琼脂糖凝胶电泳部分注意事项
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目的检测是不是,纯度,质粒DNA构型(共价闭环双链质粒)分子量
电:分离的物质得带电,必须有电场
泳:有方向
碱性环境下DNA带负电,朝正极移动
电泳的速度与形线性,无序,球型不同状分子大小,越小越快电场给予推理阻力载体给予浓度低孔隙大重力作用不大
分子大小不同以不同速度移动
溴化乙锭嵌入DNA分子在紫外光显色
琼脂糖DNA标准品都是线段,Marker已知碱基对的种片段
通过比较确定分子量
电泳缓冲液TAE=Tris-EDTA 导电
上样缓冲液有色彩蓝紫色为主,溴酚蓝,两种还有二甲苯氢,提升比重蔗糖或甘油
容易辨别清晰指示情况,
溴化乙锭定性不能定量,纯度
实验材料仪器电泳仪电泳槽电源凝胶成像系统(紫外光激发荧光)离心机也可观察蛋白
明示正负极
封胶槽橡皮膏液面下孔隙内加样前面是溴酚蓝670,二甲苯酚4000多,样品在之间,可以指示时间小分子量的指示剂到三分之二的位置
电泳方向紫外透射分析仪蛋白也会污染。环状、线性、开环只开了一个势必影响大小