微生物细胞数目

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微生物数量测定解析

《环境微生物新技术》课程作业2.微生物数量测定方法有哪些？空气、水、土壤样品分别适用哪些方法？请举例说明。

常见微生物数量的测定方法<1>1.计数器测定法：即用血细胞计数器进行计数。

取一定体积的样品细胞悬液置于血细胞计数器的计数室内，用显微镜观察计数。

由于计数室的容积是一定的(O.1mm3)，因而根据计数器刻度内的细菌数，可计算样品中的含菌数。

本法简便易行，可立即得出结果。

本法不仅适于细菌计数，也适用于酵母菌及霉菌孢子计数。

2、电子计数器计数法:电子计数器的工作原理是测定小孔中液体的电阻变化，小孔仅能通过一个细胞，当一个细胞通过这个小孔时，电阻明显增加，形成一个脉冲，自动记录在电子记录装置上。

该法测定结果较准确，但它只识别颗粒大小，而不能区分是否为细菌。

因此，要求菌悬液中不含任何碎片。

3、活细胞计数法 :常用的有平板菌落计数法，是根据每个活的细菌能长出一个菌落的原理设计的。

取一定容量的菌悬液，作一系列的倍比稀释，然后将定量的稀释液进行平板培养，根据培养出的菌落数，可算出活菌数。

此法灵敏度高，是一种检测污染活菌数的方法，也是目前国际上许多国家所采用的方法。

使用该法应注意：①一般选取菌落数在30～300之间的平板进行计数，过多或过少均不准确；②为了防止菌落蔓延，影响计数，可在培养基中加入O．001％2，3，5一氯化三苯基四氮唑(TTC)；③本法限用于形成菌落的微生物。

广泛应用于水、牛奶、食物、药品等各种材料的细菌检验，是最常用的活菌计数法。

4、比浊法比浊法是根据菌悬液的透光量间接地测定细菌的数量。

细菌悬浮液的浓度在一定范围内与透光度成反比，与光密度成正比，所以，可用光电比色计测定菌液，用光密度(OD值)表示样品菌液浓度。

此法简便快捷，但只能检测含有大量细菌的悬浮液，得出相对的细菌数目，对颜色太深的样品，不能用此法测定。

5、测定细胞重量法此法分为湿重法和干重法。

湿重法系单位体积培养物经离心后将湿菌体进行称重；干重法系单位体积培养物经离心后，以清水洗净放人干燥器加热烘干，使之失去水分然后称重。

微生物计数方法

微生物计数方法微生物计数是许多领域中重要的分析方法，包括环境科学、食品科学、医学和生物技术。

正确的计数方法能够准确地估计样品中微生物的数量，对于研究和工业应用都是至关重要的。

下面将介绍几种常用的微生物计数方法。

血细胞计数器法是一种使用显微镜进行微生物计数的经典方法。

该方法使用血细胞计数器对微生物样品进行计数，每个格子中的微生物数量被计算出来，然后进行统计分析。

此方法的优点是准确性高，但是耗时长，操作繁琐，需要熟练的操作人员。

流式细胞术是一种使用流式细胞仪进行微生物计数的现代方法。

该方法将微生物样品通过流式细胞仪进行计数和分析，能够快速准确地测定样品中的微生物数量和种类。

此方法的优点是速度快、精度高、可自动化操作，但是设备成本高，维护成本也较高。

自动细胞计数器法是一种使用自动细胞计数仪进行微生物计数的现代方法。

该方法使用自动细胞计数仪对微生物样品进行计数，能够快速准确地测定样品中的微生物数量和种类。

此方法的优点是速度快、精度高、可自动化操作，而且设备相对较为经济实惠，易于推广应用。

平板计数法是一种常用的细菌计数方法。

该方法将微生物样品涂布在平板上，培养后计算菌落数量，从而得出样品中的细菌数量。

此方法的优点是简单易行、成本低，但是结果受培养条件和操作者技能水平的影响，准确性相对较低。

不同的微生物计数方法具有不同的优缺点，应根据具体的研究目标和实际情况选择合适的方法。

为了提高计数的准确性，需要注意样品的采集、保存、制备和处理等方面的问题，确保样品的质量和代表性。

微生物的分离与计数是微生物学中重要的实验技术之一。

通过分离和计数，我们可以获得微生物群体的相关信息，如种类、数量、生长状况等，对于微生物学研究、应用以及工业生产等领域都具有重要的意义。

选择合适的培养基：根据目标微生物的种类和生长需求，选择适合的培养基。

培养基应具有营养丰富、透明度高、易于观察等特点。

制备样品：从目标环境中采集样品，如土壤、水、食品等，并进行预处理，以去除不需要的杂质和大型生物。

测定微生物总数的方法

测定微生物总数的方法测定微生物总数是微生物学研究中的一项重要任务，它可以帮助我们了解微生物在环境中的分布和数量。

本文将介绍几种常用的测定微生物总数的方法。

一、直接计数法直接计数法是最直接、最常用的测定微生物总数的方法之一。

它通过使用显微镜观察样品中的微生物细胞数目来进行测定。

具体操作步骤如下：1. 取一定量的样品，如水样、土壤样等，制备适当的稀释液。

2. 取适量的稀释液滴于玻璃片上，用显微镜观察。

3. 在显微镜下，使用目镜和物镜进行放大观察，并使用计数室或计数网格进行计数。

4. 统计不同视野中的微生物数量，并计算平均值，从而得到微生物总数。

二、培养法培养法是一种常用的测定微生物总数的方法，它通过将微生物样品在培养基上培养并生长，然后观察和计数生长的菌落数来进行测定。

具体操作步骤如下：1. 取适量的样品，如空气、食品、药品等，制备适当的稀释液。

2. 取一定量的稀释液接种于含有富营养物的培养基上。

3. 将培养基培养在适当的温度和湿度条件下，使微生物生长繁殖。

4. 观察培养基上生长的菌落，并进行计数。

5. 根据计数结果，计算微生物总数。

三、膜过滤法膜过滤法是一种常用的测定微生物总数的方法，它通过将微生物样品过滤到膜上，然后将膜放置在培养基上进行培养和生长，最后观察和计数生长的菌落数来进行测定。

具体操作步骤如下：1. 取一定量的样品，如水样、食品样等，制备适当的稀释液。

2. 将稀释液通过膜过滤装置过滤到膜上。

3. 将膜放置在含有富营养物的培养基上进行培养和生长。

4. 观察培养基上生长的菌落，并进行计数。

5. 根据计数结果，计算微生物总数。

四、荧光显微镜法荧光显微镜法是一种高级的测定微生物总数的方法，它通过将微生物样品染色，并利用荧光显微镜观察和计数荧光染色的微生物细胞来进行测定。

具体操作步骤如下：1. 取一定量的样品，如水样、食品样等，制备适当的稀释液。

2. 取适量的稀释液滴于载玻片上，进行定性或定量染色。

微生物细胞数的计数

微生物细胞数的计数一、目的了解血球计数板的结构，掌握使用和计算方法。

二、仪器与材料显微镜、血球计数板、移液管、酵母菌液（准备见附录）。

三、血球计数板的结构和计算方法血球计数板由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成。

玻片中央刻有四条槽，中央两条槽之间的平面比其他平面略低，中央有一小槽，槽的两边的平面上各刻有9个大方格，中央的一个大方格为计数室，其长和宽各为1mm，深度为0.1mm，其体积为0.1mm3。

计数室有两种规格：一种是把大方格分成16中格，每一中格分成25小格，共400小格；另一种规格是把大方格分成25中格，每一中格分成16小格，总共也是400小格。

计算方法如下：1．16×25的计数板计算公式细胞数／ml：100小格内的细胞数／100×400×10×1000×稀释倍数。

2．25×16的计数板计算公式细胞数／ml：80小格内的细胞数／80×400×10×1000×稀释倍数。

四、操作步骤（1）稀释样品，为了便于计数，将样品适当稀释，使每格约含5个细胞。

（2）取干净的血球计数板，用厚盖玻片盖住中央的计数室，用移液管吸取少许充分摇匀的待测菌液于盖玻片的边缘，菌液则自行渗入计数室，静置5～10分钟即可计数。

（3）将血球计数板置于载物台上，用低倍镜找到小方格后换高倍镜观察计数。

需不断地上、下旋动细调节器，以便看到计数室内不同深度的菌体。

现以16×25规格的计数板为例，数四个角（左上、右上、左下、右下）的四个中格（即100小格）的酵母菌数。

如果是25×16规格的计数板，除取四个角上四中格外，还取正中的一个中格（即80小格）。

对位于大格线上的酵母菌只计大格的上方及左方线上的酵母菌，或只计下方及右方线上的酵母菌。

每个样品重复计数3次，取平均值，再按公式计算每毫升菌液中所含的酵母菌数。

图6-1 血球计数板的结构图（4）洗涤血球计数板。

微生物计数方法

微生物的显微直接计数法一、实验目的了解血球计数板的构造、计数原理和计数方法，掌握显微镜下直接计数的技能。

二、实验原理测定微生物细胞数量的方法很多，通常采用的有显微直接计数法和平板计数法。

显微计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，如有杂菌或杂质，常不易分辨。

菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板，一般细菌则采用彼得罗夫·霍泽（Petrof Hausser）细菌计数板。

两种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用油镜观察。

而血球计数板较厚，不能使用油镜，计数板下部的细菌不易看清。

血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽而构成3个平台。

中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区（图21-1），计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16个小方格。

但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。

计数区边长为1mm，则计数区的面积为l mm2，每个小方格的面积为1/400mm2。

盖上盖玻片后，计数区的高度为0.1mm，所以每个计数区的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为1/4000mm3。

使用血球计数板计数时，先要测定每个小方格中微生物的数量，再换算成每毫升菌液（或每克样品）中微生物细胞的数量。

已知：1mm3体积=10 mm×10 mm×10 mm= 1000mm3所以：1mm3体积应含有小方格数为1000mm3/1/4000mm3=4×106个小方格，即系数K=4×106。

因此：每ml菌悬液中含有细胞数= 每个小格中细胞平均数（N）×系数（K）×菌液稀释倍数（d）三、实验器材1．活材料：酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）斜面或培养液。

微生物大小与数量的测定实验报告

微生物大小与数量的测定实验报告一、实验目的本次实验旨在掌握使用显微镜测量微生物大小的方法，以及学会运用血球计数板对微生物数量进行测定。

通过实验操作和数据处理，深入了解微生物的形态特征和种群密度，为后续的微生物学研究打下基础。

二、实验原理（一）微生物大小的测定微生物细胞的大小是微生物的基本特征之一。

使用显微镜测微尺可以较为准确地测量微生物细胞的长度、宽度和直径等参数。

显微镜测微尺包括目镜测微尺和镜台测微尺。

目镜测微尺是一块可放在目镜内的圆形小玻片，上面刻有刻度；镜台测微尺是一块特制的载玻片，中央有精确的刻度，用于校正目镜测微尺。

（二）微生物数量的测定血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物数量的工具。

它由一块特制的厚玻璃片制成，玻片上有四个槽构成三个平台。

中间的平台又被一短横槽隔成两半，每半边上面各刻有一个方格网。

方格网上刻有 9 个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室。

计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成 16 个中方格，而每个中方格又分成 25 个小方格；另一种是一个大方格分成 25 个中方格，而每个中方格又分成 16 个小方格。

但无论哪种规格，每个大方格的边长均为 1 毫米，盖上盖玻片后，计数室的容积是一定的。

因此，在一定体积的菌液中，通过计算微生物在计数室中的数量，就可以换算出菌液中微生物的数量。

三、实验材料与仪器（一）材料枯草芽孢杆菌、酿酒酵母的菌悬液。

（二）仪器显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、血球计数板、盖玻片、滴管、擦镜纸、吸水纸等。

四、实验步骤（一）微生物大小的测定1、安装目镜测微尺将目镜测微尺装入目镜的隔板上，注意有刻度的一面朝下。

2、校正目镜测微尺（1）将镜台测微尺置于载物台上，先用低倍镜观察，找到镜台测微尺的刻度线。

（2）移动镜台测微尺，使镜台测微尺与目镜测微尺的刻度线平行，并使两者的“0”刻度线重合。

（3）换用高倍镜观察，找出两尺再次重合的刻度线。

分别记录目镜测微尺和镜台测微尺在重合线段内各自的格数。

微生物实验显微镜直接计数法

菌体为宜。
3.计数时，格线上的菌体只数上方和右边线上的；
4.如遇酵母出芽，芽体大小达到母细胞的一半时，作
为两个菌体计算；
5.清洗计数板时切勿用手或硬物刷洗。在水龙头上用
水柱清洗，直到洗净为止。 6.一个样品要从两个计数室中计得的平均值来计算。
特别注意
血球计数板均有编号，一人一个，务必小心使用，若损坏，需原价赔偿或赔偿原物！
25×16型：25个中方格，每个中方格分16个小格。
计数室
（3）计数和计算方法
我们采用的是25×16的，计数时查5个中方格的总
菌数。如图：
5个方格的总菌数
计算：1个计数室的总菌数=A/5×25×B
稀释倍数
1g（ml）样品中的总菌数=A/5×25×10×1000×B
=50,000A×B个
计数室均能充满菌液。注意不可有气泡产生。
将酵母菌稀释液由盖玻片边缘点一小滴（不宜过多），
4.显微镜计数静置几分钟，将计数板放在显微镜下，先用低
倍镜找到计数室，再换成高倍镜进行计数。
5.清洗血球计数板
计数完毕，将计数板在水龙头下冲洗干净后自
行晾干，镜检观察每小格内无残留物为止。
五、注意事项
1.加样前先摇匀菌液，计数室中不可有气泡产生；
三、实验材料
1.菌种：酵母菌（Saccharomyces cerevisiae）悬液(已
稀释100倍)
2.器具：显微镜、血球计数板、吸管、盖玻片。
四、实验步骤
1.检查计数板
检查计数板是否有破损。
2.镜检计数室
在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则需清洗后才能进行计数。
3.加样品
在清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用细口滴管让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自行进入计数室，一般

微生物的生长量的测定方法

2. 间接计数法
➢液体稀释法
将待测样品作一系列稀释，一直稀释到取少量该稀释液 (如1mL)接种到新鲜培养基中没有出现生长繁殖为止。
具体做法是取单细胞菌悬液在定量培养基中做系列稀释培养，在一定稀释度以前的培养基中接上菌，出现生长，而在这个稀释度以后的培养液中没有接上菌，不出现菌的生长，这最后一级出现菌生长的稀释度称为临界级数，从 3～5次重复的临界级数求最大概率数(MPN)，就可得到较可靠的结果。
特点：快速，准确，对酵母菌可同时测定出率，或在菌悬液中加入少量美蓝可以区分死活细胞。
计数室
盖玻片
血球计数板是一块特别的厚玻璃片，玻片上有四条沟和两条嵴。中央有一短横沟和两个平台，两嵴的表面比两个平台的表面高0.1mm，每个平台上刻有不同规格的格网，中央1mm2面积上刻有 400个小方格(图A)。
1
11.0
2
14.0
0
13.0
1
17.0
2
22.0
3
28.0
0
24.0
1
35.0
2
54.0
3
92.0
2. 间接计数法
➢薄膜过滤计数法
常用该法测定含菌量较少的空气和水中的微生物数目。
将定量的样品通过薄膜（硝化纤维素薄膜、醋酸纤维薄膜）过滤，菌体被阻留在滤膜上，取下滤膜进行培养，然后计算菌落数，可求出样品中所含菌数。
原液所含菌体数（mL） =每小格平均菌体数×400×104×稀释倍数
计数区的结构
2. 间接计数法
➢平板菌落计数法
将待测样品进行适当稀释，取一定的菌悬液涂布平板，让微生物的单细胞一一分散在平板上
，经适宜条件培养
，每个活细胞就会形成单菌落，然

微生物的概念及特点

生产者
植物（包括部分
微生物）
消费者
动物
分解者微生物
第二十二页，编辑于星期六：二十三点二十四分。
2、利用微生物改善环境
土壤改良：土壤改良剂农业产品内含丰富有机酶(酵素)，这些有机酵素是从有益微生物菌提炼产生，可让农作物直接吸收。在农作物从土壤中吸收有机酶(酵素)及矿物质后, 农作物将充满活力及发育成长。微生物菌可分解土壤中沉积的化学盐，这些化学盐是因农地长期过量使用化肥所造成。去除沉积的化学盐可松软土壤，使水份能更深入土壤，增加土壤的保水性，解除土壤的板结问题，增加农作物根部发育。
第十八页，编辑于星期六：二十三点二十四分。
三、微生物学的发展 1、微生物学的朦胧阶段 2、微生物学的启蒙时期---形态学时期 1590年荷兰人詹森兄弟制作了第一台显微镜。 1664年英国人罗伯特.虎克用自制的显微镜并
描述了霉菌的子实体结构。 1676年荷兰商人列文.虎克观察到“微动体”。 1680年显微镜放大270倍。
二、微生物学的研究对象和任务
1、研究对象：不具细胞结构的病毒；单细胞的细菌、放线菌、支原体、蓝
细菌、蛭弧菌；属于真菌的酵母菌与霉菌；单细胞藻类、原生动物等。
第十四页，编辑于星期六：二十三点二十四分。
2、微生物学的任务理论科学研究、应用科学研究和形成
新的分支学科。微生物学可分为：普通微生物学、微
抗菌素是细菌、放线菌、真菌（如青霉、木霉、头孢霉）的次生代谢产物。生物防治
苏云金杆菌防治虫害
第二十六页，编辑于星期六：二十三点二十四分。
（三）食品
有害影响：引起食品酸败（发霉、变质）、
食物中毒（如肉毒芽孢杆菌、黄曲霉毒素等）

实训四微生物细胞数计数

一、实验目的
使用血球计数板计数பைடு நூலகம்细胞微生物的数量。
二、实验原理
血球计数板是一块比普通载玻片厚的特制玻片制成。玻片中央刻有四条槽，中央两条槽之间的平面比其它平面略低，中央有一小槽，槽的两边的平面上各刻有9个大方格。中间的一个大方格为计数室，它的长、宽各为1mm，深度为0.1mm,容积为3。计数室有两种规格，一种是把大方格分成16个中格，每一中格分成25小格，共计400小格；另一种规格是把大方格分成25中格，每一中格分成16 小格，总共也是400小格。
式中，400为计数板的小格总数； 10000为由计数室3换算成lmL体积的系数
三、实验材料和用具
1.材料酵母菌悬液
2.用具显微镜、血球计数板
四、实验方法
1.取清洁干燥的血球计数板，在计数室上面加盖玻片。在显微镜下找到计数室。
2.取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一小滴(不宜过多)。菌液可自行渗入计数室。计数室不得有气泡，然后置高倍镜下计数。
四、实验方法
3.样品浓度要求每小格内有5～10个菌体为宜。
4.计数时，用16×25的计数板要按对角线方位，取左上、左下、右上，右下四个中方格(即100 小格)计数酵母菌液，用25×16的计数板，除计数上述对角线的四个方格外，还需数中央一个方格的酵母菌数(即80小格)。
四、实验方法
5.每个样品重复计数2～3次，取其平均值，按上述公式计算每毫升菌液所含的酵母细胞数。
6.计数完毕，将计数板在水龙头上冲洗，切勿用硬物洗刷，自行晾干或吹风机吹干，或用擦镜头纸轻轻擦拭。
五、实验内容
使用血球计数板对样品酵母菌液进行计数，并计算菌液浓度。
六、实验报告
将微生物计数的结果填入下列空白 1.第一次计数的酵母细胞数目＝个。 2.第二次计数的酵母细胞数目＝个。 3.从两次的计数结果中求出酵母细胞的平均数目 4.稀释倍数＝倍。 5.求出每毫升酵母菌液中的细胞数＝个。

实验六、微生物细胞的大小测量和显微计数目

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计数规则：
1）要求每小格内约有5－10个菌体为宜；
2）选计数室四个角的中方格和中央的一个中方格进行计数；
3）当细胞位于方格的线上时，一般只数上方和右边线上的细胞；
4）酵母出芽，又未脱离母体的，只有当芽体大小达到母细胞的
一半时，即作为两个菌体计算；
操作要点：
•血球计数室要清洁。
•观察时光线不宜过强，否则难以找到计数室。
操作要点： • 观察时光线不宜过强，否则难以找到镜台测微尺的刻度。 • 换高倍镜和油镜校正时，防止接物镜压坏镜台测微尺和损坏镜头。

2、显微直接计数
1）血球计数室的观察和清洗取血球计数板置于载物台上→ 观察熟悉计数室的中方格和小方格 → 取下血球计数板→用自来水冲洗计数室后，再用无水乙醇将血球计数室冲洗干净→ 置干燥箱干燥。
精选ppt课件
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2）样品中酵母菌细胞的直接计数：
取干净血球计数板→ 在计数室上方盖上盖玻片→ 用无菌吸管，吸取摇匀的酵母菌稀释液→ 在盖玻片边缘沾一下，让菌液沿缝隙靠毛细管渗透作用进入计数室→ 静置5min → 低倍镜或高倍镜计算每个中方格内的细胞数→ 完毕后清洗血细胞计数板→ 冲洗、干燥
精选ppt课件
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二、基本原理
1、微生物细胞大小的测量
微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征，也是分类鉴定的依据之一。微生物大小的测定，需要在显微镜下，借助特殊测量工具――测微尺（包括镜台测微尺和目镜测微尺）。
测微尺原理：镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般是将1mm等分为100格，每格长 0.01mm(即10μm)。镜台测微尺并不直接用来测量细胞的大小，而是用于校正目镜测微尺每格的相对长度，然后再用目镜测微尺测量微生物细胞的大小。

高三一轮复习生物-例析菌落等微生物数目统计计数方法的几个常见问题

高中生物复习-例析菌落等微生物数目统计计数方法的几个常见问题1、从方法上分析菌落数目例 1 ：若要测定培养液中微生物B的菌体数，可在显微镜下用直接计数;若要测定其活菌数量，可选用法进行计数。

例2 ：Ⅱl号培养基加入琼脂后可以制成固体培养基，若要以该固体培养基培养目标菌并对菌落进行计数，接种时，应采用的方法是。

(参考答案:血细胞计数板稀释涂布平板法稀释涂布平板法)显微镜直接计数法是利用显微镜、血细胞计数板等工具对纯培养悬浮液直接计数来检测样本中的细胞数目。

该方法能直观、快速地检测出单细胞状态下的微生物或丝状微生物所产生的孢子的数目，但是不能区分死细胞和活细胞，不适合细胞密度低的样品。

稀释涂布平板法常常需要先将样品进行一系列的稀释，然后吸取适量稀释样品涂布在平板上，在稀释度适宜的情况下一个菌落是由一个活细胞繁殖形成的，从而通过统计平板上的菌落数来推算活菌数。

该方法能灵敏地检测出样品中的活菌数，但实验过程手续繁、耗时长、影响因素较多。

显微镜直接计数法由于不能区分死菌和活菌，因此计数结果往往比实际活菌数偏高。

为避免把死菌计数在内，可用台盼蓝染色:被染成蓝色的为死菌，反之为活菌。

稀释涂布平板法测定活菌数目的时候，由于相邻两个或多个细胞连在一起，可能形成一个菌落，因此测定值比实际值小。

2、从对照原则上分析菌落数目例3：若在某次调查中，某一实验组平板上菌落平均数为36个/平板，而空白对照组的一个平板上出现了6个菌落，这种结果说明在此次调查中出现了现象。

若将30(即36-6)个/平板作为本组菌落数的平均值，该做法(填“正确”或“不正确”)。

(参考答案∶污染不正确)设置不接种的空白培养基作为空白对照组，证明培养基制备过程中没有被杂菌污染，增强实验的说服力，保证实验结果的准确性。

若该培养基上出现了菌落则说明实验过程出现污染现象，应舍弃数据，查找原因，重做实验。

若为了证明选择培养基有选择作用，对照组往往是完全培养基。

微生物期末重点总结

微生物期末重要内容串讲1〔P8〕：把某一物体的单位体积所占有的外表积称为比面值。

物体的体积越小，其比面值就越大。

微生物是一个比面值大〔小体积，大面积〕的系统，因此拥有巨大的营养物质吸收面，代谢物质排泄面，环境信息交换面。

现以球体的比面值为例：比面值=外表积/体积=〔P34〕：将单个细菌细胞或〔其他微生物〕细胞或一小堆同种细胞接种到固体培养基外表〔有时为内层〕，当它占有一定的发展空间并处于适宜的培养条件下，该细胞就会迅速生长繁殖并形成细胞堆，此即菌落。

如果菌落是一个单细胞繁殖成的，它就是一个纯种细胞或克隆。

如果把大量分散的纯种细胞密集地接种在固体培养基的较大平面上，结果长出大量“菌落”已互相连成一片，这就是菌苔。

菌落特征：一般呈现湿润、较光滑、较透明、较粘稠、易挑取、质地均匀以及菌落正反面或边缘与中央部位颜色一致等。

〔P27〕：荚膜是细胞的特殊结构，是某些细菌在细胞壁外包围的一层粘液性物质，一般由糖和多肽组成。

细菌不仅可利用荚膜抵御不良环境；保护自身不受白细胞吞噬；而且能有选择地粘附到特定细胞的外表上，表现出对靶细胞的专一攻击能力。

4.反硝化作用〔P116〕：反硝化细菌在缺氧条件下，复原硝酸盐释放出分子态氮〔N2〕或一氧化二氮〔N2O〕的过程。

微生物和植物吸收利用硝酸盐有两种完全不同的用途：一是利用其中的氮作为氮源，称为同化性硝酸复原作用：NO3—NH4—有机态氮。

许多细菌、放线菌和霉菌能利用硝酸盐做为氮素营养；另一用途是利用NO2-和NO3-为呼吸作用的最终电子受体，把硝酸复原成氮〔N2〕，称反硝化作用或脱氮作用：NO3—NO2—N2。

能进行反硝化作用的只有少数细菌〔一般为兼性厌氧微生物〕，这个生理群称为反硝化细菌。

5.L型细菌〔P23〕：由英国学者李斯特〔Lister〕发现的细菌，它是一种典型的细胞壁缺陷型细菌，专指那些实验室或宿主体内通过自发突变而形成的遗传性稳定的细胞壁缺损菌株，在固体培养基上可以形成“油煎蛋”似的小菌落。

普通微生物学课后习题及答案第六章

微生物的个体生长：指细胞物质有规律地、不可逆地增加，导致细胞体积扩大的生物学过程。

繁殖：引起生命个体数量增加的生物学过程。

微生物细胞数目的检测方法：显微直接计数法：用计数板在光学显微镜下直接观察细胞并进行计数的方法。

活菌计数法：通过测定样品在培养基上形成的菌落数来间接确定其活菌的方法，计数依据是在稀释情况下一个菌落由一个活细胞繁殖形成，又称平板菌落计数法。

微生物生物量的测定方法：1、湿重法将微生物培养液离心，收集细胞沉淀物，然后称重。

2、干重法将离心得到的细胞沉淀物置于100~105℃的烘箱中干燥过夜至水分去除，然后再称重。

3、比浊法细菌培养物在其生长过程中，由于原生质含量的增加，会引起培养物混浊度的增加。

在一定浓度范围内，悬液中细胞的数量与透光量成反比，与光吸收值成正比。

因此利用分光光度计在450nm~650mn的某一波长可以测定培养物的光吸收值来确定细胞量。

4、生理指标法与微生物生长量相平行的生理指标很多，可根据实验目的和条件适当选用。

一般微生物细胞的含氮量比较稳定，故可用凯氏定氮法等测定其总氮量，再乘以系数6.25即为粗蛋白含量。

蛋白质含量越高，说明菌体数和细胞物质量越高。

1、丝状微生物菌丝长度测定法将真菌接种在琼脂平皿的中央，定时测定菌落的直径或面积。

2、培养料中菌体生长速率测定法主要测定一定时间内固体培养料中菌丝体向前延伸的距离。

3、单个菌丝顶端生长速率测定法可利用湿室培养法对丝状微生物进行培养，定时将湿室中的培养有微生物的载玻片置于显微镜下，借助目镜测微尺测定一定时间内单个菌丝的伸长长度。

微生物的同步生长与同步培养方法同步培养法：使培养物中所有的微生物细胞都处于相同的生长阶段的培养方法。

同步生长：指这种培养物中所有微生物细胞都处于同一生长阶段，并都能同时分裂的生长方式。

获得微生物同步生长的方法主要有两类：环境条件诱导法：采用物理或化学因子使微生物细胞生长进行到某个阶段停止下来，使先到该阶段的微生物细胞不能进入下个阶段，待全部群体细胞都到达该生长阶段后，再除去该因子，使全部群体细胞同时进入下个生长阶段，达到诱导微生物细胞同步生长的目的。

微生物细胞大小与数量的测定

微生物细胞大小与数量的测定一、实验目的1. 了解显微镜测定微生物大小与血球计数板测定微生物数量的原理。

2. 学习并掌握显微镜下测定微生物细胞大小的技术，包括目镜测微尺、镜台测微尺的校正技术与测定细胞大小的技术。

3. 了解血球计数板的结构，学习并掌握血球计数板计数微生物数量的技术，包括样品的点样、菌数计数的方法与计算。

二、实验原理1.微生物大小测定原理微生物细胞的大小，是微生物重要的形态特征之一，也是分类鉴定的依据之一。

由于菌体很小、只能在显微镜下来测量。

用于测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。

（1）目镜测微尺目镜测微尺是一块圆形玻片，在玻片中央把5mm 长度刻成50等分，或把10mm 长度刻成100等分。

测量时，将其放在接目镜中的隔板上（此处正好与物镜放大的中间像重叠）来测量经显微镜放大后的细胞物象。

由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正，以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。

2）镜台测微尺镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般将lmm 等分为100格，每格长l0”m （即O.Olmm ），是专门用来校正目镜测微尺的。

校正时，将镜台测微尺放在载物台上，由于镜台测微尺与细胞标本是处于同一位置，都要经过物镜和目镜的两次放大成象进入视野，即镜台测微尺随着显微镜总放大倍数的放大而放大，因此从镜台测微尺上得到的读数就是细胞的真实大小，所以用镜台测微尺的已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺，即可求出目镜测微尺每格所代表的长度，然后移去镜台测微尺，换上待测标本片，用校正好的 ◎图 1目镜测微尺目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物大小。

2.显微镜计数法测定微生物的原理显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上（又称计菌器），于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。

微生物的计数方法

1.血细胞计数法将稀释的菌液样品滴在血细胞计数板上，在显微镜下计算4~5个中格的细菌数，并求出每个小格所含细菌的平均数，再以此为依据，估算总菌数。

①此法的缺点是不能区分死菌和活菌。

②对压在小方格界线上的细菌，应当取平均值计数。

③此法可用于测定培养液中酵母菌种群数量的变化2.稀释涂布平板法原理：每个活细菌在适宜的培养基和良好的生长条件下可以通过生长形成菌落。

培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。

①这一方法常用来统计样品中活菌的数目②统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是当两个活多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。

因此统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。

③土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含细菌、酵母、芽孢与孢子等的数量均可用此法测定。

但不适于测定样品中丝状体微生物，例如放线菌或丝状真菌或丝状蓝细菌等的营养体等。

④此法若不培养成菌落，可通过将一定量的菌液均匀地涂布在玻片上的一定面积上，经固定染色后在显微镜下计数，这样又称涂片计数法。

染色可用台盼蓝，台盼蓝能使死细胞染成蓝色，可分别计数死细胞和活细胞。

3.滤膜法滤膜法是当样品中菌数很低时，可将一定体积的湖水、海水或饮用水灯样品通过膜过滤器。

然后将滤膜干燥、染色，并经处理使膜透明，再在显微镜下计算膜上（或一定面积上）的细菌数。

此法也可以通过培养观察形成的菌落数来推算样品中的菌数。

例如测定饮用水中大肠杆菌的数目：将已知体积的水过滤后，将滤膜放在伊红美蓝培养基上培养。

在该培养基上大肠杆菌的菌落呈现黑色，可根据培养基上黑色菌落的数目，计算出水样中大肠杆菌的数目。

此法也是统计样品中活菌的数目。

4.比浊法原理是在一定范围内，菌是悬液中细胞浓度与混浊度成正比，即与光密度成正比，菌越多，光密度越大。

因此可借助与分光光度计，在一定波长下，测定菌悬液的光密度，以光密度表示菌量。

实验测量时一定要控制在菌浓度与光密度成正比的线性范围内，否则不准确。