中，然后用橡胶塞密封瓶口，以保证培养过程中无氧环境的维持。
封闭式培养法：将厌氧细菌接种于装有适宜培养基的培养瓶中，然后用橡胶塞密封瓶口，以保证培养过程中无氧环境的维持。
2. 氮气充气法：在培养瓶中先充入氮气，将气泡排除后加入培养基和厌氧细菌。
通过氮气的充气可以去除培养瓶内的氧气，创建无氧环境。
氮气充气法：在培养瓶中先充入氮气，将气泡排除后加入培养基和厌氧细菌。
通过氮气的充气可以去除培养瓶内的氧气，创建无氧环境。
3. 厌氧室培养法：专门的厌氧室内装备有无氧环境所需的设备和仪器，可提供可控的厌氧条件，适合大规模厌氧细菌的培养。
厌氧室培养法：专门的厌氧室内装备有无氧环境所需的设备和仪器，可提供可控的厌氧条件，适合大规模厌氧细菌的培养。
厌氧细菌的应用厌氧细菌在多个领域中有着广泛的应用，以下是其中几个典型领域：1. 环境修复：厌氧细菌可以通过降解有机废弃物、重金属离子还原等方式，帮助清除污染物，修复环境。
环境修复：厌氧细菌可以通过降解有机废弃物、重金属离子还原等方式，帮助清除污染物，修复环境。
2. 发酵工业：某些厌氧细菌具有产生特定有机物质的能力，可用于发酵工业中的生物合成过程，如乙醇、乳酸等物质的生产。
发酵工业：某些厌氧细菌具有产生特定有机物质的能力，可用于发酵工业中的生物合成过程，如乙醇、乳酸等物质的生产。
厌氧菌的培养方法
厌氧菌的培养方法厌氧菌是一类不能在氧气存在下生长和繁殖的微生物。
这些微生物在许多领域都具有重要的应用价值，包括环境保护、生物能源生产等。
因此，为了研究和应用这些厌氧菌，科学家们发展了多种厌氧菌的培养方法。
本文将详细介绍常用的三种厌氧菌的培养方法。
一、利用情境气氛培养厌氧菌情境气氛培养是培养厌氧菌的一种常用方法，其原理是通过调节培养基的气氛来控制氧气浓度。
在培养厌氧菌时，一般会采用以下方法之一来制备情境气氛。
1.预氧化法：将培养容器密封，置于28-37°C的恒温灭菌箱中。
然后通过注入一定比例的高纯度二氧化碳-氧气混合气体，使容器内的气氛变为厌氧情境。
这种方法适用于厌氧菌培养基中氧气浓度较低的情况。
2.双液低压法：将培养基分成两个相隔的容器，分别加入不同的培养液。
然后将两个容器封口并贴膜，用胶带封好。
经过一段时间后，在密封的容器内会形成低压情境。
这种方法适用于厌氧菌培养基中氧气浓度较高的情况。
通过以上两种情境气氛培养方法，可以模拟出适合厌氧菌生长的条件。
二、利用厌氧培养器培养厌氧菌厌氧培养器是一种专门用于培养厌氧菌的装置，其原理是通过封闭式容器和气氛控制系统，实现在厌氧情境下的培养。
常用的厌氧培养器有以下两种类型：1.商用厌氧培养器：通常有专门的培养室和压力控制系统，可以产生适合厌氧菌生长的气氛。
在这种培养器中，可以根据菌株的特性进行相应的操作和调节。
2.自制厌氧培养器：由于商用的厌氧培养器设备较为昂贵，对于一些实验室来说并不实际。
因此，一些实验室会开发自己的厌氧培养器。
自制培养器的原理和商用培养器类似，只是在设计和制作上有所差异。
利用厌氧培养器进行培养时，需要注意以下几点：1.气氛控制：厌氧培养器应能够调节培养基的气氛，包括氮气、二氧化碳等气体的供应和排除。
2.温度调节：厌氧培养器应能够保持恒定的培养温度，一般为28-37°C。
3.培养基搅拌：适当的培养基搅拌可以增加氧气的溶解度，并促进菌体的生长和分散。
实验十二 厌氧性细菌(1稿)
实验十二厌氧性细菌（厌氧培养方法）厌氧性细菌（Anaerobicbacteria）是一大群必须在无氧或低氧环境中才能生长繁殖的细菌；一般情况下，这类细菌在无氧条件下比在有氧环境中生长好，不能在空气（氧气浓度大于18%）和（或）二氧化碳浓度小于10%以下的固体培养基表面生长。
这类细菌缺乏完整的代谢酶体系，其能量代谢多以无氧发酵的方式进行。
它能引起人体不同部位的感染，包括阑尾炎、胆囊炎、中耳炎、口腔感染、心内膜炎、子宫内膜炎、脑脓肿、心肌坏死、骨髓炎、腹膜炎、脓胸、输卵管炎、脓毒性关节炎、肝脓肿、鼻窦炎、肠道手术或创伤后伤口感染、盆腔炎以及菌血症等。
（一）无芽胞厌氧菌主要种类及生物学性状无芽胞厌氧菌共有23个属，与人类疾病相关的主要有10个属。
1.革兰阴性厌氧杆菌有8个属，类杆菌属中的脆弱类杆菌最为重要。
形态呈多形性，有荚膜。
除类杆菌在培养基上生长迅速外，其余均生长缓慢。
2.革兰阴性厌氧菌有3个属，其中以韦荣菌属最重要。
为咽喉部主要厌氧菌，但在临床厌氧菌分离标本中，分离率小于1%，且为混合感染菌之一。
其他革兰阴性球菌极少分离到。
3.革兰阳性厌氧菌有5个属，其中有临床意义的是消化链球菌属，主要寄居在阴道。
本菌属细菌生长缓慢，培养需5～7天。
4.革兰阳性厌氧杆菌有7个属，其中以下列3个属为主：（1）丙酸杆菌属：小杆菌，无鞭毛，能在普通培养基上生长，需要2～5天，与人类有关的有3个种，以痤疮丙酸杆菌最为常见。
（2）双歧杆菌：呈多形性，有分枝，无动力，严格厌氧，耐酸。
29个种中有10个种与人类有关，其中只有齿双歧杆菌与龋齿和牙周炎有关。
其他种极少从临床标本中分离到。
（3）优杆菌属：单一形态或多形态，动力不定，严格厌氧，生化反应活泼，生长缓慢，常需培养7天，最常见的是迟钝优杆菌。
（二）微生物学检查要从感染灶深部采取标本。
最好是切取感染灶组织或活检标本，立即送检医.学教育网搜集整理。
1.直接涂片镜检：将采集的标本直接涂片染色镜检，观察细菌形态、染色及菌量，为进一步培养以及初步诊断提供依据。
厌氧菌
厌氧菌在有氧的情况下不能生长。
要培养厌氧菌，必须创造一个无氧的环境。
通常用培养基中加入还原剂，或用物理、化学方法去除环境中的游离氧，以降低氧化还原电势。
如疱肉培养基、硫基乙酸钠培养基，牛心脑浸液培养基等。
常用的厌氧培养方法有许多，可根据实际情况选用。
1.厌氧缸法：接种好标本的平板或液体培养基试管，可放入厌氧缸内培养，厌氧缸是普通的干燥缸，用物理化学的方法使缸内造成厌氧环境，从而将厌氧菌培养出来。
2.厌氧袋：即在塑料袋内造成厌氧环境来培养厌氧菌。
塑料袋透明而不透气，内装气体发生管、美兰指示剂管、钯催化剂管、干燥剂。
放入已接种好的平板后，尽量挤出袋内空气，然后密封袋口。
先折断气体发生管，后折断美兰指示剂管，命名袋内在半小时内造成无气环境。
如不突变表示袋内已达厌氧状态，可以孵育。
3.厌氧手套箱：是迄今为止国际上公认的培养厌氧菌最佳仪器之一。
它是一个密闭的大型金属箱，箱的前面有一个有机玻璃做的透明面板，板上装有两个手套，可通过手套在箱内进行操作，故名。
箱侧有一交换室，具有内外二门，内门通箱内先关着。
欲放物入箱，先打开外门，放入交换室，关上外门进行抽气和换气达到厌氧状态，然后手伸入手套把交换室内门打开，将物品移入箱内，关上内门。
箱内保持厌氧状态，也是利用充气中的氢在钯的催化下和箱中钱残余氧化合成水的原理。
该箱可调节温度，本身是孵箱或孵箱即附在其内，还可放入解剖显微镜便于观察厌氧菌菌落，这种厌氧箱适于作厌氧细菌的大量培养研究，大量培养基可放入作预还原和厌氧性无菌试验。
金属硬壁型厌氧箱的抽气、充气、厌氧环境和温度等均系自动调节。
4.厌氧盒：原理同厌氧袋，有成品销售。
5.生物耗氧法：在一密闭的容器内放以生物，消耗氧气，同时产生二氧化碳，供细菌生长用。
我没见过。
6.焦性末食子酸法：在一洁净的玻片上铺上纱布或滤纸，均匀撒上焦性末食子酸，然后再混入NaHCO3粉末或NaOH溶液，迅速将已接种细菌的平板倒扣在上面，用融化的白蜡封边，造成一个封闭空间。
厌氧菌的采集、送检、培养、分离鉴定及注意事项
厌氧菌在有氧的情况下不能生长。
要培养厌氧菌，必须创造一个环境中的游离氧，以降低氧化还原电势。
如疱肉培养基、硫基乙酸钠培养基，牛心脑浸液培养基等。
常用的厌氧培养方法有许多，可根据实际情况选用。
1.厌氧缸法：接种好标本的平板或液体培养基试管，可放入厌氧缸内培养，厌氧缸是普通的干燥缸，用物理化学的方法使缸内造成厌氧环境，从而将厌氧菌培养出来。
2.厌氧袋：即在塑料袋内造成厌氧环境来培养厌氧菌。
塑料袋透明而不透气，内装气体发生管、美兰指示剂管、钯催化剂管、干燥剂。
放入已接种好的平板后，尽量挤出袋内空气，然后密封袋口。
先折断气体发生管，后折断美兰指示剂管，命名袋内在半小时内造成无气环境。
如不突变表示袋内已达厌氧状态，可以孵育（较为推荐）。
3.厌氧手套箱：是迄今为止国际上公认的培养厌氧菌最佳仪器之一。
它是一个密闭的大型金属箱，箱的前面有一个有机玻璃做的透明面板，板上装有两个手套，可通过手套在箱内进行操作，故名。
箱侧有一交换室，具有内外二门，内门通箱内先关着。
欲放物入箱，先打开外门，放入交换室，关上外门进行抽气和换气达到厌氧状态，然后手伸入手套把交换室内门打开，将物品移入箱内，关上内门。
箱内保持厌氧状态，也是利用充气中的氢在钯的催化下和箱中钱残余氧化合成水的原理。
该箱可调节温度，本身是孵箱或孵箱即附在其内，还可放入解剖显微镜便于观察厌氧菌菌落，这种厌氧箱适于作厌氧细菌的大量培养研究，大量培养基可放入作预还原和厌氧性无菌试验。
金属硬壁型厌氧箱的抽气、充气、厌氧环境和温度等均系自动调节。
4.厌氧盒：原理同厌氧袋，有成品销售。
5.生物耗氧法：在一密闭的容器内放以生物，消耗氧气，同时产生二氧化碳，供细菌生长用。
我没见过。
6.焦性末食子酸法：在一洁净的玻片上铺上纱布或滤纸，均匀撒上焦性末食子酸，然后再混入NaHCO3粉末或NaOH溶液，迅速将已接种细菌的平板倒扣在上面，用融化的白蜡封边，造成一个封闭空间。
焦性末食子酸与碱反应后耗氧。
厌氧细菌培养技术
厌氧细菌培养技术一、厌氧菌的培养方式厌氧菌的培养过程中，最重要的就是为其提供厌氧生长环境，厌氧环境的提供可以从以下两方面着手。
一方面可以提供厌氧装置如厌氧手套箱，厌氧产气罐或者厌氧产气袋。
另一方面可以提供含有还原剂的特殊培养基，如含少量琼脂，L-半胱氨酸，硫乙醇酸钠，巯基乙醇等的液体培养基。
要注意的是，如果没有厌氧手套箱，我们在对厌氧菌活化或者是转接操作的时候，动作要快，防止厌氧菌在空气中暴露的时间过长。
二、我们正常的大气环境中是有氧环境，这类厌氧菌通常生活在哪里呢我们研究这类菌有什么意义呢我们的大气环境确实是一个有氧环境。
但是，地球上还存在很多厌氧环境比如深海和淤泥中，厌氧菌在我们人体中也普遍存在。
我们研究厌氧菌，一方面是因为厌氧菌是临床上一类重要的病原菌；另一方面，哺乳动物肠道菌群中99%是厌氧菌，其中许多是促进消化吸收的有益菌，不管是从致病机理，还是开展疾病治疗来说对厌氧菌的研究意义都很重大。
三、为什么好氧菌在生长繁殖过程中必须有氧气存在，而厌氧菌在生长过程中氧气却对对其产生毒害作用呢微生物虽然可以利用氧，通过有氧呼吸来产生更多的能量，满足机体的需要，但是氧对一切生物都会产生有毒害的代谢产物，比如会产生超氧阴离子，过氧化氢和羟自由基。
超氧阴离子和羟自由基是强氧化剂，能氧化细胞内的大分子物质和有机化合物，对细胞造成损伤，过氧化氢也会损害一些细胞组分。
但是，微生物细胞可以通过产生过氧化氢酶，超氧化物歧化酶和超氧化物还原酶等等这些酶类来清除细胞内的毒性氧。
对于好氧菌来说，细胞内往往会产生超氧化物歧化酶和过氧化氢酶，所以氧气对这类微生物不会产生毒害。
那么对于厌氧菌来说，细胞内无法合成超氧化物歧化酶〔SOD〕和细胞色素氧化酶，大多数还缺乏过氧化氢酶。
所以，这类微生物无法消除氧气对它的毒害作用。
只能在无氧的环境中通过发酵或无氧呼吸产能。
水族箱厌氧菌的培养方法
水族箱厌氧菌的培养方法
水晶虾
厌氧菌生存在低氧的环境下，水晶虾、硝化菌都需大量的氧气，水中有充分的氧气，造成培育厌氧菌极为困难，就是有的话也不足需求，所以一般的缸子到硝酸盐氮循环就止，传统下来培养厌氧菌的概念就是铺厚厚的底床，但虾缸用的是土，土不像石或砂，厚土会败坏，不适用来培养厌氧菌。
最佳培养厌氧菌的地方还是在筒子里。
1、Eheim2215串三个（一个马达+二个前置）：用多量的菌类去“消耗”氧气，才能让最后一个筒子有厌氧菌生存的环境。
2、用品质好的滤材：硝化菌越多，最后筒内的氧气会越少。
3、设缸时用品牌好和多量的菌类并维持硝酸盐在最低（太高就换水）
4、处理缸内的有机物质，有机物质的累积会导致硝酸盐过高而无法降低。
厌氧性细菌的分离培养法
厌氧性细菌的分离培养法厌氧菌需有较低的氧化—还原势能才能生长(例如破伤风梭状芽孢杆菌需氧化—还原电势降低至0.11V时才开始生长)，在有氧的环境下，培养基的氧化—还原电势较高，不适于厌氧菌的生长。
为使培养基降低势，降低培养环境的氧压是十分必要的。
现有的厌氧培养法甚多，主要有生物学，化学和物理学3种方法，可根据各实验室的具体情况而选用。
1．生物学方法培养基中含有植物组织(如马铃薯、燕麦、发芽谷物等)或动物组织(新鲜无菌的小片组织或加热杀菌的肌肉、心、脑等)，由于组织的呼吸作用或组织中的可氧化物质氧化而消耗氧气(如肌肉或脑组织中不饱和脂肪酸的氧化能消耗氧气，碎肉培养基的应用，就是根据这个原理)，组织中所含的还原性化合物如谷胱甘肽也可以使氧化—还原电势下降。
另外，将厌氧菌与需氧菌共同培养在一个平皿内，利用需氧菌的生长将氧消耗后，使厌氧菌能生长。
其方法是将培养皿的一半接种吸收氧气能力强的需氧菌(如枯草杆菌)，另一半接种厌氧菌，接种后将平皿倒扣在一块玻璃板上，并用石蜡密封，置37恒温箱中培养2~3d后，即可观察到需氧菌和厌氧菌均先后生长。
2．化学方法利用还原作用强的化学物质，将环境或培养基内的氧气吸收，或用还原氧化型物质，降低氧化—还原电势。
（１）李伏夫(B．M．JIbbob)法此法系用连二亚硫酸纳(Sodium hydrosulphite)和碳酸钠以吸收空气中的氧气，其反应式如下：Na2S204十Na2C03十O2一→Na2SO4十Na2SO3十C02取一有盖的玻璃罐，罐底垫一薄层棉花，将接种好的平皿重叠正放于罐内(如系液体培养基，则直立于罐内)，最上端保留可容纳1~2个平皿的空间(视玻罐的体积而定)，按玻罐的体积每1000cm3空间用连二亚硫酸纳及碳酸钠各30g，在纸上混匀后，盛于上面的空平皿中，加水少许使混合物潮湿，但不可过湿，以免罐内水分过多。
若用无盖玻罐，则可将平皿重叠正放在浅底容器上，以无盖玻罐罩于皿上，罐口周围用胶泥或水银封闭(如图１－５)。
厌氧菌的培养方法
厌氧菌的培养方法厌氧菌是一类不能在氧气环境下生长的微生物，其培养方法与其他菌种有所不同。
为了成功培养厌氧菌，我们需要采取特殊的培养条件和方法。
下面我将详细介绍厌氧菌的培养方法。
一、厌氧培养条件的建立1. 气氛控制：培养厌氧菌的关键是防止氧气的进入。
常用的气氛控制方法包括密封法、气体置换法和用稀有气体混合气体置换法。
其中，密封法是最常用的方法。
我们可以将培养基置于密封的容器中，并注入一定量的气体，如氮气、氩气或二氧化碳等，从而构建无氧环境。
2. pH控制：厌氧菌对pH值较为敏感，一般要求pH值在6.8至7.4之间。
所以，在培养厌氧菌时，我们需要对培养基的pH进行调节。
3. 温度控制：不同的厌氧菌对温度的要求各有不同，一般在25至37之间。
在培养过程中，应根据具体菌株的要求进行控制。
4. 无氧条件维持：在培养过程中，需要保持无氧条件，避免氧气的进入。
一般可以选择在无氧罐中进行培养，该罐内有还原剂（如碘化钠、甲酚等）与氧气发生反应，将氧气消耗掉。
二、厌氧菌的预培养方法在真正进行厌氧培养之前，我们需要进行预培养，以提高成功培养的几率。
1. 培养基制备：根据具体菌株的不同要求配制培养基。
2. 保护性缓冲层：在培养基上覆盖一层液体密度较高的液体，如厌氧缓冲液、灌封液等。
这层液体可以形成一个保护层，避免氧气的进入。
3. 器具处理：将要使用的器具（如培养瓶、移液管等）经过高温高压灭菌或用灭菌包装。
4. 预培养条件：在厌氧罐或无氧条件下，将培养基接种菌种。
一般预培养时间较短，一般为12至24小时。
5. 初代接种：将预培养的菌种移植到新的含有适宜的培养基的无氧培养容器中。
三、厌氧菌的分离和纯化为了获得纯种的厌氧菌，我们需要对菌落进行分离和纯化。
常用的方法包括传代分离法和稀释分离法。
1. 传代分离法：将初代接种中的菌落进行分离。
一般使用无菌的毛细管或环陆法将菌落划入含有适宜培养基的无氧培养容器中。
2. 稀释分离法：将菌落分散在适宜培养基中，再将分散液进行稀释，以期获得稀释液中只有一个菌落的稀释液。
厌氧细菌培养方法的步骤
1. 准备培养基：选择适合厌氧细菌生长的培养基，如缺氧琼脂或者含有还原剂的液体培养基。
在实验室通气橱中进行操作，确保培养基不会受到氧气污染。
2. 设置好培养条件：调整好培养基的pH值和温度，使其适合目标细菌的生长。
另外，根据需要添加适量的营养物质和生长因子。
3. 处理样品：将待培养的厌氧细菌样品接种到培养基上。
在通气橱中用无菌技术操作，避免细菌受到氧气污染。
4. 封闭容器：将接种好的培养皿或者管子密封好，以防止氧气进入。
可以使用气密性较好的培养皿或者密封膜进行覆盖，确保细菌在无氧环境中生长。
5. 培养：将密封好的培养皿或者管子放入恒温培养箱或者恒温振荡培养箱中，以固定温度和适当的湿度进行培养。
根据目标厌氧细菌种类的需求，培养的时间可能会有所不同。
6. 观察和收获：在培养结束后，可以打开培养皿或者管子，观察厌氧细菌的生长情况。
根据需要，可以进行进一步的分离和纯化，或者收集细菌进行后续的实验操作。
厌氧菌的培养方法
融化的白蜡封边
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2.5 抽气换气厌氧培养法
玻璃干燥罐 混合气钢瓶:
10％二氧化碳、10％的氢气、80％的氮气
三通阀 触媒:钯粒 / 浸泡钢丝绒 / 氯化钴 厌氧指示剂
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1：厌氧培养罐 2：混合气体（CO2：H2：N2=1：1：8）钢瓶 3：压力表 4：三通阀 5：缓冲瓶 6：真空泵
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4 厌氧菌的保存
4.1继代保存：
以GAM半固体流动培养基和TEP半固 体培养基作传代培养保存。用毛细吸管吸 菌进行继代培养，使用白金接种环移菌接 种，可以避免有的菌在操作中接触空气或 氧化物而死亡。数周作一次继代培养。新 分离的的菌种，在几个月内，每3～4星期 传代一次。被保存的菌种，放室温下暗处。 最好是不同菌用不同培养基保存。
1
厌氧 无色 残存有氧气 蓝色
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10
Gas-Pak罐的使用操作程序
平皿培养基装入平皿架中置厌氧罐内； 打开内盖居中金属网袋，装入触媒钯粒； 打开锡箔纸袋，取出厌氧指示剂片； 剪开气体发生袋一角，注入10毫升水，迅
速紧闭罐盖，置培养箱中培养。 约经5～10分钟后，放入厌氧指示剂片。
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2.2.1 简易厌氧罐
0.05％亚甲基兰水溶液
0.2
厌氧 无色 残存有氧气 蓝色
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8
卢卡斯固体厌氧指示剂
2％硼砂溶液 9％硫乙醇酸 酚红溶液 0.02％美兰溶液 琼脂
厌氧 无色 残存有氧气 蓝色
5毫升 1毫升 0.1～0.2毫升 10毫升 1％
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布鲁氏指示剂
60％羟甲基氨基甲酯
1
4％葡萄糖
1
0.02％美蓝
1 液体培养基的厌氧培养法
厌氧菌的培养实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 熟悉厌氧菌的微生物学特性。
2. 掌握厌氧菌的分离和纯化方法。
3. 学习使用厌氧培养箱进行微生物培养。
4. 了解厌氧菌在生物工程和医学研究中的应用。
二、实验原理厌氧菌是一类在无氧或低氧环境中生长繁殖的微生物。
它们不能进行有氧呼吸，其能量代谢主要通过无氧发酵的方式进行。
厌氧菌在自然界中广泛存在，与人类的健康和疾病密切相关。
本实验旨在通过厌氧菌的分离和培养，了解其生长特性，为后续研究提供基础。
三、实验材料1. 厌氧菌样品：土壤、水体、粪便等。
2. 培养基：厌氧肉汤培养基、血琼脂平板、液体石蜡。
3. 器械：厌氧培养箱、接种环、接种针、无菌试管、锥形瓶、移液器、酒精灯、高压蒸汽灭菌器等。
四、实验方法1. 样品处理- 取一定量的厌氧菌样品，用无菌生理盐水进行稀释。
- 取适量稀释液，分别接种于厌氧肉汤培养基和血琼脂平板。
2. 厌氧环境制备- 将厌氧肉汤培养基和血琼脂平板放入厌氧培养箱中。
- 在厌氧培养箱中注入液体石蜡，覆盖培养基表面，隔绝空气。
3. 培养- 将厌氧肉汤培养基置于37℃恒温培养箱中培养24小时。
- 观察菌落生长情况，记录菌落形态、颜色等特征。
4. 分离和纯化- 将生长良好的菌落挑取，接种于血琼脂平板。
- 再次放入厌氧培养箱中培养，观察菌落生长情况。
- 重复上述步骤，直至获得纯化的厌氧菌。
五、实验结果1. 菌落形态- 厌氧肉汤培养基中的菌落呈圆形、表面光滑、边缘整齐、颜色为白色。
- 血琼脂平板上的菌落呈圆形、表面光滑、边缘整齐、颜色为白色，周围有溶血现象。
2. 分离和纯化- 通过多次接种和纯化，成功获得纯化的厌氧菌。
六、实验讨论1. 厌氧菌在自然界中广泛存在，对生态环境和人类健康具有重要意义。
2. 本实验成功分离和纯化了厌氧菌，为后续研究提供了基础。
3. 在厌氧菌的培养过程中，厌氧环境至关重要。
本实验通过使用厌氧培养箱和液体石蜡，成功制备了厌氧环境，保证了厌氧菌的生长。
七、实验结论1. 厌氧菌是一类在无氧或低氧环境中生长繁殖的微生物，其能量代谢主要通过无氧发酵的方式进行。
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厌氧细菌的培养
厌氧菌的培养方法
厌氧菌在有氧的情况下不能生长。
要培养厌氧菌，必须创造一个无氧的环境。
通常用培养基中加入还原剂，或用物理、化学方法去除环境中的游离氧，以降低氧化还原电势。
如疱肉培养基、硫基乙酸钠培养基，牛心脑浸液培养基等。
常用的厌氧培养方法有许多，可根据实际情况选用。
1．厌氧缸法接种好标本的平板或液体培养基试管，可放入厌氧缸内培养，厌氧缸是普通的干燥缸，用物理化学的方法使缸内造成厌氧环境，从而将厌氧菌培养出来。
2．厌氧袋（Bio-bag）即在塑料袋内造成厌氧环境来培养厌氧菌。
塑料袋透明而不透气，内装气体发生管（有硼氢化钠的碳酸氢钠固体以及5%柠檬酸安瓿）、美兰指示剂管、钯催化剂管、干燥剂。
放入已接种好的平板后，尽量挤出袋内空气，然后密封袋口。
先折断气体发生管，后折断美兰指示剂管，命名袋内在半小时内造成无气环境。
如不突变表示袋内已达厌氧状态，可以孵育。
3．厌氧手套箱（Anaerobie glove box）是迄今为止国际上公认的培养厌氧菌最佳仪器之一。
它是一个密闭的大型金属箱，箱的前面有一个有机玻璃做的透明面板，板上装有两个手套，可通过手套在箱内进行操作，故名。
箱侧有一交换室，具有内外二门，内门通箱内先关着。
欲放物入箱，先打开外门，放入交换室，关上外门进行抽气和换气（H2，CO2，N2）达到厌氧状态，然后手伸入手套把交换室内门打开，将物品移入箱内，关上内门。
箱内保持厌氧状态，也是利用充气中的氢在钯的催化下和箱中钱残余氧化合成水的原理。
该箱可调节温度，本身是孵箱或孵箱即附在其内，还可放入解剖显微镜便于观察厌氧菌菌落，这种厌氧箱适于作厌氧细菌的大量培养研究，大量培养基可放入作预还原和厌氧性无菌试验。
金属硬壁型厌氧箱的抽气、充气、厌氧环境和温度等均系自动调节。
4．厌氧盒：原理同厌氧袋，有成品销售。
5．生物耗氧法：在一密闭的容器内放以生物（多是植物），消耗氧气，同时产生二氧化碳，供细菌生长用。
6．焦性末食子酸法：在一洁净的玻片上铺上纱布或滤纸，均匀撒上焦性末食子酸，然后再混入NaHCO3粉末或NaOH溶液，迅速将已接种细菌的平板倒扣在上面，用融化的白蜡封边，造成一个封闭空间。
焦性末食子酸与碱反应后耗氧。
该法用于厌氧不严格的厌氧菌的培
养，简单。
如有梭状芽孢杆菌。
7．疱肉培养基：本身就是一个不需特殊设备的厌氧培养法。
疱肉和肉汤装入大试管，液面封凡士林，造成无氧环境。