实验十 X染色质标本的制作和观察
山东大学遗传试验报告,人类X染色质的制备和观察
山东大学遗传试验报告，人类X染色质的制备和观察X染色质（又称巴氏小体，性染色质小体，X小体）是由雌性哺乳动物体细胞中失活的X染色体在间期细胞核中呈异固缩状态（染色质高度螺旋化），形成直径约1μm，贴近于核膜边缘的染色小体。
巴氏小体在显微镜下为一结构致密的浓染小体，一般靠近核膜处，约1-1.5μm大小。
形状多样有卵圆形，三角形，月牙形，线性等。
正常女性口腔粘膜细胞中约30-50%有一个巴氏小体，男性则低于1-2%。
细胞分裂间期X染色体在细胞核中出现异固缩现象：浓缩、染色深、无活性；在细胞分裂期巴氏小体可形成正常的染色体形态；复制时间比有活性的X染色体稍迟一些。
在个体中，X染色质数目等于一个个体的X染色人体数减1。
1949年，加拿大学者Barr在雌性猫的神经元细胞核中发现一种染色很深的小体，而在雄性猫中则极少出现。
Barr 称这种小体为核仁随体，现在我们通常称为巴氏小体。
1961年，Mary Lyon提出了X染色体失活的假说：1.雌性哺乳动物的两条X染色体中，只有一条X染色体有转录活性，另一条X染色体无转录活性，呈固缩状，形成X染色质。
2.失活发生在胚胎发育早期。
3.失活是随机的。
X染色体的随机失活是性别决定机制为XY的动物为平衡两性之间性染色体上的基因剂量而采取的一种特殊的调控方式（因为Y染色体上的基因数量很少，因此雌性个体必须通过减少X染色体上基因剂量的方式使两性个体间基因剂量取得均衡），即所谓的“剂量补偿”，这也是X染色体失活的意义所在。
人们对X染色体失活的机制、不同物种的剂量补偿方式及机制等问题进行了广泛、深入的讨论。
据研究，X染色体的失活发生胚胎发育早期，在X染色体长臂靠近着丝点的一段序列控制X染色体的失活，称为X染色体失活中心（XIC），将这段序列通过易位方式转移到常染色体，也能引起常染色体的失活。
XIC 中含有一个转录后不翻译的RNA基因：Xist基因(X - inactive - specifictranscript)，它的表达量与X染色体的失活有关。
题目 X染色质小体标本制备与观察
题目 X染色质小体标本制备与观察【实验目的】1．了解X染色质的形成原理及X染色质的检查意义。
2．掌握X染色质标本的制备方法3．能正确鉴别X染色质【实验原理】①正常女性核型为46，XX。
在间期细胞核中紧贴核膜内缘有一个染色较深的椭圆形小体，即X染色质小体，是不具有转录活性并呈异固缩状态的X染色质这是女性细胞中一条X染色体随机Lyon化失活形成的。
这种失活保证了雌雄两性细胞中都只有一条有活性的染色体，使两性X连锁基因产物的量保持在相同水平上。
②失活的X染色质小体一般位于细胞核内边缘，直径一微米左右，形状多样，有微凸形、三角形、圆形、短棒形等③X染色质小体数=X染色体数-1，正常女性1个，细胞检出率>40%，男性<2%④人的性别是由X和Y染色体决定的。
需要对人的性别进行鉴定时，除进行染色体核型分析和临床生殖器官的检查外，还可以通过细胞学方法，如检查期间体细胞（口腔上皮，皮肤，羊水和血细胞等）的核内X染色质。
⑤正常女性间期细胞中，X染色质阳性检出率为20％～70％，大多为30％～50％，高时可达70％以上，男性细胞中则平均低于1％。
可采取口腔粘膜细胞，绒毛细胞，羊水细胞等进行检查【实验主要仪器试剂】1．试剂：45％乙酸，卡宝品红2．器材：显微镜，小吸管，载玻片，盖玻片，解剖针，擦拭纸【实验材料】人体头发毛囊【实验方法步骤】1、快速拔取头发2、2、将含有毛囊的头发置于载玻片上（4或10倍镜检观察）3、3、滴上一滴45%乙酸水解至毛囊极易剥离（用解剖针轻刮即脱落为宜）4、分离毛囊，去除毛干和胶质，滴上一滴卡宝品红（刮毛囊前先将大部分乙酸去除后再轻刮下毛囊）5、染色10分钟后拇指压片法轻压或不压6、镜检（10倍镜找目标，40倍镜观察并拍照），计数7 、镜检l00个细胞，统计含有X染色质细胞所占的百分率。
正常值：男性： 2％以下或没有，女性：40％以上。
【实验结果及讨论】1：拔取头发时，要连根部拔起，小心放至载玻片上，以求拔下的头发含有毛囊且不易破坏可以观察。
染色体标本的制备及组型观察 实验报告
细胞生物学实验报告染色体标本的制备及组型观察1.实验目的：掌握染色体标本制作的基本方法；认识不同生物的染色体的状态，学会做染色体组型图。
2.实验用品：（1）仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管、离心管、离心机、小烧杯、冰箱、酒精灯、小烧杯（1）实验药品：蒸馏水、0.9% NaCl溶液、0.3% KCl溶液，固定液（甲醇：冰醋酸=3:1）、秋水仙素（2）实验材料：小鼠3.实验原理：（1）制作染色体标本的意义：了解染色体的特征（形态、大小、数目）——绘制染色体组型图染色体组型：把真核动物一个体细胞各染色体按长度、形状、着丝粒位置排列成一定顺序。
染色体核型：某一物种特有的一组或一套染色体的形态特征。
（2）染色体组型图的应用①鉴别生物种类：兔44条；小鼠40条；大鼠42条；鸡78条；猫38条；狗78条；马64条②遗传病的诊断和研究：三体综合征（含三条21号染色体）、卵巢退化症（含45条染色体，比正常人缺少一条性染色体）、睾丸退化症（含47条染色体，比正常人多一条X或Y染色体）等因此，我们可以给孕妇抽取羊水检查器胎儿的染色体，做遗传病早期诊断。
（3）染色体标本的制作①观察：由于分裂期中期的染色体染色体凝集程度最高，因而我们应尽量使细胞停留在分裂期中期以便观察。
②细胞：为尽量看到多的染色体，我们应当选取具有旺盛分裂能力的细胞，这样的细胞可以来自:胸腺、骨髓、睾丸、小肠等。
我们在此实验中使用的是小鼠的精巢细胞。
在做人的染色体标本时，我们使用的是血液里的淋巴细胞。
③药物：PHA（植物细胞凝集素）：PHA具有促进细胞凝集和分裂的作用。
PHA可以使血液中的淋巴细胞还原至淋巴母细胞（只存在于骨髓中）秋水仙素：秋水仙素可以破坏微管的组装，纺锤体不能形成，细胞分裂停在中期。
与秋水仙素作用相同的药物还有长春花碱、鬼臼素、苯环己烯等。
可以促进胃管组装的药物有紫杉酚、重水等。
④空气干燥：使细胞与染色体易于分离⑤低渗作用：水进入细胞内，细胞内容空间变大，染色体距离变大，易于分离、展平。
X染色质标本的制备与观察内容步骤西南医科大学
医学细胞生物学与医学遗传学教研室 四川医科大学
实验一
目的与要求
1. 掌握：人类间期细胞核中性染色质的形成 机制。（重点，难点） 2.熟悉：X染色质标本的制作方法；熟悉人类 间期细胞核中性染色质的形态特征和分布。
3.了解： PTC尝味实验方法及这种单基因遗
实验一
表：13种浓度的PTC溶液的配制方法
溶液号 稀释方法 稀释倍数 约含P· T· C· 的浓度 基因
1
2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
原液
原液100ml+水100ml 2号液100ml+水100ml 3号液100ml+水100ml 4号液100ml+水100ml 5号液100ml+水100ml 6号液100ml+水100ml 7号液100ml+水100ml 8号液100ml+水100ml 9号液100+ml水100ml 10号液100ml+水100ml 11号液100nl+水100ml 12号液100ml+水100ml 13号液100ml+水100ml
实质：Y染色体长臂远端的异染色质 Y染色质的数目=Y染色体数
实验一
内容步骤
（二）X染色质标本的制备与观察
1、制作过程：
取材（漱口后用牙签刮取口腔黏膜上皮细胞标 本） → 涂片 → 染色（滴1～2滴染液） → 盖片（染色5-8min） → 压片（吸去多余染液） → 镜下观察 2、观察（高倍镜）
实验一
（2）识别X染色质的标准：（高倍镜下） 位置：紧贴核膜内侧缘，轮廓清楚，唯一深染的小体 大小：直径为1-1.5um，即小于核直径的1/10 形态：一般为平凸形，三角形或为卵圆形
X染色质标本-细胞骨架成分-细胞计数
（三）染色
Klinger硫堇染色法 1. 将玻片标本置入1mol/L HCl中， 37℃条件下水解20分钟。 2. 用蒸馏水充分冲洗、晾干。 3. 硫堇染液中染色约15分钟。 4. 蒸馏水冲洗、晾干。
（四）观察 1.先在低倍镜(10倍镜)下观察，可见视 野中有许多单个或成堆的口腔上皮细胞。 选择清楚而分散的细胞，移至视野中央， 再换高倍镜仔细观察。口腔上皮细胞为 多边形的扁平状，细胞中央有一被染成 深兰色的圆形或椭圆形的细胞核。核周 围均质部分为细胞质。细胞的外表为一 很难与细胞质相区别的薄膜即细胞膜。 2. 40倍或油镜下检查100个“可计数细 胞”，并计数具有X染色质的细胞数。
2. 用吸管吸去PBS，用 1% Triton X-100 抽提处理细胞 25分 钟。
3. 用吸管吸去Triton X-100 溶液，用 M 缓冲液轻轻漂洗细胞 3 次，（M 缓冲液有稳定细胞骨架的作用）。
4. 略微晾干后，用 3%戊二醛固定细胞 10 分钟。 5. 用PBS（pH7.2）轻轻漂洗细胞 3 次，吸干。 6. 0.2％考马斯亮蓝 R250 染色 5 分钟。 7. 蒸馏水漂洗细胞数次，去除染液，滤纸吸干标本边缘水分，
三、实验用品
（一）材料 显微镜、乙醇(无水乙醇,95％,70％、50 ％)，甲醇，冰醋酸，硫堇，1mol/L HCl。二甲苯、香柏油、擦镜纸、盖玻 片、载片、15ml刻度离心管、牙签、吸 水纸、小镊子、碘酒、酒精棉球、3％ 醋酸溶液、pH6～6.5缓冲液。
（二）试剂
硫堇染液(工作液)， ①干液(硫堇)：硫堇1g或2g溶于100mL 50%乙醇中，溶解后过滤备用； ②醋酸钠缓冲液：醋酸钠·3H2O 9.7g， 巴比妥钠14.7g，溶于500mL蒸馏水中； ③0.1 mol／L盐酸； 按①：②：③=40：28：32比例配成混 合液，调pH5.7±0.2，即得硫堇工作液。
人类性染色质标本的制备和观察
内容步骤
实验一
（二）X染色质标本的制备与观察
1、制作过程： 取材（漱口后用牙签刮取口腔黏膜上皮细胞标
本） → 涂片 → 染色（滴1～2滴染液） → 盖片（染色5-8min） → 压片（吸去多余染液） → 镜下观察
2、观察（高倍镜）
实验一
1、几对基本概念 2、X染色质形成机制——Lyon假说
实验一
X染色质
实验一
Lyon假说:
（1）正常女性体细胞内仅有1条X染色体有活性，另 一条X染色体在遗传上是失活的，在间期细胞 核中高度螺旋化而呈异固缩的X染色质。
（2）X染色体失活发生在胚胎早期。 （3）X染色体失活的随机性和恒定性。
实质：失活的X染色体 意义：X染色体的剂量补偿 X染色质的数目=X染色体数-1
（2）识别X染色质的标准：（高倍镜下） 位置：紧贴核膜内侧缘，轮廓清楚，唯一深染的小体 大小：直径为1-1.5um，即小于核直径的1/10 形态：一般为平凸形，三角形或为卵圆形
实验一
内容步骤
实验一
（二）X染色质标本的制备与观察
1、制作过程： 取材（漱口后用牙签刮取口腔黏膜上皮细胞标
本） → 涂片 → 染色（滴1～2滴染液） → 盖片（染色5-8min） → 压片（吸去多余染液） → 镜下观察
人类性染色质标本的制备、 分析和PTC尝味实验
实验一
目的与要求
1. 掌握：人类间期细胞核中性染色质的形成 机制。（重点，难点）
2.熟悉：X染色质标本的制作方法；熟悉人类 间期细胞核中性染色质的形态特征和分布。
3.了解： PTC尝味实验方法及这种单基因遗传 性状的遗传规律。
内容步骤
人类X染色质的制备与观察
人类X染色质的制备与观察摘要：人类X染色质（巴氏小体）是由雌性哺乳动物体细胞中失活的X染色体在间期细胞核中呈异固缩状态（染色质高度螺旋化），形成直径约1μm，贴近于核膜边缘的染色小体。
根据X染色体失活与Lyon假说，雌性哺乳动物的两条X染色体中，只有一条X染色体有转录活性，另一条X染色体无转录活性，呈固缩状，形成X染色质。
失活发生在胚胎发育早期，且失活是随机的。
本实验以人口腔颊部粘膜细胞、发根毛囊细胞为材料制备X染色质标本，通过硫瑾染色、压片等方法观察巴氏小体。
本次试验的目的是掌握鉴定人类X染色质的方法，在显微镜下正确识别X染色质，即Barr小体的形态特征及所在部位，了解X染色体失活的有关假说以及为失活X染色体上的基因所控制的遗传性状地特点。
1.引言1.1巴氏小体人类有23对染色体，其中22对为常染色体，另一对为性染色体。
女性为XX，男性为XY。
X与Y染色体有一部分是同源的，在减数分裂时可以相互配对，其余部分则不同源。
Y 染色体含有很少的基因，而X染色体则含有大量的基因。
男性与女性的常染色体数目是一样的，所含有的基因数目也相等；但是女性含有两条X染色体，而男性一条X一条Y，因此女性性染色体所携带的基因剂量远高于男性，然而研究发现女性伴性遗传基因的表达剂量与男性是大体相同的，其原因可以用剂量补偿效应解释。
剂量补偿效应(dosage compensation effect)的定义: 在XY性别决定机制的生物中，使性连锁基因在雌、雄性别中有相等或近乎相等的有效剂量的遗传效应。
也就是说，在雌性和雄性细胞里，由X染色体基因编码产生的酶或其它蛋白质产物在数量上相等或近乎相等。
剂量补偿存在两种情况，雌性哺乳动物一条X染色体异染色质化(失活)，只有一条X 染色体具有活性，使雌雄动物虽然X染色体数目不同但基因产物的剂量是平衡的；另一种是X染色质的转录速率不同，如果蝇雌性细胞中两条X染色体都有活性，但它们的转录速率低于雄性细胞X染色体的转录速率。
X染色质的制作
失活的X染色体在间期细 胞中的表现形式
X染色质检查的临床应用
正常女性间期细胞核 中X染色质阳性率为 10％－30％，而男性 则低于1％。
胎儿早期性别鉴定
性别的快速鉴定
一．实验目的
掌握X染色质标本制作方法。 掌握X染色质的形态、数量、分布特点。 认识X染色质与X染色体之间的数量关系，学 会核性别的判断方法。
人口腔粘膜上皮细胞 X染色质标本观察
油镜观察50个可计数细胞X染色质出现率 正常值：男性，低于1%；女性，高于10%
人口腔粘膜上皮细胞（示X染色质）
X染色质的识别方法
1. 可计数细胞的标准：a:核 较大，轮廓清楚完整，无缺损和 皱褶。b:核质染色清晰,呈细网 状或均匀的细颗粒状，无深染大 颗粒及细菌污染
二．实验用玻片；消毒牙 签；小滴瓶、滴管；天平和量筒；试剂瓶 和擦镜纸 试剂：甲醇、冰醋酸、0.2%甲苯胺蓝染色 液、盐酸、蒸馏水、香柏油、二甲苯 材料:人口腔上皮细胞
三．方法和步骤
人口腔粘膜上皮细胞X染色质标本制备 人口腔粘膜上皮细胞X染色质标本观察
X染色质的形成机制 (Lyon假说-X染色体的剂量补偿效应)
女性：XX 男性：XY
女性细胞内X染色体上基 因表达的产物的量是男性 的两倍吗？
NO
不论细胞内有几条X染色体，只有一条 是具有转录活性的，其余的形成异固缩 的X染色质。X染色质数 = X染色体数－1
X染色质的本质
胚胎发育第16-18天，出现X染色体的失活； 但卵子与精子结合后，其中失活的X染色质 变为常染色质而恢复活性。
人口腔粘膜上皮细胞 X染色质标本制备
涂片：漱口后用牙签从颊部内侧刮取口腔粘膜上皮细胞， 均匀涂在洁净的载玻片上自然晾干 固定：在涂片干燥时用固定液固定10分钟电吹风吹干。 固定液按 甲醇：冰醋酸 = 3:1 的比例配制,现配现用。 分化: 1mol/l盐酸中分化10分钟流水冲洗电吹风吹干 染色： 甲苯胺蓝染液：染色5分钟流水冲洗电吹风吹干 观察:先在低倍镜下找到标本，然后油镜观察。
实验十 X染色质标本的制作和观察
实验十X染色质标本的制作和观察一、实验目的掌握X染色质标本的制备过程及识别方法。
二、实验用品器材：显微镜，牙签，载玻片，盖玻片，滴管，吹风机，染色缸试剂：硫堇，甲醇，冰醋酸，蒸馏水，1N的HCL，香柏油，二甲苯材料：人口腔粘膜上皮细胞三、实验原理1．X染色质是X染色体由常染色质变为异染色质后失活而成。
典型的X染色质位于核膜内侧缘，大小为1~1.5um，形状多为半圆形、三角形、不规则形。
正常女性间期细胞中X染色质的阳性率为10~30%，在男性间期细胞则平均低于1%。
从理论上讲，正常女性的间期细胞中都应该有一个X染色质，但事实上由于染色方法、染色技术以及X染色质在细胞核中的位置不同，实际检查中不可能在每个细胞中都看到。
2．X染色质的本质是兼性异染色质。
在胚胎发育的3~4周，女性胚胎中两条X染色体中的一条随机发生失活变为X染色质；而存在于女性卵子中的XX染色质示意图X染色质光镜图四、实验内容与方法硫堇（thionine）染色法：1．取材：取口腔粘膜细胞。
漱口3~4次后，用牙签从面颊部内侧粘膜刮取口腔粘膜细胞，将细胞涂于干净载玻片上，用签字笔写下学号，置于空气中自然干燥。
2．固定：配固定液：按照甲醇：冰醋酸=3：1的比例配制固定液，置于染色缸中。
固定：将载玻片放入固定液中固定，10分钟后取出，用吹风机吹干。
3．分化：干燥后将载玻片放入盛有1NHCL的染色缸中分化10分钟。
4．冲洗：用自来水冲洗玻片，再用蒸馏水冲洗一次。
5．染色：将载玻片放入盛有硫堇的染色缸中静置30分钟。
6．冲洗：自来水冲洗载玻片，冲去多于的染液，用吹风机吹干。
X染色质核膜7．镜检：用油镜观察X染色质的形态，并检查50个“可计数细胞”，计数其中具有X 染色质的细胞数。
可计数细胞的标准：a：核较大，轮廓清楚完整，无缺损、皱褶，染色清晰b：核质染色均匀，呈细网状或均匀颗粒状，无退变的深染大颗粒及细菌污染。
五、实验报告记录实验步骤，绘图表示实验结果并计数50个可计数细胞，计算X染色质的阳性率。
实验十 人类X-染色
六、作业
1. 观察男女性可数细胞各50个，分别计算 显示X-染色质细胞所占的百分比。 2. 观察中选绘4-5个典型细胞，示明X-染 色质的形态部位。如下图：
附：2%乳酸醋酸地衣红的制备方法：
• 取45 ml冰醋酸置于250 ml的三角瓶中， 瓶口加一棉塞，在酒精灯上加热至微沸， 缓慢加入2 g地衣红使其溶解，待冷却后 加入55 ml蒸馏水，振荡5-10分钟，过滤 到棕色试剂瓶中备用。或在烧瓶中放入 100 ml 45 %的冰醋酸，在酒精灯加热至 沸，慢慢溶入2 g地衣红，继续回流煮沸1 小时后过滤备用。 • 临用前，取等量的2 %乳酸醋酸地衣红与 70 %乳酸液混合，过滤后使用。
五、实验方法步骤
（二）毛发根部细胞涂片的制备
1. 取材：拔取一根带有毛根的头发，自基部截取 2cm左右置载片上。 2. 预染：在毛根部加一滴地衣红染液预染片刻。 3. 软化：再加一滴50%醋酸，低倍镜下观察，待 毛根稍软化后拔去毛干。 4. 染色压片：重新加一滴染液，复以盖片，在酒 精灯上轻微加热后静置5分钟，复以吸水纸用手 指轻度加压后待检。
实验十 人类X-染色质的观察 （X-Chromatin）
齐向英
一、实验目的
1、初步掌握X-染色质标本的制作方法；
2、识别人类细胞X-染色质的形态特征及
所在位置，为进一步研究人体染色体
的畸变与疾病提供参考条件。
二、实验原理
• [1949年Barr等发现，在雌猫的神经细胞 核内有一个浓缩的深染小体，在雌性的细 胞中没有。后来了解，在雌体细胞中的两 条X-染色体在间期是有一条，（或这条的 大部分）处于凝集而不活动状态，从而形 成了这种X-染色质（或称性染色质， Barr’s body）后来进一步发现]。
人类X染色质(巴氏小体)制备与观察
人类X染色质（巴氏小体）的制备与观察摘要巴氏小体是由雌性哺乳动物体细胞中失活的X染色体在间期细胞核中形成的呈异固缩状态，贴近于核膜边缘的染色小体，在遗传学、细胞观察方面有重要意义。
实验中作者取人口腔颊部上皮细胞与发根毛囊细胞进行硫瑾染色操作，通过显微观察对巴氏小体进行识别与计数，描述巴氏小体的形态，并统计其在不同性别人体细胞中的出现率。
引言在哺乳动物体细胞间期细胞核中，除一条X染色体外，其余的X染色体失活并呈异固缩状态，此即为巴氏小体。
又称X小体、性染色质，直径约1μm，通常位于间期核膜边缘。
1949年，加拿大学者Barr在雌性猫的神经元细胞核中发现一种染色很深的小体，而在雄性猫中则极少出现[1]。
通常人类男性细胞核中很少或没有巴氏小体，而女性有1个，性染色体异常的患者如XXY、 XXYY、XXX、XXXY等，巴氏小体的数量＝X染色体数量－1。
综合巴氏小体与哺乳动物性染色体的剂量补偿效应，Lyon M．F 于1961年提出Lyon 假说，主要内容有：(1)正常的雌性哺乳动物两条X染色体只有一条在遗传上有活性，另外一条失活；(2)X染色体失活是随机的。
因此表达是随机的，结果在杂合子中会出现嵌合现象（mosaic）。
例外：有袋类失活的X染色体全部是父方的。
(3)失活发生在胚胎发育的早期，如人在受精后的16天（5000-6000个细胞时）。
一个细胞的一条染色体一旦失活，这个细胞的后代细胞中该染色体均失活。
Lyon假说虽然可以解释一些问题但不是全部，如人类中的44AXO型个体表现为Turner 综合症、44AXXY表现为Klinefelter综合症。
随着生物学和医学的发展人们已经认识到单条X染色体失活现象是普遍存在的，但失活的染色体上存在失活区和非失活的。
如人类中位于X染色体上的基因，G6PD（葡萄糖-6磷酸脱氢酶）、AHF（抗溶血第Ⅷ因子）等是非失活的，而Xg血型基因是失活的。
巴氏小体的生物学观察，对于优生学中鉴别性别和预防性连锁疾病的发生，以及作为癌细胞核异常主要形态学特征之一鉴定癌细胞，有重要价值[1]。
中山大学人类X染色质标本的制备与观察报告
人类X染色质标本的制备与观察张皓予1533５20３一、实验目的1.掌握人体口腔黏膜上皮细胞制备的方法。
２、正确识别巴氏小体的特征及其所在位置。
3、说明人体细胞中核内Ｘ染色体的数目与性染色体数目之间存在的关系。
二、实验原理Ｘ染色质呈现于女性体细胞间期细胞核内。
在口腔黏膜细胞、羊水脱落细胞、皮肤结缔组织等细胞中均可检出。
用苯酚品红改良染液染色后,便可观察到染色较浓,多位于核膜内侧缘,呈凸平形、卵圆形、扁平或三角形,直径约１μm大小的小体。
女性细胞核中出现率为40％~60%。
Baｒr与Berｔｒam首先(1949)在雌性猫的神经细胞核中发现,在多数核中部有一个小的深染的小体,而在雄性猫的同样细胞中只能偶而观察到这种小体,此后许多人的研究指出这种与性别有关的两型现象在有袋类、偶蹄类、食肉类与灵长类等动物的多数组织细胞中存在,而在噬齿类中只在少数组织中可以观察到。
这种染色质小体现在称为“性染色质”(sex ｃhｒomaｔin),或称为“巴氏小体”(Baｒｒboｄy)。
这种小体常位于核膜的内表面,呈Fｅｕlｇe ｎ阳性反应,表明就是DNA的成分,有证据表明,性染色质的存在就是由于在雌性哺乳动物核中存在两个X染色体,其中一个X染色体处于失活状态。
雄性个体只有一个X染色体。
因此原则上男性不应有性染色质。
但如果一个男人有XXY染色体,那就会有一个性染色质,虽然表现为男性。
同样,ＸXＸ的三体应当有两个巴氏小体。
因此,性染色质实质上就是一个失活的X 染色体。
为什么失活的X染色体会以巴氏小体的形式显示出来？目前,已有许多证据证明,在雌性个体中那根失活的X染色体已经异染质化,成为功能性异染质。
使用放射自显影的方法已经证明,失活的X染色体的固缩周期与其它染色体就是不同步的,它在S期就是晚复制的。
此外,人们也已发现,晚复制的这根X染色体常位于核的边缘,这个位置也正好就是巴氏小体出现的位置。
三、实验仪器与试剂１.仪器与用具显微镜,水浴锅,牙签,载玻片,盖玻片,镊子,吸水纸。
人类X染色体的制备与观察
人类X染色质的制备与观察摘要：本实验旨在掌握鉴定人类X染色质的方法，通过将人体口腔颊部粘膜细胞和毛囊细胞解离、染色等步骤制片，在显微镜下正确识别X染色质，即Barr小体的形态特征及所在部位。
同时了解X染色体失活的有关假说以及为失活X染色体上的基因所控制的遗传性状地特点。
1引言：1949年加拿大学者Barr和Bertram在一些雌猫神经原细胞核中, 发现在核膜内缘有一个染色较深的近似三角形的小体, 在雄猫中没有发现。
根据后来的深入研究发现，这个染色较深的小体和性别有关。
直到1971年巴黎会议上正式被命名为X 染色质。
以后的研究表明巴氏小体是一个异染色质化的失活的x 染色体。
在正常的男性细胞中只有一个X 染色体,是正常有活性的, 因此男性细胞中没有巴氏小体。
而在正常女性细胞中有二个X 染色体, 其中一个正常, 另一个异染色质化因此在女性细胞中可见到一个巴氏小体。
巴氏小体的个数= X 染色体个数一1 ，大都出现在核膜边缘。
性染色质在人类中，正常男性个体出现的比例约为1%，正常女性约为17-39%，在由性染色体数目异常而引起的性别畸型( X O 除外) 患者的细胞中, 可见到一个或一个以上巴氏小体。
因而通过巴氏小体检查可鉴别胎儿的性别和诊断性染色体异常引起的遗传疾病。
1961 年, 英国遗传学家Lyon 根据前人和自己的研究发表了莱昂假说, 明确提出了单个X染色体随机失活从而在两性间保证X 连锁基因转录水平一致的论点, 并为现在的科学家所普遍接受。
普遍认为, 巴氏小体的形成是与一个非编码RNA XIST 的大量且特异表达有关, 大量的XIST 顺式作用在其中一条X染色体上, 引发了该条染色质的广泛甲基化从而导致异染色质的形成, 使其上的基因出现表达沉默现象。
2 实验材料和方法：2.1实验材料和仪器：1）显微镜、镊子、载玻片、盖玻片、吸水纸、牙签；2）硫瑾染液；3）1mol/L的HCl、蒸馏水；4）口腔颊部粘膜细胞和毛囊细胞。
染色体标本制作和观察实验报告
染色体标本制作和观察实验报告【实验题目】染色体标本制作与观察【实验目的】1、掌握小鼠睾丸细胞染色体标本的基本制作过程和Giemsa染色法，了解各操作步骤的原理。
2、了解常用实验动物染色体的数目及特点。
3、认识不同生物染色体的特征，学会做染色体组型图。
【实验材料与用品】1.器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管、离心管、离心机、小烧杯、冰箱、酒精灯、小烧杯等2.材料：小鼠3. 试剂：蒸馏水、0.9%NaCl溶液、0.3%KCl溶液，固定液（甲醇：冰醋酸=3:1）、秋水仙素【实验原理】一、制作染色体标本的先决条件①细胞具有旺盛的分裂能力：选择活跃的组织，如胸腺、骨髓、睾丸、小肠；或施加药物使细胞分裂（PHA）②设法得到大量的分裂中期细胞：利用秋水仙素二、染色体染色体是基因的载体。
真核细胞染色体的数目和结构是重要的遗传特性之一。
制备染色体标本是细胞学最基本的技术之一，优良的染色体制片是进行染色体显带、组型分析、原位杂交等的先决条件。
染色体的制备在原则上可以从所有发生有丝分裂的组织和细胞悬浮液中得到。
最常用的途径是从骨髓细胞、血淋巴细胞、、和组织培养的细胞中制备染色体。
本实验采用的方法是从小鼠的睾丸细胞中获取。
染色体的形态结构在细胞增殖周期中是不断的运动变化的，一般在有丝分裂中期，染色体形态最典型、最易辨认和区分。
因此，制备染色体标本获取的是中期细胞。
染色体特征：数目、长度（绝对长度、相对长度）、着丝粒位置（M/SM/ST/T)、随体与次缢痕的数目大小和位置、带型分析描述染色体的四个参数：①相对长度=（每条染色体的长度）/（单倍常染色体之和+X染色体）*100，相对长度可以用来表示每条染色体的长度。
②臂指数=（长臂的长度）/(短臂的长度)，臂指数可以用来确定臂的长度。
③着丝粒指数=（断臂长度）/（染色体全长）*100，着丝粒指数可以决定着丝粒的相对位置。
④染色体臂数（NF），根据着丝粒的位置来确定。
染色体标本制作与观察实验报告
染色体标本制作与观察实验报告一、引言染色体是细胞核中的遗传信息携带体，它是由DNA和蛋白质组成的长丝状结构。
染色体的数目、形态和大小等特征在不同物种和个体中是有差异的。
本实验旨在通过染色体标本制作和观察，了解染色体的基本结构和分类。
二、实验材料1.新鲜的玉米幼苗2.醋酸3.高锰酸钾4.盐酸5.电镜滴管6.镜片和盖玻片7.显微镜8.实验室用具：手套、显微刀、移液器等三、实验步骤1.将新鲜的玉米幼苗准备好材料摆放在实验台上；2.取一片净玻片，滴加一滴醋酸，然后用电镜滴管吸取一点玉米根尖细胞悬浮液，滴在玻片上；3.将盖玻片慢慢压在悬浮液上，使悬浮液扩散均匀；4.把制作好的染色体标本放在带有千倍放大倍数的显微镜下观察。
四、实验结果将制作好的染色体标本放在显微镜下观察，可以清晰地观察到悬浮液中的染色体结构。
在玉米根尖细胞中，染色体呈为长条状丝状物，一般成双出现。
根据染色体的位置和大小可以将其分为四组，分别为A、B、C、D组。
五、实验分析根据观察结果可以得出以下结论：1.染色体是由DNA和蛋白质组成的长丝状结构；2.染色体的数目、形态和大小等特征在不同物种和个体中是有差异的；3.在玉米根尖细胞中，染色体大多数成对出现，有些物种的染色体可能会出现多倍体现象。
六、实验总结通过本实验，我们成功制作了染色体标本并观察到了染色体的基本结构和分类。
染色体是细胞核中的遗传信息携带体，对于了解生物遗传学、进化与变异等方面具有重要意义。
然而，本实验只观察了玉米根尖细胞中的染色体，染色体在不同组织和细胞中可能会有差异，需要进一步研究和探索。
同时，在制作染色体标本的过程中需要注意操作规范，以免对实验环境和个人健康造成危害。
以上是本次染色体标本制作与观察实验的实验报告，通过本实验，我们对染色体的结构和分类有了一定的了解，并为进一步的研究提供了基础。
实验过程中需注意操作规范，确保安全性和准确性的同时保证结果的可靠性。
中山大学人类X染色质标本的制备与观察报告
人类X染色质标本的制备与观察张皓予15335203一、实验目的1.掌握人体口腔黏膜上皮细胞制备的方法。
2.正确识别巴氏小体的特征及其所在位置。
3.说明人体细胞中核内X染色体的数目和性染色体数目之间存在的关系。
二、实验原理X染色质呈现于女性体细胞间期细胞核内。
在口腔黏膜细胞、羊水脱落细胞、皮肤结缔组织等细胞中均可检出。
用苯酚品红改良染液染色后，便可观察到染色较浓，多位于核膜内侧缘，呈凸平形、卵圆形、扁平或三角形，直径约1μm大小的小体。
女性细胞核中出现率为40%~60%。
Barr和Bertram首先（1949）在雌性猫的神经细胞核中发现，在多数核中部有一个小的深染的小体，而在雄性猫的同样细胞中只能偶而观察到这种小体，此后许多人的研究指出这种与性别有关的两型现象在有袋类、偶蹄类、食肉类和灵长类等动物的多数组织细胞中存在，而在噬齿类中只在少数组织中可以观察到。
这种染色质小体现在称为“性染色质”(sex chromatin)，或称为“巴氏小体”(Barr body)。
这种小体常位于核膜的内表面，呈Feulgen阳性反应，表明是DNA的成分，有证据表明，性染色质的存在是由于在雌性哺乳动物核中存在两个X染色体，其中一个X染色体处于失活状态。
雄性个体只有一个X染色体。
因此原则上男性不应有性染色质。
但如果一个男人有XXY染色体，那就会有一个性染色质，虽然表现为男性。
同样，XXX的三体应当有两个巴氏小体。
因此，性染色质实质上是一个失活的X 染色体。
为什么失活的X染色体会以巴氏小体的形式显示出来?目前，已有许多证据证明，在雌性个体中那根失活的X染色体已经异染质化，成为功能性异染质。
使用放射自显影的方法已经证明，失活的X染色体的固缩周期与其它染色体是不同步的，它在S期是晚复制的。
此外，人们也已发现，晚复制的这根X染色体常位于核的边缘，这个位置也正好是巴氏小体出现的位置。
三、实验仪器与试剂1.仪器与用具显微镜，水浴锅，牙签，载玻片，盖玻片，镊子，吸水纸。
人类性染色质标本制作
实验材料 器材：染色缸，显微镜，载玻片乙醇，甲醇，冰乙酸，流堇染料，乙醚，
香柏油，甲醇冰乙醇固定液等。
材料：带有毛囊的发根。
实验步骤
1、取材 取2 ～3根头发，要带有完整的毛囊组织。 加1滴40%醋酸软化毛囊，5 ～ 2、软化与涂片
10min后，刮下毛囊，弃发干，涂片1cm2大小，烘 干。 3、固定 4、水解 加固定液2 ～3滴，晾干。 放入5N HCL中10min，自来水冲洗2min，
人类性染色质标本的制 作与观察
实验目的
一、了解X染色质的不同检测方法及意义。 二、掌握X染色质的形态特点。
三、初步掌握显微镜下X染色质的识别方法
实验原理
人类性染色质（sex chromatin boby）是在间期 细胞核中染色体的异染色质部分显示出来的一种 特殊结构，其包括X染色质和Y染色质。 Lyon假说：英国遗传学家Mary Lyon 在1961年 首先提出了上述X染色体失活假说，即Lyon假说 其要点是：①雌性哺乳动物细胞内只有一条X染 色体有活性，另一条失活并固缩，后者在间期细 胞表现为性染色质；②失活发生在胚胎的早期； ③失活是随机的，即失活的X染色体既可来自父 亲也可来自母亲，但一个细胞某条X－旦失活， 由该细胞繁衍而来的子细胞都具有同一条失活的 X染色体。
剂量补偿效应：使细胞核中具有两份或两份以上基因 的个体和只有一份基因的个体出现相同表型的遗传效 应。 对于性染色体来讲，包括人类在内的哺乳动物雌 性个体的每一体细胞中有两条X染色体，所以在X染色 体上的基因剂量有两份，而雄性个体只有一条 X染色 体，基因剂量只有一份。剂量补偿效应使 X连锁性状 的表现在雌雄个体之间并无不同。1932年美国遗传学 家H.J.马勒首先在果蝇中发现了这种效应，并把它看 作是维持雌雄两性生物基因表达的一致所特有的一种 遗传效应。
人类X染色质的制备与观察
姓名系年级学号日期科目遗传学实验题目人类X染色质的制备与观察人类X染色质的制备与观察摘要：巴氏小体是由雌性哺乳动物体细胞中失活的X染色体在间期细胞核中形成的呈异固缩状态，贴近于核膜边缘的染色小体，在遗传学、细胞观察方面有重要意义。
希望通过实验掌握鉴定人类X染色质的方法，在显微镜下正确识别X染色质，即Barr小体的形态特征及所在部位；了解X染色体失活的有关假说以及为失活X染色体上的基因所控制的遗传性状地特点。
本实验中通过取人口腔颊部上皮细胞与发根毛囊细胞进行硫堇染色、显微观察识别巴氏小体并进行计数，来描述巴氏小体的形态，并统计其在不同性别人体细胞中的出现率。
引言1949年，加拿大学者Barr在雌性猫的神经元细胞核中发现一种染色很深的小体，而在雄性猫中则极少出现。
他以更多的动物组织做了深入的研究，结果发现有袋类、偶蹄类、食肉类、灵长类（包括人类）等动物的不同组织的体细胞中，同样显示这种性别差异。
Barr称这种小体为核仁随体，现在我们通常称之为巴氏小体。
Barr推论这种小体是由性染色体的异染色质衍化来的。
20世纪60年代前后，根据对性染色体异常病人的X染色体与X染色质数目的关系的研究发现，X染色质数等于一个个体的X染色体数减1。
进一步的研究表明，一个X染色质是一条异染色质化的X染色，在间期其DNA的复制要比其他的染色体晚（Morishima，1962）。
在一个个体中，究竟是来自父本还是来自母本的X染色体失活，则是随机的，这种随机失活是生物体内的剂量补偿机制（Lyon，M.，1962）。
从上述我们可以看出X染色质是一种包含结构基因的异染色质，这种异染色质通常称为兼性异染色质（facultative chromatin）。
因为X染色体的失活是个比较复杂的生物学问题，目前对这一现象仍然存在着一些难以解释的疑点。
例如：是否所有组织的全部细胞中，在任何时间都存在这种X小体？失活的X小体是如何进行复制的?虽然对X小体存在着一些不同看法，但目前X染色质的检查，在医学遗传的研究中，临床和法医诊断上仍具有一定的意义。
X染色质标本制备与观察
(3)水解：玻片标本置于5mol/L HCl中，室温水解 20 min。用新鲜蒸馏水冲三次，充分洗去残留 的HCl。 (4)染色：0.2％甲苯胺蓝染液染色10min。 (5)镜检：自来水漂洗，空气干燥后油镜下观察。
[观察与结果]
高倍镜下可见许多染成蓝色的细胞核，细胞 质不着色或不明显。选择核较大，染色清 晰，轮廓完整，核质呈均匀细网状的细胞 进行观察。找到核膜内侧缘有蓝色浓染小 体的细胞核后，换油镜进一步观察。油镜 下X染色质为蓝色平凸形、三角形、扁平形 的浓染小体。
[注意事项]
(1)取材前要漱口，以免口腔中的杂质影响观 察效果。 (2)HCl水解要充分，使X染色质易于显现。 (3)临床检查时要选择形态好的细胞观察，计 算1]
绘制X染色质图
[思考题]
1．间期核内出现X染色质有何生理意义?
2．X染色质检测有何临床用途?
实验
X染色质标本制备与观察
[目的要求]
（1）掌握X染色质标本制备方法及其原理。 （2）掌握X染色质的形态特征及其临床意义。
[实验原理]
一个个体不论其细胞中有几条X染色体，均只有一 条具有转录活性，其余的X染色体均失活形成异固 缩的X染色质。正常女性间期细胞核中X染色质阳性 率一般约为10％一30％，有的可高达50％以上。其 出现率的高低与个体不同生理状态、染色方法、染 色技术以及X染色体在细胞核中的位置不同有关。 在男性间期细胞核中则平均低于1％。一般检查X染 色质确定性别时，观察200个细胞，X染色质出现5 ％以上者为女性。现在，X染色质检查已广泛应用 于临床，作为性别测定和性染色体数目异常的一种 辅助诊断方法。
[实验用品]
(1)器材：显微镜、载玻片、牙签。
(2)试剂 ：0.2％甲苯胺蓝染液 、5mol/L HCl溶液 、95％乙醇、pH 6.0 PBS (3)材料：人口腔黏膜上皮细胞。
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实验十X染色质标本的制作和观察
一、实验目的
掌握X染色质标本的制备过程及识别方法。
二、实验用品
器材：显微镜，牙签，载玻片，盖玻片，滴管，吹风机，染色缸
试剂：硫堇，甲醇，冰醋酸，蒸馏水，1N的HCL，香柏油，二甲苯
材料：人口腔粘膜上皮细胞
三、实验原理
1．X染色质是X染色体由常染色质变为异染色质后失活而成。
典型的X染色质位于核膜内侧缘，大小为1~1.5um，形状多为半圆形、三角形、不规则形。
正常女性间期细胞中X染色质的阳性率为10~30%，在男性间期细胞则平均低于1%。
从理论上讲，正常女性的间期细胞中都应该有一个X染色质，但事实上由于染色方法、染色技术以及X染色质在细胞核中的位置不同，实际检查中不可能在每个细胞中都看到。
2．X染色质的本质是兼性异染色质。
在胚胎发育的3~4周，女性胚胎中两条X染色体中的一条随机发生失活变为X染色质；而存在于女性卵子中的X
X染色质示意图X染色质光镜图
四、实验内容与方法
硫堇（thionine）染色法：
1．取材：取口腔粘膜细胞。
漱口3~4次后，用牙签从面颊部内侧粘膜刮取口腔粘膜细胞，将细胞涂于干净载玻片上，用签字笔写下学号，置于空气中自然干燥。
2．固定：
配固定液：按照甲醇：冰醋酸=3：1的比例配制固定液，置于染色缸中。
固定：将载玻片放入固定液中固定，10分钟后取出，用吹风机吹干。
3．分化：干燥后将载玻片放入盛有1NHCL的染色缸中分化10分钟。
4．冲洗：用自来水冲洗玻片，再用蒸馏水冲洗一次。
5．染色：将载玻片放入盛有硫堇的染色缸中静置30分钟。
6．冲洗：自来水冲洗载玻片，冲去多于的染液，用吹风机吹干。
X染色质
核膜
7．镜检：用油镜观察X染色质的形态，并检查50个“可计数细胞”，计数其中具有X 染色质的细胞数。
可计数细胞的标准：a：核较大，轮廓清楚完整，无缺损、皱褶，染色清晰
b：核质染色均匀，呈细网状或均匀颗粒状，无退变的深染大颗粒及细菌污染。
五、实验报告
记录实验步骤，绘图表示实验结果并计数50个可计数细胞，计算X染色质的阳性率。
附：硫堇染液的配制方法
1．饱和硫堇液：硫堇：4克
50%酒精100ml
配成100ml硫堇液，与缓冲液混合前过滤。
2．缓冲液：
醋酸钠 1.94克
巴比妥钠 2.94克
加蒸馏水至100ml（冰箱保存可用数日）
3．硫堇工作液：按下述次序逐一混合
a：饱和硫堇液100ml
b：1/10NHCl 70ml
c：缓冲液60ml
调PH至5.7（此液冰箱保存可用数日）。