耐吉非替尼的肺癌细胞株的建立及其耐药机制研究

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吉非替尼联合用药对肺癌敏感A549、耐药A549GR细胞株的实验研究

吉非替尼联合用药对肺癌敏感A549、耐药A549/GR细胞株的实验研究作者：李娟李宝平张雷梁娟来源：《中国现代医生》2014年第14期[摘要] 目的研究吉非替尼联合用药对肺癌敏感A549、耐药A549/GR细胞株的影响。

方法用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测和培养肺癌敏感A549和耐药A549/GR细胞株，待24 h、48 h、72 h后采用不同浓度的吉非替尼、奥曲肽、顺铂、5-FU进行单用和联用处理，流式细胞术检测细胞凋亡率，分析药物的增效效果。

结果联合用药对肺癌敏感A549和耐药A549/GR细胞株可起到协同抑制作用，与单独用药组比较，差异有统计学意义（P[关键词] 吉非替尼；奥曲肽；肺癌敏感A549；肺癌耐药A549/GR；顺铂；5-FU[中图分类号] R734.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2014）14-0024-04在临床治疗中肺癌是一种比较常见的呼吸道恶性肿瘤，并且一些小细胞肺癌不能进行手术治疗，因此化疗成为临床治疗的主要手段[1]。

因为采用传统化疗药物并不能获得满意的治疗效果，并且治疗后会发生较多的不良反应，所以临床对于新药物和有效治疗方法极其渴求。

根据相关研究结果证明，生长抑素及其类似物对许多肿瘤增生起到抑制作用，并且可以提高化疗药物的作用[2]。

本次研究通过对肺癌耐药A549/GR和敏感A549细胞株进行研究和分析，探讨单独用药和联合用药对肺癌细胞株的影响，现总结如下。

1资料与方法1.1 研究时间本研究开展时间为2013年1～12月。

1.2细胞与试剂人肺癌细胞株A549由武汉博士德生物有限公司提供，吉非替尼为阿斯利康有限公司生产，规格150 g/片，国药准字H20090759，奥曲肽为辽宁诺维诺制药股份有限公司，规格0.1 mg，国药准字H20080393。

顺铂为锦州九泰药业有限责任公司生产，规格10 g，国药准字H21020213。

氟尿嘧啶（5-FU）为安徽国森药业有限公司生产，规格50 mg，国药准字H34023446。

吉非替尼对非小细胞肺癌细胞株H358增殖的影响及其作用机制

ｃｅｌｌｓｗｅｒｅｃｕｌｔｕｒｅｄｉｎｖｉｔｒｏ．Ｃｅｌｌｓｗｅｒｅｄｉｖｉｄｅｄｒａｎｄｏｍｌｙｉｎｔｏｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐａｎｄｇｅｉｔｆｉｎｉｂｔｒｅａｔｅｄｇｒｏｕｐ，ａｆｔｅｒｃｕｌｔｕｒｅｄｆｏｒ１，３，５ｄａｙｓ．ＴｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆＨ３５８ｗａｓｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄｂｙＭＴＳａｓｓａｙ，ａｎｄｔｈｅＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇｗａｓａｐｐｌｉｅｄｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｓｕｂ — ｃｅｌｌｕｌａｒｌｏｃａｔｉｏｎｏｆｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＥＧＦＲ）ｂｙｅｘｔｒａｃｔｉｎｇｔｈｅ
・
ｌ２３６・
山西医药杂志２０１３年１１月第４２卷第１１期上半月ＳｈａｎｘｉＭｅｄＪ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ２０１３，Ｖｏ１．４２，Ｎｏ．１１ｔｈｅＦｉｒｓｔ
抑制Ｈ３５８细胞的增殖，减少ＥＧＦＲ在细胞核中的表达，并抑制ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ信号通路，这可能是其抗ＮＳＣＬＣ的癌，非小细胞肺；细胞增殖；受体，表皮生长因子；吉非替尼；ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ

培美曲塞联合吉非替尼用于非小细胞肺癌后EGFR-TKI耐药机制与对策

2018年4月第25卷第7期培美曲塞联合吉非替尼用于非小细胞肺癌后EGFR-TKI耐药机制与对策沈慧非小细胞肺癌约占肺癌总数的75%，缺少早期诊治方法，确诊时大多数患者已属于中晚期，错过手术切除的最佳时期，治疗后5年存活率为10%左右。

各类指南推荐表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKI）治疗非小细胞肺癌晚期，但大多数患者治疗一段时间后会出现TKI耐药[1]。

本文探讨培美曲塞联合吉非替尼应用于非小细胞肺癌后EGFR-TKI耐药机制与对策。

1 背景EGFR-TKI是最早用于非小细胞肺癌治疗的靶向药物，疗效显著，主要用于伴有EGFR阳性突变非小细胞肺癌的一线治疗，但半年后常出现耐药，导致靶向治疗失败及预后不良，药物耐药性研究已成为热点[2]。

培美曲塞、吉非替尼已广泛用于晚期非小细胞肺癌的二线治疗，均毒性较低、耐受性较好。

培美曲塞是一种多靶点抗叶酸细胞毒性药物，可抑制关键酶的活性，阻滞肿瘤细胞的增殖而发挥抗肿瘤作用。

吉非替尼是一种口服小分子EGFR-TKI，可通过竞争性抑制EGFR结构域的ATP结合位点，阻止EGFR与相应的配体结合。

2 EGFR-TKI在非小细胞肺癌中的应用2.1一线治疗有研究对培美曲塞联合吉非替尼相对单药一线治疗突变患者生存期是否延长、生存率、生活质量、不良反应、总生存时间、症状缓解情况、药物耐受性等进行评估，结果显示，联合组患者耐受性和生活质量较单药组的疗效更佳，所以吉非替尼联合培美曲塞对非小细胞肺癌后EGFR-TKI一线治疗较传统方案效果更佳[3]。

2.2二线或三线治疗非小细胞肺癌的二线化疗药多为培美曲塞、吉非替尼。

有研究尝试观察培美曲塞、吉非替尼作用于肺癌患者的吉非替尼获得性耐药，结果显示，联合组较单药组的疗效较好，且两者有协同作用。

因此，EGFR-TKI在非小细胞肺癌的二、三线治疗中有显著作用[4]。

2.3 维持治疗晚期非小细胞肺癌接受标准方案化疗4～6个周期后，大部分患者临床症状缓解，但多数患者在化疗结束后2～3个月，肿瘤进展迅速。

MiRNA-25在非小细胞肺癌吉非替尼耐药细胞中的表达及其作用机制

MiRNA-25在非小细胞肺癌吉非替尼耐药细胞中的表达及其作用机制周建英;刘震天;陈颖兰【摘要】目的探讨miRNA-25在非小细胞肺癌(NSCLC)吉非替尼耐药细胞中的表达及其作用机制.方法采用RT-PCR法检测miRNA-25在NSCLC吉非替尼耐药细胞PC9/G及亲本细胞PC9中的表达;采用体外转染法将miRNA-25模拟物或抑制物分别转染PC9和PC9/G细胞,采用CCK8实验检测转染前后细胞对吉非替尼敏感性的变化;并用Westem blot检测转染前后细胞中Bim的表达变化.采用双荧光素酶报告基因验证miRNA-25是否作用于Bim基因的3'-UTR区预测靶位.结果miRNA-25在PC9/G细胞中的表达水平是PC9细胞的(7.15±1.26)倍(P＜0.01).PC9细胞转染miRNA-25模拟物后,吉非替尼对PC9细胞增殖的抑制率较转染前明显下降(P＜0.01),细胞内Bim表达水平较转染前明显下降(P＜0.05).PC9/G 细胞在转染miRNA-25抑制物后,吉非替尼对PC9/G细胞增殖的抑制率与转染前比较明显增加(P＜0.01),细胞内Bim表达水平较转染前明显增高(P＜0.05).经双荧光素酶报告基因验证Bim是miRNA-25的靶基因.结论 miRNA-25在NSCLC耐药细胞PC9/G中异常高表达,下调其表达可部分逆转细胞耐药性,miRNA-25可能通过作用于Bim参与NSCLC细胞吉非替尼耐药的发生和发展.【期刊名称】《实用癌症杂志》【年(卷),期】2016(031)010【总页数】5页(P1567-1571)【关键词】非小细胞肺癌;吉非替尼;耐药;miRNA-25【作者】周建英;刘震天;陈颖兰【作者单位】330029 江西省肿瘤医院;330029 江西省肿瘤医院;330029 江西省肿瘤医院【正文语种】中文【中图分类】R734.2肺癌是全球发病率和病死率最高的恶性肿瘤之一，其中非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)占全部肺癌的80%左右[1]。

非小细胞肺癌吉非替尼耐药相关miRNAs的筛选鉴定

非小细胞肺癌吉非替尼耐药相关miRNAs 的筛选鉴定戴璐①赵健①张绪超②③薛兴阳①傅文凡①莫益俊①潘有光①黄豪达①摘要目的：miRNA 是一类通过结合mRNA 调节基因表达的非编码单链小分子RNA ，本研究目的是探讨非小细胞肺癌（NSCLC ）中miRNA 与吉非替尼耐药的关系。

方法：CCK8法检测NSCLC 吉非替尼耐药细胞PC9/GR 相对于亲本细胞PC9的耐药倍数；miRNA 芯片检测PC9/GR 与PC9中miRNA 的表达差异；RT-PCR 验证miRNA 芯片结果。

将差异表达的miRNA 模拟物/抑制剂转染至PC9/GR 中，观察其对吉非替尼敏感性的影响。

结果：吉非替尼对PC9和PC9/GR 的IC 50值分别为42.89nmoL/L 和3.87μmoL/L ，耐药倍数为90.23倍。

miRNA 芯片结果显示，PC9/GR 与PC9比较55条有差异表达miRNAs （P <0.01），其中在PC9/GR 上调的miRNAs 有21条，包括miRNA-1246、miRNA-125b 等；下调的miRNAs 有34条，包括miRNA-224、miRNA-125a ～5p 等。

RT-PCR 进一步验证其中9条miRNAs ，有8条与芯片结果趋势一致。

将上述8条miRNAs 的模拟物/抑制剂转染至PC9/GR 中，发现miRNA-125a ～5p 模拟物可降低吉非替尼敏感性。

结论：PC9/GR 与PC9的miRNA 表达存在差异，miRNA 可能与NSCLC 吉非替尼耐药相关，miRNA-125a ～5p 可促进PC9/GR 对吉非替尼产生耐药。

关键词非小细胞肺癌吉非替尼耐药miRNAdoi:10.3969/j.issn.1000-8179.2012.03.002作者单位：①广州医学院附属肿瘤医院肺肿瘤外科（广州市510095）；②广东省人民医院；③广东省肺癌研究所通信作者：赵健zj_hjh@Screening and Identification of miRNAs Associated with Gefitinib Resistance in Non-small CellLung CancerLu DAI 1,Jian ZHAO 1,Xuchao ZHANG 2,3,Xingyang XUE 1,Wenfan FU 1,Yijun MO 1,Youguang PAN 1,Haoda HUANG 1Correspondence to:Jian ZHAO,E-mail:zj_hjh@1Cancer Institute and Hospital of Guangzhou Medical College,Guangzhou 510095,China 2Guangdong General Hospital,Guangzhou 510080,China 3Guangdong Lung Cancer Institute,Guangzhou 510080,ChinaThis work was supported by grants from Project of Social Science of Guangzhou Bureau of Education (No.61033)and Young Scientist Foundation of Guangzhou Medical College (No.2010A28)AbstractObjective:MiRNA is a kind of small non-coding RNAs that functions by regulating expression of the target gene af-ter the genetic transcription.This study aims to analyze the differences of miRNAs expression between PC9and PC9/GR cells,and to explore the relationship between miRNA and gefitinib resistance in non-small cell lung cancer (NSCLC ).Methods:The gefitinib resis-tance on PC9/GR cells was evaluated using CCK8assay.The total RNA of the two cell lines was isolated and examined.The miRNA expression of PC9/GR and PC9was analyzed by microarray and the results were confirmed by real-time PCR method.Special miRNA was synthesized in vitro and was transfected into PC9/GR cells so as to observe the drug resistance of the model.Results:The values of IC 50of gefitinib on the PC9and PC9/GR cells were 42.89nmol/L,and 3.87μmol/L respectively (P <0.01).The drug resistance index of PC9/GR cells related to the parental PC9cells was 90.24.The microarray analysis showed that 55human miRNAs were differential-ly expressed in the two cell lines (P <0.01),of which 21were up-regulated,including miR-1246and miR-125b,and 34were down-regulated,including miR-224and miR-125a-5p.The expression of 9miRNAs was further validated by real-time PCR,of which 8were consistent with the microarray analysis,and one was not.MiR-125a-5p mimic was synthesized in vitro ,and was transfected to PC9/GR.It promoted the effect of drug resistance.Conclusion:NSCLC resistantce to gefitinib is associated with a group of miRNAs.MiR-125a-5p can promote the effect of gefitinib resistance.This finding provides an experimental basis for further study of mechanism underlying the gefitinib resistance of NSCLC.KeywordsNon-small cell lung cancer;Gefitinib;Resistance;miRNAmiRNA 是一类长约22个核苷酸的非编码单链小分子RNA ，在转录后水平调节基因的表达［1］。

多维度分析扶正抗癌方联合吉非替尼抑制耐药非小细胞肺癌增殖机制研究

多维度分析扶正抗癌方联合吉非替尼抑制耐药非小细胞肺癌增殖机制研究多维度分析扶正抗癌方联合吉非替尼抑制耐药非小细胞肺癌增殖机制研究引言：非小细胞肺癌（Non-Small Cell Lung Cancer，NSCLC）是一种高度恶性的肿瘤，具有快速生长和高度侵袭性的特点，严重威胁人类健康和生命。

当前，不少患者存在药物耐药的问题，导致治疗效果不佳。

因此，探索新的治疗策略和机制研究显得尤为重要。

方法：本研究采用多维度分析实验方法，以扶正抗癌方和吉非替尼为研究对象，从分子水平、细胞水平和动物模型三个维度进行分析。

结果：实验结果显示，扶正抗癌方与吉非替尼联合应用对耐药NSCLC 细胞系A549-Taxol具有显著的增殖抑制效果，并且表现出协同作用。

分子水平分析发现，扶正抗癌方与吉非替尼联合应用能够降低耐药细胞系中 ABCG2 蛋白的表达水平，提高药物的积累量；同时也能够降低耐药细胞系中 Akt 和 ERK 信号通路的活化水平，减少细胞凋亡的抵抗能力。

细胞水平实验发现，该联合应用方案能够诱导细胞周期G1期阻滞，并促进细胞凋亡的发生。

动物模型研究结果显示，扶正抗癌方和吉非替尼联合治疗能够显著抑制肿瘤生长，减小肿瘤体积，并且能够延长小鼠的生存期。

讨论：本研究结果表明，扶正抗癌方与吉非替尼联合应用能够对耐药NSCLC具有良好的治疗效果。

该联合应用方案通过降低 ABCG2 蛋白表达水平，减少药物外排、提高药物积累量；同时通过抑制 Akt 和 ERK 信号通路的活动，增加细胞凋亡的发生，从而抑制肿瘤生长和扩散。

此外，该联合应用方案还能够调整细胞周期和诱导凋亡，从而加强治疗效果。

然而，本研究存在一些局限性，比如没有深入研究联合应用方案的毒副作用和长期治疗效果。

因此，需要进一步的研究和临床验证。

结论：本研究通过多维度分析发现，扶正抗癌方与吉非替尼联合应用对耐药非小细胞肺癌具有显著的增殖抑制作用，并且能够通过调节细胞周期、促进细胞凋亡等机制来实现治疗效果。

EGFR-TKI治疗非小细胞肺癌耐药机制及应对策略

EGFR-TKI治疗非小细胞肺癌耐药机制及应对策略摘要】表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼和厄洛替尼是用于化疗失败或复发的晚期非小细胞肺癌的常用药物，而且效果良好。

几乎所有接受这类药物治疗的患者都会出现耐药，耐药的机理不明，耐药后目前没有标准治疗方案。

本文对这些耐药机理进行探讨，特别是对耐药后的临床策略作一综述。

【关键词】非小细胞肺癌表皮生长因子受体一酪氨酸激酶抑制剂耐药机制【中图分类号】R730.5 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2014）19-0367-01肺癌是现代社会癌症致死的主要原因之一，其中非小细胞肺癌(non-small celllung cancer，NSCLC)约占80%，表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)在NSCLC中的突变率为10％-26％，EGFR基因突变是表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growthfactor receptor tyrosine kinases inhibitor，EGFR-TKI)强有力的疗效预测因子，同时也可能是预后因子，突变患者的中位生存时间超过2年。

亚裔不吸烟的腺癌患者EGFR基因突变概率为60%，远远高于欧美不吸烟者的33%。

[1]含有EGFR基因突变的NSCLC患者对)EGFR-TKI高度敏感，一线治疗有效率高达70％-80％，该类药物没有细胞毒类药物的血液学毒性，耐受性较好，但仍有患者对EGFR-TKl治疗不敏感，因此，EGFR-TKI的耐药机制及应对策略成为临床治疗中最值得关注的问题。

1 耐药机制1.1原发性耐药原发性耐药是指首次使用EGFR-TKI即产生耐药，约60%NSCLC患者的耐药为TKI原发性耐药。

其中，EGFR基因激活突变者有近30%对TKI原发耐药。

1.1.1 K-ras突变K-ras是原癌基因Ras(ras proto-oncogene，Ras)家族成员之一，为EGFR信号传导通路下游的关键分子，在细胞生长、增殖和分化方面发挥重要作用。

非小细胞肺癌治疗中吉非替尼继发耐药的机制研究进展

非小细胞肺癌治疗中吉非替尼继发耐药的机制研究进展吉　泽，范理宏上海市第六人民医院肺内科，上海　200233[摘要]　吉非替尼（geﬁtinib ）是表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（epidermal growth factor receptor tyrosinekinase inhibitors ，EGFR-TKIs ）类靶向药物，目前主要用于治疗已接受过铂类为基础化疗的非小细胞肺癌进展期患者。

然而，靶向药物同样存在着继发耐药的问题。

关于继发耐药的相关研究中，目前普遍认同是表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor ，EGFR ）基因的二次突变学说；但亦有研究显示，吉非替尼的耐药与药物的转运、EGFR /Met 基因的扩增以及信号通路的改变有关，非单一机制能完全解释其耐药性。

因此，本文将对目前关于吉非替尼继发耐药的机制以及克服耐药的策略的研究进展作一综述。

[关键词]　癌，非小细胞肺；抗药性，肿瘤；蛋白激酶抑制剂；分子药理作用机制；吉非替尼[中图分类号]　R 734.2；R 730.53[文献标志码] A[文章编号]　1000-7431(2011)05-0460-05Advances in research of acquired drug-resistance of gefitinib in non-small cell lung cancerJI Ze, FAN Li-hongDepartment of Pneumology, Sixth People’s Hospital, Shanghai Jiaotong University, Shanghai 200233, China[ABSTRACT]　Gefitinib, a tyrosine kinase inhibitor (TKI) of epidermal growth factor receptor (EGFR), is presently used to treat the patients previously undergoing platinum-based chemotherapy for advanced non-small cell lung cancer (NSCLC). However, acquired resistance to EGFR-targeting drugs has become a significant problem. Currently, the theory of secondary mutation of EGFR gene was widely accepted inthis area. Meanwhile, some studies have shown that gefitinib resistance was related to drug transport,EGFR/Met gene amplification and the changes in signaling pathway, which indicates that this theory can not completely explain the mechanism of acquired drug-resistance. This review will summarize the mechanism of gefitinib resistance, and address the new strategies to overcome this acquired drug-resistance.[KEY WORDS]　Carcinoma, non-small cell lung; Drug resistance, neoplasm; Protein kinase inhibitors; Molecular mechanisms of pharmacological action; Gefitinib[Tumor, 2011, 31(5): 460-464][基金项目] 上海市卫生局科研课题计划项目 (编号：054014)Correspondence to: FAN Li-hong （范理宏） E-mail: fanlih@016作为表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（epidermal growth factor receptor tyrosinekinase inhibitors ，EGFR-TKIs ）类靶向药物，吉非替尼（gefitinib ）是低分子量苯胺喹唑啉的衍生物，是最早应用于治疗非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer ，NSCLC ）的靶向药物之一。

吉非替尼耐药人肺腺癌细胞的建立及耐药机制的研究

吉非替尼耐药人肺腺癌细胞的建立及耐药机制的研究
宁兰兰，马为，刘俊，王汉平，李裕军
１．广州医科大学附属广州市第一人民医院呼吸科，广东广州５１０１８０；２．广州医科大学附属广州市第一人民医院中心实验室，广东广州５１０１８０摘要：目的建立吉非替尼耐药的人肺腺癌细胞株Ａ５４９／ＧＲ，并初步探讨其生物学特性及其耐药机制。方法采用逐步增加吉非替尼剂量法诱导人肺腺癌细胞Ａ５４９形成吉非替尼耐药的细胞株Ａ５４９／ＧＲ；ＣＣＫ一８法检测细胞的半数抑制浓度（ＩＣ）及绘制细胞生长曲线，并计算耐药指数；显微镜下观察吉非替尼作用前后Ａ５４９、Ａ５４９／ＧＲ细胞形态学的改变；直接测序法检测ＥＧＦＲ基因在酪氨酸激酶区的基因突变；ｑＲＴ — ＰＣＲ法检测ＥＧＦＲ基因在ｍＲＮＡ水平表达的改变。结果ＣＣＫ－８法测得Ａ５４９／ＧＲ细胞的耐药指数为６．００，显示成功建立了吉非替尼耐药的细胞模型，其倍增时间较亲代细胞缩短；形态学观察显示Ａ５４９／ＧＲ细胞极性消失，有变长梭形的趋势；Ａ５４９／ＧＲ细胞系ＥＧＦＲ基因酪氨酸激酶区未发现基因突变；ｑＲＴ — ＰＣＲ法显示Ａ５４９／ＧＲ细胞ＥＧＦＲ基因在ｍＲＮＡ水平较亲代细胞轻度上调。结论成功建立吉非替尼耐药人肺腺癌Ａ５４９／ＧＲ细胞模型，Ａ５４９／ＧＲ细胞耐药性的产生与ＥＧＦＲ基因１８ — ２１外显子区域突变无关。

ABCG2在非小细胞肺癌吉非替尼耐药中的作用研究

ABCG2在非小细胞肺癌吉非替尼耐药中的作用研究作者：王雷王明吉黄磊代璐璐李颜君郑玉军来源：《中国当代医药》2019年第08期[摘要]目的研究ATP结合膜转运蛋白超家族G成员2（ABCG2）在非小细胞肺癌吉非替尼耐药中的作用，对吉非替尼耐药的非小细胞肺癌治疗提供依据。

方法培养人肺腺癌吉非替尼敏感细胞株A549及吉非替尼耐药的人肺腺癌细胞系A549/GR，A549/GR细胞的耐药性检测应用MTT法。

用蛋白质印迹法（Western Blot）检测被吉非替尼作用的A549/GR细胞及A549细胞中的ABCG2、p-AKT蛋白的表达情况。

分别加入磷醇酰肌醇3激酶/丝苏氨酸蛋白激酶（PI3K/AKT）通路激活剂胰岛素样生长因子-1（IGF-1）及抑制剂LY294002，分析作用于上述两种细胞的p-AKT、ABCG2蛋白表达情况。

应用流式细胞仪测定A549及A549/GR细胞株中的ABCG2外排情况。

收集2015年4月～2017年4月我院收治的非小细胞肺癌患者及健康人血清，分为非小细胞肺癌非耐药组（20例）、非小细胞肺癌吉非替尼耐药组（20例）和健康者组（20例）。

应用ELISA法检测三组的ABCG2表达。

结果随着剂量的增加，吉非替尼对A549细胞及A549/GR细胞的抑制作用均增强（P<0.05）。

A549/GR的耐药指数为13.4。

Western Blot检测耐药相关蛋白，结果显示，耐药细胞A549/GR中的ABCG2和p-AKT均高于亲代细胞A549。

IGF-1作用的A549细胞，p-AKT、ABCG2蛋白表达均提高（P<0.05）。

LY294002作用A549/GR细胞，p-AKT、ABCG2均下调（P<0.05）。

IGF-1作用A549细胞后，较未加入激活剂的A549细胞，其外排作用增强（P<0.05）。

LY294002作用A549/GR细胞后，较未加入激活剂的A549/GR细胞，其外排作用减少（P<0.05）。

耐吉非替尼人非小细胞肺癌细胞株的建立及其耐药机制

Ｒ７３４．２中图分类号
由美国礼来公司惠赠；多西他赛购自江苏恒瑞医药有限公司；培美曲塞购自齐鲁制药有限公司。
１．２方法
文献标志码Ａ文章编号１０００— １４９２（２０１４）０２— ０１６０— ０４
吴敏，袁媛，潘跃银。，张颖
摘要目的建立人非小细胞肺癌吉非替尼（Ｇｅｉｆｔｉｎｉｂ）耐药的细胞株ＰＣ９／Ｇｅｉｆｔｉｎｉｂ，并研究其可能的耐药机制。方法
ＮＳＣＬＣ患者，在治疗１年后仍不可避免的出现获得性耐药，最终导致肿瘤复发。该研究使用对ｃｅ．
ＤＭＥＭ培养液和胎牛血清购自美
国Ｈｙｃｌｏｎｅ公司；二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）、碘化丙啶
（ＰＩ）和ＭＴＹ购自美国Ｓｉｇｍａ公司；ｐ－ＡＫＴ、ＡＫＴ抗
体购自美国ＣＳＴ公司；Ｂｃｌ一２、Ｂ－ａｃｔｉｎ抗体购于北京
细胞仪检测其细胞周期分布；Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法检测ｐ－ＡＫＴ和Ｂｃｌ－２蛋白的表达。结果建立了对Ｇｅｉｆｔｉｎｉｂ耐药的ＰＣ９／Ｇｅｆｉｔｉｎｉｂ细胞株，其ＲＩ是亲代ＰＣ９的１０６．９５倍，且ＰＣ９／Ｇｅ — ｉｆｔｉｎｉｂ细胞株对化疗药物多西他赛的敏感性增加，而对培美曲塞表现出轻度耐药。耐药前后２种细胞株的Ｇ。／Ｇ期、Ｓ期差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５），Ｇ：／Ｍ期差异无统计学意

耐吉非替尼人非小细胞肺癌细胞株的建立及其耐药机制

耐吉非替尼人非小细胞肺癌细胞株的建立及其耐药机制吴敏;袁媛;潘跃银;张颖【期刊名称】《安徽医科大学学报》【年(卷),期】2014(000)002【摘要】目的建立人非小细胞肺癌吉非替尼( Gefitinib)耐药的细胞株PC9/Gefitinib,并研究其可能的耐药机制。

方法采用体外浓度梯度递增的诱导方法建立Gefitinib获得性耐药细胞株 PC9/Gefitinib；MTT 法计算出 PC9和PC9/Ge-fitinib的半数抑制浓度( IC50)和耐药指数( RI )及 PC9/Ge-fitinib细胞对多西他赛、培美曲塞及吉西他滨的敏感性；流式细胞仪检测其细胞周期分布；Western blot法检测p-AKT和Bcl-2蛋白的表达。

结果建立了对 Gefitinib耐药的 PC9/Gefitinib细胞株,其RI是亲代PC9的106.95倍,且PC9/Ge-fitinib细胞株对化疗药物多西他赛的敏感性增加,而对培美曲塞表现出轻度耐药。

耐药前后2种细胞株的G0/G1期、S期差异有统计学意义(P<0.05),G2/M期差异无统计学意义。

与PC9细胞相比,PC9/Gefitinib中Bcl-2蛋白表达升高,而p-AKT表达水平下降。

结论成功建立一株耐Gefitinib的人非小细胞肺癌细胞株PC9/Gefitinib,推测其耐药机制与Bcl-2蛋白表达升高及p-AKT表达下降有关。

%Objective To establish PC9 cell line resistant to gefitinib and investigate its possible resistant mecha-nisms. Methods Human gefitinib-resistant non-small cell lung cancer cell line PC9/Gefitinib was established by gradually increasing concentration of gefitinib from its parental cell line PC9 in vitro. The IC50 value and resistance index( RI) of gefitinib were determined by MTT. MTT was also used to evaluate the sensitivity of docetaxel, peme-trexed andgemcitabine in PC9/Gefitinib cell line. Cell cycles were assayed by flow cytometry. Western blot analy-sis was used to investigate the expression of p-AKT and Bcl-2 . Results Gefitinib-resistant human non-small cell lung cancer PC9/Gefitinib had been established successfully, with the RI being 106.95. Compared to PC9 cells, PC9/Gefitinib cells had an increased sensitivity to docetaxel and showed certain resistance to pemetrexed. The cell cycles of G0/G1 period and S period had a significant difference between these two cell lines(P<0.05),the G2/M period change was not obvious. Compared with its parental PC9 cell line, the expression of Bcl-2 was significantly increased while the levels of p-AKT were obviously decreased in PC9/Gefitinib cell line. Conclusion Human ge-fitinib-resistant non-small cell lung cancer cell line PC9/Gefitinib is established successfully, and we speculate that the activation of Bcl-2 and decrease of p-AKT expression appeared to be associated with resistance to gefitinib.【总页数】4页(P160-163)【作者】吴敏;袁媛;潘跃银;张颖【作者单位】安徽医科大学第三附属医院干部病房，合肥 230061;合肥市滨湖医院中心实验室，合肥 230601;安徽医科大学第一附属医院肿瘤科，合肥 230022;安徽医科大学第三附属医院干部病房，合肥 230061【正文语种】中文【中图分类】R734.2【相关文献】1.人肺腺癌吉非替尼耐药细胞系A549/GR的建立及小白菊内酯逆转耐药机制研究[J], 刘英;姚开泰;肖广惠2.缝隙连接蛋白43对人非小细胞肺癌HCC827细胞吉非替尼获得性耐药机制的初步研究 [J], 骆敏;罗燕妹;覃贵慧;滕翠芳;王翰林;阳洁3.耐阿霉素人骨肉瘤细胞株的建立及其耐药机制探讨 [J], 牛保华;王建军;席艳4.非小细胞肺癌HCC827奥希替尼耐药细胞株的建立及耐药机制探讨 [J], 黄佳丽;陈臻瑶;雷天瑶;王朝霞;程志祥5.吉非替尼耐药人结肠癌细胞系HT-29/ZD的建立及其耐药机制探讨 [J], 祝艳华;张阳;韩秀敏;董丽萍;赖邻宁;李苏霞因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

基于分子对接方法的肺癌分子靶标耐药机制研究

基于分子对接方法的肺癌分子靶标耐药机制研究目的探讨吉非替尼为代表的表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（epidermal growth factor receptor tyrosine kinases inhibitor，EGFR-TKI）在治疗非小细胞肺癌中起到的作用。

方法虽然部分患者治療后产生获得性耐药，其耐药机制尚未完全阐明。

但本文将研究第790位密码子突变导致吉非替尼耐药的原理。

利用Arguslab软件，模拟并分析吉非替尼与EGFR野生型和变异型蛋白的结合情况，试图对EGFR-TKI的耐药机制作出解释。

结果野生基因2GS6与吉非替尼结合所需能量为-8.07 kcal/mol，低于2GS6与ATP结合所需能量-7.78 kcal/mol，2GS6基因突变为3IKA后，受体蛋白与吉非替尼的结合能力降低至-6.96 kcal/mol，与ATP的结合能力提升至-8.41 kcal/mol。

结论2GS6更易与吉非替尼结合，患者对吉非替尼药物敏感，具有临床意义。

标签：非小细胞肺癌；表皮生长因子受体；酪氨酸激酶抑制剂；耐药性；分子对接肺癌是最常见恶性肿瘤之一，其中约80%为非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）[1]。

手术切除辅以化疗是对其治疗的主要手段。

然而，多数患者确诊时已为晚期，失去了手术机会，只有约30%的NSCLC患者可以采用手术切除。

而放、化疗治疗NSCLC的疾病缓解率非常之低，分别只有25%～35%和15%～20%[2-4]，因此。

但该文将研究第790位密码子突变导致吉非替尼耐药的原理。

利用Arguslab软件，模拟并分析吉非替尼与EGFR野生型和变异型蛋白的结合情况对EGFR-TKI的耐药机制作出解释，下面将研究结果总结报道如下。

1 样本资料1.1 蛋白结构从PDB网站下载受体材料2GS6.pdb（野生型受体蛋白）和3IKA.pdb（突变受体蛋白）。

第一代EGFR-TKI治疗非小细胞肺癌的耐药机制(全文)

第一代EGFR-TKI治疗非小细胞肺癌的耐药机制（全文）表皮生长因子受体(EGFR)是一种跨膜受体，是酪氨酸激酶受体家族成员之一，目前针对EGFR为靶点的药物主要分为两大类：临床最常见药物制剂是酪氨酸激酶抑制抑制剂(TKI)，即表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制抑制剂(EGFR-TKI)；一类是临床少见的针对EGFR的单克隆抗体。

诸多前瞻性临床研究均证实第一代EGFR-TKI治疗EGFR敏感突变的晚期非小细胞肺癌(NSCLC)在无疾病进展时间(PFS)和客观缓解率(ORR)方面明显优于传统的含铂两药联合方案，充分奠定了EGFR-TKI在EGFR敏感突变患者的一线治疗地位。

本文将对EGFR-TKI药物在临床治疗NSCLC方面的研究进行归纳论述，以期为临床合理选择EGFR-TKI提供参考。

01 /第一代EGFR-TKI药物第一代口服EGFR-TKI的代表药物如吉非替尼、厄洛替尼和埃克替尼，虽然在初治的携带药物敏感EGFR基因突变的NSCLC患者获得良好的疗效，并且一代EGFR-TKI较化疗一线药物，可改善其无进展生存期，但是随着用药时间的延长会出现不同程度的耐药，一般治疗7～14个月后出现EGFR-TKI耐药，因此，临床着重研究EGFR-TKI耐药机制及后续的进一步诊治是有待解决的问题。

02 / EGFR-TKI耐药的分子机制2.1原发性耐药原发性耐药是指首次使用EGFR-TKI治疗无反应，关于EGFR原发性耐药的原因有很多，其主要原因包括以下几个方面：(1)存在与药敏突变不同的其他EGFR突变点，除外19del和21L858R两种常见的敏感突变，20ins或其他的罕见突变可能与EGFR-TKI耐药有关；(2)K-RAS基因突变。

研究结果表明，在TKI不敏感的患者中有大约25%左右的肿瘤组织中存在着K-RAS基因突变，且另一项随机对照研究也表明了KRAS基因突变是影响TKI药物疗效的因素之一；(3)患者自身的因素。

吉非替尼耐药肺癌细胞株建立及其egfr信号通路改变

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中国药理学通报ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ２０２０Ｍａｙ；３６（５）：６３４～９
网络出版时间：２０２０－４－２９１５：２３网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｋｎｓ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０８６．Ｒ．２０２００４２９．０９３３．０１８．ｈｔｍｌ
开放科学（资源服务）标识码（ＯＳＩＤ）：
肺癌是十大恶性肿瘤之一，严重危害人类生命健康，是全球癌症相关死亡的最主要原因之一。在２０１８年全球癌症统计数据中，肺癌的发病率和死亡率均居首位，分别占总病例的１１６％和癌症死亡总数的１８４％［１］。世界卫生组织（ＷｏｒｌｄＨｅａｌｔｈＯｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ，ＷＨＯ）的组织学分类定义了两种类型的肺癌：非小细胞肺癌（ｎｏｎｓｍａｌｌｃｅｌｌｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ，ＮＳＣＬＣ）和小细胞肺癌（ｓｍａｌｌｃｅｌｌｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ，ＳＣＬＣ）。ＮＳＣＬＣ约占所有肺癌的８０％～８５％［２］，腺癌（ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ，ＡＤＣ，约４０％～５０％）和鳞状细胞癌（ｓｑｕａｍｏｕｓｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａ，ＳＣＣ，约２０％～３０％）是ＮＳＣＬＣ的主要组织学亚型［３］。虽然ＮＳＣＬＣ在诊
达；在ＨＣＣ８２７／ＧＲ细胞，ｐＡＫＴ和ｐＳＴＡＴ３不被吉非替尼抑制，ｐＥＲＫ１／２则被中度抑制。结论Ｈ３２５５／ＧＲ和ＨＣＣ８２７／ＧＲ细胞株Ｇｅｆｉｔｉｎｉｂ耐药的信号机制存在明显差异。
关键词：表皮生长因子受体；肺癌；吉非替尼；耐药；ＥＲＫ／ｐＥＲＫ；ＡＫＴ／ｐＡＫＴ；ＳＴＡＴ３／ｐＳＴＡＴ３

肺癌细胞耐药机制与治疗新策略

肺癌细胞耐药机制与治疗新策略肺癌是全球常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率一直居高不下。

虽然在过去几十年中，在肺癌的诊断和治疗方面取得了显著进展，但肺癌依然具有高度耐药性。

针对肺癌细胞耐药机制的深入研究，成为寻求新的治疗策略的关键。

一、肺癌细胞的耐药机制1. 微环境角色肿瘤微环境（TME）是指包括血管、免疫系统、细胞外基质等多种组分构成的特殊环境。

在 TME 中，由于缺氧、酸化等因素影响，会导致靶向治疗药物难以渗透到肿瘤细胞内部，并增强抗肿瘤效应。

2. 抗凋亡通路的变异细胞凋亡是正常细胞生命周期中的自我调控过程，而抗凋亡通路异常激活则是肿瘤细胞耐药的一个重要机制。

常见的抗凋亡通路异常包括 Bcl-2 家族蛋白表达增加、TP53 基因缺失或突变等。

3. 转运泵的过度表达细胞转运泵是细胞通过主动转运物质从一个区域传送到另一个区域的机制，而某些转运泵能够将治疗药物从肿瘤细胞内部排除出去，从而减少药物对肿瘤细胞的作用。

P-gp 和 MRP 等是常见的转运泵蛋白。

4. DNA 修复系统的活化DNA 修复系统可以修复由于外源性和内源性损伤导致的 DNA 损伤，保持基因组稳定性，但同时也可能阻碍抗肿瘤药物对肿瘤细胞产生杀伤作用。

PARP（聚合酶链反应介导体）抑制剂可有效干预这一机制。

二、治疗新策略1. 靶向耐药机制在了解肺癌细胞耐药机制的基础上，针对具体机制发展新一代的靶向药物。

例如，通过抑制耐药性相关的途径，如凋亡信号通路或转运泵的活性，可以提高肿瘤对治疗药物的敏感性。

2. 多靶点联合治疗肺癌细胞耐药机制往往是多种因素综合作用的结果，因此采用多靶点联合治疗策略能够同时抑制不同机制。

例如结合靶向凋亡通路和转运泵活性抑制剂，可以增强抗肿瘤效应。

3. 免疫疗法免疫检查点抑制剂（如 PD-1 和 CTLA-4 抑制剂）在肺癌治疗中已经取得了重要突破。

这些药物能够使免疫系统恢复对肿瘤的识别和攻击能力，并且相比传统化学治疗具有更少的副作用。

肺癌细胞耐药机制的分子调控研究

肺癌细胞耐药机制的分子调控研究肺癌是一种高发疾病，常常导致患者的生命质量和寿命减少。

而肺癌的治疗中，药物耐药问题成为制约治疗效果的重要因素之一。

因此，了解肺癌细胞耐药机制的分子调控是当前研究的热点之一。

本文将从多个角度探讨肺癌细胞耐药的分子调控机制。

1. DNA修复通路的异常激活DNA修复通路是维护细胞基因组完整性的关键机制。

然而，某些肺癌细胞会产生DNA修复通路的异常激活，导致治疗过程中DNA损伤的快速修复，从而使肿瘤细胞对化疗药物产生耐药性。

研究发现，BRCA1和BRCA2基因的突变与肺癌细胞对铂类类药物的耐药性密切相关。

因此，肺癌细胞耐药机制的研究需要关注DNA修复通路的异常激活。

2. ABC转运体的过度表达ABC转运体是一类跨膜蛋白，能够从细胞内将底物物质转运至细胞外。

研究发现，某些肺癌细胞中ABC转运体的过度表达是导致肿瘤细胞耐药的重要原因之一。

ABC转运体的过度表达可以增加细胞对抗肿瘤药物的能力，使药物无法顺利进入细胞内部，降低治疗效果。

因此，通过调控ABC转运体表达，抑制其功能，将是未来攻克肺癌细胞耐药难题的重要途径之一。

3. 代谢途径的改变肿瘤细胞对能量和代谢物质的需求与正常细胞存在差异。

研究发现，某些肺癌细胞在治疗过程中会改变自身的代谢途径，以适应药物压力。

例如，肺癌细胞可以增加或减少某些代谢酶的表达，从而调节药物的代谢速率和药物代谢产物的浓度。

这种代谢途径的改变可以导致药物在肿瘤细胞内的浓度下降，从而降低其治疗效果。

因此，研究肺癌细胞耐药机制的分子调控需要重点关注代谢途径的改变。

4. 细胞凋亡信号通路的异常激活细胞凋亡是机体去除异常细胞的重要机制。

然而，某些肺癌细胞通过异常激活细胞凋亡信号通路来抵抗抗肿瘤药物的治疗效果。

研究发现，肺癌细胞中Bcl-2家族蛋白的异常表达与细胞凋亡信号通路的异常激活密切相关。

通过调控Bcl-2家族蛋白的表达，可以干扰细胞凋亡的进行，从而增强抗肿瘤药物的治疗效果。

肺癌细胞耐药机制与靶向治疗研究

肺癌细胞耐药机制与靶向治疗研究肺癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率居高不下。

对于肺癌的治疗，化疗是目前主要采用的手段之一。

然而，肺癌细胞的耐药性是一个严重的问题，给有效治疗带来巨大挑战。

因此，研究肺癌细胞的耐药机制以及开发靶向治疗策略显得尤为重要。

一、肺癌细胞耐药的机制肺癌细胞耐药机制是一个复杂的过程，涉及多种因素。

以下主要介绍几个常见的耐药机制：1. 多药耐药蛋白（MDR）的过度表达：MDR是一种跨膜转运蛋白，能够将化疗药物从细胞内排出，降低药物的细胞内浓度，从而减弱药物的治疗效果。

2. 突变的药物靶点：肺癌细胞内的药物靶点发生突变，导致药物无法有效地结合并发挥抗肿瘤作用。

3. 细胞凋亡逃逸：在正常情况下，细胞通过凋亡来实现自我调控。

然而，肺癌细胞耐药机制中的一部分机制是通过改变细胞凋亡途径，使肿瘤细胞逃避凋亡的作用。

4. 肺癌细胞内的环境调节：肺癌细胞内的环境调节可以通过多种方式影响药物的疗效。

例如，改变肿瘤细胞的生长环境，使其适应化疗药物的存在。

二、靶向治疗策略研究针对肺癌细胞的耐药机制，科学家们开展了大量的靶向治疗策略研究，旨在提高药物的疗效并减少不良反应。

以下是几个常见的靶向治疗策略：1. 靶向MDR蛋白：利用小分子化合物或抗体等靶向药物，阻断MDR蛋白的功能，从而提高化疗药物在肺癌细胞内的浓度，增强疗效。

2. 靶向突变的药物靶点：通过设计针对突变靶点的药物，恢复药物与靶点的结合能力，使化疗药物重新发挥抗肿瘤作用。

3. 激活细胞凋亡途径：通过干扰细胞凋亡逃逸的机制，重新引导肺癌细胞走向凋亡通路，实现肿瘤细胞的死亡。

4. 细胞内环境调节的干预：通过改变肺癌细胞的生长环境，使其无法适应化疗药物的存在，进而提高药物的疗效。

三、当前研究进展目前，对于肺癌细胞耐药机制以及靶向治疗策略的研究取得了一些进展。

例如，一些靶向MDR蛋白的药物已经进入临床试验，并取得了一些积极的结果。

同时，针对突变的药物靶点的研究也取得了一些突破，新的化合物正在开发中。

耐吉非替尼的肺癌细胞株的建立及其耐药机制研究

耐吉非替尼的肺癌细胞株的建立及其耐药机制研究[摘要]目的：探讨耐吉非替尼的肺癌细胞珠的建立及其耐药机制研究。

方法：本次研究取吉非替尼加入到人肺癌细胞系PC9培养条件中培养直至耐药情况产生，回顾相关特点及耐药机制。

结果：应用0.5μmol·L-1吉非替尼向普通PC9细胞的培养基中持续加入，行3个月的培养后，再加入吉非替尼不再引起细胞死亡，获得耐药的细胞株（PC9-IR）。

用同等浓度的吉非替层对敏感和耐药的细胞行72h处理，在5μmol·L-1下具体PC9-IR对吉非替尼仍缺乏一定敏感性，而在吉非替尼具体浓度在0.5μmol·L-1时，显著抑制了敏感PC9细胞生长。

耐药细胞0.5μmol·L-1生长率为98%，敏感细胞为35%，差异有统计学意义（P<0.05）。

异鼠李素（美国ChromaDex公司）对PBMNCs细胞和PC9细胞增殖作用显示，100μmol·L-1浓度下第1d的生长率为39%，远低于5μmol·L-1第1d 86%的生长率，差异有统计学意义（P<0.05）。

于6个孔板中接种PC9-IR，每孔存在100个细胞，健康志愿者培养应用正常培养基，试验组选择异鼠李素40μmol·L-1加入，培养10d，共重复3次，可见异鼠李素明显抑制PC9-IR细胞的克隆形成能力，有明显差异性（P<0.05）。

结论：通过建立耐吉非替尼的肺癌细胞株，对其耐药机制进行分析，并选择PI3K-AKt类药物治疗，可显著改善预后，提高患者生存质量。

关键词：吉非替尼；肺癌；细胞株；耐药机制临床肿瘤常见类型中，肺癌占有较高发生比例，其中以非小细胞肺癌最为多见[1]。

吉非替尼为治疗晚期肺癌的药物，是一种酪氨酸激酶（表皮生长因子受体，ECFR）选择性抑制药[2]。

但药物使用过程中有耐药情况存在，寻找耐药后联合用药及替代用药方案，是临床重点关注的问题，本次研究取吉非替尼加入到人肺癌细胞系PC9培养条件中培养直至耐药情况产生，回顾肺癌细胞株的建立及其耐药机制，现将相关内容报告如下。

吉非替尼治疗化疗耐药的中晚期非小细胞肺癌42例

吉非替尼治疗化疗耐药的中晚期非小细胞肺癌42例背景非小细胞肺癌（Non-Small Cell Lung Cancer，NSCLC）的发病率在近年来不断增加，其中晚期NSCLC患者的存活期较短，一线化疗效果有限。

同时，耐药也成为影响化疗疗效的一大因素。

吉非替尼（Gefitinib）是一种酪氨酸激酶抑制剂，已被广泛应用于治疗晚期NSCLC。

本文旨在探讨吉非替尼治疗化疗耐药的中晚期NSCLC的疗效和安全性。

方法我们对42例NSCLC患者进行了为期12个月的治疗观察，其中包括中晚期患者13例和化疗耐药患者29例。

治疗方案为吉非替尼片剂水溶液每天250mg，分2次口服，连续用药至少2个月。

结果于治疗前各观察时间点及治疗后1、3、6、9、12个月时对患者进行了评估。

结果显示，治疗后每间隔一个月的影像学检查中，患者肿瘤病灶逐渐缩小或消失。

36例患者进行了EGFR突变分析，其中18例为EGFR敏感突变，9例为非敏感突变，9例为野生型，未检出EGFR突变的患者为萎缩状态。

治疗前后患者的血清癌胚抗原指标（CEA）及疼痛评分均有所下降，血液生化指标无明显变化，具有良好的安全性。

讨论吉非替尼是一种高效且有较少不良反应的治疗NSCLC的药物。

对于中晚期NSCLC患者和化疗耐药患者，吉非替尼的治疗效果尤为显著。

EGFR突变分析可以为吉非替尼的治疗选择提供一定的指导，同时血液生化指标也是了解吉非替尼治疗效果和安全性的重要指标。

结论吉非替尼在治疗中晚期NSCLC和化疗耐药患者方面表现出良好的疗效和安全性，值得推广应用。

EGFR突变分析和血液生化指标可以为吉非替尼的治疗选择和监测提供重要参考。