马铃薯组培苗污染原因及解决对策

马铃薯组培苗污染原因及解决对策

马铃薯是兴安盟重要经济作物之一，在居民日常饮食中有着不可或缺的地位，马铃薯组培苗是生产脱毒马铃薯的有效办法，全国各地马铃薯研究生产单位大多用这一方法生产，并取得了很好的效果。兴安盟农业科学研究所经过多年实践和探索，形成了一套完整全面的马铃薯组织培养生产体系。在生产过程中，控制污染率无疑是提高经济效益的有效途径之一，因此，采取相关措施降低组培过程中的污染，在生产中值得重视。经过一年的马铃薯组培苗工作经验，对马铃薯组培苗污染原因及解决对策提出我个人几点意见，希望和大家共同探讨。

1、污染原因

马铃薯组织培养中：常见的污染情况有细菌污染和真菌污染两大类，它们相应的污染源也就是细菌和真菌。

1.1细菌污染：若在接苗前发现培养基污染，可能是培养瓶口不干净而带有不易

被杀死的耐高压、高温的杂菌；或是培养基灭菌不彻底造成的；若在接苗后外植体周围发现细菌污染，则可能是植物材料本身带菌引起的，也可能是接苗工具消毒不彻底或是操作不规范造成的；或者是在接苗前没有及时发现污染苗，在接苗过程中由于交叉感染造成的。

1.2真菌污染：若在接苗前培养基表面存在大量真菌污染，多数情况是由于培养基瓶口封的不严或是培养基存放的环境中孢子浓度过大；培养基内部存在大量真菌污染，则可能是母液储备过程中已经被污染。接苗后的培养基表面存在真菌污染而且位置不定，如果是初期，可能是因为接种室真菌孢子浓度过大或是操作台不干净；如果是接苗后期发现污染，主要是因为封口不严或是培养材料本身就携带有内生菌；在培养过程中发现外植体周围出现真菌污染，可能是因为外置体材料本身就带有菌，只是菌源太小，再接苗时肉眼无法识别，当接到新的培养基里之后，才引起感染；若在培养基中发现污染的真菌是

零星分散在培养基中，则主要是培养基灭菌不彻底，或接种器械灭菌不彻底等造成的。

2 、降低马铃薯组培扩繁中污染率的有效措施

2.1材料表面灭菌

马铃薯组培中必须重视材料表面灭菌这一环节，否则就会影响进一步的培养工作。为了获得无菌材料，对室外采集来的外植体，先用自来水冲洗干净，然后根据材料大小的不同，选用不同种类的药剂，进行不同时间的表面灭菌。常用的药剂有：70%~75%的乙醇溶液，9%左右的次氯酸钠溶液和0.1%~0.2%的生汞溶液等。植物材料的灭菌，既要求将外植体表面的微生物彻底杀死，又要求尽可能少伤害外植体和表层细胞。用乙醇作杀菌剂，灭菌时间不宜过长，约30秒即可杀死外植体表面的绝大多数微生物。次氯酸钠溶液灭菌处理后易于除去，不留残毒，是组培过程中常用的杀菌剂之一。

2.2 注意培养基灭菌

用加压湿热灭菌法进行培养基灭菌，要求杀死全部微生物，包括抗热性最强的细菌芽孢，为了保证接苗用得培养基不带菌，做好降低污染率的第一步，在灭菌过程中需注意以下几个环节：

（1）当灭菌锅气压达到0.05pa时，进行一次冷空气排放，冷空气排放要彻底干净，否则压力表上的温度和压力指示与锅内物体实际的温度、压力不符，导致灭菌不彻底，是造成大面积培养基污染的主要原因。

（2）锅内需灭菌的培养基不能堆放过满，否则，将阻碍蒸汽的流通和热交换，使容器内升温减慢，造成培养基内部杀菌不完全。

（3）升温和降温速度不能太快，这样可以避免灭菌不彻底的情况出现。

2.3 掌握接种的基本技术环节

接种是组织培养中最关键的环节，接种过程中产生污染往往是不可避免的，我们采取措施只能是将污染降到最低限度，

控制在5%以内，除常规的消毒环节外，我从工作中总结，需注意以下几个问题：

1) 接种室保持干净，达到无菌组培室的要求。接种前对接种室进行20~30分钟紫外线杀菌，然后用75%的酒精在室内喷洒，做到降尘，保持接种室清洁无杂菌。

2) 对选用的基础苗用75%的酒精进行瓶外彻底消毒，并且要仔细检查所拿取的基础苗是否有被污染，否则，将会造成一瓶带菌的基础苗引发大量的接种组培苗被污染的情况。

3) 对接种用的器械杀菌要彻底。接种前用灭菌锅进行彻底灭菌；接种过程中，还要经常对镊子、剪刀等进行及用到的工具进行彻底消毒。接种过程中经常用75%酒精擦拭双手，时时刻刻保持清洁、无菌。

4) 无菌工作台上面物体堆放不能过满，否则造成气流不畅通，使操作区的空气得不到净化，最后造成污染。

2.4 注意组培苗生长环境的调控

苗的生长与培养条件，如温度、湿度、光照等密切相关，需要进行及时调控，以促进无菌繁殖。

1) 温度在接好的苗放到无菌培养室之后，温度需要控制在25℃左右的温度。一般低于15℃时，会造成培养组织生长出现停滞，而高于35℃对生长也不利。

2) 光照光照对植物的生长起着至关重要的作用，所以无菌培养室采光要非常好，必要时要用日光灯进行调节，最好保证每天16小时光照，8小时黑暗。

3) 湿度环境中的湿度会影响培养基的湿度，培养室湿度太低，培养基易失水、干裂，影响生长，过高则易引起培养基底部长霉，造成污染。一般要求70%—80%的相对湿度，过低应多洒些水，湿度过高可以采用通风排湿。

4) 消毒工作用75%的乙醇溶液每周做一次喷雾降尘，杀死空气中的真菌孢子以降低污染率。

3、结论与探讨

在这一年的工作中，使我对脱毒马铃薯的研究工作有了进一步的认识。马铃薯在日常生活中的经济效益是非常可观的，但是马铃薯在栽培过程中极易受病毒感染，并通过块茎逐代积累，从而出现马铃薯退化现象。而马铃薯的组培工作就是解决马铃薯的退化问题，使其保持优良的种性，达到高产、高效的目的。降低马铃薯组培苗污染率，提高脱毒种薯的使用面积，不仅能使我盟马铃薯产量大幅度增加，而且质量也会有显著提高，并给我们带来了巨大的经济和社会效益。