细胞生物学实验一 - 360文档中心

1-细胞生物学实验

如镜台测微尺1mm处(全长)与目镜测微尺75 刻度(150小格)重合，则:
目镜测微尺每小格的实际长度=
1 150
mm
=0.0067mm=6.7μm
④同样的方法标定高倍镜下目镜测微尺每小格的实际长度
计算公式如下:
目镜测微尺每小格的实际长度
镜台测微尺长度＝
目镜测微尺格数
＝ 30×10μm 200
(4)测量细胞并计算核质比
五、实验操作
1. 取猪肝1g，放入小烧杯中，加4ml 0.25M蔗糖缓冲液，将组织剪成约1mm立方的小块。
2. 将剪碎的组织移入匀浆器的外管中，再将内管（带柄的活塞）插入外管中，缓慢而均匀地施力，上下旋转拉动，匀浆7-10分钟，然后用六层纱布过滤回洗净的原烧杯中。（这两步操作略）
3. 每组取1个5ml离心管，加入匀浆液2ml，2000rpm离心10分钟。（每组1管）
许多酸性染料不易穿过活细胞的质膜进入细胞内，却能渗入死亡的细胞内，使其着色，以此来鉴别死活细胞。
2.方法取酵母悬液一滴于洁净玻片上，滴一滴0.2％亚甲基
蓝染液，加盖片，2分钟后于显微镜下观察细胞。
3.结果死细胞被染成蓝色，活细胞不着色。
实验作业
画图记录细胞吞噬实验所见结果
实验三
细胞核与线粒体的分级分离
实验内容
实验一、细胞的形态结构与显微测量实验二、细胞生理活动的实验观察实验三、细胞核与线粒体的分级分离实验四、细胞分裂的形态观察实验五、细胞原代培养实验六、细胞计数及死活细胞的鉴定实验七、综合设计性实验
实验一
细胞的形态结构与显微测量
实验目的
(一) 观察并了解细胞的基本形态。 (二)掌握临时制片和显微绘图的方法。 (三)了解显微测微尺的原理及使用方法

细胞生物学实验报告

细胞生物学实验报告细胞生物学实验报告篇一实验教师：xxx所在学校：xxx中学目的要求：1练习徒手切片2认识叶片的结构3画叶片的表皮细胞和保卫细胞材料用具：新鲜叶片（如菠菜、槐树、蚕豆的叶片），显微镜，双面刀片（两片、并在一起、一侧用胶布粘牢）、镊子、载玻片、盖玻片、叶片的永久切片、盛有清水的培养皿、滴管、吸水纸、碘液、纱布、毛笔、小木板。

方法步骤方法与步骤要点注意事项（一）练习徒手切片，制作叶片横切片的临时切片1将新鲜的叶片平放在小木板上。

2右手捏紧并排的两片刀片，沿着图中虚线的方向，迅速切割。

3把刀片夹缝中存在的切下的薄片放入盛有清水培养皿中。

要多切几次（每切一次，刀片要蘸一下水）。

4用毛笔蘸出较薄的一片，制成临时切片。

叶片下面要垫上小块木板，以防损坏桌面。

刀片要捏紧，切割速度要快，注意安全。

为了便于观察，载玻片的水滴中可以同时放几片叶的横切片，选择切得较薄的一片用来观察。

（二）观察叶片的结构1．用显微镜先观察叶片横切面的临时切片，再观察叶片的永久横切片。

2．观察时注意分清时的表皮、叶肉和叶脉。

仔细观察上、下表皮细胞的`区别（三）观察叶片的下表皮1．用镊子撕下一小块叶片的下表皮，制成临时装片。

2．用显微镜进行观察，下表皮细胞的形态是什么样子的，下表皮上有没有气孔？撕取下表皮时，一定要薄，否则影响观察效果。

注意观察气孔的结构。

（四）画图在下面空白处画出下表皮上一对保卫细胞及周围的几个表皮细胞，这一对保卫细胞要详细画，周围的细胞只需勾出轮廓。

画图时，要真实、实事求是。

讨论与交流1．保卫细胞的结构特点对植物的蒸腾作用有什么意义？2．从结构上看，叶片有哪些方面是适于接受阳光的？细胞生物学实验报告篇二一、实验目的1. 初步学会观察植物细胞质壁分离和复原的方法。

2. 理解植物细胞发生渗透作用的原理。

二、实验原理当细胞液的浓度小于外界溶液的浓度时，细胞液中的水分就透过原生质层进入外界溶液中，使细胞壁和原生质层都出现一定的收缩。

细胞生物学实验(本科生)实验内容

细胞生物学实验（本科生）实验内容实验一细胞的结构目的：1、熟悉实验室规范2、掌握光镜下细胞器的形态、分布特点；3、掌握临时制片法；4、学会生物绘图内容：（一）录像：临时标本片的制作（二）光镜下细胞器形态学观察：1、高尔基体（兔神经节切片）2、细胞核及核仁（蝾螈表皮装片）3、线粒体（肾小管切片）4、细胞骨架（培养肝癌细胞飞片）5、中心体*（马蛔虫受精卵切片）（二）操作：制作人口腔上皮细胞临时制片（显示活体线粒体）（三）实验报告：绘制人口腔粘膜上皮细胞实验二细胞化学细胞工程目的：1、掌握甲基绿-派洛咛染色法原理及操作技巧2、了解几种化学成分的显示方法及原理；3、观察各种化学成分在细胞中的分布；4、了解PCC原理；5、了解细胞融合及其应用；内容：（一）录象：克隆羊（二）观察：1、糖原（动物肝切片，PAS反应）2、酸性蛋白（蟾蜍血涂片，酸性固绿染色）3、酸性磷酸酶*（鼠腹腔液涂片，金属沉淀法显色）4、DNA* （小鼠睾丸切片，Feulgen反应）5、DNA、RNA*（人口腔粘膜上皮细胞涂片，吖啶橙染色，荧光显微镜观察）6、细胞融合（鸡血细胞、培养细胞）7、PCC*（Hela细胞）（三）操作：制作蟾蜍血涂片，显示DNA、RNA（四）实验报告：甲基绿-派洛咛染色原理、步骤及结果实验三显微测量细胞的生理活动目的：1、掌握显微测量技术；2、观察细胞的生理活动；3、掌握死活细胞的鉴别方法及原理；内容：(一)录象：细胞的活动显微测量（二）观察：1、胞质环流（黑藻叶片）2、吞噬作用*（小鼠白细胞）3、吞噬作用（蟾蜍白细胞）（三）操作：1、显微测量（蟾蜍红细胞）2、死活细胞鉴别（酵母细胞）（四）实验报告：1、测量5-10个细胞的大小，计算平均值；2、计算细胞存活率。

实验四细胞增殖染色体（质）目的：1、熟悉细胞增殖的主要方式；2、掌握细胞增殖周期各期的形态学特点；3、熟悉人染色体的基本形态特征；4、掌握X染色质标本的制备方法及原理；内容：（一）观察：1、动物细胞有丝分裂（马蛔虫受精卵切片）2、植物细胞有丝分裂（洋葱根尖纵切片）3、收缩环*（肝癌细胞飞片）4、无丝分裂*（草履虫装片）5、人染色体的基本形态（人血涂片）（二）操作：1、制作有丝分裂压片（洋葱根尖）2、制作X染色质标本片（人口腔粘膜上皮细胞）（三）实验报告：绘有丝分裂图、X染色质图。

细胞生物学实验

实验一细胞膜的渗透性一、实验目的1、了解细胞膜对物质渗透的一般规律。

2、了解溶血现象及其发生机制。

二、实验原理细胞膜为一种半透膜，对物质的通透具有选择性。

当红细胞放入低渗溶液时，细胞吸水膨胀而发生溶血。

当红细胞放入含有不同溶质的等渗溶液中时，由于细胞膜对不同溶质的透性不同，细胞发生溶血的时间也会不同，故发生溶血现象时间长短可作为测量物质进入红细胞速度的一种指标。

三、实验操作1、从集市买适量活鸡血，取5ml（防止污染），放入盛有20ml Alsever’s液瓶中，混匀后置冰箱保存备用（2周内使用）。

2、使用前取用Alsever’s液保存的新鲜鸡血5ml，加入8ml的0.128mol/L NaCl溶液，小心混匀，1000r/min 离心5min，如此3次洗涤，最后配成30%的鸡红细胞（CRBC）悬液。

3、取11支试管，按附表中所示测试溶液，分别取样各3ml，作出标记后，各管均加入红细胞悬液2滴，混匀后静置于室温中，观察各支试管中发生溶血的时间及变化。

四、观察结果1、试管内液体分两层：上层浅黄色，下层红色不透明为不溶血（―）,镜检红细胞完好呈双凹盘状。

2、如果试管内液体浑浊，上层带红色者，称不完全溶血（+或++），镜检部分红细胞呈碎片。

3、如果试管内液体变红色而透明者，称完全溶血（+++），镜检发现细胞全部呈碎片。

五、实验建议1、鸡血在离心时，试管均需在扭力天平上平衡。

2、目测红细胞体积或置于带刻度的离心管中，加入生理盐水配成30%的红细胞悬液。

、3、试管中有红细胞和测试溶液时，不应强力摇晃，以免造成人为的红细胞破裂。

实验报告及作业※目测判断标准：快速溶血：+++；慢速溶血：++或+；不溶血：―实验二核酸(DNA和RNA)的细胞核定位观察一、实验目的1、了解和学习两类核酸显示的原理及操作程序。

2、了解细胞中DNA和RNA的分布。

二、实验原理细胞内的DNA主要分布在细胞核内，RNA主要存在于细胞质中。

甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同：甲基绿使DNA呈现绿色，吡罗红使RNA呈现红色。

试验1细胞大小测定

《细胞生物学》实验（养殖：1——3；生技、海科：1——6）实验一细胞器的分离、提取与测量【目的】掌握叶绿体分离的一般原理和方法，学习用测微尺测量细胞与细胞器大小的测定方法，并了解应用荧光显微镜方法观察叶绿体荧光现象。

【原理】叶绿体是植物细胞中较大的一种细胞器，能发生特有的能量转换。

利用低速离心机可以分离叶绿体，其分离在等渗溶液(0.35 mol／L氯化钠或0.4mol／L蔗糖溶液)中进行，目的是为了防止渗透压的改变引起叶绿体的损伤。

将匀浆液在1000r／min离心，去除其中的组织残渣和一些未被破碎的完整细胞，然后，3000 r／min离心，可获得沉淀的叶绿体(混有部分细胞核)。

在室温下进行分离要迅速。

用显微测微尺可以直接测量细胞大小，精确度较高。

显微测微尺分为物镜测微尺和目镜测微尺2种。

目镜测微尺是1块小玻璃圆片(可放人目镜内，其大小正好卡人目镜筒内)，在圆片正中央刻有1cm长的直线，直线上均匀分为100小格或50小格，每小格的长度，随目镜和物镜的放大倍数而变动。

物镜测微尺是一块特制的玻璃载片，载片中央刻有一条1mm长的直线，均匀地刻分为100个小格，每小格为1／100mm (为10μm)，用一小圆形玻璃盖片封盖着，物镜测微尺较目镜测微尺小格的间距精确，通过目镜测微尺测量细胞与细胞器的大小(小格数)，然后换以物镜测微尺校测小格数的精确数值，即为测量的细胞与细胞器大小结果。

某些物质在一定短波长的光(如紫外光)的照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基态时，就能在极短的时间内放射出比照射光波长更长的光(如可见光)，这种光就称为荧光。

若停止供能荧光现象立即停止。

有些生物体内的物质受激发光照射后，可直接发出荧光(称为自发荧光)，如叶绿素的火红色荧光。

有的生物材料本身不发荧光，但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光(称为间接荧光)，如叶绿体吸附吖啶橙后可发橘红色荧光。

【材料】菠菜叶片。

【实验用品】1．试剂：蒸馏水，0.35 mol／L氯化钠溶液，0.01% 吖啶橙。

细胞生物学实验 (1)

结构特点：
a.光源：最好采用单色光，因为光的速度，折射率，和干涉现象由于波长的不同而有差异。一般镜检可使用普通光。
b.目镜：要带有十字线的目镜。
c.聚光镜：为了取得平行偏光，应使用能推出上透镜的摇出式聚光镜。
d.伯特兰透镜：聚光镜光路中的辅助部件，这是把物体所有造成的初级相放大为次级相的辅助透镜。它可保证用目镜来观察在物镜后焦平面中形成的干涉图样。
3 、材料：
兔肝，蟾蜍，洋葱鳞莖、黄豆幼苗根尖
实验步骤：
样品的制备→染色→观察
作业：
绘出你所观察到的动植物液泡及线粒体
设计性实验：细膜的通透性
原理
细胞膜是细胞与外界环境进行物质交换的结构。可选择性地让某些物质进出细胞，各种物质出入细胞的方式是不同的，如水分子可以按照物质浓度梯度从渗透压低的一侧通过细胞膜向渗透压高的一侧扩散，以至于在高渗环境中，动物细胞会失水而收缩；在低渗环境中，动物细胞会吸水膨胀直至破裂。
结构特点：
相差物镜、具有环状光阑的转盘聚光器、合轴调中望远镜和绿色的滤光片。
使用方法 :
相差装置为多功能系列显微镜中的附属装置．与普通显微镜配合使用。 (1) 相差装置的调换安装卸下普通显微镜使用的聚光器，将环状光阑装在聚光器支架上，把绿色滤光片放在上面，它可吸收红色和蓝色光，使波长范围小的单色光线进行照明，并有吸热作用，能使相差观察获得良好的效果。再从转换器上旋下普通物镜，换上相差物镜。
实验目的
了解细胞膜的渗透性及各种物质进入细胞的速度。
实验器材与材料
1、器材
烧杯、试管、移液管等
2、试剂
氯化钠、氯化铵、草酸铵、硫酸钠、甘油、乙醇、丙醇等。
3、材料
血、半透膜、洋葱、鸡蛋等

细胞生物学实验材料

实验一荧光显微镜的原理和使用实验二叶绿体的分离与荧光观察实验三线粒体的活体染色与观察实验四细胞膜的通透性实验五 DNA的细胞化学——Feulgen反应实验六植物染色体标本的制备和观察实验七细胞计数实验八植物细胞骨架的光学显微镜观察实验九植物原生质体的分离和活性鉴定实验十环境因素诱变染色体改组的观察实验一荧光显微镜的原理和使用一、实验目的了解荧光显微镜的构造及其维护方法；掌握荧光显微镜的使用方法和使用中的注意事项。

二、实验原理荧光显微镜是选择由高压汞灯或类似光源发出一定波长的激发光，激发标本内的荧光物质发射出各种不同颜色的荧光后，观察细胞某种特异成分的分布状态的显微镜。

与普通光学显微镜一样，荧光显微镜也有物镜、目镜、调焦装置、光源、聚光器、载物台、镜身等组成部分。

所不同的是，荧光显微镜增加了激发光源和滤片系统，它投射到样品上的是特定波长的激发光而不是普通的可见光。

在激发光的作用下，样品中的荧光物质产生图1荧光显微镜发射光（即荧光）。

因此，荧光显微镜观察到的是样品中能产生荧光的部分所呈现的荧光映象，普通光学显微镜则是整个样品的可见光透射和折射影像。

某些物质在—定短波长的光（如紫外光）的照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基态时，就能在极短的时间内放射出比照射光波长更长的光(如可见光)，这种光就称为荧光。

若停止供能荧光现象立即停止。

有些生物体内的物质受激发光照射后直接发出荧光，称为自发荧光（或直接荧光），如叶绿素的火红色荧光和水质素的黄色荧光等。

有的生物材料本身不发荧光，但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光，这种荧光称为次生荧光（或间接荧光），如叶绿体吸附吖啶橙后可发桔红色荧光。

利用荧光显微镜对可发荧光物质进行检测时，将受到许多因素的影响，如温度、光、淬灭剂等。

因此在荧光观察时应抓紧时间，有必要时立即拍照。

三、实验用品荧光显微镜、镊子、载玻片、盖玻片、解剖刀、0.01%吖啶橙染色液（acridine orange）、蒸馏水、水葫芦叶片四、实验内容与方法（一）荧光显微镜的构造1、基本装置荧光显微镜的基本装置是由普通光学显微镜加上一些附件（如荧光光源、激发滤片、二向色镜和阻断滤片等）的基础上组成的。

细胞生物学实验指导

细胞生物学实验指导实验一、显微镜的结构与使用方法一、实验目的1.认识显微镜的构造2.学会独立操作显微镜二、仪器和材料显微镜、擦镜纸、装片三、实验内容1.学生按编号把自己的显微镜取出，放在试验台上，在教师的指导下熟悉显微镜各部分的构造及用途，然后进行操作练习。

先用低倍镜进行对光联系，使视野明亮而均匀。

如果使用双筒目镜，还应学习目镜间距的调节。

在转换高倍物镜观察，此时应注意它的视野亮度与低倍物镜有无区别？并思考通过哪几种方法调节使得高倍物镜的视野达到要求的亮度。

2.取已制备好的装片进行观察：按低倍镜使用步骤和方法进行操作练习。

注意要使观察到的像向前移动时，玻片标本应向那个方向移动？欲使观察到的像向右移动时，拨片标本应向那个方向移动？3.观察制备好切片：细胞核、中心体、胞间连丝、有丝分裂、减数分裂、高尔基体等。

4.观察完毕后，按正规要求取下玻片，把显微镜收好。

四、作业绘制2-3中细胞结构实验二、Feulgen反应显示DNA（一）实验目的1．掌握临时制片法。

2．熟悉Feulgen反应的原理及操作步骤。

3．观察细胞中DNA的分布。

（二）实验原理Feulgen在1924年发明一种对DNA特异的组织化学染色反应，故称Feulgen反应。

DNA经酸（1mol/L HCl）水解后，DNA分子中的嘌呤和脱氧核糖连接的配糖键被打开，脱氧核糖的一端释放出醛基，并在原位与Schiff试剂反应形成特异性的紫红色产物。

该产物能特异地吸收峰值为550~570nm的光波。

并且在一定的浓度范围内，对550~570nm光波的吸收值与DNA 含量成正比关系，既符合化学计量学关系。

此法既可定位用于细胞或组织化学染色反应，观察DNA的分布，又可用显微分光光度计和图像分析仪对细胞或组织中DNA的含量进行定量分析。

紫红色的产生，是由于反应产物的分子内含有醌基，醌基是一个发色团，所以具有颜色。

对照组或采取不经盐酸处理，或预先用热三氯醋酸或DNA酶处理，抽提去细胞中的DNA而得到阴性反应。

细胞生物学实验本科生实验内容

细胞生物学实验（本科生）实验内容实验一细胞的结构目的：1、熟悉实验室规范2、掌握光镜下细胞器的形态、分布特点；3、掌握临时制片法；4、学会生物绘图内容：（一）录像：临时标本片的制作（二）光镜下细胞器形态学观察：1、高尔基体（兔神经节切片）2、细胞核及核仁（蝾螈表皮装片）3、线粒体（肾小管切片）4、细胞骨架（培养肝癌细胞飞片）5、中心体*（马蛔虫受精卵切片）（二）操作：制作人口腔上皮细胞临时制片（显示活体线粒体）（三）实验报告：绘制人口腔粘膜上皮细胞实验二细胞化学细胞工程目的：1、掌握甲基绿-派洛咛染色法原理及操作技巧2、了解几种化学成分的显示方法及原理；3、观察各种化学成分在细胞中的分布；4、了解PCC原理；5、了解细胞融合及其应用；内容：（一）录象：克隆羊（二）观察：1、糖原（动物肝切片，PAS反应）2、酸性蛋白（蟾蜍血涂片，酸性固绿染色）3、酸性磷酸酶*（鼠腹腔液涂片，金属沉淀法显色）4、DNA* （小鼠睾丸切片，Feulgen反应）5、DNA、RNA*（人口腔粘膜上皮细胞涂片，吖啶橙染色，荧光显微镜观察）6、细胞融合（鸡血细胞、培养细胞）7、PCC*（Hela细胞）（三）操作：制作蟾蜍血涂片，显示DNA、RNA（四）实验报告：甲基绿-派洛咛染色原理、步骤及结果实验三显微测量细胞的生理活动目的：1、掌握显微测量技术；2、观察细胞的生理活动；3、掌握死活细胞的鉴别方法及原理；内容：(一)录象：细胞的活动显微测量（二）观察：1、胞质环流（黑藻叶片）2、吞噬作用*（小鼠白细胞）3、吞噬作用（蟾蜍白细胞）（三）操作：1、显微测量（蟾蜍红细胞）2、死活细胞鉴别（酵母细胞）（四）实验报告：1、测量5-10个细胞的大小，计算平均值；2、计算细胞存活率。

实验四细胞增殖染色体（质）目的：1、熟悉细胞增殖的主要方式；2、掌握细胞增殖周期各期的形态学特点；3、熟悉人染色体的基本形态特征；4、掌握X染色质标本的制备方法及原理；内容：（一）观察：1、动物细胞有丝分裂（马蛔虫受精卵切片）2、植物细胞有丝分裂（洋葱根尖纵切片）3、收缩环*（肝癌细胞飞片）4、无丝分裂*（草履虫装片）5、人染色体的基本形态（人血涂片）（二）操作：1、制作有丝分裂压片（洋葱根尖）2、制作X染色质标本片（人口腔粘膜上皮细胞）（三）实验报告：绘有丝分裂图、X染色质图。

细胞生物学实验技术一

(2)脱水
定义：借助某些化学溶剂置换组织内水分的过程常用的脱水剂：酒精
(3)包埋
定义：将组织块包入包埋剂使组织硬化的过程。常用的包埋剂：液体石蜡、树脂
(4)切片
1-10 μm
（5）染色
采用某些化学物质特异性或选择性地与细胞内的某些成分相互作用，从而原位显示细胞某种成分或结构的方法
A 选择性染色
观察组织的表面三维结构
冰冻断裂电镜-观察生物膜结构
A 冰冻组织( N2) B 重金属喷镀(Pt) C 喷碳加固(C) - SEM D 复型 - TEM
冰冻蚀刻电镜-观察生物膜结构
A 冰冻组织( N2)
B 真空中升华
C 重金属喷镀(Pt) D 喷碳加固(C) - SEM E 复型 - TEM
负染电镜技术-观察纤维状\颗粒状成分
活体细胞观察
5.激光扫描共焦显微镜
（ Laser Scanning Confocal Microscope）
(1)原理
在显微镜基础上配置激光光源，扫描装置，共轭聚焦装置和检测系统而形成的显微镜。
单色激光光源
光源后－照明针孔－点光源
检测器前－探测针孔分层扫描三维重建
共扼
（2）应用
A 细胞的三维重建
考马斯亮蓝 – 蛋白质 Brachet反应
hematoxylin-eosin
B 特异性染色
酶 + 底物
+ substrate
抗原 + 抗体
antigen
** *
* * *
antibody
酶标记荧光标记
*
*
*
*
*
*
3.荧光显微镜技术
(1) 原理

1-细胞生物学实验

五、实验操作

1. 取猪肝1g，放入小烧杯中，加4ml 0.25M蔗糖缓冲液，将组织剪成约1mm立方的小块。 2. 将剪碎的组织移入匀浆器的外管中，再将内管（带柄的活塞）插入外管中，缓慢而均匀地施力，上下旋转拉动，匀浆7-10分钟，然后用六层纱布过滤回洗净的原烧杯中。（这两步操作略） 3. 每组取1个5ml离心管，加入匀浆液 2ml，2000rpm离心10分钟。（每组1管）接下去的操作见下面的流程图。健那绿染色：各取10μlD4悬浮液和健那绿染液在载玻片上混合，10分钟后加盖玻片，观察线粒体。改良苯酚品红染色：取10μlD6涂片，滴10μl改良苯酚品红染液，5分钟后加盖玻片，观察细胞核。
2.细胞核的分离提取
3.高速离心分离提取线粒体
操作步骤装有上清液的高速离心管→ 17000rpm 离心 20 分钟 → 弃上清，留取沉淀物 → 加入 0．25mol／L蔗糖－0.003 mol／L氯化钙液1ml，用吸管吹打成悬液→17000rpm离心20分钟→将上清吸入另一试管中，留取沉淀物，加入 0.1ml 0． 25mol／L蔗糖一0.003mol／L氯化钙溶液混匀成悬液→取上清液和沉淀物悬液，分别滴于载玻片上，各滴一滴 0.02 ％詹纳斯绿 B 染液盖上盖片染20分钟→油镜下观察，颗粒状的线粒体被詹纳斯绿B染成蓝绿色。
(2) 镜台测微尺

1.外形是一载玻片，上有一带精细刻度的标尺。
2 . 总长度为 1mm，分为 100 等份，每一个格的长度为 0.01mm(10μm)。
(3)标定方法

①将镜台测微尺置镜台上。 ②低倍下找到镜台测微尺，使之与目镜测微尺平行且左端对齐(0刻度重合)。

(完整版)医学细胞生物学实验1

酸性蛋白的显示结果
（左图×100，右图×400）
碱性蛋白的显示结果
(左图×100，×400）
作业
实验一光学显微镜的使用与细胞化学成分的分析
• 实验内容
• 一、显微镜的结构及使用方法
• 1、光学显微镜的主要构造
• 机械部分
• 照明部分
• 光学部分
• 2、光学显微镜的使用方法
• 对光置片低倍高倍
• 低倍镜使用
•
高倍镜使用
• 3、使用光学显微镜的注意事项
复原
二、细胞化学成分的分析
1 、酸性蛋白和碱性蛋白的显示 •制作蟾蜍血涂片三张，编号。 •1#、2#血涂片→凉干→70%乙醇中固定5 分钟→冲洗→90℃的5%三氯醋酸处理15 分钟→冲净 → 1#→0.1%酸性固绿染色3分钟
2#→0.1%碱性固绿染色30分钟 →冲洗→吸干→观察
2、DNA和RNA的显示
3#血涂片→凉干→70%乙醇中固定5-10 分钟→冲洗→甲基绿一哌罗宁混合染液染色20分钟→冲洗→吸干→观察四、作业（1）绘制蟾蜍红C所显示的酸性蛋白或碱性蛋白的分布图（2）绘制蟾蜍红C所显示的DNA和RNA 分布图

细胞生物学实验

• sin α /2的最大值必然小于1；介质为空气，镜口率一般为0.05~0.95；油镜头用香柏油为介质，镜口率可接近1.5。
• 普通光线的波长为400~700nm，分辨力数值不会小于0.2μm，人眼的分辨力为0.2mm。
【操作方法】
▪ 1、取洋葱块茎，用刀片切下0.5 cm大小的小块时，小心用镊子夹住内皮，轻轻撕下，置于载玻片上，然后加2滴碘液，5～10min后，盖上盖玻片，同时用吸水纸拭去过多的碘液，随后置于显微镜下观察。
• 其中λ为入射光线波长；N．A．为镜口率＝ｎsinα/2，n=介质折射
率；α=镜口角（样品对物镜镜口的张角）。
思考：如何提高显微镜的分辨能力？
表一、几种介质的折射率
介质空气水香柏油 α 溴萘折射率 1 1.33 1.515 1.66
显微镜的几个光学特点
▪ 制作光学镜头所用的玻璃折射率为1.65~1.78，所用介质的折射率越接近玻璃的越好。
注意事项与作业
▪ 【注意事项】 ▪ 1、做血涂片时，应该注意：①推片的边缘要平滑。②推血
膜时，用力要均匀，保持角度，中途不能停止。若停止再推，血膜产生波纹，薄厚不均。⑧推血膜时，如血滴大、角度大，速度慢，易出现较厚的血膜，对观察不利。 ▪ 2、做刮取口腔上皮细胞前，应超前漱口，以防残留的食物渣影响镜下观察。 ▪ 3、油镜使用完毕后，应及时用蘸有二甲苯的擦镜纸擦拭干净，以免油镜受到污染。
实验用品
▪ 1、材料：普通显微镜、普通离心机、扭力天平、 10ml试管、10ml刻度离心管、试管架，2ml注射器（无需针头）或5ml移液管、洗耳球、滴管、载玻片、擦镜纸、记号笔。
▪ 2 、试剂： 0.128mol/L NaCl 溶液、 0.128mol/L NH4Cl 溶液、 0.128mol/L NH4AC 溶液、 0.128mol/L NaNO3溶液、0.09mol/L Na2SO4溶液、0.24mol/L葡萄糖、 0.24mol/L 甘油、 0.24mol/L 乙醇、 0.24mol/L丙酮、0.128mol/L察------临时制片法

细胞生物学实验报告

1、通过对原核和真核各种形态细胞的光学显微镜观察，了解细胞的形态及其显微构造；2、学习显微测量的方法，对细胞的大小有向来观认识。

小白鼠肝细胞切片；鸡血红细胞；蚕豆叶片横切片；普通光学显微镜；目镜测微尺；镜台测微尺；载玻片；盖玻片。

(一)细胞形态观察l、动物细胞的观察〔1〕人肝细胞切片：在显微镜下子细观察肝细胞的形态构造。

〔2〕鸡血细胞涂片的观察：观察血细胞的组成；红细胞、白细胞、血小板的形态特点。

2、植物细胞的观察〔1〕取蚕豆叶片横切片的观察：注意表皮细胞和叶肉细胞的根本构造。

〔二〕细胞的大小和测量1、卸下目镜的上透镜，将目镜测微尺刻度向下装在目镜的焦平面上，再旋上目镜的上透镜。

2、将镜台测微尺刻度向上放在镜台上夹好，使测微尺分度位于视野中央。

调焦至能看清镜台测微尺的分度。

3、小心挪移镜台测微尺和转动目镜测微尺(如目镜测微尺分度含糊，可转动目镜上透镜发展调焦)，使两尺左边的向来线重合，然后由左向右找出两尺另一次重合的直线。

4、记录两条重合线间目镜测微尺和镜台测微尺的格数。

按下式计算目镜测微尺每格等于多少μm：1、目镜校正： 40倍显微镜目镜测微尺每格的微米数2、细胞大小的测量：1、血细胞按含量上下，主要含有：红细胞，白细胞，血小板。

白细胞最大，红细胞次之，血小板最小。

红细胞：主要的功能是运送氧。

白细胞：主要扮演了免疫的角色，当病菌侵入人体时，白细胞能穿过毛细血管壁，集中到病菌入侵部位，将病菌包围，吞噬。

血小板：止血过程中起着重要作用。

细胞形态见以下图。

2、植物细胞普通比动物细胞大一些。

形态图见下。

3、在不同放大倍数下，测定的细胞大小根本一致，但有一些偏差。

放大倍数越大，在视野中同等实际距离下的两点视野距离更大，而更容易测量准确。

1、熟悉PAS 法原理及操作步骤；2、观察PAS 反响的染色结果，并观察多糖在组织细胞中的分布。

多糖是由多个单糖份子缩合脱水而生成的化合物。

一些不溶性的多糖构成植物和动物的骨架，如植物的纤维素和动物的甲壳素，普通称为构造多糖。

细胞生物学实验方案

实验一细胞形态结构与几种细胞器的观察
实验目的
在光学显微镜下识别细胞和细胞器的形态结构，掌握生物绘图的方法。
实验原理
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细胞在形态上是多种多样的，有球形、椭圆形、扁平形、立方形、梭形、星
形等。虽然细胞的形状各异，但是它们却有共同的基本结构特点．都由细胞膜（动
物）、细胞壁（植物）、细胞质和细胞核组成。细胞中的各种细胞器，如线粒体、高尔基体、中心体、核仁、染色体等，一般经过一定固定染色处理后，大多数在
方法与步骤
剪取一小块红辣椒，用小刀小心刮除果肉，留下一层极薄的表皮，放在载玻
片上，滴一滴水，盖上盖玻片后观的胞间连丝。
实验三细胞膜的通透性
实验目的
了解相对分子质量、脂溶性大小、电解质和非电解质溶液对细胞膜透性的影响。
实验原理
细胞膜在不断变化的环境中，必须保持自身的稳恒状态，才能生存。细胞膜允许一些物质通透，又能降低甚至阻挡另一些物质的通透，所以细胞膜具有选择通透性。水分子可以自由通过细胞膜，当细胞处千低渗液环境时，水分子大量渗到细胞内，使细胞膨胀、进而破裂，血红蛋白释放到介质中，由不透明的红细胞悬液变为红色透明的血红蛋白溶液，这就是溶血现象，溶血现象可作为测量物质进入红血细胞速度的一种指标。
6. 在制好的密度梯度上小心地沿离心管壁加入 0.4 mL 上清液。 7. 严格平衡离心管，份量不足的管内轻轻加入少量上清液。 8. 用水平转头离心 8000r/min, 20 min。 9. 取出离心管，可见叶绿体在密度梯度液中间形成带，用滴管轻轻吸出滴千载
玻片上，盖上盖玻片，显微镜下观察。还可用荧光显微镜观察。作业 1. 分离的叶绿体是否纯净？试分析原因。 2.匀浆介质为什么选用 0.25mol/L 庶糖？匀浆在低温下快速进行是何道理？

细胞实验教案1.

细胞生物学实验教案实验一细胞核与线粒体的分级分离一、实验目的了解差速离心法分离细胞器的原理，以及练习使用差速离心法分离哺乳动物的细胞核与线粒体。

二、实验原理细胞内不同结构的比重和大小都不相同，在同一离心场内的沉降速度也不相同，根据这一原理，常用不同转速的离心法，将细胞内各种组分分级分离出来。

分离细胞器最常用的方法是将组织制成匀浆，在均匀的悬浮介质中用差速离心法进行分离，其过程包括组织细胞匀浆、分级分离和分析三步，这种方法已成为研究亚细胞成分的化学组成、理化特性及其功能的主要手段。

匀浆(Homogenization)低温条件下，将组织放在匀浆器中，加入等渗匀浆介质(即0.25mol／L蔗糖一0.003mol／L氯化钙)进行破碎细胞使之成为各种细胞器及其包含物的匀浆。

分级分离(Fractionation)由低速到高速离心逐渐沉降。

先用低速使较大的颗粒沉淀，再用较高的转速，将浮在上清液中的颗粒沉淀下来，从而使各种细胞结构，如细胞核、线粒体等得以分离。

由于样品中各种大小和密度不同的颗粒在离心开始时均匀分布在整个离心管中，所以每级离心得到的第一次沈淀必然不是纯的最重的颗粒，须经反复悬浮和离心加以纯化。

分析分级分离得到的组分，可用细胞化学和生化方法进行形态和功能鉴定。

三、细胞核的分离提取(一)操作步骤1．用颈椎脱位的方法处死小白鼠后，迅速剖开腹部取出肝脏，剪成小块(去除结缔组织)尽快置于盛有0.9％NaCl的烧杯中，反复洗涤，尽量除去血污，用滤纸吸去表面的液体。

2．将湿重约1g的肝组织放在小平皿中，用量筒量取8ml预冷的0.25mol／L蔗糖一0.003mol／L氯化钙溶液，先加少量该溶液于平皿中，尽量剪碎肝组织后，再全部加入。

3．剪碎的肝组织倒入匀浆管中，使匀浆器下端浸入盛有冰块的器皿中，左手持之，右手将匀浆捣杆垂直插入管中，上下转动研磨3～5次，用3层纱布过滤匀浆液于离心管中，然后制备一张涂片①，做好标记，自然干燥。

细胞生物学实验报告1-动物细胞融合

【实验目的】1.了解动物细胞融合的常用方法2.学习化学融合和电融合的基本操作3.观察动物细胞融合过程中的行为和变化【实验原理】1.病毒诱导融合仙台病毒、牛痘病毒、新城鸡瘟病毒和疱疹病毒等可以介导细胞的融合。

这类病毒的被膜中含有融合蛋白，可以介导病毒同宿主细胞融合，也可以介导细胞与细胞的融合。

用紫外线灭活后，这些病毒即可诱导细胞发生融合。

2.化学诱导融合很多化学试剂都能诱导细胞融合，如聚乙二醇（PEG），二甲基亚砜、山梨醇、甘油、溶血性卵磷脂，磷脂酰丝氨酸等。

这些物质能够改变细胞膜脂质分子的排列，在去除这些物质之后，细胞膜趋向于恢复原有的有序结构。

在恢复的过程中相接处的细胞由于接口处脂质双分子层的相互亲和与表面张力，细胞膜融合，胞质流通，发生融合。

化学诱导方法，操作方便，诱导融合的概率比较高，效果稳定，适用于动、植物细胞，但对细胞具有一定的毒性。

PEG是被广泛使用的化学融合剂。

3.电击诱导融合包括电诱导、激光诱导等。

其中，电诱导是先使细胞在电场中极化成为偶极子，沿电力线排布成串，再利用高强度、短时程的电脉冲击破细胞膜，细胞膜的脂质分子发生重排，由于表面张力作用，两细胞发生融合。

电诱导方法具有融合过程易控制，融合概率高，作用机制明确，可重复性高等优点。

【实验材料】1.材料鸡血红细胞2.试剂 50%PEG、0.85%氯化钠溶液、GKN缓冲溶液3.器材倒置显微镜、离心机、量筒、注射器、载玻片、盖玻片、离心管等【实验步骤】1.取离心管，加入冷藏的鸡血1ml，加入4ml 0.85%氯化钠溶液，摇匀2.将离心管放入离心机中，以1000-1200r/min的速度离心5分钟左右。

取出离心管，弃掉上清液，再加入4ml氯化钠溶液，重复以上操作。

3.取离心管，弃掉上清液后，按照红细胞沉积的体积，加入1-2mlGKN溶液，摇匀。

4.取以上溶液1ml，加入3mlGKN溶液，再次摇匀5.取以上溶液1ml，加入0.5mlPEG，先静置1-2min，再将溶液摇匀后，静置1-2min。