果胶酶提取银耳多糖的研究

目录

摘要 (1)

关键词 (1)

Abstract (1)

Key words (1)

1 前言 (2)

2 仪器、设备和试剂 (2)

2.1 材料、与设备 (2)

2.2试剂及溶液的配制 (2)

3.方法及试验步骤 (2)

3.1葡萄糖含量标准曲线的制作 (2)

3.2 银耳多糖的提取方法 (3)

3.3 银耳多糖含量的测定 (4)

4 结果与分析 (4)

4.1 银耳多糖含量测定结果 (4)

4.2 酶解法提取银耳多糖结果分析 (5)

5小结与讨论 (6)

参考文献 (7)

果胶酶提取银耳多糖的研究

摘要：国内常用的银耳多糖提取方法有热水提取法，酸碱提取法和酶解提取法等，其中酶解提取法具有提取时间短，条件温和等优点。本试验选取了酶解时间和提取时间作为研究对象，探讨了不同条件下银耳多糖的收率，由试验结果表明，解法提取银耳多糖的最适条件为：银耳与水的比例为1g:50ml,加入果胶酶浓度为1%，酶解时间45min,提取时间60min。

关键词：果胶酶；银耳多糖；酶解

On Pectinase extract of Tremella polysaccharides

Abstract:Tremella polysaccharide extraction of hot water extraction method, the acid-base extraction and enzymatic extraction, enzymatic extraction with extraction time is short, under mild conditions. This test selected the study of enzymatic hydrolysis time and extraction time to explore the Tremella polysaccharides yield under different conditions, the results showed that the optimal conditions of the solution extract of Tremella polysaccharides: white fungus and water ratio 1g: 50ml join the pectinase concentration of 1%, the hydrolysis time was 45min, extraction time 60min.

Key words: Pectinase; the Tremella polysaccharide; enzymatic

1 前言

银耳俗称白木耳，是一种高等真菌，属于有隔担子菌亚纲银耳科。银耳作为药食两用的食用菌已久负盛名。传统汉方医学认为，它具有润肺生津、滋阴养胃、益气和血和补脑强心等功效。现代生物医学研究表明，银耳中多糖物质具有提高机体免疫力、降血糖、降血脂、抗衰老、抗溃疡、抗血栓形成，还可增强机体耐缺氧能力，清除自由基，抑制肿瘤等作用。

我国银耳资源丰富，为开发应用银耳多糖提供了有利条件。近年来，有关银耳多糖的研究越来越多，但这些研究多为银耳多糖的化学特性和药理作用方面的研究，少有关于银耳中提取银耳多糖的研究。目前银耳多糖的提取方法多为热水浸提法或酸碱法提取，但热水浸提法耗时过长，且收率较底，费时费力，因此不适合大规模的工业生产，而酸碱法提取虽然提取时间较短，却会破坏银耳多糖立体旋光活性结构，降低甚至失去银耳多糖的生物活性，使提取到的银耳多糖药用效果大大下降。因此，建立高效、经济的银耳多糖提取方法是具有积极意义的。

本试验主要研究使用果胶酶酶解银耳，热水提取的技术来提取银耳多糖的方法。且如今生物工程工艺发展迅速，各种生物制品价格也不断下降，这为用酶解法提取银耳多糖提供了方向和可行性。用酶解法提取银耳多糖不仅能大大缩短单纯用热水法提取的时间，也不会像酸碱法那样破坏银耳多糖的生物活性。因此找出最适的酶解银耳提取银耳多糖的条件是具有实用和良好的现实意义的。

2 仪器、设备和试剂

2.1 材料、与设备

101型电热鼓风干燥箱（北京市永光明医疗仪器厂）

YP202N型电子天平（上海精密科学仪器有限公司）

HH系列恒温水浴锅（苏州金坛中大仪器厂）

电子万用炉（北京市永光明医疗仪器厂）

TDZ5-WS型台式低俗离心机（长沙湘麓离心机仪器有限公司）

722E型可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司）

2.2试剂及溶液的配制

银耳(市售)

葡萄糖(分析纯):取1g葡萄糖加入1000ml容量瓶中，定容至1000ml;

果胶酶：按100ml:1g加入果胶酶

苯酚（分析纯）：精确量取6ml苯酚放入100ml容量瓶中，定容至100ml;

浓硫酸(发烟硫酸)

3.方法及试验步骤

3.1葡萄糖含量标准曲线的制作

取5支洁净的试管，分别标记为1、2、3、4、5号管，依次加入标准糖溶液0mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL和水1.0mL、0.8mL、0.6mL、0.4mL、0.2mL，再分别加入苯酚试剂1mL，浓硫酸5mL，混匀，室温放置30min，冷却后，在490nm 波长处测定吸光值，绘制含糖量标准曲线。

糖含量测定标准曲线制作

管号 1 2 3 4 5

标准糖溶液

0 0.2 0.4 0.6 0.8

/mL

蒸馏水/mL 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2

苯酚试剂/mL 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0

浓硫酸/mL 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0

糖含量标准曲线A值测定结果

管号 1 2 3 4 5 糖含量/mg 0 0.2 0.4 0.6 0.8 A值0 0.228 0.425 0.663 0.980

糖含量标准曲线

得到糖含量标准曲线为y = 1.1975x - 0.0198 （糖含量为横坐标，A值为纵坐标）方程的R2为0.992，具有较高拟合度，可以作为糖含量的标准曲线。

3.2 银耳多糖的提取方法

取市售银耳适量，洗净，70℃烘干后，破碎成粉末状，称取粉末0.5g（2%），果胶酶0.25g （1%），同时加入蒸馏水25mL，迅速置于45℃水浴锅中酶解，3个样品为一组，第一组酶解30min，第二组酶解45min，第三组酶解60min。酶解后迅速升温至98℃将酶灭活，然后每组样品分别于98℃水浴中保温浸提30min,45min,60min，浸提完成后置于冷水中冷却至室温，然后于4500rpm离心分离10min，最后取上清液待用。