细胞生物学实验测试题

细胞生物学实验测试题

1、试述荧光显微镜的原理和用途。（并操作）

原理：荧光显微镜是以紫外线为光源，用以照射被检物体，使之发出荧光，然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。

（滤光镜片：获得所需波长的激发光；光源：高压汞灯）

用途：荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。细胞中有些物质，如叶绿素等，受紫外线照射后可发荧光；

另有一些物质本身虽不能发荧光，但如果用荧光染料或荧光抗体染色后，经紫外线照射亦可发荧光，荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研

究的工具之一。

2、试述酸性磷酸酶显示法的原理及主要步骤。

原理：酸性磷酸酶（ACP）是溶酶体的标志酶，通常酸性磷酸酶在pH 为5左右时发挥作用能水解磷酸酯而释放出磷酸基，PO43-与底物中硝酸

铅反应生成磷酸铅沉淀物。由于这些沉淀物是无色的，需再与黄色的硫化

铵反应，生成棕黄色到棕黑色的硫化铅沉淀而被显示出来。其反应过程如

下：

β-甘油磷酸钠+酸性磷酸酶→甘油+PO43-

PO43-+Pb(NO3)2 →Pb3(PO4)2↓

Pb3(PO4)2+(NH4)2S →PbS↓(棕黑色)

主要步骤：

1、前处理：获取小白鼠或大白兔腹腔液（猪肝）

2、制片：

（1）、将腹腔液（肝细胞悬液）滴一滴于冰冻的干净载玻片上，用牙签涂开，自然干燥。

（2）、放入10%中性福尔马林固定液中固定30min。

（3）、蒸馏水中漂洗,3-5次。（洗去固定液）

（4）、磷酸酶作用液，37°C，30Min。

（5）、蒸馏水中漂洗3次，5min一次。（洗去游离铅离子）

（6）、1%硫化铵处理（3-5min）;

（7）、吉姆沙染液复染15min;（使细胞核、轮廓显示出来）

（8）、制片观察。

结果：阳性细胞内有大小不等的棕色或棕黑色的颗粒即为酸性磷酸酶。

对照实验：标本放入作用液前先用高温（50℃）处理 30min，使酶失去活

性，做好标记，其他步骤相同。

3、试述DNA的Feulgen染色法的原理及主要步骤。

原理：DNA经稀盐酸（1mol/L HCL溶液）处理后，可使嘌呤碱与脱氧

核糖间的糖苷键断裂，并使脱氧核糖的醛基游离出来，醛基化合物与Schiff试剂（无色品红溶液）结合，形成含醌基的紫红色化合物，使细胞内含DNA的部位呈紫红色，由呈现紫红色的部位即可推断DNA的存在，为

提高实验的可信度，应设置对照实验，即将对照组先用热三氯乙酸处理，以除去细胞中的DNA。

4、固定液的作用是什么？说出我们实验中所用过的几种不同

的固定液及它们的实用范围。

作用：1、破坏细胞的酶系统，防止细胞自溶；

2、稳定细胞物质成分；

3、稳定各种细胞结构的空间构型；

总的来说，杀死并固定细胞。

⑵我们实验中用到的固定液

动物肝细胞线粒体的分离与观察固定液甲醇：冰醋酸=9：1

细胞中酸性磷酸酶的定位固定液 10%福尔马林

植物细胞骨架的光学显微镜观察固定液 3%戊二醛

DNA的Feulgen染色法 Carony固定液

简单固定剂即单一固定剂，常有的有乙醇，甲醛，冰醋酸等。乙醇只能凝固清蛋白，而冰醋酸只能凝固核蛋白，甲醛对这两种蛋白都不凝固。

简单固定剂的局限性大，如将其适当混合，制成复合固定剂可以取得更好的效果。常有的混合固定剂有Carony改良液（3份无水乙醇+1份冰醋酸），

Bouin液等

5、常用的组织破碎方法有哪些？各自的适用范围如何？

1.机械法主要通过机械切力的作用使组织细胞破碎的方法，常用

的器械有组织捣碎机、匀浆器、研钵和研磨、压榨器等。

1)组织捣碎机、匀浆器：一般用于动物组织、植物肉质种子、柔嫩

的叶芽等，匀浆器破碎细胞的程度比组织捣碎机高。

2)研钵: 多用于细菌或其他坚硬植物材料，研磨时常加入少量石英

砂，玻璃粉或其他研磨剂，以提高研磨效果。

2．物理法主要通过各种物理因素使组织细胞破碎的方法。

1)反复冻溶法:多用于动物性材料。

2)急热骤冷法:用于细菌及病毒材料。

3)超声波处理:多用于微生物材料。

3．化学及生物化学法

1)自溶法: 在一定PH和适当的温度下，利用组织细胞内自身的酶

系统将细胞破碎的方法。

2)酶溶法: 利用各种水解酶，如溶菌酶、纤维素酶、半纤维素酶、

脂酶等，将细胞壁分解，使细胞内含物释放出来。

3)表面活性剂处理: 如十二烷基硫酸钠。

6、什么是差速离心法、密度梯度离心法？各自的用途如何。

差速离心法：是交替使用低速和高速离心，用不同强度的离心力使具有不同质量的物质分级分离的方法。用途：此法适用于混合样品中各沉降系数差别较大组分的分离，采取逐渐提高离心速度的方法分离不同大小的细胞器。

密度梯度离心法：用一定的介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度，将细胞悬液或者匀浆置于介质的顶部，通过重力或者离心力场的作用，使细胞分层分离。用途：可用来分离核酸、蛋白质、核糖体亚基及其它成分。

7、染色法有哪些方式？各自如何进行？

蛋白电泳常用的染色方法主要是考马斯亮蓝法，银染法，荧光染色法和负染法。用适当浓度的TritonX-100处理细胞，再经戊二醛固定和蛋白质染料考马斯亮蓝R250染色，即可观察细胞骨架结构。

吉姆萨（Giemsa）染色法：将细胞染色，使细胞器的轮廓显示出来，便于观察。

染色体染色法：醋酸洋红溶液或龙胆紫溶液

先用95%的酒精解离，再用水漂洗10min,然后用上述溶液染色3~5min。

苏木精—伊红染色法：苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。

8、显示染色体的实验，其材料往往需要作什么预处理？取材

部位如何选择？

答：预处理：适宜浓度的秋水仙素。取材：生长旺盛或具有高度分裂能力

的部位。

9、试述用考马斯亮蓝R250来显示细胞微丝骨架的原理及其