微生物细胞数目

显微镜下的 直接计数法
（1） 血球计数板 （2） 细菌计数法
利用血球计数板或细菌计数板，在显微镜下对微生物数量进 行直接计数（计算一定容积的样品中微生物的数量）。
原理：将1cm2×0.1mm的薄层空间划分为
400小格，从中均匀分布地选取 80或100小 格，计数其中的细胞数目，换算成单位体积 中的细胞数。
活菌计数通常需要先将样品进行一系列稀释。方法的 优 点是能够测出样品中的活菌数，且灵敏度高。缺点是手续繁、 时间长、影响因素多等。
三.最大可能数计数法
四.光电比浊计数法
比浊法：样品中由于菌体细胞呈浑浊，细胞数目越多，浑浊 度越高，对光的通透性越小。 浊度可以用比色计或分光光度 计测量，以光吸收值来表示 。单细胞生物在一定的范围内的 光吸收值的大小与液体中细胞数目及细胞物质量成正比 ，因 而可用做溶液中总细胞的计数。
二、生物量的测定
1、重量法 （1）以干重/湿重 直接衡量微生物群体的生物量； （2）通过样品中含量稳定的细胞成分，如蛋白质/核酸含量的 测定，间接推算微生物群体的生物量；
测定多细胞及丝状的放线菌和真菌生长情况的有效方法
干重法
?将一定量的菌液中的菌体通过离心或过滤分离出来 ,然后烘 干(干燥温度可采用105℃、100℃或80℃)、称重。一般干重 为湿重的10%—20%，而一个细菌细胞一般重约 10-12 —10-13 g 。 ?该法适合菌浓较高的样品。
微生物细胞的DNA含量比较稳定，采用适当的荧光指示剂 与菌体DNA作用，荧光比色或分光光度计法测 DNA含量。
其它生理指标
微生物的生理指标，如呼吸强度，耗氧量、酶活性、生物热 等与其群体的生长成正相关。
样品中微生物数量多或生长旺盛，这些指标愈明显，因此的 可借助特定仪器如瓦勃氏呼吸仪等设备来测定相应的指标。
该方法缺点是灵敏度差，优点是简便、快速、不干扰或不破 坏样品。检测时可使用三角瓶在不同的培养时间重复测定样 品的浊度，因而广泛地用作生长速率的测定。
五.薄膜计数法
常用该法测定量大、含菌量较少的空气和水中的微生 物数目。
将定量的样品通过薄膜（硝化纤维素薄膜、醋酸纤维 薄膜）过滤，菌体被阻留在滤膜上，取下滤膜进行培 养，然后计算菌落数，可求出样品中所含菌数。
举例：大肠杆菌一个细胞一般重约 10–12~10–13g，液体培养物 中细胞浓度达到 2×109个/ml 时，100ml 培养物可得 10~90mg 干重的细胞。
湿重法
将微生物培养液离心，收集细胞沉淀物，然后称重。
测含氮量
?蛋白质是细胞的主要物质Baidu Nhomakorabea含量稳定，而氮是蛋白质的 主要成分，通过测含氮量就可推知微生物的浓度。
第四单元 微生物生长测定技术
模块一 微生物细胞数目的测定技术
微生物生长表现为微生物数量或质量的变 化，通过此类指标测定可以了解微生物的生长 状况，
计数法 （单细胞微生物）
微生物生长的测定
生长量 法
（单细胞和多细胞 微生物）
一、显微镜直接计数法
可用于细菌、酵母等单细胞微生物，以及放线菌和霉菌的 孢子计数。
优点：快速简便，还可以知道细胞的大小和形 态特征 缺点：不进行特殊染色时，不能区分死菌与活 菌，所计为总菌数；
采用特定的染色技术也可对活菌和死菌分别进行计数， 如利用美兰染液可进行酵母的活菌计数。
美兰染液
酵母细胞
区分死活细胞
二.平板菌落计数法——活菌计数法
原理：活菌计数法是通过在培养基形成的菌落来间接确定其 活菌数的方法，也称平板计数法。原理是每个活细菌在适宜 的培养基和良好的生长条件下可以通过生长形成菌落。
?一般微生物细胞的含氮量比较稳定，可以用凯氏定氮法 等测其总量，再乘以系数6.25即为粗蛋白含量，蛋白含量 越高，说明菌体数和细胞物质量越高。
?一般细菌含氮量为干重的12.5%，酵母菌为7.5%，霉菌为 6.0%，根据一定体积培养液中的含氮量再乘以 6.25，就可 测得粗蛋白的含量。
DNA含量测定法