硅胶柱层析的操作方法及注意事项

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柱层析的操作步骤和注意事项

柱层析技术常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。

我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。

由于柱分的经验成分太多，所以下面我就几年来过柱的体会写些心得，希望能有所帮助。

柱子可以分为：加压，常压，减压。

压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。

所以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的，但是时间也最长，比如天然化合物的分离，一个柱子几个月也是有的。

减压柱能够减少硅胶的使用量，感觉能够节省一半甚至更多，但是由于大量的空气通过硅胶会使溶剂挥发（有时在柱子外面有水汽凝聚），以及有些比较易分解的东西可能得不到，而且还必须同时使用水泵抽气（很大的噪音，而且时间长）。

以前曾经大量的过减压柱，对它有比较深厚的感情，但是自从尝试了加压后，就几乎再也没动过减压的念头了。

加压柱是一种比较好的方法，与常压柱类似，只不过外加压力使淋洗剂走的快些。

压力的提供可以是压缩空气，双连球或者小气泵（给鱼缸供气的就行）。

非凡是在轻易分解的样品的分离中适用。

压力不可过大，不然溶剂走的太快就会减低分离效果。

个人觉得加压柱在普通的有机化合物的分离中是比较适用的。

关于柱子的尺寸，应该是粗长的最好。

柱子长了，相应的塔板数就高。

柱子粗了，上样后样品的原点就小（反映在柱子上就是样品层比较薄），这样相对的减小了分离的难度。

试想假如柱子十厘米，而样品就有二厘米，那么分离的难度可想而知，恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了。

而假如样品层只有0.5厘米，那么各组分就比较轻易得到完全分离了。

当然采用粗大的柱子要牺牲比较多的硅胶和溶剂了，不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么了（有些不环保的说，不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪费）。

现在见到的柱子径高比一般在1：5～10，书中写硅胶量是样品量的30～40倍，具体的选择要具体分析。

假如所需组分和杂质分的比较开（是指在所需组分rf在0.2～0.4，杂质相差0.1以上），就可以少用硅胶，用小柱子（例如200毫克的样品，用2cm×20cm 的柱子）；假如相差不到0.1，就要加大柱子，我觉得可以增加柱子的直径，比如用3cm 的，也可以减小淋洗剂的极性等等。

硅胶柱层析法的操作方法

硅胶柱层析法的操作方法硅胶柱层析法是一种常用的分离和纯化技术，主要用于分离、富集和纯化混合物中的化合物。

它基于化合物在固定相（硅胶）和流动相（溶剂）中的亲疏水性差异而实现分离。

下面将详细介绍硅胶柱层析法的操作方法。

1. 实验准备首先，需要准备层析柱、硅胶、溶剂和待分离的混合物。

层析柱是用玻璃制成的管状装置，内部装填有硅胶，通常有不同直径和长度可供选择。

硅胶是用硅酸盐矿物质制成的多孔性固体，有不同颗粒大小和孔径可供选择以适应不同的分离需求。

2. 层析柱装填首先，将层析柱垂直安放在支架上，并使用适当的填料将底部封堵，例如硅胶糊。

然后，将干燥的硅胶颗粒倒入层析柱中，轻轻敲击柱壁使其均匀沉积。

填充的高度应根据需分离化合物的极性和分子量来确定。

最后，将柱顶用玻璃棉堵塞，以防止硅胶颗粒从柱顶溢出。

3. 条件调节层析柱安装完毕后，需要调节运行条件。

首先，根据所选的溶剂系统，选择合适的溶剂和比例，将溶剂混合均匀，以确保溶剂前后在柱内具有相似的极性和极性强度。

其次，填充好柱的硅胶会吸附一些杂质，因此需要进行预洗。

先用适量的纯溶剂通过柱，以洗去杂质，直至柱底完全干燥。

4. 样品加载样品的加载通常分为直接加载和前处理两种方式。

直接加载适用于纯度较高的样品，直接将样品溶解于少量溶剂中，通过注射器将样品溶液缓慢注入到柱顶。

前处理适用于混合物样品，需要通过一定的前处理步骤，例如萃取、溶剂抽提或浓缩，以得到纯度较高的目标化合物，然后再进行样品加载。

5. 层析过程样品加载后，开始进行层析过程。

通常采用重力下滴、低压或高压加速流动相的方法进行柱层析。

流动相会在柱内不断移动，化合物会因为与流动相的亲疏水性差异而发生分离。

这时，需要控制流动相的速度和流动相比例，以使得分离效果最佳。

根据待分离物质的特性和分离效果，可以适当调整流速和流动相比例。

6. 集取分离物分离后的化合物会分布在柱上的不同位置，目标化合物可能会随着柱顶溶剂一起流出柱外。

柱层析的操作步骤和注意事项

柱层析技巧常说的过柱子应当叫柱层析分别,也叫柱色谱.我们经常应用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱.因为柱分的经验成分太多,所以下面我就几年来过柱的领会写些心得,愿望能有所帮忙.柱子可以分为：加压,常压,减压.压力可以增长淋洗剂的流淌速度,削减产品收集的时光,但是会减低柱子的塔板数.所以其他前提雷同的时刻,常压柱是效力最高的,但是时光也最长,比方自然化合物的分离,一个柱子几个月也是有的.减压柱可以或许削减硅胶的应用量,感到可以或许节俭一半甚至更多,但是因为大量的空气经由过程硅胶会使溶剂挥发（有时在柱子外面有水汽凝集）,以及有些比较易分化的器械可能得不到,并且还必须同时应用水泵抽气（很大的噪音,并且时光长）.以前曾大量的过减压柱,对它有比较深挚的情感,但是自从测验测验了加压后,就几乎再也没动过减压的念头了.加压柱是一种比较好的办法,与常压柱相似,只不过外加压力使淋洗剂走的快些.压力的供给可所以紧缩空气,双连球或者吝啬泵（给鱼缸供气的就行）.不凡是在随意马虎分化的样品的分别中实用.压力不成过大,不然溶剂走的太快就会减低分别后果.小我以为加压柱在通俗的有机化合物的分别中是比较实用的.关于柱子的尺寸,应当是粗长的最好.柱子长了,响应的塔板数就高.柱子粗了,上样后样品的原点就小（反应在柱子上就是样品层比较薄）,如许相对的减小了分别的难度.试想假如柱子十厘米,而样品就有二厘米,那么分别的难度可想而知,生怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了.而假如样品层只有0.5厘米,那么各组分就比较随意马虎得到完整分别了.当然采取粗大的柱子要就义比较多的硅胶和溶剂了,不过这些成底细对于产品来说也许就不算什么了（有些不环保的说,不过溶剂收受接管重蒸后也就减小了部分糟蹋）.如今见到的柱子径高比一般在1：5～10,书中写硅胶量是样品量的30～40倍,具体的选摘要具体剖析.假如所需组分和杂质分的比较开（是指在所需组分rf在0.2～0.4,杂质相差0.1以上）,就可以罕用硅胶,用小柱子（例如200毫克的样品,用2cm×20cm的柱子）;假如相差不到0.1,就要加大柱子,我以为可以增长柱子的直径,比方用3cm的,也可以减小淋洗剂的极性等等.关于无水无氧柱,实用于对氧,水迟钝,易分化的产品.可以湿柱,也可以干柱.不过在样品之前至少要用溶剂把柱子饱和一次,因为溶剂和硅胶饱和时放出的热量有可能是产品分化,毕竟要分别的是迟钝的东东,当心不为过.也是因为分别的器械比较迟钝,所以吸收瓶必定要用可密封的,遵守schlenk操纵.至于是加压.常压.减压,随需而定.因为是schlenk操纵,所以点板是个问题,假如样品是显色的,恭喜了,不必点板,直接看柱子上的色带就行了.假如样品无色,只好准备几十个schlenk瓶,一瓶一瓶的点,不过几回之后就知道样品在哪,也就可以省些了.像我以前过一根无水无氧柱,须要六个schlenk,如今只一个就能把所要的全收集到.无水无氧柱顶用的比较多的是用氧化铝作固定相.因为硅胶中有大量的羟基袒露在外,很随意马虎是样品分化,不凡是金属有机化合物和含磷化合物.而氧化铝可以做成碱性.中性和酸性的,选择余地比较大,但是比硅胶要贵些.据说有个办法,就是用石英做柱子,然后用HF254做固定相,如许在柱子外面用紫外灯一照就知道产品在哪里了,没有验证过.哪位做过可以提出来大家参详参详.--※ 关于湿法.干法上样.湿法省事,一般用淋洗剂消融样品,也可以用二氯甲烷.乙酸乙酯等,但溶剂越少越好,不然溶剂就成了淋洗剂了.许多样品在上柱前是粘乎乎的,一般没紧要.可是有的上样后在硅胶上又会析出,这一般都是比较大量的样品才会消失,是因为硅胶对样品的吸附饱和,而样品本身又是比较好的固体才会产生,这就应当先重结晶,得到大部分的产品后再柱分,假如不克不及重结晶那就不管它了,直接过就是了,样品跟着淋洗剂流淌会消融的.有些样品消融性差,能消融的溶剂又不克不及上柱（比方DMF,DMSO等,会跟着溶剂一路走,显色是一个很长的脱尾）,这时就必须用干法上柱了.样品和硅胶的量有一种说法是1：1,我以为是越少越好,但是要包管在旋干后,不克不及看到显著的固体颗粒（那解释有的样品没有吸附在硅胶上）.溶剂的选择.当然是最便宜,最安然,最环保的了.所以大多选用石油醚,乙酸乙酯.文献中有写用正己烷的,太贵了,除非不凡须要不要用不然银子哗哗的,流的比淋洗剂还快,不过因为极性很小,有时照样非它不成.乙醚也可以用,但是就是随意马虎睡觉,重视保持苏醒别让溶剂流干了,那样柱子也就不爽了.二氯甲烷也有效的,但是要知道,它和硅胶的吸附是一个放热进程,所以炎天的时刻经常会在柱子里产朝气泡,气象冷的时刻会好一些.甲醇,据说能消融部分的硅胶,所以产品假如想过元素剖析的话要留心,应当经事后继处理,比方说重结晶等.其他的溶剂用的相对较少,要依小我的不合须要选择了.因为某些原因,用到的淋洗剂多是大包装的（便宜嘛）,我们这里是用10升或25升的塑料桶装的,就要重视这些工业品的纯度是较低的.经常可以或许从送来的大桶底部看见有色的杂质,其他的杂质就可想而知了,所以在比较严厉的柱分时就要对溶剂重蒸.当然过原料时就可以免除这一步了,横竖下面还有提纯的办法.别的溶剂在过柱子后最好也收受接管应用,一方面环保,另一方面也能节俭部分经费,缺陷是要消费必定的人工.这里要重视的是,一般在过柱同时进行的是减压旋蒸,石油醚和乙酸乙酯的比例因为挥发度的不合会导致极性的变更,一般会使得极性变大,在梯度淋洗时比较适合,正好极性越来越大了.在过完柱子后,溶剂最后收受接管要采取常压,因为在减压旋蒸时会有部分低沸点的杂质一路出来,常压时就会削减这种现象,假如杂质和你下面要过的样品有反响那就惨了.关于操纵问题.1 装柱.柱子下面的活塞必定不要涂润滑剂,会被淋洗剂带到产品中的,可以采取四氟节门的.干法和湿法装柱以为没什么差别,只要能把柱子装实就行.装完的柱子应当要适度的紧密（太密了淋洗剂走的太慢）,必定要平均（不然样品就会从一侧斜着下来）.书中写的都是不克不及见到气泡,我以为在大多半情形下有些吝啬泡没太大的影响,一加压气泡就全下来了.当然假如你装的柱子老是有气泡就解释须要多演习了.但是柱子更隐讳的是开裂,甭管竖的照样横的,都邑影响分别后果,甚至作废！2 加样.用少量的溶剂溶样品加样,加完后将下面的活塞打开,待溶剂层降低至石英砂面时,再加少量的低极性溶剂,然后俅蚩钊绱肆饺危话闶⑸熬突臼前咨牧恕?参加淋洗剂,一开端不要加压,等溶样品的溶剂和样品层有一段距离（2～4cm就够了）,再加压,如许防止了溶剂（如二氯甲烷等）夹带样品快速下行.3 淋洗剂的选择.感到上要使所需点在rf0.2～0.3阁下的比较好.不要以为在板上爬高了分的比较开,过柱子就用那种极性,假如rf在0.6,即使相差0.2也不随意马虎在柱子上离开,因为柱子是一个多次爬板的状况,可以经由过程公式的比较：0.6/0.8一次的分别度,确定不如（0.2/0.3）的三次方或四次方大.4 样品的收集.用硅胶作固定相过柱子的道理是一个吸附与解吸的均衡.所以假如样品与硅胶的吸附比较强的话,就不随意马虎流出.如许就会产生,后面的点先出,而前面的点后出.这时可以采取氧化铝作固定相.别的,收集的试管大小要以样品量而定,不凡是小量样品,假如用大试管,可能一根就收到了三个样品,wuwu.假如都用小试管那工作量又太大.5 最后的处理.柱分后的产品,因为应用了大量的溶剂,个中的杂质也会累积到产品中,所以假如想送剖析,最好用少量的溶剂洗涤一下,因为大部分的杂质是溶在溶剂里的,一洗根本就没了,须要时进行重结晶.别的,再过柱的时刻,有时会消失气泡,一是和应用的溶剂有关,假如是易挥发的溶剂,如乙醚.二氯甲烷等,在室温稍高的情形下,很随意马虎消失这种现象,是以,在室温高的时刻,可以选择沸点较高,挥发相对小的溶剂.还有,应用混杂溶剂时,应用的两种溶剂的沸点应当相差不大,如：乙酸乙酯和石油醚(60~90),而乙醚却要选择30－60的石油醚.二是：不管是用带砂板的照样塞棉花的,在装柱之前,都要将空气用加压的办法将空气排干,如许就可防止柱中有空气！过柱子须要耐烦,不要焦急.。

实验室硅胶柱操作规范

实验室硅胶柱操作规范1、操作步骤1.1 硅胶准备柱硅胶一般选用200-300目，拌样硅胶一般选用100-140目。

拌样硅胶用量为样品量的1-8倍，柱硅胶用量为样品量的8-100倍，对于极难分离的样品，还可以使用硅胶H作为柱硅胶。

1.2 实验仪器准备一支玻璃色谱柱，一个铁架台，烧杯，锥形瓶，径口直径较大的玻璃漏斗，一支玻璃棒，硅胶管，螺旋夹，夹子等。

1.3 装柱1.3.1 将硅胶管与色谱柱下端相连(若色谱柱带活塞则不用)，往硅胶管上加上螺旋夹，取与色谱柱口径相应的棉花，厚薄适中(太厚流速慢，太薄易漏硅胶)，置入色谱柱底部，将色谱柱固定于铁架台上。

1.3.2 吸附剂的加入①干法：将吸附剂一次加入色谱管，振动管壁使其均匀下沉，然后沿管壁缓缓加入开始层析时使用的流动相；或将色谱管下端出口加活塞，加入适量的流动相，旋开活塞使流动相缓缓滴出，然后自管顶缓缓加入吸附剂，使其均匀地润湿下沉，在管内形成松紧适度的吸附层。

操作过程中应保持有充分的流动相留在吸附层的上面。

②湿法：将吸附剂与流动相混合，搅拌以除去空气泡，徐徐倾入色谱管中，然后再加入流动相，将附着于管壁的吸附剂洗下，使色谱柱表面平整。

装完柱后需等硅胶沉降压实后再上样，通常需要半天到一天时间。

1.3.3试样的加入①湿法：将试样溶于层析时使用的流动相中，过滤，待填装吸附剂所用流动相从色谱柱自然流下，液面将与柱表面相平时，再沿色谱管壁缓缓加入滤液。

注意勿使吸附剂翻起。

②干法：选择适当溶剂使样品刚好完全溶解，过滤后取100-140目硅胶适量，将样品溶液缓慢加入到拌样硅胶中，边加入边搅拌，再使溶剂挥发去尽后使呈松散状（一般需放入通风橱中挥干过夜）；将混有试样的吸附剂加在已制备好的色谱柱上面。

如试样在常用溶剂中不溶解，可将试样与适量的吸附剂在乳钵中研磨混匀后加入。

上完样后可在拌样硅胶上面加入少量100-140目的保护硅胶，在保护硅胶之上还可以加入脱脂棉以防止加流动相时破坏硅胶保护层。

硅胶层析原理及操作

硅胶层析原理及操作硅胶层析原理及操作硅胶柱层析原理⼀．硅胶柱层析原理⼀．硅胶层析法分离原理是根据物质在硅胶上的吸附⼒不同⽽得到分离，极性较⼤的物质与硅胶作⽤强，保留时间长，极性弱的物质与硅胶作⽤弱，保留时间短，物质在固定相与流动相间通过反复的吸附、解吸过程，得以分离。

流动相选择，极性⼩的⽤⼄酸⼄酯/⽯油醚系统；极性较⼤的⽤甲醇/氯仿系统；极性⼤的⽤甲醇/⽔/正丁醇/醋酸系统；如有拖尾，可根据具体情况，加⼊少量氨⽔或冰醋酸操作⽅法硅胶层析操作⽅法⼆．硅胶层析⼆． 1.硅胶量确定。

称取⼀定量的硅胶，根据所要装填的柱⼦体积及上样量来确定（上样量5%以内），极难分的物质，可适当增加硅胶量。

硅胶的密度在0.5-0.6左右，由此可计算出装填⼀定体积的柱⼦需要称取的硅胶质量。

2.制备匀浆。

加⼊⼲硅胶体积⼀倍的溶剂，玻璃棒充分搅拌。

如果洗脱剂是⽯油醚/⼄酸⼄酯/丙酮体系，就⽤⽯油醚制备匀浆；如果洗脱剂是氯仿/醇体系，就⽤氯仿制备匀浆。

3.装柱。

柱底出⼝关闭，⽆筛板的可⽤棉花替代，加⼊约1/5体积⽯油醚（氯仿），将匀浆⼀次性倾⼊柱⼦中。

然后打开柱⼦底部出⼝，待硅胶床沉降稳定后，关闭出⼝（注意不要使液⾯低于硅胶床）。

4.压实。

沉降完成后，⽤双联球或⽓泵加压，泵⼊洗脱液，直⾄床⾯稳定。

5.上样。

上样后，加⼊洗脱剂洗脱，可将脱脂棉置于硅胶床表⾯。

避免添加流动相时冲坏硅胶表⾯。

6.过柱和收集。

采⽤合适的洗脱液洗脱，根据样品情况可采⽤梯度洗脱。

分离出的样品采⽤分部收集，具体每个馏分的体积可根据实际的分离效果来确定，⼀般情况下以柱体积的10%为⼀个馏分来收集。

7.检测。

使⽤专⽤喷显剂，只使⽤⽤紫外检测，可能会损失⼀些样品，紫外的灵敏度⼀般⽐喷显剂低1-2个数量级。

三．柱层析经验1．柱⼦填装硅胶柱⼦装填，有两种⽅法：即湿法装柱和⼲法装柱。

不论⼲法还是湿法，硅胶（固定相）床的表⾯要平整，柱床径⾼⽐1:10以上，太短塔板数不够，太长会产⽣轴向扩散。

柱层析硅胶

柱层析硅胶
1.原理
柱层析硅胶的原理是根据原理相同的物质在不同条件下移动速度不同的特性，将样品在填充于柱中的硅胶中进行分离。

硅胶作为非极性物质，能够吸附极性物质，不同的硅胶粒度对样品的分离效果均不同。

2.分类
柱层析硅胶根据不同的粒度、孔径及强度，可分为不同的类型。

常见的有：
①L类型：中等孔径（100-200Å），对大多数化合物有良好的分离效果；
3.性质
柱层析硅胶的性质主要包括吸附性、表面积、孔径和粒径等。

其中吸附性越好，分离效果越好，但是也容易出现过度吸附的问题。

硅胶的表面积、孔径和粒径越小，其表面积和孔径比就越大，样品与硅胶的接触面积越大，吸附能力也就越强。

4.注意事项
在柱层析实验中，应注意以下事项：
①硅胶的选择应根据样品的性质和对分离效果的要求来进行。

②实验前要进行柱层析硅胶表面修饰，保证硅胶的表面活性。

③样品在加入前应先进行前处理，如过滤、浓缩或化学修饰等，以保证样品质量。

④严格控制柱层析条件，如移相剂的类型和浓度、流速、温度等，以保证分离效果。

⑤在柱层析后，对分离得到的物质进行鉴定和分析，以判断分离效果。

在实验中，应注意操作安全，避免化学品泼洒和误吸等意外情况的发生。

5.总结。

硅胶柱层析注意事项

硅胶柱层析注意事项
1. 在操作硅胶柱层析之前，应当充分了解并熟悉相关实验室操作规程和安全操作要求，并戴好实验手套和口罩等个人防护装备。

2. 在使用硅胶柱层析进行分离纯化时，应选取合适的溶剂体系和流速，以保证分离效果和纯度。

3. 在装填硅胶柱层析柱时，应先将硅胶柱层析剂固定在柱内，并严密密封，以防止溶剂流失和杂质的进入。

4. 在进行样品的吸附和洗脱过程中，应控制好溶剂的流速和温度，以避免硅胶柱层析柱破裂和溶剂挥发带走干燥样品。

5. 硅胶柱层析柱的操作过程中，应避免剧烈振荡和撞击，以免柱内填充物移位或破碎。

6. 在层析过程中应注意观察样品和洗脱液的颜色和透明度变化，及时调整溶剂类型和浓度，以确保分离效果。

7. 在分离纯化后，应及时冻干或浓缩洗脱液，避免其再次污染或挥发。

8. 操作硅胶柱层析时，要注意保持实验室环境的清洁和卫生，以防止杂质的污
染和误差的产生。

9. 在操作过程中，要随时关注实验仪器和设备的运行状态，确保实验安全和数据准确。

10. 在结束实验后，要对硅胶柱层析柱进行彻底的清洗和维护，以保证下次使用时的质量和效果。

使用柱层析硅胶的几个技巧

使用柱层析硅胶的几个技巧柱层析硅胶是一种广泛应用于化学分析和制造领域的化学试剂。

它的主要作用是用于将混合的化合物进行分离，并且可以根据渗透性和亲和力进行分子分离。

与许多其他试剂一样，柱层析硅胶具有一个独特的使用方法，需要特别注意到几个技巧和步骤。

本文讲述使用柱层析硅胶的几个技巧，旨在帮助您更好地理解并正确使用这种化学试剂。

技巧1：正确选择柱层析硅胶的类型必须根据需要分离的分子和混合物的性质来选择柱层析硅胶的类型。

当前市面上有许多不同类型的柱层析硅胶，包括正相色谱柱层析、反相色谱柱层析和离子交换柱层析等。

因此，在选择柱层析硅胶之前，需要了解试剂的类型并选择该类型以最佳地满足您的需要。

技巧2：调整样品浓度以达到最佳解析度对于过于稀释或过于浓密的样品溶液，分子无法均匀地分配到柱层析硅胶的各个部分中。

因此，调整样品的浓度以满足柱层析硅胶的需求是非常关键的。

在调整样品浓度时，不仅需要注意分子的浓度，还需要考虑呈现样品的溶剂，并确保在正确的浓度下呈现。

技巧3：保持柱层析硅胶的湿润状态柱层析硅胶的硬度和结构会在干燥时受到损坏，从而影响了分析结果。

因此，在柱层析硅胶不在使用时应始终保持其湿润状态。

这可以通过注入一些有机相来实现，并在放置柱子时确保其垂直或略向下安装。

这可以防止重液沉积并保持柱层析硅胶的湿度。

技巧4：避免过载柱子过载柱层析硅胶会导致以前分离的混合物的重新混合，从而可能会影响分析结果。

因此，在添加新的样品之前，应完全冲洗柱层析硅胶以确保前一讲分离的混合物已彻底从柱子中清除。

此外，在每个柱层析硅胶中应根据压力适当调整样品的量以避免过度装载柱层析硅胶。

技巧5：检查设备并记录运行参数尽管柱层析硅胶是一种高质量的化学试剂，但它也需要适当的设备和参数来实现最佳结果。

因此，在使用柱层析硅胶之前，应检查所有设备以确保其完好无损，并记录运行参数，包括溶剂流率，发生器，解决方案pH，溶液组合等。

这样，如果发现问题，可以更轻松地识别并进行调整。

硅胶柱层析的操作方法及注意事项

硅胶柱层析一、硅胶柱层析的原理利用吸附原理，即利用硅胶对中药混合物中各种成分吸附能力的差异，而使混合物中各成分得以分离的色谱方法。

二、硅胶柱层析的操作方法及注意事项1、装柱操作要点：装柱前柱底要垫一层脱脂棉以防吸附剂外漏。

有干法装柱和湿法装柱两种方法（1）干法装柱：将硅胶通过漏斗装入柱内，中间不应间断，形成一细流慢慢加入管内。

也可用橡皮槌轻轻敲打柱硅胶柱使硅胶装填连续均匀、紧密。

柱装好后，打开下端活塞，然后倒入洗脱剂洗脱以排尽柱内空气，并保持一定液面。

（2）湿法装柱：将最初准备使用的洗脱剂装入柱内，打开下端活塞，使洗脱剂缓慢流出。

然后把硅胶慢慢连续不断地倒入柱内（或将硅胶与适量洗脱剂调成混悬液慢慢加入柱内，），硅胶依靠重力和洗脱剂的带动，在柱内自由沉降，此间要不断把流出的洗脱剂加回柱内保持一定的液面，直至把硅胶加完并在柱内沉降不再变动为止。

然后在硅胶上面加一小片滤纸或少许脱脂棉。

根据加样量控制洗脱剂液面至一定高度。

匀浆法：搅成匀浆。

加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。

如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮体系，就用石油醚拌；如果洗脱剂是氯仿/醇体系，就用氯仿拌。

如果不能搅成匀浆，说明溶剂中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，如果不与水配伍走分配色谱的话，必须预先用无水硫酸钠久置干燥。

氯仿用无水氯化钙干燥，以除去1%的醇。

如果样品对酸敏感，不能用氯仿体系过柱。

2、上样将欲分离的样品溶于少量装柱时用的洗脱剂中，制成体积小、浓度高的样品溶液，加入层析柱中硅胶面上。

如样品不溶于装柱时用的洗脱剂，则将样品溶于易挥发的溶剂中，并加入适量硅胶（不超过柱中硅胶全量的1/10）与其拌匀，除尽溶剂，将拌有样品的硅胶均匀加到柱顶（始终保持洗脱剂有一定的液面），再覆盖一层硅胶即可。

上样时注意沿着柱内壁慢慢加入，始终保持硅胶上端表面平整；上样量为硅胶的1/60~1/30。

3、洗脱洗脱剂的选用可通过薄层色谱筛选，一般TLC展开时Rf 值为0.2~0.3的溶剂系统是最佳的洗脱系统，采用梯度洗脱法洗脱。

硅胶柱层析

硅胶柱层析硅胶柱层析技术是一种用于分离和分析分子结构相似或略有不同的有机化合物的有机分离技术。

这种分离技术既可用于混合物的分离纯化，也可用于单组分的准确分析。

硅胶柱层析可以得到高精度的分离分析结果，它与其它分离分析技术相比具有较高的灵敏度，操作方便和分析效率高。

硅胶柱层析分子可以通过两种不同的方式分离：一种是吸附，另一种是偏析。

在吸附过程中，溶质分子被吸附在柱粒子表面上，并且不会溶解，而在偏析过程中，溶质分子会在柱粒子表面上同时进行偏析和均相移动，也就是说，不同结构的分子会以不同的速度移动，从而分离混合物中的分子。

硅胶柱层析过程的主要操作步骤如下：第一步是将硅胶柱放入柱层析装置中；第二步是向硅胶柱中加入待分离分析物；第三步是使用柱层析仪进行柱层析测定，即将分析物在柱中均匀地向下移动；最后一步是收集偏析后的分子产物。

硅胶柱层析技术在有机合成研究和有机分子分析中都有广泛的应用。

它在分离有机混合物、有机废水处理、有机物种鉴定以及其他有机化学应用等方面非常有用。

例如，它可以用于分离混合物中的微量组分；可以用于鉴定相似的有机物；可以用于检测污染物和有毒物质；可以用于分离复杂的有机混合物，如香料中的混合物；还可以用于研究生物分子的三维结构。

此外，硅胶柱层析技术还可以用于食品分析，如可可粉、乳糖、蛋白质分析等，以及药物分析，如抗生素分析、降脂药物分析等。

它甚至可以用于环境分析，如溶解性有机磷、元素烃的分析，在进行环境污染检测中也有重要作用。

硅胶柱层析技术目前已经被广泛应用于各个领域，它具有较高的灵敏度、操作简便、分析效率高以及结果可靠等优点。

硅胶柱层析技术也可以用于大规模分离复杂的物质，这使得它成为有机化学研究中不可或缺的重要技术。

硅胶柱层析的操作方法及注意事项

硅胶柱层析的操作方法及注意事项硅胶柱层析法是一种常用的化学分析方法，具有操作简便、结果准确等优点，在化学、生物、医药等领域得到广泛应用。

下面我们来介绍硅胶柱层析的操作方法及注意事项。

1.准备样品及配制溶剂：一般需要将待测物质与适当的溶剂混合，使其溶解度较大，且不产生化学反应。

根据分析目的选用不同的溶剂，以保证分离效果。

2.准备硅胶柱：硅胶柱由无色透明的硅胶胶体组成，直径一般为1-2.5厘米，长约10-40厘米。

硅胶柱层析的分离效果，与柱高、柱径、胶体的大小和分布、溶液的流速等因素有关。

在选择硅胶柱时，应该根据实际需要选用合适的柱径和柱高。

3.测试流速：测试不同流速对分离效果的影响。

测试方法为将流速调节为不同值，测定每个流速下所采集的溶液吸收曲线，最终确定出最佳的流速。

4.样品处理：样品从洗脱液中洗脱出来之后，可以使用各种不同的方法进行处理。

例如可以用过滤膜、离心、深度过滤等方法，来去除样品中的离子、颗粒等。

5.动态洗脱：先在洗脱液用水稀释3-5倍，使液面齐平。

关掉泵阀使得管路只循环搅拌。

将占底部10%的甲醇浸入硅胶柱底部粉末颗粒中，然后打开泵阀。

保持洗脱液的温度和相对湿度稳定，然后逐渐开始动态洗脱。

6.收集洗脱液：可以采用分批收集和连续收集两种方法，最终将洗脱液图谱编制。

1.操作前，务必检查所有设备设施是否完好，液体循环是否通畅，以及所有参数（如气温、流速、洗脱液配比等）是否调整合适。

2.在操作时，不能超量进样，以免产生超过硅胶柱承受能力的负荷。

3.在操作中，应注意洗脱溶液的挥发和流动，以避免水分汽化，在操作过程中，应该密封管路和溶液，防止冷凝积聚。

4.硅胶柱层析法有一定的危险性，提供人员应该具备一定的化学实验经验，同时要持续关注硅胶柱的干燥程度，确定每步操作的效果，以保证精度和安全性。

5.在分析过程中，应注意各种简化重复操作，减少操作依赖，以提高生产效率。

总之，硅胶柱层析法是一种常用的化学分析方法，其操作相对简便，可以大量产生准确的结果，因此在化学、生物、医药等领域都有广泛的应用。

柱层析的操作步骤和注意事项

柱层析技术常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。

我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。

由于柱分的经验成分太多，所以下面我就几年来过柱的体会写些心得，希望能有所帮助。

柱子可以分为：加压，常压，减压。

压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。

所以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的，但是时间也最长，比如天然化合物的分离，一个柱子几个月也是有的。

以前曾经大量的过减压柱，对它有比较深厚的感情，但是自从尝试了加压后，就几乎再也没动过减压的念头了。

加压柱是一种比较好的方法，与常压柱类似，只不过外加压力使淋洗剂走的快些。

压力的提供可以是压缩空气，双连球或者小气泵（给鱼缸供气的就行）。

非凡是在轻易分解的样品的分离中适用。

压力不可过大，不然溶剂走的太快就会减低分离效果。

个人觉得加压柱在普通的有机化合物的分离中是比较适用的。

关于柱子的尺寸，应该是粗长的最好。

柱子长了，相应的塔板数就高。

柱子粗了，上样后样品的原点就小（反映在柱子上就是样品层比较薄），这样相对的减小了分离的难度。

试想假如柱子十厘米，而样品就有二厘米，那么分离的难度可想而知，恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了。

而假如样品层只有0.5厘米，那么各组分就比较轻易得到完全分离了。

现在见到的柱子径高比一般在1：5～10，书中写硅胶量是样品量的30～40倍，具体的选择要具体分析。

硅胶柱层析分离的实验原理法与技巧

硅胶柱层析分离的实验原理法与技巧硅胶柱层析分离的实验原理、方法与技巧一、硅胶柱层析原理硅胶层析法的分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力不同而得到分离，一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附，极性较弱的物质不易被硅胶吸附，整个层析过程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸过程。

硅胶柱层析流动相极性小的用乙酸乙酯：石油醚系统；极性较大的用甲醇：氯仿系统；极性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系统；拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸硅胶柱层析惯用方法1.称量。

200-300 目硅胶，称 30-70 倍于上样量；如果极难分，也可以用 100 倍量的硅胶 H。

干硅胶的视密度在 0.4 左右，所以要称40g 硅胶，用烧杯量 100ml 也可以。

2.搅成匀浆。

加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。

如果洗脱剂是石油醚 /乙酸乙酯 /丙酮体系，就用石油醚拌；如果洗脱剂是氯仿 /醇体系，就用氯仿拌。

如果不能搅成匀浆，说明溶剂中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，如果不与水配伍走分配色谱的话，必须预先用无水硫酸钠久置干燥。

氯仿用无水氯化钙干燥，以除去1% 的醇。

如果样品对酸敏感，不能用氯仿体系过柱。

3.装柱。

将柱底用棉花塞紧，不必用海沙，加入约1/3 体积石油醚（氯仿），装上蓄液球，打开柱下活塞，将匀浆一次倾入蓄液球内。

随着沉降，会有一些硅胶沾在蓄液球内，用石油醚（氯仿）将其冲入柱中。

4.压实。

沉降完成后，加入更多的石油醚，用双联球或气泵加压，直至流速恒定。

柱床约被压缩至 9/10 体积。

无论走常压柱或加压柱，都应进行这一步，可使分离度提高很多，且可以避免过柱时由于柱床萎缩产生开裂。

5.上样。

干法湿法都可以。

海沙是没必要的。

上样后，加入一些洗脱剂，再将一团脱脂棉塞至接近硅胶表面。

然后就可以放心地加入大量洗脱剂，而不会冲坏硅胶表面。

6.过柱和收集。

柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡。

太低的洗脱强度并不好，推荐用梯度洗脱。

收集的例子：10mg 上样量，1g 硅胶H，0.5ml 收一馏分；1-2g 上样量，50g 硅胶（200-300 目），20-50ml 收一馏分。

硅胶柱层析——精选推荐

硅胶（Silicon dioxide）别名：硅橡胶是一种高活性吸附材料，属非晶态物质，其化学分子式为mSiO2·nH2O。

不溶于水和任何溶剂，无毒无味，化学性质稳定，除强碱、氢氟酸外不与任何物质发生反应。

各种型号的硅胶因其制造方法不同而形成不同的微孔结构。

硅胶的化学组份和物理结构，决定了它具有许多其他同类材料难以取代得特点：吸附性能高、热稳定性好、化学性质稳定、有较高的机械强度等。

硅胶根据其孔径的大小分为：大孔硅胶、粗孔硅胶、B型硅胶、细孔硅胶。

硅胶层析性状：该产品为白色均匀颗粒，主要成分为二氧化硅，由优质硅胶为原料加工制成。

其主要特点是能通过对混合物质中的不同成分吸附保留时间的差异，达到分离提纯的目的。

依其纯度又分为工业级粗孔柱层析硅胶、试剂级柱层析硅胶。

用途：主要用于石油产品的精制，脱除芳烃物质或用于中草药有效成分的分离提纯，高纯度物质的制备等。

规格：国际惯例：63-212μm（70-230目）；38-63μm（230-400目）国内常规：150-250μm （60-100目）；75-150μm （100-200目）；45-75μm （200-300目）（也可按用户需求加工成其他规格）薄层层析是将吸附剂或者支持剂（有时加入固化剂）均匀地铺在一块玻璃上，形成薄层。

把欲分离的样品点在薄层上，然后用适宜的溶剂展开，使混合物得以分离的方法。

由于层析在薄层上进行故而得名。

薄层层析是一种微量、快速的层析方法。

它不仅可以用于纯物质的鉴定，也可用于混合物的分离、提纯及含量的测定。

还可以通过薄层层析来摸索和确定柱层析时的洗脱条件。

根据分离的原理不同，薄层层析可以分为两类：用吸附剂铺成的薄层所进行的层析为吸附薄层层析；用纤维素粉、硅胶、硅藻土为支持剂铺成的薄层，属于分配薄层层析。

薄层层析中以吸附薄层为多用，吸附薄层中常用的吸附剂为氧化铝和硅胶。

吸附TLC→固定相为吸附剂→氧化铝、硅胶。

（较多用）TLC→｛分配T LC→固定相为液态（水）→固定相吸苷在支持剂上。

柱层析的操作步骤和注意事项

柱层析技术常说得过柱子应该叫柱层析分离,也叫柱色谱。

我们常用得就是以硅胶或氧化铝作固定相得吸附柱。

由于柱分得经验成分太多,所以下面我就几年来过柱得体会写些心得,希望能有所帮助。

柱子可以分为:加压,常压,减压、ﻫ压力可以增加淋洗剂得流动速度,减少产品收集得时间,但就是会减低柱子得塔板数。

所以其她条件相同得时候,常压柱就是效率最高得,但就是时间也最长,比如天然化合物得分ﻫ离,一个柱子几个月也就是有得。

减压柱能够减少硅胶得使用量,感觉能够节省一半甚至更多,但就是由于大量得空气通过ﻫ硅胶会使溶剂挥发(有时在柱子外面有水汽凝聚),以及有些比较易分解得东西可能得ﻫ不到,而且还必须同时使用水泵抽气(很大得噪音,而且时间长)、以前曾经大量得过减压柱,对它有比较深厚得感情,但就是自从尝试了加压后,就几乎再也没动过减压得念头了、加压柱就是一种比较好得方法,与常压柱类似,只不过外加压力使淋洗剂走得快些。

压力ﻫ得提供可以就是压缩空气,双连球或者小气泵(给鱼缸供气得就行)、非凡就是在轻易分解ﻫ得样品得分离中适用。

压力不可过大,不然溶剂走得太快就会减低分离效果、个人觉得ﻫ加压柱在普通得有机化合物得分离中就是比较适用得、关于柱子得尺寸,应该就是粗长得最好。

柱子长了,相应得塔板数就高、柱子粗了,上样后样品得原点就小(反映在柱子上就就是样品层比较薄),这样相对得减小了分离得难度。

试想假如柱子十厘米,而样品就有二厘米,那么分离得难度可想而知,恐怕要用很低极性得溶剂慢慢冲了。

而假如样品层只有0.5厘米,那么各组分就比较轻易得到完全分离了、当然采用粗大得柱子要牺牲比较多得硅胶与溶剂了,不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么了(有些不环保得说,不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪费)、现在见到得柱子径高比一般在1:5～１０,书中写硅胶量就是样品量得30~40倍,具体得选择要具体分析。

假如所需组分与杂质分得比较开(就是指在所需组分rｆ在0。

硅胶柱层析分离的实验原理法与技巧

硅胶柱层析分离的实验原理、方法与技巧一、硅胶柱层析原理硅胶层析法的分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力不同而得到分离，一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附，极性较弱的物质不易被硅胶吸附，整个层析过程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸过程。

200-300 目硅胶，称 30-70 倍于上样量；如果极难分，也可以用 100 倍量的硅胶 H。

干硅胶的视密度在 0.4 左右，所以要称 40g 硅胶，用烧杯量 100ml 也可以。

2.搅成匀浆。

加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。

如果洗脱剂是石油醚 /乙酸乙酯 /丙酮体系，就用石油醚拌；如果洗脱剂是氯仿 /醇体系，就用氯仿拌。

如果不能搅成匀浆，说明溶剂中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，如果不与水配伍走分配色谱的话，必须预先用无水硫酸钠久置干燥。

氯仿用无水氯化钙干燥，以除去1% 的醇。

如果样品对酸敏感，不能用氯仿体系过柱。

3.装柱。

将柱底用棉花塞紧，不必用海沙，加入约1/3 体积石油醚（氯仿），装上蓄液球，打开柱下活塞，将匀浆一次倾入蓄液球内。

随着沉降，会有一些硅胶沾在蓄液球内，用石油醚（氯仿）将其冲入柱中。

4.压实。

沉降完成后，加入更多的石油醚，用双联球或气泵加压，直至流速恒定。

柱床约被压缩至 9/10 体积。

无论走常压柱或加压柱，都应进行这一步，可使分离度提高很多，且可以避免过柱时由于柱床萎缩产生开裂。

5.上样。

干法湿法都可以。

海沙是没必要的。

上样后，加入一些洗脱剂，再将一团脱脂棉塞至接近硅胶表面。

然后就可以放心地加入大量洗脱剂，而不会冲坏硅胶表面。

6.过柱和收集。

柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡。

太低的洗脱强度并不好，推荐用梯度洗脱。

收集的例子：10mg 上样量，1g 硅胶 H，0.5ml 收一馏分； 1-2g 上样量，50g 硅胶（200-300 目），20-50ml 收一馏分。

硅胶柱层析的操作过程

柱层析极性小的用乙酸乙酯：石油醚系统极性较大的用甲醇：氯仿系统极性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系统拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸硅胶柱层析下面介绍我现在惯用的方法：匀浆法。

1。

称量。

200-300目硅胶，称30-70倍于上样量；如果极难分，也可以用100倍量的硅胶H。

干硅胶的视密度在0.4左右，所以要称40g硅胶，用烧杯量100ml也可以。

2。

搅成匀浆。

加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。

如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮体系，就用石油醚拌；如果洗脱剂是氯仿/醇体系，就用氯仿拌。

如果不能搅成匀浆，说明溶剂中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，如果不与水配伍走分配色谱的话，必须预先用无水硫酸钠久置干燥。

氯仿用无水氯化钙干燥，以除去1%的醇。

如果样品对酸敏感，不能用氯仿体系过柱。

3。

装柱。

将柱底用棉花塞紧，不必用海沙，加入约1/3体积石油醚（氯仿），装上蓄液球，打开柱下活塞，将匀浆一次倾入蓄液球内。

随着沉降，会有一些硅胶沾在蓄液球内，用石油醚（氯仿）将其冲入柱中。

4。

压实。

沉降完成后，加入更多的石油醚，用双联球或气泵加压，直至流速恒定。

柱床约被压缩至9/10体积。

无论走常压柱或加压柱，都应进行这一步，可使分离度提高很多，且可以避免过柱时由于柱床萎缩产生开裂。

5。

上样。

干法湿法都可以。

海沙是没必要的。

上样后，加入一些洗脱剂，再将一团脱脂棉塞至接近硅胶表面。

然后就可以放心地加入大量洗脱剂，而不会冲坏硅胶表面。

6。

过柱和收集。

柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡。

太低的洗脱强度并不好，推荐用梯度洗脱。

收集的例子：10mg上样量，1g硅胶H，0.5ml收一馏分；1-2g上样量，50g硅胶（200-300目），20-50ml收一馏分。

7。

检测。

要更多地使用专用喷显剂，如果仅用紫外灯，会损失较多产品，紫外的灵敏度一般比喷显剂底1-2个数量级。

8。

送谱。

收集的产品旋干，在送谱前通常需要重结晶。

如果样品太少或为液体，可过一小凝胶柱，作为送谱前的最后纯化手段。

柱层析技术要点

装柱子（添硅胶）时，有两种方法：即湿法装柱和干法装柱，二者各有优劣。

不论干法还是湿法，硅胶（固定相）的上表面一定要平整，并且硅胶（固定相）的高度一般为15cm左右，太短了可能分离效果不好，太长了也会由于扩散或拖尾导致分离效果不好。

湿法装柱是先把硅胶用适当的溶剂拌匀后，再填入柱子中，然后再加压用淋洗剂"走柱子"，本法最大的优点是一般柱子装的比较结实，没有气泡。

干法装柱则是直接往柱子里填入硅胶，然后再轻轻敲打柱子两侧，至硅胶界面不再下降为止，然后再填入硅胶至合适高度，最后再用油泵直接抽，这样就会使得柱子装的很结实。

接着是用淋洗剂"走柱子"，一般淋洗剂是采用TLC分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂。

通常上面加压，下面再用油泵抽，这样可以加快速度。

干法装柱较方便，但最大的缺陷在于"走柱子"时，由于溶剂和硅胶之间的吸附放热（可以用手摸柱子明显感觉到），容易产生气泡，这一点在使用低沸点的淋洗剂时如乙醚，二氯甲烷更为明显。

虽然产生的气泡在加压的情况下不易察觉，但是，一旦撤去压力，如在上样、加溶剂等操作的时候，气泡就会释放出来，严重时，整个柱子变花，样品不可能平整地通过，当然也就谈不上分离了。

解决的办法是：第一、硅胶一定要天结实；第二、一定要用较多的溶剂"走柱子"，一定要到柱子的下端不再发烫，恢复到室温后再撤去压力。

也有介绍在硅胶的最上层填上一小层石英砂，防止添加溶剂的时候，使得样品层不再整齐。

但我的感觉是如果小心上样，添加溶剂，则没有这个必要。

上样也有干法和湿法之分：干法就是把待分离的样品用少量溶剂溶解后，在加入少量硅胶，拌匀后再旋去溶剂。

如此得到的粉末再小心加到柱子的顶层。

干法上样较麻烦，但可以保证样品层很平整。

湿法上样就是用少量溶剂（最好就是展开剂，如果展开剂的溶解度不好，则可以用一极性较大的溶剂，但必须少量）将样品溶解后，再用胶头滴管转移得到的溶液，沿着层析柱内壁均匀加入。

硅胶柱层析分离的实验原理、方法与技巧

硅胶柱层析分离的实验原理、方法与技巧硅胶柱层析分离的实验原理、方法与技巧一、硅胶柱层析原理硅胶层析法的分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力不同而得到分离，一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附，极性较弱的物质不易被硅胶吸附，整个层析过程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸过程。

200-300目硅胶，称30-70倍于上样量；如果极难分，也可以用100倍量的硅胶H。

干硅胶的视密度在0.4左右，所以要称40g硅胶，用烧杯量100ml也可以。

2.搅成匀浆。

加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。

如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮体系，就用石油醚拌；如果洗脱剂是氯仿/醇体系，就用氯仿拌。

如果不能搅成匀浆，说明溶剂中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，如果不与水配伍走分配色谱的话，必须预先用无水硫酸钠久置干燥。

氯仿用无水氯化钙干燥，以除去1%的醇。

如果样品对酸敏感，不能用氯仿体系过柱。

3.装柱。

将柱底用棉花塞紧，不必用海沙，加入约1/3体积石油醚（氯仿），装上蓄液球，打开柱下活塞，将匀浆一次倾入蓄液球内。

硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。

由于柱分的经验成分太多，所以下面我就几年来过柱的体会写些心得，希望能有所帮助。

一：柱子可以分为：加压，常压，减压压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。

所以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的，但是时间也最长，比如天然化合物的分离，一个柱子几个月也是有的。

减压柱能够减少硅胶的使用量，感觉能够节省一半甚至更多，但是由于大量的空气通过硅胶会使溶剂挥发（有时在柱子外面有水汽凝结），以及有些比较易分解的东西可能得不到，而且还必须同时使用水泵抽气（很大的噪音，而且时间长）。

以前曾经大量的过减压柱，对它有比较深厚的感情，但是自从尝试了加压后，就几乎再也没动过减压的念头了。

硅胶柱层析实验报告

硅胶柱层析实验报告本实验旨在通过硅胶柱层析法分离和纯化混合物中的有机物，了解硅胶柱层析法的原理及操作步骤，并掌握准确分离纯化有机物的方法。

实验原理：硅胶柱层析法是一种常用的分离和纯化有机物的方法，其分离原理是利用不同物质在硅胶柱上的吸附性、溶解性和扩散性差异，通过物质在硅胶上的迁移速度不同实现分离纯化的目的。

实验步骤：1. 准备硅胶柱：在取样架上横放一根长玻璃管，管内填充净化后的硅胶，并用砂芯杆将硅胶填充密实。

2. 试样制备：将待分离的混合物按照一定比例混合，加入适量的溶剂中溶解，制备好浓度适中的试样溶液。

3. 样品处理：将试样溶液通过滤纸滤除杂质，然后用注射器将样品注入硅胶柱上部，让其均匀渗透到硅胶柱中。

4. 流动相选择：根据样品的特性和目的，选择合适的流动相，如正己烷：乙酸乙酯（8:2）。

5. 层析：用滴酒器滴加流动相，使其从硅胶柱上部流动到底部，收集不同部位的溶液，通常以试剂漏斗收集。

6. 分离纯化：根据不同吸附特性，选择性收集目标物质，分离纯化为单一化合物。

实验结果：根据实验操作，得到硅胶柱层析的分离纯化实验结果。

实验讨论：1. 实验结果是否与预期相符，若不符合，可能的原因是什么？2. 实验中是否出现问题，如何解决？3. 实验中有无其他操作或步骤可以改进？4. 实验中应注意的细节和操作注意事项是什么？实验结论：通过硅胶柱层析法可以有效地分离和纯化混合物中的有机物，实验结果符合预期要求。

实验中出现的问题及解决方案已在讨论中给出。

实验中可以改进的操作或步骤需要再次优化。

在实验操作中，应注意保持操作环境的清洁和安全，遵循实验室操作规程，准确记录实验数据，并在实验结束后将实验器材进行清洗和归还。

参考文献：[1] 硅胶柱层析法在有机化学实验中的应用[J]. 实验技术与管理，2010(4)：138-140.[2] 孙XX，李XX. 有机化学实验[M]. 北京：高等教育出版社，2019.。