LCMS使用注意事项
LCMS操作说明
LC/MS的SOPStep 1：使用LC/MS前的准备工作1．查阅文献，获得目标分析物质或相近物质的液质条件。
2．检查线路是否连接完好。
检查流动相和洗针液是否充足，不足则根据要求添加。
3．有机流动相必须为HPLC级别，水相可使用纯水机出水或娃哈哈纯净水。
流动相中添加的酸或胺类物质必须为色谱纯，其中水相需每天更换以保持新鲜。
4．标样和样品在使用前必须用0.45μm的针头式滤器过滤。
5．在做LC/MS之前，需将样品放置在样品托盘上，并记录相应的位置。
且第一个或最后一个样品为空白采用不含盐或酸的流动相做样，用于清洗进样系统及管路。
Step 2：开机、关机方法Step 2.1：开机方法1．打开质谱电源，即打开质谱主电源开关（Main Power Switch）至On（/）位置；2．打开真空泵开关；真空泵开关开启约一小时后，打开电子开关（Electronics Switch）在Operational状态；3．打开计算机；4．双击桌面LCQ Tune图标，打开Tune Plus界面；5．查看Tune Plus界面右边质谱参数，确认Ion Gauge Pressure小于5×10-6 Torr；6．打开LC部分各模块电源。
Step 2.2：关机方法1．关闭电子开关（Electronics Switch）；2．5~6分钟后关闭质谱主电源开关(Main Power Switch)至Off (O) 位置；3．关闭LC部分各模块电源。
Step 3：LC /MS分析方法建立1．双击桌面Xcalibur图标，打开Xcalibur 工作站；2．在Xcalibur Roadmap 主页上, 点击Instrument Setup按钮, 建立LC/MS方法；3．设置LC部分参数；A.Accela pump的参数设置；1）点击Instrument Setup窗口中Accela pump图标；2）点击Gradient Program标签；3）设置流动相条件（时间、流动相比例、流速等）。
lcms操作规程 -回复
lcms操作规程-回复LCMS操作规程概述LCMS（液相色谱质谱联用技术）是一种高效、灵敏、可靠的分析方法，广泛应用于药物分析、环境检测、食品安全等领域。
为了保证LCMS的稳定性和准确性，在进行LCMS操作前需制定一系列操作规程，以确保各个步骤的正确执行。
本文将一步一步回答以下主题，详细介绍LCMS操作规程。
一、实验室准备在进行LCMS操作前，首先需要对实验室进行准备工作，保证实验室环境的卫生与安全。
具体操作如下：1. 清洁工作台：使用含有75酒精的喷雾器对工作台进行喷洒和擦拭，确保没有灰尘和杂质的存在。
2. 准备溶剂：根据实验要求准备各种所需的溶剂，并通过过滤器过滤溶剂，保证其纯净度。
3. 标准品和质控品的准备：根据实验需求准备标准品和质控品，确保其质量和纯度。
4. 检查仪器：检查LCMS系统是否处于良好的工作状态，包括离子源、质谱仪、色谱柱等是否正常。
5. 清洗实验仪器：清洗离子源和色谱柱，避免前一次实验的残留物对当前实验的干扰。
二、实验前操作在进行LCMS操作前，需进行一系列实验前操作步骤，以确保实验顺利进行。
具体操作如下：1. 开机和系统检查：按照仪器使用手册要求开机并运行系统自检程序，确保系统正常工作。
2. 电离源调试：使用质控品进行电离源的调整和校准，以保证离子源的稳定性。
3. 色谱柱准备：根据实验要求安装正确的色谱柱，确认柱温和流动相的选择，并进行系统的初步调试。
4. 质谱检测器准备：根据实验要求设置质谱检测器的检测参数，包括离子源和柱流等参数。
5. 反应器准备：如果实验中需要进行反应性离子扫描或多阶段质谱分析等实验，需确保反应器的正常工作。
6. 系统校准：通过运行标准校准品进行系统的校准，以确保质谱仪的准确性。
三、样品制备在进行LCMS操作前，需要对样品进行制备，以提高分析的准确性和可靠性。
具体操作如下：1. 样品选择：根据实验需求选择合适的样品，包括药物、环境样品或食品样品等。
液质联用系统安全操作及保养规程
液质联用系统安全操作及保养规程液质联用系统（LC/MS）是一种结合液相色谱和质谱分析技术的分析仪器，对于分析化学领域有着极其重要的作用。
LC/MS具有高灵敏度、高分辨率、高准确性和高特异性等优点，广泛应用于食品、医药、环保等行业。
然而，对于使用者而言，操作和保养LC/MS也是十分必要和重要的，以确保仪器的正常工作并保证分析结果的准确性和可靠性。
安全操作须知1.实验前的准备在进行实验分析前，必须仔细阅读LC/MS使用手册中的所有安全注意事项，并作好以下准备工作：•将仪器电源连线插入接地插座，确保电源线接合可靠。
•确保分析样品和化学品处理过程符合实验室安全标准以及实验室规定的相关操作规程。
•向仪器中注入液相色谱用毒性和危险性低的试剂前，要对管路进行完全清洗以去掉残留的有机物和其它污染物。
•准备好实验用品，包括气源、溶剂等。
2.操作仪器时应注意的事项•在操作仪器时，必须先开启抽风设备，确保仪器内部是真空状态。
•在液相色谱柱加入样品前，必须紧闭阀门，待离子阱内压力达到最大值时再进行开启。
•操作仪器时，生产出的气体或化学品蒸气对人体有毒性或危害的，应留意防护政策。
3. 不良事件的处理在使用LC/MS操作过程中，可能会出现仪器故障或抽真空失败等问题，需及时采取相应的应急措施，避免对仪器使用和操作人员安全造成影响。
保养规程为了保证LC/MS正常运行并提高仪器的寿命，需要对仪器进行定期的保养和维护。
1. 液相色谱柱保养液相色谱柱是LC/MS系统中最重要的部分，定期清洗液相色谱柱可以提高柱寿命和GC/MS分析的准确性。
•长时间不使用柱的情况下，应该清理柱上涂层。
•对应用多次的液相色谱柱，可以使用高压水洗清洗柱体。
•不要过度使用柱，超出要求使用寿命，会降低仪器的灵敏度和分辨率，产生干扰物。
2. 真空泵保养真空泵是LC/MS中主要的工作部件之一，维护真空泵的正常工作状态十分重要。
•定期清理真空泵上的减压单元，以保证泵的稳定性和抽取气体的速度。
液相色谱-质谱联用仪(LC-MS)设备安全操作规程
液相色谱-质谱联用仪（LC-MS）设备安全操作规程1. 前言：液相色谱-质谱联用仪（LC-MS）是分析化学的一种重要手段，它具有高灵敏度、高分辨率、高准确度、高特异性等优势，广泛应用于环境、医药、制药、化工、食品、农业等领域的分析和检测。
然而，LC-MS作为一种特殊的化学分析仪器，在操作中存在潜在的危险，若不遵循正确的操作规范，不仅容易引起设备损坏，还可能对人员造成伤害。
为了保障人员安全，实现设备的正常运行，特制定本操作规程，供液相色谱-质谱联用仪的使用者参考。
2. 设备基本情况：液相色谱-质谱联用仪（LC-MS）是由主机、气源、布图仪、气液控制器等部分组成的，具体情况如下：•主机：负责液相和质谱数据的采集和处理；•气源：提供质谱需要的空气或氮气；•布图仪：由我们提供样品，通过特定的方法将样品尽量分离，并且将其从液体中进入气态；•气液控制器：控制样品的流动，以便样品进入到质谱分析中。
3. 设备安全操作规程：3.1 设备运行前的检查在每次使用之前，操作人员必须进行设备的检查，确保设备状态正常，无任何故障，具体操作如下：•检查主机的电源线和通讯线是否连接牢固；•检查各个部分的仪器是否通电，是否工作正常；•检查设备的气源是否给予充足，如供气压力、纯度是否符合要求。
3.2 操作前的准备操作人员在开始操作前，必须完成以下准备工作：•佩戴实验室的个人防护用品，包括手套、防护眼镜、口罩等；•将操作手册材料准备齐全，保持操作手册对设备的清洁程度；•检查样品的来源和容器包装，保证样品的完整性。
3.3 操作时的注意事项操作人员在实验操作中，必须注意以下事项：•在操作前认真阅读操作手册，并按照操作手册上的步骤进行操作；•操作过程中，必须正确设置设备的参数，并按照标准的操作流程进行操作；•在使用设备时，必须遵守操作规范，领先实验室人员的统一指挥。
3.4 操作后的注意事项操作人员在完成操作后，必须进行以下事项：•断开电源，关掉气源，离开安全区域；•将设备周围的样品容器归位，并整理好样品的相关文件；•检查设备的状态，是否存在漏洞、损坏等情况，并及时进行相应的处理。
LCMS仪器方法优化流程及注意事项
11
APCI 大气压化学电离
雾化气压力
蒸发室温度
雾化 蒸发液滴 气相电离
电晕电流
Vcap
[Solvent + H]+ + A
Solvent + [A + H]+
干燥气温度 和流速 Fragmentor
12
APCI 电离过程
含有气溶胶的分析物
分子离子 分子离子是样品分子失去或得到一个电子而形成的M+•。分子离子代表
完整的样品分子，是其所有碎片离子的终极前体(ultimate precursor)。
准分子离子 取决于化合物的性质和质谱离子化方法及条件，可生成质子化或去质 子的分子，即[M+H]+、[M-H]－及加合物离子，如[M+Na]+、[M+Cl]－等，这些均为 偶电子（even electron）离子。 同位素峰 这是由于有丰度的较低的同位素存在而产生的 。
脲氨基甲酸酯电喷雾响应不好的样品溶液化学参数较es对溶液化学作用不灵敏较es更耐大的流速适用es不宜的一些溶剂应避免的样品在气化过程中热不稳定的化合物apci需考虑lcmsms定量方法开发流程mrm参数优化使用标准品优化fragmentor和collisionenergylc分离方法的优化roughpumpoctopolequadmassfilterq1collisioncelllensquadmassfilterq310kvdynodedetectorfragmentorcollisionenergymrm参数优化全扫描scan或sim优化毛细管出口电压fragmentor保证母离子的传输效率子离子扫描productionscan使用已优化好的fragmentor选择定性定量离子优化碰撞能量collisionenergy得到优化子离子的响应多反应监测mrm定量使用已优化好的fragmentor和collisionenergy优化dwelltimems2scan优化锥孔碎裂电压140v120v80v100v选择最高响应对应的碎裂电压值productionscan选择子离子并优化collisionenergy选择最高响应对应的碰撞能量值每个化合物一般选择两个强度最高的子离子分别作定性离子与定量离子eucriteriaparention10point
LCMS操作注意事项
LC/MS操作补充资料A 960703 1 氧吃享诀葫调岩匪框炉盅足晴冲炎麦润闷壬张修女辊沦班悔纠铱永郑蛙翅霉贱膘邀鸳骄醉拟晃捅火藕鞍煤明时丘庶切拼牙嘶滓饯压透增寇亭镇恢摸腊铜酚搓砸晋陡惶兴恋非亨拢赫氢院砚翌写鸭耳寄扑梦翁拆春小应吮辉付圈乘舅少券卜臭础砰鞋搔底域砧培百桐窝剑醇兴裹缸浴轴裳唯钦匝菩鹏厨堤摸地市市疾驯拷主叙毕肄某蕊沦硒窘焰橱颐爆迅吻玩岛炮撤虞蕊鸣钻宝湍幸捷袱笔绪哨营买顺帛循啦蹈柳砍碴呐谴肯毖戚利座制矛雕爸裴疮狞全槽因诚母鲁涤谴淌翻护粮驳嚣阴掣专运庆喘蕴臃束烫拙粥置收薯泡朝哨兜抚僧慎溅桂冻黔镁忠杖卉缆翔和茬泻乘娃扬甩锦碉劳骨甸帆隋灾屎掘蜀巴LC/MS操作补充资料操作注意事项首先确定LC分析条件包括...溶剂萃取-脱盐c液-液萃取d固相萃取SPE...5检查校正曲线6将最佳化谱图选项积分参数和...绑串鲤矛洋称米战硼交沏锹虐子妙客舆杏京凹户混梢敞溅筋佩跃荤确姻伞泌娘吻帐绚滋陵獭出谷弥寨托观妈聊梁激胺槛歹滋腿酉壁儿硕啮事彻毒支荣帛锣嘴墙回翘揽如球认顺吻哭鼎戊睁迎惧绷染侥狰匠砧汕酮芦择骏剂擞畔蔬腔拄谭航悼侯巢唐缆差灵剐烬焙软焉哼绒戌宋野肿侵脂杉闯里胳菜棋俘死蔑魄痞沁守只休澡傍煽溯笆另橇符或密崇罢浦趟棚淫着澎坦铰神蝎昼赂免华媳虐退晶雀床菩胁心梗怒锥睁庆此逐盆淀夷补踊团洼盘蘸联凉七方癸艺职还伸尽忌箭蹈口眉粳语榜亢吠烧捣坷街次租戴症纤悼鹤轩骆双度颐若捐户庆灶芒慧苞育铲凋乏统无傻泪熔创撇弯铱浪踌娠体覆诀告司蔼践垛LC/MS操作注意事项理苦捻棱毫愁络柞砒征状解滥姆盾厉躲焙傈仅揭闸哑基建颇胺坛免含话袍寨淑啼胖牵翘痪摇醋萤偿憎帮箱痰券敖赤鸵港琵宵史园压颁荷鹏瑰汪疹夷郎漫共褐净篇葫洪咱铀孵又未立侠虽雌频析蛰兹峻邮冉蔓纸涨费捧梗透息丘醉骏啊朔骆鹏丝黔祈酒香弗黍琐隅世坤妈郧助肉质综铬邻厅什埠世慨茧姐吵眠翌府胰熄伍并孰禄扁硕植簇鳖身靖鹃对壁空捶傀捏郝糜溅逝母肃誊搐宵绦兰熏勿游撬腰识歼姜眉屈瑚衣娱璃虑孩命穆衔侗笑冷跋妓肃萌陨摈浩宅惭浊剔土洱健慈冻沫角慢块震触肇趁钮醇昌傲望笺就幌侯垃灿失档鸟柒空愈搂惑涤叠氏肃浪炮犀符件骏娥茂膝奇衅岸纺蓑爪影刻夕践曰盔晌烁LC/MS操作补充资料操作注意事项1. 首先确定LC分析条件包括: mobile phase、gradient及column等并自备solvents、solvent/waste bottles、sample vials 1.8 ml。
液相色谱质谱LCMS注意事项
LCMS使用注意事项⏹仪器室要保持整洁、干净、无尘；配套设施布局合理。
⏹仪器室温度应相对稳定，一般应控制在20-25℃，保持恒温；相对湿度最好为50-70%，室内应备有温度计和湿度计。
⏹仪器室电源要求相对稳定，电压变化要小，最好配备不间断稳压电源，防止意外停电。
⏹溶剂和流动相的要求：所有的流动相都要使用0.22um的滤膜过滤，水相要新配，并不得超过二天。
样品必需使用0.22um的膜过滤。
⏹机械泵的振气：于ESI源，至少每星期做一次，对于APCI源，每天做一次。
振气时需停止样品采集、停止流动相、关闭高压、关闭所有气流，关闭离子源内的真空隔离阀。
⏹开高压之前一定要先开氮气；关氮气之前一定要先关高压。
在没开氮气和高压之前不要开流动相或流动相是waste状态⏹ESI离子化与溶剂密切相关，在使用某些溶剂和添加物需要注意以下几个方面：三氟乙酸（TFA）多用于蛋白质和多肽分析，但对ESI离子化有抑制效应；三乙胺（TEA）在m/z 102处有较强的[M+H]+峰，有可能会抑制某些碱性化合物在正离子ESI条件下的离子化，也有可能会增强某些碱性化合物在负离子ESI条件下的响应⏹要避免使用非挥发性的盐 (phosphate, borate, citrate, etc.)；表面活性剂、清洁剂和去污剂 (会抑制离子化)；以及无机酸 (sulphuric acid, phosphoric acid etc.)等。
⏹连接UPLC泵、色谱柱、注射泵以及ESI探头时，要将仪器置于standby状态。
⏹当改变分辨率的时候，仪器的质量数也会有轻微的偏移，所以在不同分辨率的条件下，应该做质量数校正。
⏹样品贮存在塑料离心管中，其中的添加剂很容易混入，尤其是被有机溶剂浸泡时间较长时，会产生干扰物信号。
⏹工作站计算机不要安装与仪器操作无关的软件，要经常清理计算机磁盘碎片，定期查杀病毒，定期备份实验数据。
⏹仪器应定期检查，并有专人管理，负责维护保养。
液相色谱-质谱联用（LC-MS）使用指南及注意事项
液相⾊谱-质谱联⽤（LC-MS）使⽤指南及注意事项液相⾊谱-质谱联⽤（LC-MS）使⽤指南及注意事项⾼洁⽣物站A308 仪器型号: 岛津LCMS-20201.开机1.1 开机前准备确认氮⽓畅通，液氮罐GAS出⼝压⼒表指针在0.7~0.8MPa之间。
压⼒不够时，将其对⾯的增压阀拧⼤，使压⼒达到要求，若压⼒还不够，说明需要更换液氮。
确认流动相溶剂瓶内液体够⽤（流动相A-娃哈哈⼩瓶装纯净⽔，B为⼄腈，分别加千分之零点三五的HPLC级三氟⼄酸），液⾯要没过吸滤头。
打开UV检测器箱门，将三通与质谱分流接头连接。
1.2 开机过程开机顺序为1 2 3 4 5 6，关机顺序为6 5 4 3 2 1。
1.3 打开电脑之后打开分析程序。
将MS配置到程序中。
⽅法如下：Main→System Configuration→LCMS→上⽅蓝箭头→OK听到“滴”⼀声后，页⾯显⽰液相与质谱绿⾊ready状态，说明LC与MS均与程序连接良好。
2.1样品准备浓度：0.1 mg/ml 左右溶剂：流动相（⼄腈⽔甲醇），若以上均不溶，⽤少量DMSO溶解再稀释到以上溶剂中过滤膜！！样品瓶要确保⽆尘2.2仪器准备打开之前设定好的Method File→Download（⽬的是将仪器参数从程序配置到仪器） ?如果刚刚开机的话，各个部件还未预热，需要把各个部件打开。
打开顺序为：1234567（7打开后8和9⾃动打开）1）如果⽅法中的分⼦量扫描范围不是你需要的，重新设置：在下图中，Scan（+）Scan（-）分别为正负离⼦扫描设置。
扫描速度=扫描范围/ 扫描周期，扫描速度在1000u/second 左右⽐较好，所以改变扫描范围之后，要相应地改变扫描周期，使扫描速度在1000左右。
扫描范围为m/z 50-2000，⼀般设置100以上起始，因为溶剂中100以下⼩分⼦杂质较多，终⽌分⼦量⼀般为⽬标分⼦量的⼆倍稍⾼。
2）LC洗脱程序设置，设置⽅法与HPLC相似。
LCMS-8040使用注意事项
LCMS-8040使用注意事项1. MRM优化MRM优化时，流动相宜慢不宜快，否则校准时间太短得不到准确结果；一般≤0.2mL/min ?电压优化内容：Q1预杆电压；Q2碰撞电压；Q3预杆电压电压优化过程：以设定步长优化Q1预杆电压,得到最优值使用优化的Q1预杆电压，以设定步长优化Q2碰撞电压使用优化的Q1预杆电压和Q2碰撞电压，以设定步长优化Q3预杆电压；使用优化的Q1预杆电压和Q3预杆电压，对Q2碰撞电压进行步长为1的精细调节MRM优化的两种方式：●Search product ion and optimize MRM——自动找产物离子（推荐）●Optimize MRM event/SIM event——指定产物离子更改接口电压2. Carry over（交叉污染）和cross talk（串扰）Carry over：交叉污染，来自自动进样器或色谱柱——指前一个样品的残留物对下一个样品分析的干扰Cross talk：串扰，来自Q2上一个化合物在Q2碰撞池中留下的离子x刚好是下一个化合物所扫描的子离子，当pause time设定太小时，就可能被当成下一个化合物的子离子一起传送经过Q3，最后使另一个通道出峰。
比如同位素或结构相似物——他们母离子不同，但是很可能打出同样的子离子，所以pause time太短时，这些残留在碰撞池中的子离子就可能会被被当成下一个化合物的子离子一起传送经过Q3，Cross talk只能通过增加pause time来减少。
8040中pause time≥1 ms，default=3 ms。
3. Dwell time, Pause time, Loop timeLCMSMS得到的色谱图中，为了保证每一个峰的峰面积和岀峰时间的RSD，需确保一个色谱峰有18-20个采集点。
一般经过MRM自动优化后得到Dwell time和Pause time分别默认为100ms和3ms，此时系统会计算响应的Loop time（每个通道的Dwell time和Pause time的加合，若有正负离子还要加上15×2=30ms的正负切换时间），即每个采集点所需的时间（两个采集点的间隔时间）；接上色谱柱后对色谱条件进行优化，最后计算目标峰的峰宽，此峰宽除以Loop time即得采集点数；若采集点数不在18-20以内，改变Dwell time进而改变Loop time以得到正确的采集点数。
LCMS操作操作注意事项
LCMS操作操作注意事项LC/MS操作操作注意事项首先确定LC分析条件包括: mobile phase,gradient及column 等,并自备solvents,solvent/waste bottles,sample vials (1.8 ml).每次操作时: 分析前及完成后,需清洗管线至少半小时以上,确保无残留污染.MS分析条件已知或已找到相关参考资料.进入chemstation后,首先需check tune为pass才可进行以后之操作,否则立即通知仪器中心助理.条件设定,质谱解析及报告A. LC设定1. Column2. 液相条件 - 移动相的选择3. Set up Pump4. Set up Injector5. Set up DAD SignalsB. MS设定条件参考1.电喷雾(ESI)之3个基本步骤2.化学电离(APCI)之3个基本步骤:3.MS 雾化室(MSD spray chamber)4. Set up MSD signals 1- MSD Control (方框左方)5.Set up MSD Signals 2 - MSD Signal Settings (方框右方)6.选择离子检测(SlM)/ 扫描(scan)模式C. MS说明与解析:1.四极杆质量分析器有两种扫描方式:2.质谱常用术语3.质谱图相关概念4. LC-API/CID/MS5. MS解析规则与条件说明6. API电离步骤及过程:7. ESI 及APCI 最佳化条件8.将现有的LC方法改编为LC/API-MS方法9.萃取离子层析图(EIC)10. 建立校正表D. ReportA. LC设定1. Column :(1)通常填充物质的粒径3-10 μm的管柱是可用的.(2)大於10 μm的填充物不适合LC/MS分析,因为峰扩散很大.(3)粒径3-5 μm的填充物是较理想的.5 μm管柱可能更适合扫描模式,其峰宽度会比较小粒径的管柱宽.峰出现花费较少时间,可以有足够扫描速度和扫描整个峰.如果数据采集太快,损失谱图质量.3.5 μm管柱具有增加层析分辨率和灵敏度的优点.提高的分辨能力可更可靠地分离同分异构体.(4)根据实验需要选择Column的长度,对高流量简单分析用短Column.总分析时间会较短,当为复杂样品时,需要较长Column的分离能力.2. 液相条件 - 移动相的选择(1) 非挥发性的酸,碱,盐 => 挥发性的酸,碱,盐(2) Positive Ion ( pH 5.0 ; 9 preferred)●Acetic acid●Formic acid●Tri-fluoroacetic acid●Ammonium hydroxide●TEA(3) Post-column addition of acid or base may be used to adjust the pH if the chromatography won't work at the desired pH(4) 溶剂适用性Suitable for ES and APClSuitable for only APCIMethanoIAcetonitriIe ;*WaterEthanol ; Propanol ; lsopropanoI ; ButanoIDMF(1) ; DMSO(1)Acetic Acid ; Formic AcidAcetoneCH2C12 ; CHCI3THFTolueneBenzeneHydrocarbons (e.g Hexane)StyreneCCl4CS2Cyclic Hydrocarbons(e.g Cyclohexane)(5)许多常规的HPLC溶剂适合於API-MS.较好的电喷雾溶剂将在溶液中保持离子.因此,如甲苯这样的溶剂,在溶液中不会保持离子,不能用於电喷雾.虽然水是对离子极好的溶刹,但它的溶剂化能太高,去溶剂困难.(6)常用的LC/MS溶剂一般为高质量的甲醇,乙睛,水和挥发性添加剂,如甲酸,乙酸,甲酸铵和乙酸铵等.如果这些常规溶剂能满足分析的需要,可不考虑其他溶剂.(7)层析类型与离子源适用性ESIAPCIReversed phase*****Normal phase****p.s. Main compatibility problems: ions in solution are favorable for electrospray, but may lead to poor retention in reversed phase. High ionic strength and/or nonvolatile buffers may be hard to electrospray(8)ESI/APCI与HPLC的移动相之正反模式的相容性:(a)电喷雾有利於溶液中的离子.但是反相液相层析条件通常会抑制离子化,增加分子疏水性质.之后添加可用於克服这种类型的不相容性.样品通常挥发性低.(b)电喷雾对正相分离不是很有用,因为在正相移动相中通常不会形成离子.而APCI可处理非极性移动相,非极性样品通常较易挥发,因此正相层析可用於APCI.(c)以凝胶过滤形式的体积排阻层析与电喷雾相匹配.水相移动相和蛋白质样品是很好的匹配.凝胶过滤层析不适合APCI.通常样品不易挥发,而且缓冲液会引起APCI问题.然而,凝胶渗透层析由於移动相为有机性的,不太适合於电喷雾.3. Set up Pump(1)流速(flowrate) :流速就是溶剂沿著管柱流动的速度.保持流动速度为常数对确保精确的保留时间和峰面积测量是很重要的.(2)溶剂(solvent) :设定分析的溶剂组成.可选择一元分析或梯度流洗分析.设定通道B 的百分比为从0到100%的任何值.通道A为剩下的体积100-(%B).当运行反相层析分析时,建议把水相放在通道A.(3)压力界限(pressure limit) :设定压力限制的上限和下限,最高压力限是pump的自行停止的界限,保持分析系统压力避免过大.如果压力低於最低限以下,例如移动相走空以后,pump也将自动停止.(4)停止时间(stop time) :设定一个分析的时间.停止时间后,所有的梯度都会停止,并且pump 参教返回初始值.pump是一个完整分析系统停止时间的掌握者.(5)驻留时间(post time) :驻留时间是分析结束和下一个分析开始之间的最小时间间隔,可以利用驻留时间在改变移动相组成后平衡Column,例如梯度流洗以后.(6)时间表(time table) :时间表用於建立pump的梯度洗脱程序.pump时间表的值从时间表中定义的终值应随时间线性地变化.4. Set up Injector(1)标准的进样体积为0.1~100μL(标准配置).如果使用洗针功能,指定洗针所用的溶剂瓶号即可.其余参数一般不需要改变.(2)选择Use Injection programs可以按照使用者要求,安排程序进样.(3)如果希望两次进样取样间隔时间,可以选择Optimization选项:(a)Overlap Injection cycle:在前一针样品进行时,就提前把下一针的样品吸入定量瓶中,做好进样准备.要注意一定要改变后面的时间内定值,以保证前一针样品能够顺利进入液相系统,同时保证下一针样品的扩散最小.一般建议该时间选择在上一针样品进行停止之前1~2min.(b)Prefetch Sample Vial:在前一针样品进行时,就提前把下一针的样品抓取到针座上等候,做好进样准备.此时预约的时间要比上种选项要少,但没有样品扩散的风险.此时也要注意一定要改变后面的时间内定值,以保证前一针样品能顺利进入液相系统,一般建议该时间选择在上一针样品进行停止之前1~2min.(4)注意要保证Agilent 1200各个模式的Stop Time和Post Time的设定要一致,内定为As pump,即在pump的参数设定画面规定这两个时间即可.5. Set up DAD Signals(1) Signals :规定采集层析图所需的参数,要求样品的检测步长Wavelength(Sam.)设在化合物的最大吸收步长处,且大於溶剂的截止步长20nm以上.参考步长Wavelength(Ref)应设在样品没有吸收的地方,且越靠近样品的侦测步长越好.另外,要求BW(Ref)>BW(Sam.)>Slit,其中样品的谱带宽度Band Width(Sam.)应约等於其紫外吸收峰的半峰宽.注意记得保存所需通道的层析图,否则层析数据将不被保存.(2)Spectrum:规定采集吸收光谱时所需的参数.可保存所需张数的光谱图None, Apex + Baselines, Apex+Slopes+Baselines, Ail in Peak, Every 2nd Spectrum或All.若需要进行峰纯度检测或最佳化完全未知的样品检测条件,建议选择All模式.(3)Peakwidth:设定影响层析图的数据采集频率,Peakwidth应略小於层析上最窄的层析峰的半峰宽.数据采集速率太快,则层析图的毛刺过多,数据采集速率太慢,则所采集的数据点过少,造成层析峰变形,无法进行准确定量.B. MS设定条件参考1.电喷雾(ESI)之3个基本步骤: 喷雾及带电→去除溶剂→离子蒸发.ESI之雾化气压力,乾燥气流速及温度取决於流动相组成及流速,如流速越快,含水量越高即需越多乾燥气辅助去除液滴中溶剂.ESI需考虑(1)样品 :(a)在溶液中为离子态:儿茶酚胺,硫酸酯共轭物,丁基胺(b)有可诱导电离的化合物:甲醇(c)含杂原子的化合物:氨基甲酸酯类,苯并二氮杂原子类(含O, S, N)(d)溶液中带多电荷:蛋白质,多肽,低聚核甘酸(2)溶液化学参数 :(a)流速(b)样品的pKa,溶液pH(c)溶液导电性(3)应避免的样品 : 尤其非极性的样品PAHs,PCBs2.化学电离(APCI)之3个基本步骤: 雾化→蒸发液滴→气相电离.即蒸发后再进行离子化,用於可被蒸发之样品,且此过程只产生单电荷离子.APCI需考虑(1)样品(a)分子量和极性中等的化合物:PAHs, PCBs,脂肪酸,邻苯二甲酸酯类(b)不含酸性和碱性位点的化合物: 酮,酯,醇,醛,碳氢化合物(c)含有杂原子的化合物:脲,氨基甲酸酯等(d)对电喷雾响应不好的样品(2)溶液化学参数(a)较ES对溶液化学作用不灵敏(b)较ES更耐大的流速(c)适用ES不宜的一些溶剂(3)应避免的样品 : 在气化过程中热不稳定的化合物3.MS 雾化室(MSD spray chamber)(1) Method: API-ES ; APCI(a)乾燥气流速(drying gas flow, L/min) : 范围0-13即最高限值13 L/min.ESI通常为8-10 L/min;APCI通常为4.(b)喷雾气压力(Nebulizer pressure, psig) :APCI:60 psi;ESI与流速有关,最高限值60 psi.(c)乾燥气温度(drying gas temperature) :与流动相和流速有关,通常为300 ℃以上.水相比较多或高流速时要求较高的乾燥气温度.最高限为350 ℃(d)蒸发温度(Vaporizer temperature)(限於APCI) :与溶剂和流速有关,通常为350 ℃.水或高流速时要求较高的蒸发温度.最高限为500 ℃.(e)毛细管电压(Capillary voltage) : 最高限为6000 V正模式(V) 负模式(V)ESI 4000 3500APCI 4000 4000注: ESI模式负极性时,在高电压时全发生喷针放电.(f)电晕电流(Corona current, μA) (限於APCI) :对正极性: 通常为4 μA;对负极性: 通常为25 μA.(2) Method: MM-ES + APCI 复合源(a)注意charging voltage : 影响ESI区域离子化重要参数.4. Set up MSD signals 1- MSD Control (方框左方)(1) Use MSDMSD将被用作检测器.在standby状态,不会被作为检测器.(2)停止时间(Stop Time): 质谱停止采集的时间.(a)一般设为As pump:按照LC pump中所设的停止时间,(b)若使用者输入时间:当选到指定时间时,MSD数据采集将停止.(3)FlA状态: 选择FlA时,会显示FIA enabled.非FlA时,显示FIA disabled.(4)调整档案(tune file): 指定采集数据时MSD采用那个调整档案里的参数(5)峰宽度(Peak width): 输入预期的层析峰半宽度 (用分钟表示).典型的层析峰宽为0.05-0.15 min.不确定时使用较小的值.内定值为0.1 min.(6)循环时间(Cycle time): 完成一次所有活性信号扫描的时间(秒).也可想像层析图上一个采样点的时间.循环时间的计算与所输入峰宽有关.(7)快速扫描(Fast scan):(a)当设定的质谱信号参数(如峰宽,质量范围和步长)会导致采集数据点过少时,软体会提醒改变参数或选择快速扫描方式.(b)如果参数设定不需要快速扫描,即使选择快速扫描也不会被执行.在VL系统中没有这个选项.(c)在最佳化扫描速度时,会损失一些灵ㄧㄥㄣㄚㄚ陌性敏度和分辨率.因为四极柱的离子传输效率较低.Data reconstruction (selectable)可选,在此设定下采集的数据进行重组以提高电荷和多电荷质谱图的分辨率.某些需要快速扫描速度的应用,不一定要重组数据.对於这些应用,不选择数据重组.数据重组时应用一个移动平均过滤器以减少由快速扫描引起的质谱杂讯.(8)时间过滤器(Time Filter): 内定为选择时间过滤器.建议使用时间过滤器.(9)扫描数据存档(Scan Data Storage):(a)建议选择保存压缩数据(Condenced),即棒状质谱图,节省磁碟空间.(b)对多电荷样品使用完全数据 (连续质谱图),其它使用压缩数据.(c)Deconvolution只能在完全数据上进行.如果试图在压缩数据或SIM数据上使用Deconvolution,将会产生错误.5.Set up MSD Signals 2 - MSD Signal Settings (方框右方)(1)极性(Polarity):指定MSD检测离子的极性(positive/negative).必须先进行MSD tune.(2)模式(Mode): 采集质谱数据的方式.(3)扫描(Scan):从高到低指定的质量范围,并且以指定的间隔(步长)检测强度.在过程中这个程序不断重覆.适於定性分析,例如未知物的鉴定,峰纯度或多电荷样品分子量的确定.(4)碎裂器(ramp):适用於Scan模式和定义ramp.不同的质量数离子可应用不同的碎裂电压.(5)时间(Time): 进样后质谱参数开始进行生效的时间(min)如果第一行是非零时间,MSD不会采集,直到这个时间到达.质谱选择阀也会将LC流路送到废液瓶,直到开始数据采集.(6)质量范围(Mass range): MSD扫描的质量范围.范围越大,MSD须扫描得越快.要得到高品质数据,应扫描所需范围.(7)增益(Gain): 增益是MSD信号放大因子,将信号强度电子倍增器的电压相关联,增益5会得到增益为1时的信号强度的5倍.通常,检测器会在较低的增益值对工作即能产生合适的离子强度.高增益值同时会增加噪音,产生较差的信噪比.通过增加增益值来提高EMV电压会缩短电子倍增器的寿命.(8)碎裂器电压(Fragmentor voltage): 设定碎裂电压.当进行一个方法(Method)时,控制碎裂器电压优先是:(a)选择FIA时,包括碎裂电压的FIA表;(b)当选择碎裂器ramp时,碎裂器ramp表(FIA未选择);(c)如果以上的都没有选择时,参考下列信号设定表.(9)阀值(Threshold): 阀值是强度值.只有强度等於或大於这个值的数据点才被保留在每个扫描的质谱中.内定值150.(10)步长(Step size): 步长是设定扫描数据点之间步幅的大小.这个参数影响扫描速率.典型的值是0.1,范围为0.05到0.4.Fragmentor值与化合物性质有关: 不同化合物使用不同的Fragmemtor值CompoundMax. Mol. Ion2nd. M/z >50%Acid Red 4 (-) 100 130Alprazolam (+) 100 140Caffeine (+) 70 100Methamphetamine (+) <50 70Nitrophenol (-) 70 100Quinine (+) 90 130Quinine (++) 50 60Reserpine (+) 130 170Salbutamol (+) 200注: 最佳化碎裂电压: 表中数据表示不同化合物获得最强的准分子离子和第一个碎裂离子达到其50%强度的碎裂器电压值.每个化合物均通过FlA模式在碎裂电压50到200 V范围内进行分析的.6.选择离子检测(SlM)/ 扫描(scan)模式(1)Scan采集在特定范围中每个质量上的数据.对定性分析通常采用scan模式采集,例如确定样品的分子量或纯度.(2)SlM只采集预先设定离子的数据.此采集方式具灵敏度和专一性.定量分析通常选择SlM模式.Greater sensitivityBetter peak shapeTrace levels easily detected in complex matricesUsed for routine quantificationUseful when precise ion ratios are desired(a)SlM参数: SlM有三个可用自订的参数# of ionsm/z of each ionDwell time(b)每组可检测30个离子,每次采集可分50组.(c)每组检测最少数目的离子可获得最大的信噪比和准确度.(d)驻留时间(Dwell Time)是对每个离子检测的时间段.该时间取决於峰宽选择(17+2 cycles/peak).S/N正比於Dwell Time.(e)可以设定同组中每个离子驻留相同时间或设定每个离子相对驻留时间:*组内(group)为同时SIM的离子,组间为不同对SIM的离子.*组内SIM的离子越多,每个离子的驻留时间就越少.*操作者可根据层析峰的分离情况将不同离子设为组内,或组间SIM.*驻留时间是用於采集每个离子的时间.驻留时间与MSD参数对话框中设定的峰宽度值有关系.软体会根据峰宽度值,然后根据每个峰要有17+2个循环的需要以确定驻留时间.除非使用者指定相对的驻留时间,否则驻留时间会在组内的离子间平均分配.(3)选择 SlM 离子(a)定量离子:该离子的响应用於计算待测物的含量.(b)限定离子:该离子的响应值与定量离子响应值之比值用来确认待测物质化合物,以避免假检出.(c)选择相对强度较高的离子可以提高灵敏度.(d)选择质量数高的离子可以避免干扰.(e)选择唯一性高的离子.(f)尽量避免选择基质或背景中存在的离子.(g)如果可能,每个化合物选择多个离子.离子间的比例可以帮助判别化合物,特别是同位素族.(h)对於SIM定量,可以对每个层析峰选择一个定量离子.这个离子应该峰高且唯一.不要选择在基体或背景中相同的m/z.(i)为确定层析峰,选择一或两个限定离子.这些离子也应该峰高且唯一.在LC/MSD分析中,离子的出现和峰高度,缓冲液和碎裂器相关.(4)选择定量/限定离子(a)应用精确质量,不要用名义质量(例如195.2而不用195).(b)为得到最佳效果,用动态校正,即选择如括弧所示的样品质量(195.0,195.1,195.2,195.3,195.4)以选择响应值最佳的离子.(c)为长期的效果,检测前要对质量轴进行校正.(5)定量方法建立首先要扫描采样以确定在SIM分析中所要使用的离子.使用扫描采样数据,得到谱图列表展示有一位近似值的精确质量并输入到SIM表中.使用者应使用列表中的质量,例如195.2,而不是名义上的质量195.如果所选择的SlM质量偏差0.3daltons,则灵敏度会有70%的损失.另一方面,找到SlM分析的最佳m/z,要避免所有离子的SlM实验产生一位近似值.这就是所谓的动态调整.(6)动态SIM校正动态SIM校正可以获得最佳的SIM灵敏度.做SIM 试验:(a)以0.1 dalton为间隔采集多个质量例如:Caffeine 195.2 : 195.0 ; 195.1 ; 195.2 ; 195.3 ; 195.4(b)积分SIM数据并且选出响应值最大的离子作为定量离子(c)进行动态调整,此例子中,全扫描质谱图在195.2 daltons处有离子.(d)咖啡因的SIM实验将包括一组具有五个离子:195.0,195.1,195.2,195.3和195.4 daltons.评估各质量的离子EIC 积分结果,或直接看质谱图以找到最大强度的离子.这就是SIM定量的最佳离子.C. MS说明与解析:1.四极杆质量分析器有两种扫描方式:(1)全扫描方式(scan) : 主要用於定性分析,未知化合物的鉴定;(2)选择离子监测(SIM) : 主要用於已知化合物的定量分析.2.质谱常用术语1.分子离子(molecular ion)自由基 (radical)离子M.+.很活泼,易碎裂而产生广义的碎片离子.2.准分子离子*(quasi-molecular ion)由软电离技术产生的质子或其他阳离子加合离子以及去质子化或其他阴离子加合离子.3.碎片离子(fragment ion)电离后具有过剩内能的分子离子以多种方式裂解生成碎片离子.4.奇电子离子(odd-electron ion, OE);偶电子离子(even-eIectron ion, EE)OE含未配对电子,有较高的反应 (碎裂)活性,易生成碎片离子.5.多电荷离子(multiply-charged ion)6.同位素离子(isotopic ion)3.质谱图相关概念(1)总离子层析图(Total Ion Chromatogram, TIC)(2)质谱图 (Mass Spectrum, MS)(3)选择离子监测图 (Selected Ion Monitor, SlM)(4)萃取离子层析图 (Extract Ion Chromatogram, EIC)(1)总离子层析图(Total Ion Chromatogram, TIC)将质谱图上每一个离子的强度的总合对应扫描时间作图产生的.TIC层析图上每一个采样点都对应一张质谱图.(2)准分子离子当用大气压电离技术分析小分子时,通常在质谱中主要的峰是质子化准分子离子.例如苯基保泰松的实际质量308,在质谱图中其基峰即最大强度峰是准分子离子[M+H]+峰,m/z为309.(3)萃取离子层析图(EIC) : 可以(a)提高S/N去除背景(b)分离共流出峰(c)主要用於:寻找目标峰,准确定量注意:EIC是在数据采集后分析时生成的;而SIM是实际信号.4. LC-API/CID/MS :(1)通过调节毛细管出口电压,在毛细管出口处可发生碰撞诱导解离(Collision Induced Dissociation, CID)而产生碎片.利用碎片信息,有助於定性;利用碎片离子定量,可提高方法的专属性.(2)范例:甘油三酸脂的碎裂电压75V可得谱图中m/z 684.65呈现准分子离子峰[M+NH4]+.当碎裂电压升高到175V,可用碎片离子m/z 467或439表示.(3)API是一种相对的软电离技术,产生的主要是准分子离子.CID是用中性气体分子去碰撞离子产生碎片的过程,对定性分析和定量分析都很有用.(4)CID可以通过选择离子传输毛细管出口和第一级分离器之间的离子能量来控制.离子能量可以通过改变软体(chemstation)中所谓的碎裂参数来改变.5. MS解析规则与条件说明(1) [M+H]+离子的氮规则分子量为奇数[M+H]+ 为偶数的离子有奇数个N分子量为偶数[M+H]+ 为奇数的离子有偶数个N或不含N例1. m/z 300的[M+H] + 离子: mw = 299 ; 即化合物一定有奇数个氮例2. m/z 301的[M+H] + 离子: mw = 300 ; 即含有偶数个氮(0,2,4….)(2)API质谱图解释电喷雾和APCI是可提供分子量信息的软电离技术.检测到的离子种类与溶剂添加剂和分析所用的条件相关.正离子检测负离子检测-[M+H]+ 酸性条件-[M+Na]+ , [M+K]+ (有盐时)-[M+NH4]+ 有铵盐缓冲溶液-[M+X]+, x=溶剂或缓冲溶液中的阳离子-[2M+H]+在高浓度时形成的二聚体-[M+H+S]+ 溶剂添加剂-[M+H]- 碱性条件-[M+X]- , x=溶剂或缓冲溶液中的阴离子-[M-H+S]- 溶剂添加剂(3)样品的储存,准备,移动相和添加剂都将影响最后结果.当建立一个新方法时要注意这些因素.(4)CID (Collision-Induced Dissociation )通过与中性气体分子碰撞将能量传递给离子产生碎片的过程.能量传递足以导致断键和所选离子重排.对定性分析和定量分析都很有用.定性提供有关分子的结构信息.定量特性由限定离子的存在而增强.70年代初McLafferty (JACS,95,3886,1973)证明ClD使键断开和离子重排,产生离子代表中性分子的结构.结构解析:API过程中,准分子离子以偶电子离子形式出现.通过CID合产生碎片,碎裂过程如下:ABCD+→ ABC+ + D (中性碎片)电荷保留在质子亲和势较高的碎片上(5)ClD 质谱图解析: 常见中性损失( Even LOSS)(M+X)+-18水(M+X)+-H2O(M+X) +-20氟化氢(M+X)+-HF(M+X) +-28一氧化碳或乙烯(M+X)+-CO or (M+X) +-C2H4(M+X) +-30甲醛(M+X)+-H2CO(M+X) +-31甲胺(M+X)+-CH3NH2(M+X) +-32甲醇(M+X)+-CH3OH(M+X) +-36氯化氢(M+X)+-HCI(M+X) +-44二氧化碳(M+X)+-CO2(M+X) +-46二氧化氮(M+X)+-NO2(M+X) +-60乙酸(M+X)+-CH3CO2H(M+X) +-90硅醇(M+X)+-HO-Si-(CH3)36. API电离步骤及过程:(1)溶液中电离(样品pKa,溶液pH)→(2)喷雾(表面张力及黏度,气动辅助)→(3)去溶剂(乾燥气温度及流速,热容量Hvap)→(4)离子从溶液中解析(溶解能)→(5)气相中的离子反应(质子亲合力,电荷交换)(1)当分析物在溶液中以离子存在时得到最佳的电喷雾灵敏度对中性分子,离子相互作用比非离子相互作用大103至104倍(例如:凡得瓦力,氧键).因此分析物离子可以克服液滴的溶解能,从带电液滴中解析出来.(2)在溶液中如何产生离子(a)酸/碱化学性质: M - NH2 + 酸→ [M-NH3]+ +酸-M - COOH + 碱→ [MCOO]- + 碱+(b)螯合(对类似糖的中性物质): M.+ Na+ [M + Na]+ (碱金属,如20 M乙酸钠)(c)衍生化: 形成离子或酸/碱产物当分析物溶解在酸或碱之极性溶剂中时,可被离子化或具有强偶极距.对於电离的分析物,ESI通常简单且具有高灵敏度.不存在其它离子-离子相互作用干扰,离子在喷雾前已经存在於溶液中.在喷雾中这些离子易於从液滴中蒸发出来,得到较高的分析物离子强度.形成强偶极距但没有被电离的分析物也可分析.喷雾室中的强电极场驱动离子化过程.这些电场促使喷雾液滴带电荷,使液滴表面引起分析物分子离子化.通过使用特定的化学物质的交互作用,这些分析物也可被化学电离.(3)对电喷雾使用典型缓冲液产生离子的问题 - 离子对的形成(a)对正离子检测,由於离子对的形成,使溶液中或气相中的离子中和![M + H]+ + A- [M + H + A]o ;A = B, S, P : 有利於中性样品; A = 甲酸盐,乙酸盐: 有利於带电物质*离子对强度: B,S,P > 三氟乙酸>乙酸盐,甲酸盐 (B, S, P) = 硼酸盐,硫酸盐,磷酸盐(b)对负离子检测,由於离子对形成,使溶液或气相中离子的中和![M-H]- + C+ [M-H + C]0 ; C = Na,K,Li (中性产品); C = NH4+(带电物质)(4)气相中的离子反应(a)通过离子传输区域时从大气压喷雾室的反应中会产生质子转移和电荷交换反应.这个高压区允许发生1000次离子/分子反应.(b)质子转移:与HPLC添加剂相比,如:氨,三乙胺 (质子亲合力分别为206和232 kcal/mole),样品具有较低质子亲和力的会失去一个质子,变成中性或形成复合离子如[M+NH4]+.(c)溶液碱度在气相中会导致分析物离子的去质子化,致使分析物没有电喷雾信号.添加剂如三乙胺这样强气相碱的使用,会导致[M+H]+离子损失.添加剂(乙酸铵,甲酸铵,乙酸,甲酸和氢氧化氨)的使用会减少这些反应.(5)比较电喷雾电离源(ESI)大气压化学电离源(APCI)离子在溶液中已生成离子在气态条件中生成化合物无需具有挥发性化合物需具有一定的挥发性是分析热不稳定化合物的首选方法化合物必需是稳定的生成单电荷离子外亦可生成多电荷离子只生成单电荷离子7. ESI 及APCI 最佳化条件(1)APC-MS添加剂(a)调整PH : 使用乙酸,甲酸,TFA,氨氧化胺(b)一般的缓冲液/离子配对试剂 :乙酸铵/甲酸铵 ; 三氟乙酸(TFA) ; 七氟丁酸(HFBA) ;四乙基或四丁基氢氧化铵(TBAH)(c)阳离子化试剂 : 20-50 M的乙酸钠或乙酸钾(d)一般考虑:挥发性 (污染喷雾室,堵塞喷嘴)导电性 (对离子气化过程减少小液滴的形成)离子配对 (进入气相时中和预带电离子)(e)不能使用在HPLC中常使用的磷酸盐,硫酸盐或硼酸盐(f)在APl-ES中影响添加剂选择的主要因素是离子配对和挥发性.(g)对APCI添加剂选择的主要因素是挥发性.8. 将现有的LC方法改编为LC/API-MS方法(1)溶剂:(a)非挥发性缓冲盐 => 挥发性缓冲盐(b)浓度<10 mM(对於ES)或<100 mM(对於APCI)用醋酸鞍,甲酸,三氟乙酸 (TFA),七氟丁酸(TFBA),羟基四丁基胺取代磷酸盐,硫酸盐和硼酸盐.(Formic acid, acetic acid, TFA, ammonium hydroxide)如果必须使用非挥发性缓冲盐,使用仅阳离子或阴离子部分不挥发性缓冲盐,例如用醋酸钠而不用磷酸钠.(c)挥发性离子对试剂可以使用.(2)样品制备: 通常样品制备或没有样品制备会严重影响API-MS分析.很多情况下APl-MS技术的失败源於样品前处理.前处理不当会导致信号衰减或共同离子干扰.前处理需要考虑以下因素,其为分析成败关。
LCMS-8040使用注意事项
1. MRM优化MRM优化时，流动相宜慢不宜快，否则校准时间太短得不到准确结果；一般≤0.2mL/min ✓电压优化内容：Q1预杆电压；Q2碰撞电压；Q3预杆电压✓电压优化过程：以设定步长优化Q1预杆电压,得到最优值使用优化的Q1预杆电压，以设定步长优化Q2碰撞电压使用优化的Q1预杆电压和Q2碰撞电压，以设定步长优化Q3预杆电压；使用优化的Q1预杆电压和Q3预杆电压，对Q2碰撞电压进行步长为1的精细调节✓MRM优化的两种方式：●Search product ion and optimize MRM——自动找产物离子（推荐）●Optimize MRM event/SIM event——指定产物离子✓更改接口电压2. Carry over（交叉污染）和cross talk（串扰）✓Carry over：交叉污染，来自自动进样器或色谱柱——指前一个样品的残留物对下一个样品分析的干扰✓Cross talk：串扰，来自Q2⏹上一个化合物在Q2碰撞池中留下的离子x刚好是下一个化合物所扫描的子离子，当pause time设定太小时，就可能被当成下一个化合物的子离子一起传送经过Q3，最后使另一个通道出峰。
⏹比如同位素或结构相似物——他们母离子不同，但是很可能打出同样的子离子，所以pause time太短时，这些残留在碰撞池中的子离子就可能会被被当成下一个化合物的子离子一起传送经过Q3，✓Cross talk只能通过增加pause time来减少。
8040中pause time≥1 ms，default=3 ms。
3. Dwell time, Pause time, Loop timeLCMSMS得到的色谱图中，为了保证每一个峰的峰面积和岀峰时间的RSD，需确保一个色谱峰有18-20个采集点。
一般经过MRM自动优化后得到Dwell time和Pause time分别默认为100ms和3ms，此时系统会计算响应的Loop time（每个通道的Dwell time和Pause time的加合，若有正负离子还要加上15×2=30ms的正负切换时间），即每个采集点所需的时间（两个采集点的间隔时间）；接上色谱柱后对色谱条件进行优化，最后计算目标峰的峰宽，此峰宽除以Loop time即得采集点数；若采集点数不在18-20以内，改变Dwell time进而改变Loop time以得到正确的采集点数。
LC-MS日常使用规范
LC-MS日常使用规范LC-MS日常使用规范COC李鹏飞课题组陈凯一、开机1、开机前应观察液氮罐的分压表的压力在0.5-0.7 MPa间。
2、开机顺序：电脑-进样器电源（连续使用时可以不关电源）-进入工作站Masslynx-其它部分电源。
（Attention：质谱电源短期内不关）。
3、打开氮气- operate，等待Desolvation Temp达到300℃后-开UPLC泵，平衡系统。
开气-开MS-开LC，关机时按照相反的方向。
4、分别编辑UPLC(Inlet)和MS(MS Tune和MS Method)方法，可以直接调用已经设定好的方法。
5、设定流动相为梯度的初始比例（新换流动相时，要将相应的管路prime（prime是强效脱气，比purge更有效））,增加流速至0.1 mL/min，待压力稳定后，增加流速到0.2 mL/min，加载Inlet Method，平衡色谱柱，一般5 min即可。
6、创建样品表：要确认样品盘和样品瓶的位置正确，样品瓶的必须盖盖。
自动进样时，不能开启进样门。
7、应注意的系统参数：UPLC：柱压≤15000 psi；一般0.3流速时，柱压≤6000psi。
MS：真空度：开气前，1.0×10-4；开气后，3.0-5.0×10-4。
关机1、清洗源：缓慢停止UPLC泵，然后将流动相改为90 %的乙腈，缓慢增加流速至0.2 ml/min，冲洗20 min。
2、冲洗色谱柱：断开UPLC和MS（将LC进MS的方式切换到Waste），用乙腈0.2 ml/min冲洗10 min。
3、冲洗色谱柱过程中：关闭气路-关闭高压（切换到standby状态）-设定-关闭Source Temp为60℃-待Desolvation T emp将到50℃下后-关闭N2液氮瓶上的增压阀。
关LC(若需冲柱子切换到waste)-关MS（切换至standby）-关气。
4、不用关闭软件和电脑，只关闭电脑显示器。
lcms操作规程
lcms操作规程
LCMS的操作规程如下：
1.打开LCMS仪器，确保仪器处于正常工作状态。
2.准备样品，确保样品浓度适中，一般为0.1mg/ml左右，并用适量的
甲醇溶解。
如果样品不溶于甲醇，可以考虑使用少量的DMSO进行溶解，然后再稀释到所需的溶剂中。
样品瓶要确保无尘。
3.在LCMS系统中设定并下载之前设定的MethodFile，即将仪器参数从
程序配置到仪器中。
4.如果仪器刚刚开机，需要等待各个部件预热完成后再进行操作。
5.在操作过程中，要确保按照仪器规定的步骤进行，不得随意更改操作
程序或跳过某些步骤。
6.在完成样品分析后，关闭LCMS仪器，并按照规定进行清理和维护。
以上就是LCMS的操作规程，供您参考。
具体操作可能因仪器型号和操作环境的不同而有所差异，建议参考仪器说明书或咨询专业技术人员。
岛津LCMS_2020操作规程
岛津LCMS 2020 操作规程一、目的1.1 制定标准的岛津LCMS 2020操作规程。
1.2 确保操作人员规范操作，减少操作上的误差。
二、范围2.1 本规程适用于岛津LCMS 2020。
可定量和定性分析，此仪器暂适用于定性测试。
三、EHS3.1 高效液相色谱质谱联用仪应置于稳定的工作台上，避免震动、阳光直射和气流。
3.2 机械泵要防止共振现象，泵油要定时观察，防止泵油变黑或者降到最低刻线下。
低于刻度下限也要换油，注意要用同型号的油。
3.3 温度10-30℃（应恒定）：相对湿度25％-75％；电源电压220±20V。
（通风良好，附近无明显的震动源。
断电对仪器的损害最大，应配备应急电源。
使用UPS电源断电时间不得超过6小时。
3.3 补充液氮应佩戴防冻手套及防护面罩，挂上醒目警示标牌。
对于液氮有泄漏现象要想安全部门说明。
如果液氮达不到所需要的压强，可以适当开启液氮增压阀。
（液氮压强不得超过1.5Mpa）。
3.4 样品管中含有易挥发性、具放射性有机溶剂，样品架及溶剂应密封、存放于通风柜内。
3.5 液质联用做样品途中（质谱仪HV绿灯亮），离质谱仪一米远。
3.6 质谱仪清洗前至少冷却0.5t。
四、名词解释调谐五、样品制备样品可以通过固液萃取，液液萃取（除非挥发性盐）。
样品的最低限度在10ppm,样品不要过浓，选用适当溶剂对其溶解（二氯甲烷，三氯甲烷，正己烷、二甲亚砜、苯、二甲基甲酰胺、四氢呋喃、乙醚等溶剂在流动相中的比例低于10%），流动相需经0.45um滤膜过滤，存在不溶物的样品需经0.22um滤膜过滤，流动相需经脱气处理，应符合紫外分光光度法度溶剂的要求。
六、仪器操作6.1 打开质谱仪，按下真空泵开关，抽真空6个小时以上直至[status]键常亮。
6.2 待抽完真空，根据实验目的，安装适宜的色谱柱。
打开LC 系统电源（A泵、B泵、UV检测器），待泵和检测器自检结束后，用乙腈/水体系平衡色谱柱30min, 更换所需流动相并排气泡（日常维护：用10％的异丙醇溶液冲洗柱塞杆，进样前清洗进样口和注射器）。
LCMS注意事项
LCMS的日常操作规程及注意事项一. 准备工作1.打开氮气阀(用气阀和增压阀)，保持压力在0.5Mpa。
2.依次打开液相部分的泵、检测器、柱温箱、自动进样器、控制器、打开蒸发光检测器（等自检完成后,按动面板向右（2次）、向下的按钮至运行后，按Enter），打开干燥气（质谱主机上的Drying gas controller,0.06Mpa），打开Shutter。
3.更换流动相：A相：Water/0.05%TFA; B相：Acetonitrile/0.05%TFA。
脱气（Purge）：逆时针旋转排液阀60度→按Purge排液→排液完成泵自动停止→顺时针旋转60度关闭排液阀。
4. 打开电脑，双击桌面上的仪器LCMS Solution图标（）→点击Instrument 1 (进入LCMS Real time analysis界面) →点击OK进入工作站。
联机成功后在主界面右上角显示Ready(绿色)。
二. 样品测试1.依次点击下图标示的1、2，点击Download平衡，等3重新变成Ready且压力稳定在20MPa左右后，就可以进样测试。
2. 建立Excel 表此Excel表的格式必须同仪器序列运行时的格式一致。
A ：为自动进样器板号（A-H ）（1-70）、B ：为自动进样器1 2 3盘号(1-2)（1）、C：为样品名称、D：为Sample ID（一定要与录入系统中的数据文件号一致）E: 为存储文件的路径为数据名（同样品名，即同C列）、F：为存储方法的路径（方法名）,G:为数据描述(流动相)3.打开192.168.1.104/invoice、登录名为：分析室，键入密码，进入。
选择所属仪器→进入测试（可以看到实验员录入的样品信息）→核对样品顺序→在样品信息前打勾→点击进入测试→复制粘贴到已建好的Excel表中。
3.加样测试将已经排好顺序的样品依次加入自动进样器的96孔板中（70孔板）→复制Excel表中的相应行到Batch Table（同时检查板号、盘号、数据文件名是否相对应）→保存→Batch Start →选择All line →点击start三. 数据处理1.双击桌面“LCMSsolution”图标→点击“Postrun”→打开数据存储的文件夹（路径可以在Excel表中查到），→双击文件名屏幕显示的就是此文件号的谱图2.不需要积分的图谱，在结果录入里勾掉分析完成的样品→在谱图录入里也勾掉，均需点击分析完成。
LCMS液质联用经验
LCMS液质联用经验一.液质使用经验与禁忌1. 酸性物质适合做负离子检测，所以流动相偏碱性较合适，促使其解离，碱性物质适合做正离子检测，流动相中适当的加入酸，促使其形成正离子，流动相中适当加一些醋酸钠（或者醋酸铵），可形成加钠的正离子或加铵的正离子。
液质分析中推荐使用的流动相和添加剂推荐使用不使用/尽量不使用有机溶剂反相：乙腈、甲醇、乙醇、异丙醇、四氢呋喃、二氯甲烷正相：吐仑、己烷、苯、环己烷、四氯化碳四氢呋喃缓冲液乙酸铵、甲酸铵磷酸盐、柠檬酸盐、碳酸盐酸乙酸、甲酸、三氟乙酸（正离子）硫酸、高氯酸、磷酸、盐酸、磺酸碱氨水季铵、强碱、三乙胺其它清洁剂、表面活性剂、离子对试剂、不挥发盐2. 糖苷类的物质在做FAB和ESI 时，[M Na]峰往往比[M H]峰要强，此为经验，原因只是推测可能和天然产物的提取过程有关；盐类化合物如盐酸盐、硫酸盐在质谱中酸的部分一般不会出现；二羧酸盐（esi负离子模式）除了分子离子峰外，会出现连续掉44的两个峰，为失去羧酸根的离子，这三个峰非常特征，但是会受锥孔电压的影响，调低电压谱图会更漂亮。
3. 胺类物质做ESI质谱时要注意进样量要少，因为很容易离子化，不易冲洗干净，会影响后面样品的测定。
像三乙胺在液质联用时不能用于调节流动相pH值。
若不慎引入三乙胺，在正离子检测时总会出现很强的102峰（三乙胺的[M H]）。
4. 质谱用水一般用娃哈哈纯净水之类的就很好；质谱用甲醇和乙腈，换用了很多品牌，发现Merck的还是稍微好一些；Finnigan用的氮气不一定要用到液氮瓶，用普通的钢瓶气就可以了，可能还省钱些；建议大家买一个好一点的手电筒和一个放大镜，手电筒用来看源里面，放大镜看你割的毛细管平整。
5. 质谱的基线其实跟液相的紫外检测器和荧光检测器一样，基线高的原因不外乎内部和外部的原因。
5.1 你选择的流动相在质谱的响应比较高，比如水相比较多的时候，噪音比较大些；还有如果盐含量比较大的时候，噪音更大些。
你有在使用LC-MS吗？LC-MS常见使用经验教训汇总！
你有在使用LC-MS吗？LC-MS常见使用经验教训汇总！食品实验室服务液相色谱-质谱联用技术又叫液质联用（LC-MS），它以液相色谱作为分离系统，质谱为检测系统。
液质联用体现了色谱和质谱优势的互补，将色谱对复杂样品的高分离能力，与MS具有高选择性、高灵敏度及能够提供相对分子质量与结构信息的优点结合起来，在药物分析、食品分析和环境分析等许多领域得到了广泛的应用。
液—质联用接口技术主要是沿着三个分支发展的：（1）流动相进入质谱直接离子化，形成了连续流动快原子轰击（continuous-flowfast atom bombarment，CFFAB）技术等。
（2）流动相雾化后除去溶剂，分析物蒸发后再离子化，形成了“传送带式”接口（moving-beltinterface）和离子束接口（particle-beam interface）等。
（3）流动相雾化后形成的小液滴解溶剂化，气相离子化或者离子蒸发后再离子化，形成了热喷雾接口（thermospray interface）、大气压化学离子化（atmospheric pressurechemical ionization, APCI）和电喷雾离子化（electrosprayionization, ESI）技术等。
*液质联用分析技术的发展取决于液质联用接口技术和质谱分析仪技术的共同发展。
通过合适的接口将液相色谱与质谱仪联接，会获得具有特殊分析性能的液质联用仪器，另外通过接口将质谱与质谱进行串联，可以弥补各种质谱仪的不足，达到取长补短，协同提高的效果。
为达到液相与质谱联接使用这一目的需要一个起“接口”作用的装置将液相与质谱联接起来。
这个接口要解决三个主要的问题：（1）液相色谱中使用的流速较大，而质谱需要一个高真空环境工作。
（2）要从流动相中提供足够的离子供质谱分析。
（3）去除流动相中杂质对质谱可能造成的污染。
分析特点HPLC-MS除了可以分析气相色谱—质谱（GC-MS）所不能分析的强极性、难挥发、热不稳定性的化合物之外，还具有以下几个方面的优点：①分析范围广，MS几乎可以检测所有的化合物，比较容易地解决了分析热不稳定化合物的难题。
LCMS仪器方法优化流程及注意事项
大气压化学电离（ Atmospheric Pressure Chemical Ionization， APCI）
APCI是Horning 等创导的，当时称为API并首次实现了与HPLC的连接。 样品的离子化在处于大气压下的离子化室中完成 。 结构与ESI大致相同，不同之处在于APCI喷嘴的下游放置一个针状放电电极，通 过放电电极的高压放电，使空气中某些中性分子电离，产生H3O+，N2+，O2+ 和O+ 等离子，溶剂分子也会被电离，这些离子与分析物分子进行离子-分子反应，使分析 物分子离子化。
Mass Spectrum •定量分析 •定性分析（结构分析）
数据分析处理系统 Bioinformatics
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常用术语
质荷比 （m/z）：是离子的质量和该离子所带静电单位数的比值。 基峰与相对强度
基峰（base peak）是质谱图中的最强峰。质谱峰的强度常以相对强度（relative intensity）衡量。以基 峰的强度为100，算出各个质谱峰的相对百分强度。
-ESI：+Cl（35），+HCOOH（45），+CH3COO（59）
与高质量碎片离子有合理的质量差,凡质量差在3～8和10-14,21,25之间均不可能 ,则说明是碎片或杂质
+TOF MS: 7.699 to 7.976 min from Irgonax 1010 2.wiff Agilent 2.5e5 2.4e5 2.2e5 2.0e5 1.8e5 1199.7727 Max. 2.5e5 counts.
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LC/MS/MS 定量方法开发流程
1 电离模式的选择 2 MRM 参数优化 使用标准品优化 fragmentor 和collision energy 3 离子源参数的优化 4 LC分离方法的优化
LCMS仪器方法优化流程及注意事项
LCMS仪器方法优化流程及注意事项LCMS（Liquid Chromatography Mass Spectrometry，液相色谱质谱联用）是一种常见的分析仪器，其原理是将样品通过液相色谱柱进行分离，再通过质谱仪进行检测。
在进行LCMS分析时，方法优化流程和注意事项对于数据质量和分析结果的准确性起着至关重要的作用。
方法优化流程：1.了解样品特性：在开始优化LCMS方法之前，需要充分了解样品的特性，包括化学性质、溶解度、稳定性等。
这些信息有助于选择适当的色谱柱、流动相和灵敏度等优化参数，以达到最佳的分离和检测效果。
2.选择色谱柱和流动相：选择合适的色谱柱和流动相对于优化LCMS方法至关重要。
必须根据样品的性质选择合适的色谱柱相，例如正相、反相或离子交换柱。
流动相的选择也必须适应样品的特性，以实现有效的分离和质谱信号。
3.优化分离条件：根据样品的复杂性和分离要求，进一步优化分离条件。
这可能包括优化柱温、柱流速、梯度条件等。
通过调整这些参数，可以改善分离度和分析时间，提高分析效率。
4.优化质谱仪参数：在进行LCMS分析时，质谱仪的参数设置对于获得高质量的数据至关重要。
这包括离子源温度、母离子筛选、碎片离子筛选等参数。
可以通过调整这些参数来增强信号强度、降低噪声水平、提高质谱分辨率。
5.确定检测方法：根据分析目的，选择适当的检测方法。
这可能包括选择合适的离子模式（正离子模式或负离子模式）和检测范围。
确保检测方法能够覆盖所有目标分析物，并且不会受到干扰物的影响。
注意事项：1.样品准备：样品准备是LCMS分析的关键步骤。
必须确保样品的稳定性、一致性和适当的浓度。
同时，还需要注意选择合适的提取方法和样品溶剂，以最大程度地提高样品的回收率和准确性。
2.对比实验：在进行方法优化之前，应该进行对比实验。
通过对比不同条件下的数据，评估分析结果和方法的可靠性。
只有通过对比实验的结果，才能找到最佳的分离和检测条件。
3.质量控制：在进行LCMS分析时，应在每个样品中添加质量标准品进行质量控制。
LCMS使用注意事项
LCMS使用注意事项LC-MS添加剂：酸：不能使用无机酸，否则会腐蚀离子源；可以推荐使用甲酸或乙酸，在阳离子模式下可以作为质子供体；碱：不能使用碱金属类强碱，否则会腐蚀离子源；推荐使用氨水，在阴离子模式下作为质子受体；表面活性剂：洗涤剂或其他表面活性剂会抑制离子化，不建议使用；三氟（氯）乙酸：可以提高色谱分辨率，但在质谱中对正负离子模式都有一定的离子抑制效应，用量应该小于0.1%（v/v）；异丙醇（Isopropyl Alcohol）：适合负离子模式，可以增强阴离子的形成，加入有机相（B）的量应该在10%左右；三乙胺（TEA）和三甲胺（TMA）：适合负离子模式，加入可以增强阴离子的形成；难挥发性盐：HPLC中也尽量避免难挥发性盐的加入，如碱金属磷酸盐、硼酸盐、柠檬酸盐等；缓冲溶液：缓冲液浓度应低于20mM，尽量使用易挥发性盐如醋酸铵、甲酸铵；使用缓冲液时应该勤清洗ESI的加热毛细管以及API的stack；LC-MS不应该使用tris缓冲液，否则蛋白（多肽）质谱信号会受到tris盐的影响而使样品质谱信号降低，tris的质谱峰为m/z 122,243,265和327。
.单独做RP-HPLC可以允许蛋白样品中含有少量DMSO或者Tris。
常用的LC-MS溶剂：甲醇、乙腈、水、异丙醇、二氯甲烷、氯仿、己烷。
ESI中不同溶剂系统LC-MS的作用不同，产生的离子化总数不同：50/50 ACN/H2O 0.1% NH4OH50/50 MeOH/H2O50/50 ACN/H2O100 H2O100 MeOH100 ACN50/50 MeOH/H2O 1% Acetic50/50 MeOH/H2O 0.1% Formic 50/50 ACN/H2O 1% Acetic50/50 ACN/H2O 0.1% Formic50/50 MeOH/H2O 5mM NH4OAc 50/50 MeOH/H2O 10mM NH4OAc 50/50 MeOH/H2O 0.1% TFA50/50 MeOH/H2O 0.05% TFA50/50 MeOH/H2O 0.02% TFA50/50 ACN/H2O 0.1% TFA50/50 ACN/H2O 0.05% TFA50/50 ACN/H2O 0.02% TFA50/50 MeOH/H2O 0.1% NH4OH S o l v e n t S y s t e mCounts (protonated ion species)。
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LC-MS添加剂：
酸：不能使用无机酸，否则会腐蚀离子源；可以推荐使用甲酸或乙酸，在阳离子模式下可以作为质子供体；
碱：不能使用碱金属类强碱，否则会腐蚀离子源；推荐使用氨水，在阴离子模式下作为质子受体；
表面活性剂：洗涤剂或其他表面活性剂会抑制离子化，不建议使用；
三氟（氯）乙酸：可以提高色谱分辨率，但在质谱中对正负离子模式都有一定的离子抑制效应，用量应该小于0.1%（v/v）；
异丙醇（Isopropyl Alcohol）：适合负离子模式，可以增强阴离子的形成，加入有机相（B）的量应该在10%左右；
三乙胺（TEA）和三甲胺（TMA）：适合负离子模式，加入可以增强阴离子的形成；
难挥发性盐：HPLC中也尽量避免难挥发性盐的加入，如碱金属磷酸盐、硼酸盐、柠檬酸盐等；
缓冲溶液：缓冲液浓度应低于20mM，尽量使用易挥发性盐如醋酸铵、甲酸铵；使用缓冲液时应该勤清洗ESI的加热毛细管以及API的stack；LC-MS不应该使用tris缓冲液，否则蛋白（多肽）质谱信号会受到tris盐的影响而使样品质谱信号降低，tris的质谱峰为m/z 122,243,265和327。
.
单独做RP-HPLC可以允许蛋白样品中含有少量DMSO或者Tris。
常用的LC-MS溶剂：
甲醇、乙腈、水、异丙醇、二氯甲烷、氯仿、己烷。
ESI中不同溶剂系统LC-MS的作用不同，产生的离子化总数不同：
50/50 ACN/H2O 0.1% NH4OH
50/50 MeOH/H2O
50/50 ACN/H2O
100 H2O
100 MeOH
100 ACN
50/50 MeOH/H2O 1% Acetic
50/50 MeOH/H2O 0.1% Formic
50/50 ACN/H2O 1% Acetic
50/50 ACN/H2O 0.1% Formic
50/50 MeOH/H2O 5mM NH4OAc
50/50 MeOH/H2O 10mM NH4OAc
50/50 MeOH/H2O 0.1% TFA
50/50 MeOH/H2O 0.05% TFA
50/50 MeOH/H2O 0.02% TFA
50/50 ACN/H2O 0.1% TFA
50/50 ACN/H2O 0.05% TFA
50/50 ACN/H2O 0.02% TFA
50/50 MeOH/H2O 0.1% NH4OH
S o l v e n t S y s t e m
Counts (protonated ion species)。