分子生殖生物学

第一章男性生殖系统的结构与功能

1．管壁上皮由支持细胞和生精细胞组成；

2．生精细胞包括精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞和精子。

3．生精小管界膜的功能

⑴界膜是生精上皮和睾丸间质进行物质交换的通道，是构成血睾屏障的组成成分，对精子发生起重要作用；

⑵界膜的细胞外基质对支持细胞的分化、正常形态结构维持、细胞间紧密连接的形成以及正常功能的行使有重要调节作用；其储存的生长因子对精子发生和雄激素合成有调节作用；

⑶肌样细胞能够收缩，有助于精子向附睾方向输送；肌样细胞受损，界膜可发生病理性增厚；

⑷肌样细胞分泌的肌样细胞刺激支持细胞因子(peritubular modifees sertoli, PMods)对支持细胞合成、分泌ABP、运铁蛋白具有强烈的刺激作用，分泌的其他因子如TGF、TGF、IGF-1和睾丸其他细胞分泌的因子共同构成生长因子网络，对睾丸的功能起局部调节作用。

4．支持细胞的功能

1). 支持细胞参与形成血睾屏障，创造了相对稳定的生精内环境。

2). 支持细胞有支持生精细胞和促进生精细胞转位及精子释放的作用。

3). 支持细胞有旺盛的分泌功能。

4). 支持细胞有营养生精细胞的作用。

5). 支持细胞有免疫屏障功能。

5．精细胞完成转位及精子释放于生精小管管腔中，都是在支持细胞作用下完成的，依据如下：

①精子释放是不同因子直接作用于支持细胞的结果。

②支持细胞能合成分泌纤溶酶原激活因子和其他蛋白水解酶，生精细胞移位和精子释放需要这些酶。

③生精细胞的运动与自身无关，但依赖于支持细胞骨架系统的完整。

④支持细胞隆突和胞浆特化复合体参与了生精细胞转位和精子释放。

6．精子发生：将精原细胞增殖、精母细胞减数分裂到精子形成的连续发育过程，称为精子发生（spermatogenesis）。

7．精子形成：精子细胞不再分裂，经过结构复杂的变化过程，由球形转变为蝌蚪形的精子，这个过程称精子形成(sperminogenesis)或精子变态。

8．血睾屏障：

（1）在生精小管和血液之间存在的防止二者之间大分子物质交换的结构。

（2）广义的血睾屏障由毛细血管管壁、睾丸间质内的结缔组织、生精小管的界膜和支持细胞的连接复合体四部分组成。

（3）狭义的血睾屏障指支持细胞间的连接复合体。

（4）血睾屏障对维持生精微环境具有关键性作用。

9．间质细胞：又称Leydig 细胞，具有分泌类固醇激素细胞的特征。3β-羟甾脱氢酶是间质细胞的标志酶。10．间质细胞的功能：

（1）合成雄激素

（2）间质细胞能分泌一些非甾体类激素、生长因子等，这些因子对支持细胞和间质细胞自身的分泌功能具有调节作用。

（3）间质细胞也可分泌少量的雌激素

11．精子发生包括三个阶段：

精原细胞增殖阶段：精原细胞—有丝分裂—→精母细胞

精母细胞成熟分裂阶段：精母细胞—减数分裂—→精子细胞

精子细胞演变阶段：精子细胞—变态—→精子

12．FSH、LH、雄激素是哺乳动物和人精子发生主要的调节因素。

生精细胞没有雄激素和FSH的受体，而支持细胞和肌样细胞有FSH和雄激素的受体。

FSH、雄激素调节精子发生主要是通过支持细胞、肌样细胞起作用，而不是直接作用于生精细胞。13．激素调节的基本模式：下丘脑－垂体－生殖腺轴系在精子发生调节中发挥中心作用。

14．睾丸内的睾酮处于高水平的原因：

（1）睾丸中存在某种机制以维持间质中高的睾酮水平，并同时限制其向血中扩散或转移。

（2）Sertoli细胞向间质中大量分泌雄激素结合蛋白ABP，同时，间质中存在与血清中相似浓度的白蛋白。（3）Leydig细胞绝不贮存睾酮，而是分泌所有生产的睾酮。分泌的睾酮首先进入间质，再扩散入曲细精管或入血。

15．睾酮支持精子发生的机制：

（1）睾酮通过其受体发挥调节精子发生的作用。受体分布在Leydig细胞，管周细胞和Sertoli细胞核内，在生殖细胞中没有发现其存在。

（2）睾酮维持精子发生并非直接作用与生精细胞，而是通过Sertolil细胞或曲细精管周围的肌样细胞间接调节精子发生。

（3）睾酮缺乏时，并非所有生精细胞都降解—睾酮并非作用于精子发生全过程，而仅仅作用于精子发生的某一个或几个时期。

16．FSH作用机制

FSH→支持细胞膜的FSH受体→激活腺苷酸环化酶AC→产生第二信使cAMP，诱导cAMP聚集→产生第二信使cAMP，诱导cAMP聚集→PKA被激活，调节Sertoli细胞功能→生产雄激素结合蛋白ABP、运铁蛋白等→ABP与雄激素结合形成复合物，维持睾丸及生精小管内雄激素的高浓度，维持生精微环境。17．精子发生的睾丸局部调节：

生精小管是精子发生的微环境

ECM与CAMs是生精细胞转位的物质基础

ECM由胶原蛋白、蛋白多糖、弹性蛋白和ECM糖蛋白组成。ECM介导细胞黏附、增殖分化和运动。

CAMs由四大家族：整合素lectin、选择素、依赖Ca2+粘连素、不依赖Ca2+样CAMs

18．精子发生的基因调节

一、原癌基因小鼠原癌基因表达产物包括：

蛋白激酶家族：c-kit、c-abl、c-raf、c-mos、prim-1

具有GTP酶活性的GTP结合蛋白：c-ras

转录因子：c-fos、c-jun

wnt-1原癌基因

二．减数分裂基因：Ott 基因

三、DNA复制相关基因

DNA聚合酶ε不仅在有丝分裂复制中起作用，同时在精子细胞的DNA损失修复中可能起作用。

DNA聚合酶α和ξ除在增殖的精原细胞DNA复制中起作用外，还参与了减数分裂前期的DNA合成。

四、细胞周期蛋白基因Cdc25的基因产物是一蛋白磷酸酶，可水解Thr14 、Tyr15 的磷酸根，促进MPF活性。Cdc25 基因参与生精细胞有丝分裂和减数分裂细胞周期的调节。

周期蛋白cyclin 周期蛋白依赖性蛋白激酶CDK或cdc

成熟促进因子MPF：CDK1/cdc2 (34kd)+cyclinB (45kd)

五、调节核蛋白转型基因

精子发生的特征性生化事件之一是：体细胞组蛋白逐渐被睾丸特异的生精细胞组蛋白变异体代替。

精子细胞核蛋白的正常转换是精子头形成的先决条件。

六、细胞骨架蛋白基因肌动蛋白actin和微管蛋白tubulin

七、温度相关基因热休克蛋白（heat shock protein,HSP）在精子发生过程中广泛表达。

八、同工酶基因

糖酵解途径中的几个酶在生精细胞中有特异的同工酶：LDH、细胞色素c、磷酸甘油激酶、3-磷酸甘油醛脱氢酶GAPD

第二章精子的附睾成熟及获能

1．当精子通过附睾头部、体部并转运到尾部近侧端时，就获得了前向运动和使卵子受精的能力，这一过程称为附睾精子成熟。

2．附睾具有高速胆固醇合成能力，同时胆固醇被成熟精子转运至质膜。

胆固醇是精子成熟过程中转变膜特性的关键分子之一。

胆固醇具有稳定精子膜的作用；有利于精、卵在雌性生殖管道中经过各种不利的微环境。

3．人及哺乳动物精子在离开生殖管道时，还不能立即与卵子受精，必须在雌性生殖道内经历一段成熟过程，才能获得受精能力，这一现象称为精子获能。

4．钙离子内流和活性氧ROS的产生似乎是精子获能中最早发生的事件。它们可能参与人精子获能中起重要作用的腺苷酸环化酶AC的激活。

哺乳动物精子核结构稳定源于其精子核蛋白中二硫键的广泛交互连接。

5．精子在附睾尾部和输精管中呈现微弱运动，一旦它们与获能培养基接触后，精子立即被激活，呈现爆发式的急剧运动，将此运动称为激活运动（activation movement）。

6．精子在获能培养数小时后，聚集的精子逐渐散开，解离出来的精子在培养基中自由地快速运动，表明精子表面特性发生了改变并开始获能，将这一运动称为超激活运动(hyperactivated motility, HAM)。超激活运动是一种非直线性运动，是典型的“8字型”运动。

7．超激活运动的生理意义

（1）超激活运动中的非直线性运动有助于精子从输卵管峡部释放出来。

（2）精子急剧的尾部运动所产生的强有力的穿刺能量推进精子穿过黏滞的输卵管液和相对坚韧的卵的透明带。

（3）精子超激活运动与精子穿过透明带能力息息相关。

（4）如果精子在雌性生殖道的不当之处提前发生超激活运动，必将导致精子能量耗竭和受精失败。

8．超激活运动的机制

⑴激活运动的启动和维持需胞外Ca2+ 的存在。

⑵精子局部含G蛋白和蛋白激酶。

第三章女性生殖系统的结构与功能

1．卵泡发育与成熟的一般过程

哺乳动物出生前后，卵原细胞停止增殖，停滞于第一次减数分裂前期称为初级卵母细胞。

经细线期、偶线期、粗线期，发育到双线期，至核网期。此时的细胞核称为生发泡（GV）。

性成熟后，在促性腺激素或其他因子的作用下，卵母细胞恢复减数分裂，发生生发泡破裂(germinal vesicle breakdown, GVBD)，排出第一极体，并发育到第二次减数分裂中期（MⅡ）成为一个成熟卵母细胞，从卵巢释放。

2．卵丘：随着卵泡液的增多，卵泡腔扩大，初级卵母C+透明带+放射冠突入卵泡腔内, 形成卵丘。

卵泡细胞表达FSH受体，卵泡膜细胞表达LH受体.

3．排卵：成熟卵泡破裂，次级卵母C+放射冠+透明带+卵泡液,一起从卵巢排出的过程称排卵。

发生时间: 月经周期的第14天

4．排卵后，残留的颗粒层和卵泡膜向腔内塌陷，卵泡膜的CT和毛细血管也伸入颗粒层，逐渐演化成具有内分泌功能的细胞团，新鲜时呈黄色，故称黄体。

5．黄体的细胞构成

颗粒黄体细胞：孕酮和松弛素。

膜黄体细胞：雌激素。

6．MPF是一种在G2期形成、能促进M期启动的调控因子，为一种丝/苏氨酸蛋白激酶，在G2期进入M 期时起着重要的作用。

MPF由两种蛋白质组成，一种为细胞周期蛋白cyclinB，另一种为细胞周期蛋白依赖激酶cdc2/CDK1 cyclinB的合成和积累是导致卵母细胞减数分裂恢复的关键所在。

MPF的cdc2亚基的Tyr15和Thr14处于磷酸化状态时，使MPF处于无活性状态。

而cdc2上的Thr161的磷酸化则直接促进cdc2与cyclinB结合成复合体

7．卵母细胞的发育成熟伴随几次发育停滞状态：

第一次停滞在减数分裂前期的双线期，称为前期停滞的卵母细胞，自卵泡取出的卵母细胞处于这一时期——GV期；超越这个阻滞后发生从G2向M期转变，即由GV期发生GVBD向MI期转变；

第二个停滞是卵母细胞成熟至MⅡ期后，在该期维持较长时间，直到受精，卵母细胞才离开MⅡ期并获得继续发育的能力，次期为MⅡ期停滞。

8．MPF活性变化

MPF活性出现在GVBD时，并在此时达最大值，进入中期和后期时，MPF活性下降；到MⅡ期时又提供到最大值，并在MⅡ期维持数小时。

9．cyclinB的降解是细胞从分裂期跳出，进入静止期的决定因素。

10．MPF活性调节

W ee1 、Myt1磷酸化Thr14、Tyr15，抑制MPF活性。

Cdc25的基因产物是一蛋白磷酸酶，可水解Thr14 、Tyr15 的磷酸根，促进活性。

cdc2激活激酶（cdc2 activating kinase, CAK) 催化Thr161/160磷酸化；脱磷酸化则由蛋白磷酸酶KAP或PP2A催化。

11．从G2 →M相的转变

（1）激素诱导和蛋白质合成依赖性途径受促性腺激素（FSH、LH）的作用，少数卵泡成为优势卵泡并排卵，卵泡的募集（recruitment）和优势卵泡的选择（selection）是通过雌性激素，如孕酮和雌二醇作用完成的。

（2）自动催化扩增途径这一调节是在翻译水平上，由活性MPF对pre-MPF分子进行修饰，称为自动催化扩增。MPF活性的扩大不需要蛋白质合成；也证实前期停滞的卵中应该有pre-MPF存在，使有活性MPF增加，又促使更多的pre-MPF激活，可在短时间内迅速提高MPF水平。

12．孕酮的作用是（1）刺激细胞内cyclin的合成。（2）通过抑制wee I和myt-1激酶起作用。13．cyclinB降解和MPF失活是细胞离开M相进入后期所必需的，而cyclinB的降解是MPF失活的前提条件。

14．cyclinB的结构分为两部分：

N-末端区作为cyclinB被降解的靶目标，其中的保守性序列，被称为“降解盒（destruction box，D盒）”。C-末端区作用是与cdc2结合，并使cdc2激活。

15．cyclinB的降解是通过一条普遍存在的蛋白依赖性蛋白水解系统，以cyclinB为降解目标的特异性在于蛋白水解系统的蛋白-蛋白连接酶，是一种20S的称为后期促进复合体（anaphase-promoting complex，APC）的分子。

16．由M相向后期转变，这一时期重要的现象是姊妹染色单体的分离。

D盒依赖性水解作用是姊妹染色体分离和进入后期所必须的。

17．MⅡ期卵母细胞的维持：

卵母细胞中存在细胞静止因子（CSF），即高活性的CSF维持MPF处于高活性状态，从而使卵母细胞保持在中期。

CSF是一族作用相似的活性物质。至少包括c-mos产物、MAP激酶和cdk2。

CSF的作用是抑制停滞于MⅡ期卵内的cyclinB的降解。通过维持cyclinB的这种动态平衡而使MPF保持高活性。

MⅡ期维持也依赖于纺锤体的三维组合

18．cAMP及其类似物dbcAMP，磷酸二脂酶（PDE）的抑制物，腺苷酸环化酶和能激活腺苷酸环化膜的物质如forskolin等，都能抑制GVBD的发生。

第四章顶体反应及穿过透明带

1．精子获能和顶体反应是受精的前提。

2．顶体酶(acrosin)是一种丝氨酸蛋白水解酶，在顶体反应中起关键作用，参与透明带的结合及其穿透；

透明质酸酶在精子穿过卵丘细胞时起重要作用；

酸性蛋白酶和芳香基硫酸酯酶协同透明质酸酶降解卵丘细胞基质。

3．顶体反应至少有双重功能：使精子穿越；是精子质膜与卵质膜融合的必要前提。

4．自发性顶体反应是指在获能培养基中没有任何刺激因子存在下，以活动的精子发生顶体反应者为自发性顶体反应。

5．人透明带由三种糖蛋白成分组成，称为ZP1、ZP2、ZP3。

ZP3和精子质膜上的ZP3受体介导了精子与卵子透明带之间的初级识别，ZP3与精子结合诱发顶体反应的发生。

ZP2与顶体反应的精子相互作用，构成精子与卵子透明带之间的次级识别和结合。

ZP1不与精子直接作用，主要具有结构支撑功能，他把ZP2、ZP3和细丝横向连接起来，构成透明带的三维构象

6．小鼠透明带主要由3种糖蛋白组成：ZP1、ZP2和ZP3，三种透明带在卵子发生过程中合成并分泌。

ZP2占10％，其功能为阻止多精受精，ZP3占25％，作用为精子受体及顶体反应诱发物，ZP1占10％，起ZP2和ZP3的连接作用。

7．小鼠ZP3蛋白有两个来源和两个时期合成：一是来源于卵母细胞；二是来源于卵丘及颗粒细胞。

第一个合成时期是卵母细胞最初的生长时期，此时由卵母细胞合成并分泌ZP3蛋白，构成透明带内表面。第二个合成时期是卵母细胞生长后期，此时卵母细胞内ZP3蛋白合成减弱，而卵丘和颗粒细胞开始大量合成和分泌ZP3蛋白，构成透明带的外表面。

8．精子受体：与精子结合的卵子表面成分，称为精子受体（sperm receptor）。

卵子结合蛋白：与卵子结合的精子表面成分，称为卵子结合蛋白（egg-binding protein）。

9．精子和卵子之间的种属特异性的黏附和结合是通过精子表面的卵子结合蛋白与卵子表面的精子受体相互作用而实现的。

10．小鼠卵ZP3与精子质膜上的特异受体结合后，形成受体-配体复合物，有两种功能：

一是使精子附着在透明带上，另一功能是激发精子发生顶体反应。ZP3是精子的初级受体。

11．顶体反应发生后，精子质膜脱落，精子表面与ZP3结合的受体也随之丢失。此时，精子与透明带间发生次级识别或称二级识别。

透明带中负责与精子发生次级识别的是ZP2。

12．获能精子与透明带结合是一种强烈的化学结合，这是由透明带表面的初级精子受体与精子质膜表面的初级卵子结合蛋白相互作用而完成的。

13．精子－透明带相互作用是一个复杂的现象，至少由三个步骤组成：

①顶体完整的精子与透明带结合－透明带初级结合；

②正在顶体反应和完成顶体反应的精子与透明带结合－透明带次级结合；

③完成顶体反应的精子进入并穿过透明带。

14．精子表面的初级卵子结合蛋白位于精子顶体区质膜上，与卵子透明带上的初级精子受体ZP3相互作用，诱发顶体反应的发生。

次级卵子结合蛋白位于顶体反应后精子的表面，即顶体内膜上，与次级精子受体ZP2相互作用，在精子穿过透明带过程中，始终使精子与透明带结合。

15．卵子结合蛋白

（1）Β－1，4半乳糖苷转移酶是初级卵子结合蛋白。

（2）sp56

（3）透明带受体激酶

透明带受体激酶（zona receptor kinase，ZRK），又称p95，是一种跨膜受体，具有酪氨酸蛋白激酶活性。P95蛋白既是酪氨酸激酶的底物，又具有内在的酪氨酸激酶活性。

16．顶体反应是由信息传递系统调控的。

顶体反应依赖于细胞外Ca 2+内流。

顶体反应时调节Ca 2+进入胞内机制的假说：Na+/Ca 2+反转运子起重要作用

17．精子膜由蛋白质和脂类组成。膜脂类主要由胆固醇和磷脂两部分构成。

18．在精子获能期间，顶体外膜和质膜上的溶血磷脂酰胆碱（lysoptdcho）含量显著下降。

19．DAG的作用是激活PKC；DAG还可提高精子中PLA2和PLD活性。

20．精子膜上至少存在两类RZP（精子膜上ZP受体）：一类激活磷脂酶C（PLC）β1G蛋白－偶联受体；另一类是与PLCγ偶联的酪氨酸(PTK)受体。

21．孕酮（P4）刺激顶体反应依赖于胞外Ca 2+内流。

第五章卵子的孤雌激活

1．孤雌激活：无雄性配子的任何作用，由雄性配子产生的胚胎，不论其是否发育成个体。

2．孤雌激活的人工激活方法：物理性刺激和化学性刺激。

物理性刺激包括机械刺激、温度刺激和电刺激处理。

化学性刺激二价阳离子或钙离子载体、细胞松弛素B、酶刺激、渗透压处理等。

3．影响卵母细胞激活的因素卵龄、激活方法和激活剂的控制。

第六章受精前、后雄性配子核蛋白的重组及再重组

一. 哺乳动物精蛋白的分类及蛋白一级结构的特点

P1型：存在于所有哺乳动物精子中(进化上非常保守,有50个氨基酸残基，富含精氨酸和半胱氨酸，其N端6个氨基酸均为ARYRCC，此外还含有5～7组精氨酸结构)

P2型：仅存在于人、小鼠和仓鼠等少数哺乳动物精子中(富含精氨酸、组氨酸和半胱氨酸，在结构上与P1精蛋白的主要差异在于富含组氨酸，约25％～30％精氨酸被组氨酸取代)

二. 精蛋白的主要生理功能

1.浓缩核并使精子伸长成流线型；

2.保护精子遗传信息；

3.使精子基因组在受精卵内胚胎开始发育前处于稳定的不活跃状态。

第七章 哺乳动物体外受精

● 体外受精(in vitro fertilization, IVF)是指在体外环境完成精卵结合的过程。

第二极体的排放和原核的形成是判断受精是否发生的直接标准。

一. 影响卵母细胞体外成熟的因素

（一）卵母细胞来源: 动物种类, 动物年龄, 卵母细胞类型, 卵巢运输

（二）生化因子:

1、第二信使因子：cAMP,cGMP 和cCMP

2、钙

3、甾类激素

4、卵母细胞成熟抑制因子(OMI)

（三）细胞关系: 主要是缝隙连接

（四）培养条件: 温度，气相（常用的气相有两种: 含5％CO2的空气；5％ CO2 ＋5％O2＋90％N2）

(CO2很关键，它是培养基缓冲体系维持正常pH 所必需的。), 静止或流动的培养系统, 培养基(水，血清, 血清替代品)

二．体外受精时常见的异常情况: 多精受精、卵母细胞的孤雌发育和胚胎的染色体异常

三．哺乳动物早期胚胎发育阻滞产生的机制

● 哺乳动物胚胎表现种特异性的发育阻滞

● 胚胎发育阻滞可能是由培养条件的不完备引起的，在适合的条件下发育阻断可以克服

● 已经证明，哺乳动物早期胚胎发育是靠卵母细胞中储存的蛋白质和mRNA 驱动。早期卵裂时期的转录导致蛋白质合成在质与量上的变化，从而产生控制转录的母本/胚胎转换(MET)。一些研究者认为某些特别化合物或培养基组成的变化可能允许胚胎通过阻断期。

在小鼠胚胎发育培养基中去掉葡萄糖而添加谷氨酰胺就可克服小鼠2细胞阻断；

有些研究者认为单独添加牛磺酸对克服小鼠2细胞期阻滞起关键作用。

四．精子或能机制

五．精子、卵子和胚胎冷冻保存的意义

（1）精子、卵子和胚胎的冷冻保存是实现哺乳动物体外受精实用化和商业化的重要保证，也是完善人类体外受精临床应用的重要手段。

（2）可以使优良品种、珍稀濒危动物或任何个体的基因库得到长期保存；

（3）使体外受精以及胚胎抑制不受时间和空间的限制；使体外受精工作不受配子供给的限制而根据需要和受体动物生长发情情况随时随地进行，便于异地合作与交流；

第八章受精

一．受精的概念及生理意义

概念：单倍体的精子和卵子相互结合和融合而形成双倍体合子的过程，是有性生殖生物个体发育的起点

生理意义：A保证了双亲的遗传作用

B 恢复了染色体双倍体数目

C 把个体发生过程中产生的变异通过生殖细胞

D 遗传下去，保证了物种的多样性

二．精卵质膜相互作用的基本过程

1.精子附着(attachment)：精子借助尾部的运动接近卵子质膜，并附着于卵子质膜的表面；

2. 精卵结合(binding)：精卵建立牢固结合，其基础是精子表面的配体和卵子质膜上精子受体的结合；

3. 精卵质膜融合：首先发生在精卵质膜的接触部位。通过融合蛋白的介导，形成细胞内含物的通道

4. 细胞内含物混合：主要是脂质物质自发完成的

三.简述精卵质膜融合的限制因素

1、融合前配子的状态：精子发生质膜融合必要的前提条件是完成顶体反应

2、精卵质膜发生融合的部位

3、精卵获得质膜融合能力的发育时间

4、精卵质膜融合的物种特异性

四．参与精卵相互作用的蛋白分子有哪些

1、卵子整合素

2、CD9

3、GPI(glycosal phosphatidylinosotol)锚定蛋白

4、依赖Zn2+的金属蛋白

酶

五．什么是卵子激活/活化

精子入卵使“休眠”的卵子复苏，启动一系列生化事件的发生、代谢的变化和减数分裂的完成，最终导致细胞分裂、分化和新生命个体的诞生。卵子的这种复苏过程称为卵子激活。

六．什么是钙波、钙振荡？受精时，Ca2+振荡中升高的Ca2+的来源

1.哺乳动物受精时，精子穿入卵子，引起卵子胞质内持续数小时的、反复性的、短暂性的[Ca2+]i升高，称为Ca2＋振荡(Ca2＋oscillations)

2：受精后，第一次[Ca2+]i升高是从精子入卵处发生的，然后以波的形式传遍整个卵子，这种现象称为钙波(calcium wave

3.来源：[Ca2+]i升高一方面来自外界Ca2＋的内流，另一方面是从胞内钙库中释放出来的。内质网是细胞内主要的Ca2+库，在骨骼肌中称为肌浆网

七．介导胞内Ca2+信号产生的途径

(1)IP3诱导的Ca2＋释放(IICR)

(2)植物碱诱导的Ca2＋释放(Ryanodine-induced Ca2+ release, RICR)

细胞内另一种重要的通道——ryanodine受体(RyR)钙通道；

(3) Ca2＋诱导的Ca2＋释放(CICR)

八．受精前后MPF、MAPK、PKC各自的功能

1. 成熟促进因子maturation-promoting factor, MPF)：MPF活性在MⅡ期卵子中处于激活状态，

对维持MⅡ期阻滞具有重要作用；受精后MPF活性下降可能与减数分裂恢复和第二极体释放有关，但与原核发育没有关系；受精卵原核膜破裂后，MPF激活是第一次有丝分裂的前提；早期胚胎卵裂过程中，MPF周期性的被激活和灭活，即在细胞周期的间期被灭活，在中期被激活，从而保证正常的卵裂。

●2、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)：MOS/MAPKK/MAPK/p90rsk信号通路可能在维持MⅡ期阻

滞中起作用；MAPK可能是抑制核膜形成的一个因素，它的失活是受精后原核核膜组装的前提；

MAPK可能参与受精后精子中心体的功能调节；

●3、蛋白激酶C (PKC)：PKC的激活是诱导小鼠卵子突破MⅡ期阻滞的必要条件，并且受精后钙

离子释放所引发的MPF降解途径是PKC依赖性的；在受精过程中，精卵结合可能激活PKC，克服MⅡ期阻滞，再通过某种途径诱导MAPK失活，从而使卵子形成原核；PKC可能通过激活PP-2A，导致MAPK的去磷酸化而失活，使卵子形成原核；PKC激活的另一个重要功能是激发卵子的皮质反应，从而阻止多精受精的发生

九．何谓精子核去致密的时间窗口？关键步骤是什么？

1. 从卵子激活到雌原核形成这段时间称为精核去致密的时间“窗口”(time window)。

2关键步骤：在去致密时间窗口内使鱼精蛋白二硫键减少到足够数量是引起精核去致密和精核激活的关键十．哺乳动物组织多精受精的机制

●雌性生殖道的初步筛选：只有那些活力相当好的精子才能到达受精部位；

●卵子本身具有强烈的阻止多精受精的能力：参与阻止多精受精的是卵子所特有的一种细胞器——

皮质颗粒(cortical granule, CG)。

十一. 皮质颗粒内含物主要包括哪些物质？

1、蛋白酶：类胰蛋白酶；组织型纤溶酶原激活因子(tPA)，该因子是一种把纤溶酶原转变为纤溶酶的丝氨酸蛋白酶；

2、卵过氧化物酶

3、N-乙酰氨基葡萄糖苷酶

4、糖基化物质

5、其他成分：CRT(calreticulin)、p75、肝素结合胎盘蛋白

最后补充内容：

1．超排卵：为获得更多的胚胎，人们模拟体内卵母细胞发育成熟与排放的激素调节模式，通过注射不同的促性腺激素，刺激暂时处于休止状态的卵母细胞进入成熟发育期。成熟后排放于输卵管。由此可以获得比自然排卵时多得多的卵母细胞或胚胎，这一过程成为超排卵。

2．影响产排卵的因素：1.母鼠的性成熟的程度

2.PMSG、HCG皮下注射剂量：对于多数小鼠品系PMSG、HCG皮下注射5IU-10IU.

3.激素注射的时间：注射PMSG后42—48h再注射HCG能获得最佳排卵效果。

4.小鼠品系：小鼠品系是影响超排卵效果的另一重要因素。

3．如何才能较为正确的反应受精与否？

1.卵母细胞内可见精子尾部

2.卵母细胞内可见膨大的精子头部

3.卵母细胞内可存在雌雄原核

4.有明确的第一极体和第二极体

5.卵周隙变化