实验十 X染色质标本的制作和观察

实验十X染色质标本的制作和观察

一、实验目的

掌握X染色质标本的制备过程及识别方法。

二、实验用品

器材：显微镜，牙签，载玻片，盖玻片，滴管，吹风机，染色缸

试剂：硫堇，甲醇，冰醋酸，蒸馏水，1N的HCL，香柏油，二甲苯

材料：人口腔粘膜上皮细胞

三、实验原理

1．X染色质是X染色体由常染色质变为异染色质后失活而成。

典型的X染色质位于核膜内侧缘，大小为1~1.5um，形状多为半圆形、三角形、不规则形。正常女性间期细胞中X染色质的阳性率为10~30%，在男性间期细胞则平均低于1%。从理论上讲，正常女性的间期细胞中都应该有一个X染色质，但事实上由于染色方法、染色技术以及X染色质在细胞核中的位置不同，实际检查中不可能在每个细胞中都看到。

2．X染色质的本质是兼性异染色质。

在胚胎发育的3~4周，女性胚胎中两条X染色体中的一条随机发生失活变为X染色质；而存在于女性卵子中的X

X染色质示意图X染色质光镜图

四、实验内容与方法

硫堇（thionine）染色法：

1．取材：取口腔粘膜细胞。漱口3~4次后，用牙签从面颊部内侧粘膜刮取口腔粘膜细胞，将细胞涂于干净载玻片上，用签字笔写下学号，置于空气中自然干燥。

2．固定：

配固定液：按照甲醇：冰醋酸=3：1的比例配制固定液，置于染色缸中。

固定：将载玻片放入固定液中固定，10分钟后取出，用吹风机吹干。

3．分化：干燥后将载玻片放入盛有1NHCL的染色缸中分化10分钟。

4．冲洗：用自来水冲洗玻片，再用蒸馏水冲洗一次。

5．染色：将载玻片放入盛有硫堇的染色缸中静置30分钟。

6．冲洗：自来水冲洗载玻片，冲去多于的染液，用吹风机吹干。

X染色质

核膜

7．镜检：用油镜观察X染色质的形态，并检查50个“可计数细胞”，计数其中具有X 染色质的细胞数。

可计数细胞的标准：a：核较大，轮廓清楚完整，无缺损、皱褶，染色清晰

b：核质染色均匀，呈细网状或均匀颗粒状，无退变的深染大颗粒及细菌污染。

五、实验报告

记录实验步骤，绘图表示实验结果并计数50个可计数细胞，计算X染色质的阳性率。附：硫堇染液的配制方法

1．饱和硫堇液：硫堇：4克

50%酒精100ml

配成100ml硫堇液，与缓冲液混合前过滤。

2．缓冲液：

醋酸钠 1.94克

巴比妥钠 2.94克

加蒸馏水至100ml（冰箱保存可用数日）

3．硫堇工作液：按下述次序逐一混合

a：饱和硫堇液100ml

b：1/10NHCl 70ml

c：缓冲液60ml

调PH至5.7（此液冰箱保存可用数日）