高效液相色谱使用常见问题解决方法
高效液相色谱仪的几个使用问题 液相色谱解决方案
高效液相色谱仪的几个使用问题液相色谱解决方案1. 色谱柱中的流动相见排干吗？不少做色谱分别试验的人碰到过这样的情形：不慎未适时补充流动相，泵将溶剂瓶中的流动相吸干了，HPLC系统由此而停止工作了。
如此情况是否会损坏色谱柱？泵是否已将色谱柱中全部流动相都排干了？色谱柱还能使用吗？事实上，假如泵将溶剂瓶中的流动相吸干，并不会造成色谱柱的损坏。
即使泵中充分了空气，泵也不会将空气排入色谱柱。
由于泵只能输送液体，而不能输送空气。
相比之下，另一个更可能发生的情况是忘掉盖上色谱柱两端的密封盖或盖子太松而使色谱柱变干。
同样，整个色谱柱干枯的情况不太简单发生，多半可能只是色谱柱两端的几个毫米变干了，因挥发掉全部溶剂是色谱柱变干需要相当长的时间。
即使色谱柱真的变干了，也不愿定就不可救药了。
可以尝试用一种完全脱气的、表面张力低的溶剂（如经氦气脱气的甲醇）冲洗色谱柱以除去气体。
较低的表面张力有助于浸润填料表面；已脱气的溶剂应当能够溶解并去除滞留在填料中的气体。
色谱柱大约需要（以1mL/min的流速）冲一个小时或更多的时间被彻底浸润，恢复到正常状态。
2. 使用PEEK （polyetheretherketone）管路和接头需要注意什么问题？假如常常需要更改流路或更换不同品牌的色谱柱，使用PEEK 材料制成的管路和接头会特别便利。
PEEK管路简单连接；PEEK接头不仅无需工具，手拧即可固定，而且简单调整锥箍之外的管路长度，便利与不同品牌或规格的色谱柱相连接。
使用此类材料的管路需要注意的是：PEEK对卤代烷烃和四氢呋喃的兼容性不好。
虽然未察看到上述溶剂溶解PEEK材料的明显迹象，但PEEK碰到上述溶剂会变脆。
另一个西药考虑的因素是压力限。
不锈钢管可耐受6000psi的压力，但PEEK管只能耐受近4000psi （但多数HPLC应用系统压力不会超过3000psi）。
使用PEEK接头时则无需挂念接头耐溶剂性能，由于接头几乎或很少与溶剂直接接触。
高效液相色谱仪使用中常见故障及解决方法 液相色谱常见问题解决方法
高效液相色谱仪使用中常见故障及解决方法液相色谱常见问题解决方法1 高效液相色谱仪系统液相色谱仪紧要由贮液瓶、泵、进样器、柱子、柱温箱、检测器、数据处理系统构成。
对于整个系统而言，柱子、泵和检测器是核心部件同时也是易出问题的紧要部位。
2 常见问题及解决方法高效液相作为一种高精密仪器，假如在使用过程中不依照正确操作的话，就简单导致一些问题。
其中常见的就是柱压问题、漂移问题、峰型异常问题。
1.柱压问题柱压问题是使用高效液相色谱过程中需要紧密注意的地方，柱压的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分别效果及保留时间等紧密相关。
所谓柱压稳定并不是指压力值稳定于一个恒定值而是指压力波动范围在50PSI（3.3 Bar）之间（在使用梯度洗脱时，柱压平稳缓慢的变化是允许的）。
压力过高、过低都属于柱压问题。
压力过高：这是高效液相在使用中常见的问题，指的是压力蓦地上升，一般都是由于流路中有堵塞的原因。
此时，我们应当分段进行检查。
（1）.首先断开真空泵的入口处，此时PEEK管里充分液体，使PEEK管低于溶剂瓶，看液体是否自由滴下，假如液体不滴或缓慢滴下，则是溶剂过滤头堵塞。
处理方法：用30%的硝酸浸泡半个小时，在用超纯水冲洗干净。
假如液体自由滴下，溶剂过滤头正常，在检查；（2）.打开Purge阀，使流动相不经过柱子，假如压力没有明显下降，则是过滤白头堵塞。
处理方法：将过滤白头取出，用10%的异丙醇超声半个小时。
假如压力降至100PSI （6.7 Bar）以下，过滤白头正常，在检查；（3）.把色谱柱出口端取下，假如压力不下降，则是柱子堵塞。
处理方法：假如是缓冲盐堵塞，则用95%的水冲至压力正常。
假如是一些强保留的物质导致堵塞，则要用比现在流动相更强的流动相冲至压力正常。
假如按上面的方法长时间冲洗压力都不下降，则可考虑将柱子的进出口反过来接在仪器上，用流动相冲洗柱子。
这时，假如柱压仍不下降，只有换柱子入口筛板，但一旦操作不甚，很简单造成柱效下降，所以尽量少用。
高效液相色谱仪常见故障及解决方法
高效液相色谱仪常见故障及解决方法一、泵故障1. 故障现象：泵无法正常启动或启动后无法正常停止。
解决方法：检查泵头是否有污物堵塞，清除污物；检查泵头与控制器之间的连接线是否接触良好，如有松动，重新插紧。
2. 故障现象：泵的流量不稳定或无法调节。
解决方法：检查泵头是否有污物堵塞，清除污物；检查泵头与控制器之间的连接线是否接触良好，如有松动，重新插紧；检查泵头与柱塞之间的密封圈是否损坏，如损坏，更换密封圈。
二、流动相跑空1. 故障现象：流动相液位下降至最低液位以下，导致无法正常进样。
解决方法：检查流动相的储液瓶是否已空，如已空，重新更换储液瓶；检查流动相的流速设置是否正确，如不正确，重新设置流速；检查管路是否有泄漏点，如存在泄漏点，修复泄漏点。
2. 故障现象：流动相液位迅速下降，导致无法正常进样。
解决方法：检查废液瓶是否已满，如已满，倾倒废液；检查管路是否有堵塞或弯折，如有，更换管路或调整管路布局。
三、峰面积重复性差1. 故障现象：同一色谱条件下，每次运行同一色谱图时，峰面积重复性差。
解决方法：检查进样阀的切换次数是否过多，如过多，减少切换次数；检查进样针的清洗是否彻底，如不彻底，加强清洗；检查样品前处理的稳定性是否可靠，如不可靠，重新进行样品前处理。
2. 故障现象：不同色谱条件下，每次运行同一色谱图时，峰面积重复性差。
解决方法：检查流动相的组成是否恒定，如不恒定，重新配制流动相；检查色谱柱的稳定性是否可靠，如不可靠，更换色谱柱；检查检测器的波长是否准确，如不准确，重新调整波长。
四、峰丢失1. 故障现象：在色谱图中看不到预期的峰。
解决方法：检查进样针是否堵塞或断裂，如堵塞或断裂，更换进样针；检查进样阀的切换次数是否过多，如过多，减少切换次数；检查样品前处理是否可靠，如不可靠，重新进行样品前处理。
2. 故障现象：在流动相中添加了某种物质后，出现了预期之外的峰。
解决方法：检查流动相中添加的物质是否稳定，如不稳定，重新配制流动相；检查检测器的灵敏度是否足够高，如不够高，调整灵敏度；检查色谱柱的类型是否正确，如不正确，更换色谱柱。
高效液相色谱常见故障及解决方案
高效液相色谱常见故障及解决方案1.压力过高或过低-压力过高可能是由于柱堵塞或流动阻力增加所致。
解决方案包括更换柱、清洗柱或检查管路是否存在问题。
-压力过低可能是由于泵的磁力搅拌器不工作或进样器封堵所致。
解决方案包括检查泵的磁力搅拌器是否工作正常，清洗进样器。
2.峰形不对称-峰形不对称可能是由于进样量不均匀或柱温度过高所致。
解决方案包括确保进样量均匀和降低柱温度。
3.峰尾或前肩-峰尾可能是由于柱温度过高、流速过快或流动相pH值不合适所致。
解决方案包括降低柱温度、减慢流速或调整pH值。
-前肩可能是由于流动相中存在杂质或柱堵塞所致。
解决方案包括更换流动相或清洗柱。
4.杂峰或基线噪声-杂峰可能是由于样品纯度不高、固定相老化或试剂污染所致。
解决方案包括提高样品纯度、更换固定相或检查试剂是否污染。
-基线噪声可能是由于进样器密封不良、流动相气泡或电噪声所致。
解决方案包括检查进样器密封情况、减少流动相中的气泡或检查电子设备是否存在干扰。
5.柱寿命短-柱寿命短可能是由于样品预处理不彻底、柱收尾不当或流动相pH值不合适所致。
解决方案包括增加样品预处理步骤、正确收尾柱或选择合适的流动相pH值。
6.流量不稳定-流量不稳定可能是由于柱堵塞、进样器密封不良或流动相流速波动所致。
解决方案包括清洗柱、检查进样器密封情况或调整流动相流速稳定性。
7.进样量偏差-进样量偏差可能是由于进样器封堵、进样器针头磨损或进样器流速不稳定所致。
解决方案包括清洗进样器、更换进样器针头或调整进样器流速稳定性。
8.柱温度不稳定-柱温度不稳定可能是由于温控系统故障或环境温度变化所致。
解决方案包括检查温控系统是否工作正常或采取措施保持恒定环境温度。
这些是HPLC常见故障及其解决方案的例子。
在实际操作中，操作人员应该根据具体情况诊断和解决故障，并遵循相关的操作规程和安全操作指南。
高效液相色谱中常遇见的问题及处理方法
高效液相色谱中常遇见的问题及处理方法高效液相色谱中常遇见的问题及处理方法1 色谱柱跑干了，处理方法：将贮液瓶装入重蒸水，首先按purge键，将柱前气柱排出，若无法排出，可将色谱柱前拆下，用注射器抽吸。
待柱前气体排空后，连接色谱柱，用水高低流速交替冲洗色谱柱，直至柱压稳定为止。
2.基线不稳，有静电，处理方法：检查接地是否良好。
3.峰面积变化非常大，处理方法：检查是否进样阀堵塞。
4.基线突然提高，变粗，处理方法：检查样品池能量，若低于正常值，说明检测器污染。
5.柱压变动范围较大，处理方法：多为进气泡。
高低流速交替冲洗。
6.柱效或峰形突然变差，处理方法：更换预柱。
7塔板数低：色谱柱选择不对，二次保留、峰形不好的影响8色谱柱易变性：色说柱选择不对，二次保留的影响9色谱柱寿命短：色谱柱选择不对，样品需预处理（PH<3或PH>7）10保留值变化：色谱柱平衡不够，流动相比例改变11出现新的干扰峰：初始分离不够或初始样品无代表性选择波长要从以下几个方面考虑：1. 检测波长要大于溶剂截止波长。
如果所选择的波长下溶剂有很强的吸收当然是不合适的。
溶剂有强吸收后，基线抬高，减小检测的线性范围而且会加大基线噪声，对溶质的检测灵敏度下降。
2. 对各组分都要有适当的吸收。
一般是不可能做到的。
所以只要选择一个对大多数组分都有较大吸收的波长就可以了。
3. 外标法定量时，要选择被测组份最大吸收波长。
254nm 对常见的共轭结构和羰基官能团都有吸收。
对饱和基团也有弱的吸收。
而对于常见的乙腈、甲醇的透过率很高。
是在不知道用什么波长时最理想的试验波长。
（一）涡流扩散（Eddy diffusion）流动相碰到较大的固体颗粒，就像流水碰到石头一样产生涡流。
如果柱装填得不均匀，有的部分松散或有细沟，则流动相的速度就快；有的部位结块或装直紧密则流就慢，多条流路有快有慢，就使区带变宽。
因此，固相载体的颗粒要小而均匀，装柱要松紧均一，这样涡流扩散小，柱效率高。
高效液相色谱常见故障及解决方案
清洗柱或更换柱 清洗六通阀 清晰检测器
管路污染
冲洗
流动相中含有稳定剂 或稳定剂变化
使用无防腐溶剂
8.保留时间变 化
现象
保留时 间不重 复
判断
系统不问或未达 到平衡
室温波动大
柱被污染 溶剂配比不合适 进样体积太大或 样品浓度太高
故障排除
分析之前应有足够的时间 使系统平衡 使用柱温箱、将系统置于 恒温、空气对流小的环境 冲洗柱或更换柱 调节溶剂配比
检测器内有气泡
用甲醇或其他强极性的溶剂 冲洗流通池
用强极性的溶剂清洗系统
清洗检测器，在检测器后面 安装背景压力调节器
检测器灯能量不足
更换灯
12.规则基线 噪音
现象
规则基 线噪音
判断
故障排除
流动相、检测 器或泵内有气 泡
流动相脱气，冲洗系统除去检 测器或泵内的空气
室温不稳
稳定环境温度。使用柱温箱、 将系统置于恒温、空气对流小 的环境
鬼
洗脱物
峰
注射器脏
故障排除
用标准品对照、检查样品处理过程， 换新样品
增加分析时间或梯度洗脱、提高流 速、如问题仍存在，两次进样间用 强溶剂冲洗色谱柱
清洗注射器、冲洗进样口
现象
判断
故障排除
流动相被污染
清洗溶剂贮液瓶、清洗溶剂入 口过滤器、使用HPLC级试剂
色谱图 出现鬼 峰
柱被污染 六通阀污染 检测器污染
峰变 宽
环境温度变化 漏夜
使用柱温箱 检查漏夜的位置并维修
出现两个或多个未被完 全分离的物质的峰
选择其它色谱条件以改善分 离效果
检测器时间常数太大
使用较小的时间常数
4.峰分叉
高效液相色谱使用过程中的常见问题及解决方法
高效液相色谱使用过程中的常见问题及解决方法2014-07-02高效液相色谱技术,HPLC 是近期发展起来的一种具有高灵敏度、高选择性的高效快速分离、分析技术.它既能用于微量组分的分析测定，又能用于大量的制备分离，灵活多样，应用范围已超过其它各种分离方法。
如果HPLC使用人员能在分析样品之时就熟悉常见的问题并加以解决，就能避免许多麻烦，让您在HPLC使用过程中轻松应对。
1 高效液相色谱仪系统液相色谱仪主要由贮液瓶、泵、进样器、柱子、柱温箱、检测器、数据处理系统组成(见图1)。
对于整个系统而言，柱子、泵和检测器是核心部件，同时也是易出问题的主要部位。
2 高效液相色谱仪常见问题及解决方法高效液相色谱仪作为一种高精密仪器，如果在使用过程中操作不当的话,就容易导致一些问题，其中最常见的就是柱压问题、漂移问题、峰形异常问题。
2.1 柱压问题柱压问题是使用高效液相色谱过程中需要密切注意的地方，柱压的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分离效果及保留时间等密切相关。
所谓柱压稳定并不是指压力值稳定于一个恒定值，而是指压力波动范围在345kPa以内(在使用梯度洗脱时，柱压平稳、缓慢的变化是允许的)。
压力过高、过低都属于柱压问题。
2.1.1 压力过高这是高效液相色谱仪在使用中最常见的问题，指的是压力突然升高，一般都是由于流路中有堵塞的情况。
此时，我们应该分段进行检查。
①首先断开真空泵的入口处，此时PEEK管里充满液体，使PEEK管低于溶剂瓶，看液体是否自由滴下，如果液体不滴或缓慢滴下，则是溶剂过滤头堵塞。
处理方法：用30%的硝酸浸泡0.5h，在用超纯水冲洗干净。
如果液体自由滴下，溶剂过滤头正常，再检查。
②打开Purge阀，使流动相不经过柱子，如果压力没有明显下降，则是过滤头堵塞。
处理方法：将过滤头取出，用10%的异丙醇超声30min。
如果压力降至690kPa以下，过滤头正常，再检查。
③把色谱柱出口端取下，如果压力不下降，则是柱子堵塞。
高效液相色谱操作常见问题
⾼效液相⾊谱操作常见问题⾼效液相⾊谱的常见问题分析⼀、⾼效液相⾊谱仪操作步骤1)．过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。
2)．对抽滤后的流动相进⾏超声脱⽓10-20分钟。
3)．打开HPLC⼯作站（包括计算机软件和⾊谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。
4)．进⼊HPLC控制界⾯主菜单，点击manual，进⼊⼿动菜单。
5)．有⼀段时间没⽤，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。
冲洗泵，直接在泵的出⽔⼝，⽤针头抽取。
冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10 ml/min。
6)．调节流量，初次使⽤新的流动相，可以先试⼀下压⼒，流速越⼤，压⼒越⼤，⼀般不要超过2000。
点击injure，选⽤合适的流速，点击on，⾛基线，观察基线的情况。
7)．设计⾛样⽅法。
点击file，选取select users and methods，可以选取现有的各种⾛样⽅法。
若需建⽴⼀个新的⽅法，点击new method。
选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要⽽不同。
选完后，点击protocol。
⼀个完整的⾛样⽅法需要包括：a.进样前的稳流，⼀般2-5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading-inject转换；d.⾛样时间，随不同的样品⽽不同。
8)．进样和进样后操作。
选定⾛样⽅法，点击start。
进样，所有的样品均需过滤。
⽅法⾛完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。
全部样品⾛完后，再⽤上⾯的⽅法⾛⼀段基线，洗掉剩余物。
9)．关机时，先关计算机，再关液相⾊谱。
10)．填写登记本，由负责⼈签字。
⼆、注意事项：1)．流动相均需⾊谱纯度，⽔⽤20M的去离⼦⽔。
脱⽓后的流动相要⼩⼼振动尽量不引起⽓泡。
2)．柱⼦是⾮常脆弱的，第⼀次做的⽅法，先不要让液体过柱⼦。
3)．所有过柱⼦的液体均需严格的过滤。
4)．压⼒不能太⼤，最好不要超过2000 psi三、提⾼HPLC检测限、溶剂脱⽓等的⼏点经验1、仅针对⽤反相碳⼗⼋烷基硅烷化填料的柱⼦和紫外检测器的HPLC通常在理论教学时，HPLC分析总要求实⽤HPLC纯的试剂、⽤孔径⽐填料粒度⼩的微孔滤膜过滤流动相、最好⽤真空或氦⽓脱⽓。
高效液相色谱仪使用中常见故障及解决方法
高效液相色谱仪使用中常见故障及解决方法1 高效液相色谱仪系统液相色谱仪主要由贮液瓶、泵、进样器、柱子、柱温箱、检测器、数据处理系统组成。
对于整个系统而言，柱子、泵和检测器是核心部件同时也是易出问题的主要部位。
2 常见问题及解决方法高效液相作为一种高精密仪器，如果在使用过程中不按照正确操作的话，就容易导致一些问题。
其中最常见的就是柱压问题、漂移问题、峰型异常问题。
2.1 柱压问题柱压问题是使用高效液相色谱过程中需要密切注意的地方，柱压的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分离效果及保留时间等密切相关。
所谓柱压稳定并不是指压力值稳定于一个恒定值而是指压力波动范围在50PSI（3.3 Bar）之间（在使用梯度洗脱时，柱压平稳缓慢的变化是允许的）。
压力过高、过低都属于柱压问题。
2.1.1 压力过高这是高效液相在使用中最常见的问题，指的是压力突然升高，一般都是由于流路中有堵塞的原因。
此时，我们应该分段进行检查。
(1).首先断开真空泵的入口处，此时PEEK管里充满液体，使PEEK管低于溶剂瓶，看液体是否自由滴下，如果液体不滴或缓慢滴下，则是溶剂过滤头堵塞。
处理方法：用30%的硝酸浸泡半个小时，在用超纯水冲洗干净。
如果液体自由滴下，溶剂过滤头正常，在检查；(2).打开Purge阀，使流动相不经过柱子，如果压力没有明显下降，则是过滤白头堵塞。
处理方法：将过滤白头取出，用10%的异丙醇超声半个小时。
如果压力降至100PSI (6.7 Bar)以下，过滤白头正常，在检查；(3).把色谱柱出口端取下，如果压力不下降，则是柱子堵塞。
处理方法：如果是缓冲盐堵塞，则用95%的水冲至压力正常。
如果是一些强保留的物质导致堵塞，则要用比现在流动相更强的流动相冲至压力正常。
假如按上面的方法长时间冲洗压力都不下降，则可考虑将柱子的进出口反过来接在仪器上，用流动相冲洗柱子。
这时，如果柱压仍不下降，只有换柱子入口筛板，但一旦操作不甚，很容易造成柱效下降，所以尽量少用。
高效液相色谱常见问题原因及处理方法
高效液相色谱法一．仪器的维护与常见问题处理若液相出现规律性基线波动，长时间不平稳可能原因是什么？快速解决方法：一般为仪器系统出现气泡，最好使用纯甲醇长时间冲洗系统（不少于3小时，特殊情况要12小时左右）柱压逐渐升高可能原因是什么？快速判断①色谱柱出现堵塞②针座堵塞③进样针出现堵塞④系统管路中有未冲洗干净的盐⑤滤芯脏了解决方法①色谱柱出现堵塞：一种是将堵塞了色谱柱的位置拆卸，取出里面的筛网用水或甲醇超解（不建议采用，除非没有其他方法）另一种是将堵塞一头色谱柱链接在仪器上另一头不要链接，先用10%甲醇根据色谱柱柱压调节流速冲洗一小时左右，然后换成纯甲醇再以此方法继续冲洗，根据其柱压随时调整流速。
②针座堵塞与进样针出现堵塞：情况不严重则将它们拆卸后用水超解几分钟就可以了，若堵塞严重只有更换新的（堵塞不代表不能用，若无明显的质量损坏如：变形，滑口，开裂等，后续修好后还能做备件使用）③系统管路中有未冲洗干净的盐：用水或10%异丙醇对系统冲洗，冲洗后柱压正常，则可正常使用。
（注意不建议对系统反冲洗，会造成管路中的残留盐类物质重新回到系统中造成二次堵塞。
）④滤芯脏了：更换滤芯若出现保留时间飘移可能原因是什么？快速判断原因：①流动相混合不均匀②柱温不稳③压力不稳④密封圈松动⑤对于是四元泵的液相，其比例阀区域有堵塞情况（流动相是按比例配置，若比例阀区域堵塞，进样第一针时，可能有一个阀只进入25%另一个阀则是75%，进样第二针时则会变成一个阀进入20%，另一个阀80%）快速解决方法：①流动相重新配置，并按要求混匀②保证环境温度与仪器设定温度相差不大并稳定③系统冲洗平衡后方能实验④更换或调整密封圈⑤将出现堵塞区域的设备进行超声清洗。
1.气相检验化学残留：对照品重复性必须符合要求，但供试品重复性不做要求（上海海尼是对照品重复性必须符合要求，但配置两个供试品，各进一针不计算重复性。
目前海陵是对照品与供试品都要计算重复性）液相进样针无法正常采集?解决方法：一般为仪器机械故障，若进样器显示信号一直为红色，可能是进样针损坏或机械臂故障。
高效液相色谱中常遇见的问题及处理方法
每天用足够的时间来平衡色谱柱，您就会在处理问题方面获得最大的"补偿"，而且您的色谱柱的寿命也会变得更长！------ 一定得做！新的色谱柱在使用之前应该在您自己的液相色谱仪上进行性能测试，即使用色谱柱附带的检验报告上测试条件和样品来测定该色谱柱的柱效。
并且，在以后的使用中，应时常对色谱柱进行测试。
卡套柱的安装（不加预柱）1．将卡套架套入柱芯2．将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽，使柱芯高于夹套（见左图）3．将已套到柱芯上的卡套架向上推，直至高过夹套片4．将卡套帽和卡套架旋在一起，然后用手拧紧5．然后依同样的顺序连接好柱子的另一端6．连接到液相色谱仪，PEEK接头手拧即可；若为不锈钢接头应使用专用扳手注意：使用卡套柱时，两端的卡套应时刻连接在柱芯上。
不管您是平衡色谱柱或是清洗，任何时候都不能将卡套取下来，否则会造成填料的流失。
卡套柱的安装（加预柱）1．将卡套架套入柱芯2．将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽，使夹套高于柱芯（见左图）3．将已套到柱芯上的卡套架向上推，直至高过夹套片4．将"子弹头"预柱放入卡套片内5．将卡套帽和卡套架旋在一起，然后用手拧紧6．然后依同样的顺序连接好柱子的另一端7．连接到液相色谱仪，PEEK接头手拧即可；若为不锈钢接头应使用专用扳手更换色谱柱滤网和玻璃棉过滤片（同时可以修补色谱柱）注意：在取出反相柱芯的滤网和玻璃片之前，应该将色谱柱充分用水和甲醇/乙腈冲洗，而且修补工具的头部也应该蘸取少量的甲醇/乙腈，以避免在取出滤网和玻璃棉滤片时带出柱子内的填料。
1．将修补工具中的2套入柱芯的顶端2．将修补工具中的3轻轻地旋入已套着2的柱芯中，并顺时针方向旋转到旋紧3．一手握柱芯，另一只手轻轻地向外拉3，取出柱芯顶端的滤网4．用一个小铲子轻轻地取出滤网下面的玻璃棉以及被污染的填料5．将新的填料用甲醇润湿，然后填入挖去的部位，压平6．照（左图）装上新的玻璃棉滤网，并用修补工具中的4将玻璃棉压入柱芯顶端7．柱芯顶端套上2，然后参照（左图）将滤网放入8．压紧，然后取下2，再用4将滤网的边缘压平平衡色谱柱反相色谱柱在经过出厂测试后是保存在乙腈/水中的。
高效液相色谱使用常见问题解决方法
高效液相色谱使用常见问题症状：(一)保留时间变化可能的原因 : 解决方法1.柱温变化: 柱恒温2.等度与梯度间未能充分平衡 : 至少用10倍柱体积的流动相平衡柱3.缓冲液容量不够 : 用>25mmol/L的缓冲液4.柱污染 : 每天冲洗柱5.柱条件变化 : 稳定进样条件,调节流动相6.柱快达到寿命 : 采用保护柱(二)保留时间缩短可能的原因 : 解决方法1.流速增加 : 检查泵,重新设定流速2.样品超载 : 降低样品量3.键合相流失 : 流动相PH值保持在3~7.5检查柱的方向4.流动相组成变化 : 防止流动相蒸发或沉淀5.温度增加 : 柱恒温(三)保留时间延长可能的原因: 解决方法1.流速下降 : 管路泄漏,更换泵密封圈,排除泵气泡2.硅胶柱上活性点变化 : 用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱至钝化柱3.键合相流失 : 同前(二)34.流动相组成变化 : 同前(二)45.温度降低 : 同前(二)5(四)出现肩峰或分叉可能的原因: 解决方法1.样品体积过大 : 用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15%2.样品溶剂过强 : 采用较弱的样品溶剂3.柱塌陷或形成短路通道 : 更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件4.柱烧结不锈钢失效 : 更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品5.进样器损坏 : 更换进样器转子(五)鬼峰可能的原因: 解决方法1.进样阀残余峰 : 每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗2.样品中未知物 : 处理样品3.柱未平衡 : 重新平衡柱,用流动相作样品溶剂 (尤其是离子对色谱)4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱) : 每天新配,用抗氧化剂5.水污染(反相) : 通过变化平衡时间检查水质量，用HPLC级的水(六)基线噪声可能的原因: 解决方法1.气泡(尖锐峰) : 流动相脱气,加柱后背压2.污染(随机噪声) : 清洗柱,净化样品,用HPLC级试剂3.检测器灯连续噪声 : 更换氘灯4.电干扰(偶然噪声) : 采用稳压电源,检查干扰的来源(如水浴等)5.检测器中有气泡 : 流动相脱气,加柱后背压(七)峰拖尾可能的原因: 解决方法1.柱超载 : 降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相2.峰干扰 : 清洁样品,调整流动相3.硅羟基作用加三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH值,钝化样品4.同前(四)4 : 同前(四)45.同前(四)3 5. : 同前(四)36.死体积或柱外体积过大 : 连接点降至最低,对所有连接点作合适调整,尽可能采用细径的连接管7.柱效下降 : 用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱(八)峰展宽可能的原因: 解决方法1.进样体积过大 : 同(四)12.在进样阀中造成峰扩展 : 进样前后排出气泡以降低扩散3.数据系统采样速率太慢 : 设定速率应是每峰大于10点4.检测器时间常数过大 : 设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10%5.流动相粘度过高 : 增加柱温,采用低粘度流动相6.检测池体积过大 : 用小体积池,卸下热交换器7.保留时间过长 : 等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱8.柱外体积过大 : 将连接管径和连接管长度降至最小9.样品过载 : 进小浓度小体积样品液相色谱常见问题及处理方法HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法1、样品量不足，解决办法为增加样品量2、样品未从柱子中流出。
WATERSHPLC常见故障分析
WATERSHPLC常见故障分析WATERSHPLC（高效液相色谱）是一种常用的分析方法，用于分离和检测化合物。
然而，HPLC仪器在使用过程中一些常见故障可能会影响分析结果和实验的进行。
在以下的文章中，我们将探讨一些WATERSHPLC常见故障的分析和解决方法。
1.峰形不对称峰形不对称可能是由于流动相、柱等问题引起的。
首先，检查流动相是否正确配置，确保使用的溶剂无气泡和杂质。
其次，检查柱的状态，尽量避免在柱上运行样品时破坏柱的封底。
最后，还可以尝试调整梯度和流速等参数以改善峰对称性。
2.噪声干扰噪声干扰可能是由于仪器的光电检测器或环境因素引起的。
首先，检查光电检测器是否干净，清洁检测器表面以去除灰尘和杂质。
其次，尽量将仪器放置在安静的环境中，避免外部噪声的干扰。
最后，检查样品制备的过程，确保样品中没有杂质或颗粒。
3.漏液漏液可能是由于柱连接不紧密或密封圈老化引起的。
首先，检查柱连接是否紧固，确保连接件没有松动。
其次，检查密封圈的状态，及时更换老化的密封圈。
最后，还可以尝试调整流速和压力以减轻压力对密封的影响。
4.柱堵塞柱堵塞可能是由于样品中的杂质、柱背压增加或柱老化引起的。
首先，可以尝试使用过滤器或微孔过滤膜将样品预处理，去除样品中的颗粒和杂质。
其次，检查流动相的组分，避免出现析出物或结晶。
最后，定期检查柱背压，及时更换老化的柱。
5.柱效降低柱效降低可能是由于柱老化、样品残留或流动相组分改变引起的。
首先，定期检查柱的状态，及时更换老化的柱。
其次，对于含有高糖、脂肪或盐的样品，可以考虑进行前处理或柱后处理以减轻柱效降低的影响。
最后，检查流动相的组分，确保流动相没有杂质和过多的溶剂。
总结而言，WATERSHPLC常见故障的分析和解决方法需要综合考虑多个因素，包括流动相、柱、样品和仪器等。
通过仔细检查和调整这些因素，可以解决大多数故障，并确保HPLC仪器的正常运行和准确的分析结果。
液相色谱使用注意及保养
高效液相色谱(HPLC)使用中常见故障及解决方法（一）峰型异常问题峰型问题是液相的主要问题，在做液相过程中，我们就是要变换不同的条件来改善不好的峰型，对于各种各样的异常峰，要区别对待，从主要问题出发，一个一个加以解决。
1、色谱图中未出峰。
解决方法：系统未进样或样品分解；泵未输液或流动相使用不正确；检测器设置不正确；针对以上情况成因作相应调整即可。
2、一个峰或几个峰是负峰。
解决方法：流动相吸收本底高；进样过程中进入空气；样品组分的吸收低于流动相。
3、所有峰均为负峰。
解决方法：信号电缆接反或检测器输出极性设置颠倒；光学装置尚未达到平衡。
4、所有峰均为宽峰。
解决方法：系统未达到平衡；溶解样品的溶剂极性比流动相差很多；色谱柱尺寸及类型选择不正确；色谱柱或保护柱被污染或柱效降低；温度变化造成的影响。
、5、所出峰比预想的小。
解决方法：样品黏度过大；进样品故障或进样体积误差；检测器设置不正确．定量环体积不正确；检测池污染；检测器灯出现问题。
6、出现双峰或肩峰。
解决方法：进样量过大；样品浓度过高；保护柱或色谱柱柱头堵塞；保护拄或色谱柱污染或失效；柱塌陷或形成短通道。
7、前伸峰。
解决方法：进样量或样品浓度高；溶解样品的溶剂较流动相极性强；保护柱或色谱柱污染或失效。
8、。
解决方法：柱超载，降低样品量；增加柱直径采用较高容量的固定相；峰干扰，对样品进行清洁过滤；调整流动相；硅羟基作用，加入三乙胺，用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相pH值；柱内烧结不锈钢失效，更换烧结不锈钢；加在线过滤器，对样品进行过滤；死体积或柱外体积过大，将连接点降至最低；尽可能使用内径较细的连接管；柱效下降，更换柱子；采用保护柱，对柱子进行再生。
9、出现平头峰。
解决方法：检测器设置不正确；进样体积太大或样品浓度太高。
10、出现鬼峰。
解决方法：进样阀残余峰，在每次进完样后用充足的时间来平衡和清洗系统；样品中存在未知物，改进样品的预处理；流动相污染，更换新流动相，尽可能现配现用，隔夜的流动相再次使用时要过滤；尽可能使用HPLC级试剂；流路中有小的气泡，打开Purge阀，加大流速排除。
岛津高效液相色谱仪常见故障
岛津高效液相色谱仪常见故障
岛津高效液相色谱仪常见故障如下：
1. 流动相内有气泡：
解决方法：检查流动相是否脱气，流动相抽滤时要用氮气或干燥的空气顶走滤膜上面的流动相，过滤后的流动相放置时间不要过长，最好现用现配。
2. 基线漂移：
解决方法：检查流动相是否纯净，溶剂过滤，必要时用有机溶剂如甲醇或乙腈精制，确认输液泵流速是否正常，色谱柱是否被污染。
如果被污染可用0.05mol/L 的氢氧化钠溶液进行冲洗。
3. 噪音：
解决方法：检查流动相流速是否正常，色谱柱是否被污染。
如果被污染可用0.05mol/L的氢氧化钠溶液进行冲洗。
4. 峰形不对称：
解决方法：检查样品是否与色谱柱兼容，流动相流速是否正常，流动相比例是否改变，样品是否超载，如果出现这些情况可以进行相应的处理。
1。
高效液相色谱法分析中的常见问题与解决方案
高效液相色谱法分析中的常见问题与解决方案高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种现代化的分析方法，广泛应用于药物、食品、环境等领域。
然而，在实际应用过程中，常常会遇到一些问题。
本文将探讨高效液相色谱法分析中的常见问题，并提供解决方案。
1. 色谱峰分离不良在进行高效液相色谱分析时，首要问题就是色谱峰的分离不良。
造成这个问题的原因可能是样品组分过于复杂，或是色谱柱选择不当。
解决的方法包括：（1）优化样品前处理方法，如提取、净化等，以减少样品的复杂性；（2）调整流动相的组成和流速，或试用其他类型的色谱柱，以提高色谱峰的分离度。
2. 流动相持续泵出问题在HPLC分析过程中，流动相持续泵出是关键步骤之一。
当出现流量不稳定或持续泵出不工作的情况时，可以尝试以下解决方法：（1）检查管路是否有漏气现象，尤其是连接件的密封性；（2）清洗或更换柱子和过滤器，以防止堵塞；（3）检查、更换流量检测器，并校正流量计。
3. 柱寿命较短柱寿命的短暂是高效液相色谱法分析中常见的问题之一，主要原因是样品残留物的堆积、色谱柱废液的积累、和流动相的不合适。
针对这个问题可以采取以下措施：（1）对样品进行预处理，减少残留物的堆积；（2）定期清洗和维护色谱柱，保持柱的表面状况；（3）使用适当的流动相，避免酸性或碱性物质损害色谱柱。
4. 波峰畸变问题波峰畸变是指在色谱图上观察到的峰形呈现为不对称的情况，这可能是由于柱床不均匀、流量不稳定或是组分浓度过高引起。
解决这个问题的方法包括：（1）更换新的色谱柱，确保柱床的均匀性；（2）检查各部分的流量是否稳定，尤其是溶液的泵出和进样流速的稳定性；（3）适当稀释样品，以降低组分浓度。
5. 某些组分无法检测到当分析物无法检测到时，可以考虑以下解决方法：（1）确认所使用的检测器是否适用于分析物的检测，并检查检测器的灵敏度；（2）尝试使用其他检测器或改变检测器条件，如波长或电流；（3）检查样品制备方法是否完整，是否包含了分析物。
高效液相色谱仪器故障的诊断及其维修
高效液相色谱仪器故障的诊断及其维修液相色谱仪器是一种广泛应用于化学、生物和医药等领域的分离和分析仪器。
然而，由于长期使用或操作不当等原因，液相色谱仪器可能会出现故障。
本文将介绍一些常见的液相色谱仪器故障，并提供诊断和维修方法。
1. 压力异常当液相色谱仪器出现压力异常时，可能是由于柱堵塞或柱压力不足等原因引起的。
首先，可以检查柱是否堵塞，可以通过更换柱或者清洗柱来解决。
另外，也需要检查柱前的过滤器是否堵塞，如果是，则需要更换过滤器。
2. 泵故障液相色谱仪器的泵可能会出现泵头堵塞或密封件损坏等故障。
当出现这种情况时，需要检查泵头是否堵塞，并清洗或更换泵头。
另外，也需要检查泵的密封件是否完好，如果密封件损坏，则需要更换密封件。
3. 检测器信号异常检测器信号异常可能是由于检测器灯管老化或污染、检测器电路故障等原因引起的。
当出现这种情况时，可以先清洗检测器灯管或更换灯管；同时，也需要检查检测器电路是否正常，如果电路故障，则需要修复或更换电路。
总的来说，液相色谱仪器的故障诊断和维修需要具备一定的专业知识和技能。
在进行维修前，建议先查阅液相色谱仪器的使用说明书，了解其工作原理和结构，以便更好地诊断和解决故障。
同时，定期对液相色谱仪器进行维护和保养，可以有效地减少故障的发生，延长仪器的使用寿命。
液相色谱仪器（HPLC）是一种高效、精确的分析仪器，在化学、生物、药学等领域都有着广泛的应用。
然而，由于长期使用、操作不当或者设备老化等原因，液相色谱仪器也会出现各种故障。
在这种情况下，对仪器进行准确的故障诊断，并采取适当的维修措施，是保障仪器正常运行的关键之一。
4. 色谱柱问题液相色谱仪器中的色谱柱是重要的部件，若出现问题则会导致分离效果下降。
柱子可能会发生堵塞、损坏或老化，而影响分离效果。
如果怀疑柱子的问题导致了色谱仪器的故障，第一步就是检查柱子的状态。
可以通过更换柱子或者清洗柱子来解决这一问题。
此外，也要检查柱前的过滤器是否正常运行，如果过滤器故障，也会影响色谱仪器的运行。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
高效液相色谱使用常见问题 症状：
（一）保留时间变化
可能的原因：解决方法
1•柱温变化：柱恒温
2.等度与梯度间未能充分平衡：至少用10倍柱体积的流动相平衡柱
3.缓冲液容量不够：用＞25mmol/L的缓冲液
4.柱污染：每天冲洗柱
5.柱内条件变化：稳定进样条件，调节流动相
6.柱快达到寿命：采用保护柱
答：流速设定过高；流动相或进样中有机械杂质，造成保护柱、柱前 筛板或在线过滤器阻塞；流动相粘度过大；柱温过低；缓冲盐结晶； 压力传感器故障。
2、基线不稳，上下波动或漂移的原因是什么，如何解决？
答：a.流动相有溶解气体；用超声波脱气15-30分钟或用充氦气脱气
b.单向阀堵塞；取下单向阀，用超声波在纯水中超20分钟左右, 去处堵塞物
7.柱效下降：用较低腐蚀条件，更换柱，采用保护柱
（八）峰展宽
可能的原因：解决方法
1•进样体积过大：同（四）1
2.在进样阀中造成峰扩展：进样前后排出气泡以降低扩散
3•数据系统采样速率太慢：设定速率应是每峰大于10点
4.检测器时间常数过大：设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10%
5•流动相粘度过高：增加柱温，采用低粘度流动相
5.水污染（反相）：通过变化平衡时间检查水质量，用HPLC级的水
（六）基线噪声
可能的原因：解决方法
1•气泡（尖锐峰）：流动相脱气，加柱后背压
2污染（随机噪声）：清洗柱，净化样品，用HPLC级试剂
3.检测器灯连续噪声：更换氘灯
4•电干扰（偶然噪声）：采用稳压电源，检查干扰的来源（如水浴等）
5•检测器中有气泡：流动相脱气，加柱后背压
（七）峰拖尾
可能的原因：解决方法
1•柱超载：降低样品量，增加柱直径采用较高容量的固定相
2•峰干扰：清洁样品，调整流动相
3.硅羟基作用加三乙胺，用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流 动相PH值，钝化样品
4•同前（四）4 :同前（四）4
5•同前（四）35.:同前（四 ）3
6•死体积或柱外体积过大：连接点降至最低，对所有连接点作合适调 整,尽可能采用细内径的连接管
6.检测池体积过大：用小体积池，卸下热交换器
7.保留时间过长：等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱
8.柱外体积过大：将连接管径和连接管长度降至最小
9.样品过载：进小浓度小体积样品
液相色谱常见问题及处理方法
HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法
1、样品量不足，解决办法为增加样品量
2、样品未从柱子中流出。可根据样品的化学性质改变流动相或柱子
3、样品与检测器不匹配。根据样品化学性质调整波长或改换检测器
4、检测器衰减太多。调整衰减即可。
5、检测器时间常数太大。解决办法为降低时间参数
6、检测器池窗污染。解决办法为清洗池窗。
7、检测池中有气泡。解决办法为排气。
&记录仪测压范围不当。调整电压范围即可。
9、流动相流量不合适。调整流速即可。
10、检测器与记录仪超出校正曲线。解决办法为检查记录仪与检测器， 重作校正曲线。
为什么HPLC柱柱压过高
柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。其原因有多方面，而且 常常并不是柱子本身的问题，您可按下面步骤检查问题的起因。
1、拆去保护预柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压 仍高，再检查；
2、把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，否则是管路堵塞，需
清洗，若压力下降，再检查；
3、将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗 柱子，（此时不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动池）。这时，如 果柱压仍不下降，再检查；
4、更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明您的溶剂或样品含有颗粒 杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。 若柱压还高，请与厂 商联系。一般情况下，在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便 可避免柱压过高的问题，SGE提供的Rheodyne7315型过滤器就是 解决这一问题的最佳选择。
2.硅胶柱上活性点变化 ：用流动相改性剂，如加三乙胺，或采用碱至
钝化柱
3•键合相流失：同前（二）3
4.流动相组成变化：同前（二）4
5•温度降低：同前（二）5
（四）出现肩峰或分叉
可能的原因：解决方法
1•样品体积过大：用流动相配样，总的样品体积小于第一峰的15%
2样品溶剂过强：采用较弱的样品溶剂
3•柱塌陷或形成短路通道：更换色谱柱，采用较弱腐蚀性条件
4.柱内烧结不锈钢失效：更换烧结不锈钢，加在线过滤器，过滤样品
5•进样器损坏：更换进样器转子
（五）鬼峰
可能的原因：解决方法
1•进样阀残余峰：每次用后用强溶剂清洗阀，改进阀和样品的清洗
2.样品中未知物：处理样品
3•柱未平衡：重新平衡柱，用流动相作样品溶剂（尤其是离子对色谱）
4•三氟乙酸（TFA）氧化（肽谱）：每天新配，用抗氧化剂
（二）保留时间缩短
可能的原因：解决方法
1•流速增加：检查泵，重新设定流速
2.样品超载：降低样品量
3.键合相流失：流动相PH值保持Байду номын сангаас3~7.5检查柱的方向
4.流动相组成变化：防止流动相蒸发或沉淀
5.温度增加：柱恒温
（三）保留时间延长
可能的原因：解决方法
1•流速下降：管路泄漏,更换泵密封圈，排除泵内气泡
c.泵密圭寸损坏，造成压力波动；更换泵密圭寸
d.系统存在漏液点；确定漏液位置并维修
f.柱后产生气泡；流通池出液口加负压调整器
g.检测器没有设定在最大吸收波长处；将波长调整至最大吸收波 长处
h.柱平衡慢，特别是流动相发生变化时；用中等强度的溶剂进行 冲洗，更改流动相时，在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进 行冲洗。
2、流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等
3、柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡
快速变化现象
1.流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定
2、泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。
3、流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进 行适当混合
HPLC仪器问题
1、我的HPLC泵压明显的偏高，请问可能的原因？
液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？
1、筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换 柱子。
2、存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选 择性好的柱子
如何解决HPLC进行分析时保留时间发生漂移或急速变化
漂移现象
1、温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定