RM2235切片机技术参数
丙环唑对玉米幼苗生长的调控及其相关机制
丙环唑对玉米幼苗生长的调控及其相关机制郝岭;邢嘉鹏;段留生;张明才;李召虎【摘要】丙环唑(propiconazole, 简称 Pcz)作为一种杀菌剂被广泛应用于作物生产, 它同时具有调节作物生长发育的作用, 但关于丙环唑在玉米上的应用研究较少.本研究以玉米品种郑单958为材料, 研究丙环唑(Pcz)对玉米苗期植株生长、细胞形态和激素信号的影响.结果表明, Pcz 处理显著抑制玉米中胚轴与胚芽鞘的生长, 降低株高, 缩短叶片和叶鞘长度, 减小叶夹角, 同时显著抑制叶片和叶鞘细胞的纵向伸长, 促使叶枕细胞排列由疏松变为紧密; Pcz 处理显著降低玉米中赤霉素(GA1和GA3)的含量,下调GA合成酶基因GA3ox1基因的表达,上调GA钝化酶基因GA2ox5和GA2ox8表达,而GA合成酶基因GA20ox1的表达呈现先上调后下调模式;Pcz处理显著降低油菜素内酯(BR)含量,但BR合成基因CPD和DWF4的表达上调,可能是由于反馈调节.此外,Pcz处理下调扩张蛋白基因EXPA4、EXPA5和木葡聚糖内糖基转移酶/水解酶基因XTH1、XET1的表达.综上所述,Pcz处理调节GA和BR信号转导途径,抑制GA和BR在植株内积累, 调控扩张蛋白、木葡聚糖内糖基转移酶/水解酶基因表达, 操纵细胞生长, 有效调控株型.%Propiconazole (Pcz) has been widely used as fungistat in crop production. Meanwhile, Pcz can be used as plant growth regulator to influence plant growth. There is less study on the application of Pcz in maize. The present experiment using maize variety Zhengdan 958 was conducted to study the effect of Pcz on maize seedling growth, cell morphology and hormone signal. Pcz treatment inhibited the growth of mesocotyl and coleoptile, reduced plant height, shortened the length of sheath and leaf, and decreased leaf angle significantly. At the same time, longitudinal growth of sheath and leaf wasinhibited and the shape of pulvinus cells changed from loosened rectangle type or oval type to closely spaced spindle cell. Furthermore, the GA (GA1and GA3)content was reduced significantly and the expression of GA biosynthesis gene GA3ox1 was down-regulated,the expression of GA2ox5 and GA2ox8, genes involved in GA inactivation, was up-regulated, and the expression of GA biosynthesis gene GA20ox1 was up-regulated at the beginning and down-regulated later;the BR content was reduced significantly and the expres-sion of BR biosynthesis genes CPD and DWF4 was up-regulated,which might be feedback regulated by endogenous BR levels. In addition, the expression of expansin genes EXPA4, EXPA5 and xyloglucan endotransglucosylase/hydrolase genes XTH1 and XET1 was down-regulated.In conclusion,Pcz treatment can adjust the signal transduction of GA and BR,inhibit the accumulation of GA and BR,regulate the expression of EXPs and XTHs,control the cell growth,and adjust plant type of maize effectively.【期刊名称】《作物学报》【年(卷),期】2017(043)011【总页数】8页(P1603-1610)【关键词】玉米;丙环唑;油菜素内酯;株型;细胞形态【作者】郝岭;邢嘉鹏;段留生;张明才;李召虎【作者单位】植物生长调节剂教育部工程研究中心/中国农业大学农学与生物技术学院农学系, 北京 100193;植物生长调节剂教育部工程研究中心/中国农业大学农学与生物技术学院农学系, 北京 100193;植物生长调节剂教育部工程研究中心/中国农业大学农学与生物技术学院农学系, 北京 100193;植物生长调节剂教育部工程研究中心/中国农业大学农学与生物技术学院农学系, 北京 100193;植物生长调节剂教育部工程研究中心/中国农业大学农学与生物技术学院农学系, 北京 100193【正文语种】中文Abstract:Propiconazole (Pcz) has been widely used as fungistat in crop production. Meanwhile, Pcz can be used as plant growth regulator to influence plant growth. There is less study on the application of Pcz in maize. The present experiment using maize variety Zhengdan 958 was conducted to study the effect of Pcz on maize seedling growth, cell morphology and hormone signal.Pcz treatment inhibited the growth of mesocotyl and coleoptile, reduced plant height, shortened the length of sheath and leaf, and decreased leaf angle significantly. At the same time, longitudinal growth of sheath and leaf was inhibited and the shape of pulvinus cells changed from loosened rectangle type or oval type to closely spaced spindle cell. Furthermore, the GA (GA1and GA3) content was reduced significantly and the expression of GA biosynthesis geneGA3ox1 was down-regulated, the expression of GA2ox5 and GA2ox8, genes involved in GA inactivation, was up-regulated, and the expression of GA biosynthesis gene GA20ox1 was up-regulated at the beginning and down-regulated later; the BR content was reduced significantly and the expression of BR biosynthesis genes CPD and DWF4 was up-regulated, which might be feedback regulated by endogenous BR levels.In addition,the expression of expansin genes EXPA4, EXPA5 and xyloglucan endotransglucosylase/hydrolase genes XTH1 and XET1 was down-regulated. In conclusion, Pcz treatment can adjust the signal transduction of GA and BR, inhibit the accumulation of GA and BR, regulate the expression of EXPs and XTHs, control the cell growth, and adjust plant type of maize effectively.Keywords:Maize; Propiconazole; Brassinosteroids; Phenotype; Cellular morphology玉米(Zea mays L.)作为我国主要的粮食作物, 对确保我国的粮食安全有着至关重要的作用。
LeicaRM2265旋转薄切片机的使用步骤
LeicaRM2265旋转薄切片机的使用步骤Leica RM2265旋转薄切片机的使用步骤一、半薄切片（厚度0.25-5μm）使用步骤1、接通电源，打开主开关（仪器背面），待仪器发出嘟嘟响声，将进行初0始化；2、选择切片厚度:在切片模式SECT显示下，切片厚度范围将显示：0.25-100μm；在样品修整模式TRTM显示下，样品修整厚度将显示：1-600μm;通过“+”、“-”调节厚度数值，单位：μm；3、安放包埋块于切片头中央位置，旋转固定螺丝，将样品按要求固定夹紧；4、安放粘有水槽的玻璃刀（务必锁定手轮后再上刀），并将玻璃刀口对准样品；5、选择切片模式：自动切片或手动切片；选择好切片模式后，仪器回零，切片计数开始；6、取切片的材料：将漂入水中的薄切片用铜网捞起来后，放于涂有聚状氨酸的玻片上，加热，用HCl脱树脂，在材料上滴一滴亚甲基蓝，着色后冲洗、封藏、烘干。
二、石蜡切片（厚度5-100μm）使用步骤1、接通电源，打开主开关（仪器背面），待仪器发出嘟嘟响声，将进行初始化；2、选择切片厚度：通过“+”、“-”调节厚度数值，单位：μm；3、安放削好包埋鳞块于切片头中央位置，旋转固定螺丝，将样品按要求固定夹紧；4、安放刀片刀座，将Leica719一次性刀片、或钨钢或一般用切片钢片（务必锁定手轮后再上刀），并将刀口对准样品；5、选择切片模式：自动切片或手动切片；选择好切片模式后，仪器回零，切片计数开始；6、取切片的材料：将蜡带用毛笔挑起，放入蜡带盒中；7、粘片：用圆头小刀将蜡带切割，挑选结果完整的材料放入涂有蛋清干油的载玻片（蛋清干油上滴注蒸馏水，使材料漂浮于其上）；8、烘片：在电热烘片台上，待材料平展后，将玻片放入摊片盘中，在36℃恒温箱中烘烤4天左右；9、脱蜡、染色、封藏：用二甲苯脱蜡后，根据实验目的将材料染色后，用中性树胶或加拿大树胶封藏烘干。
三、注意事项1、在处理切片刀和更换刀片时必须十分小心，刀刃十分锋利，可能造成严重损伤；2、在取出刀/刀片之前，必须将刀的固定器从仪器上分离，如果不使用刀，一定将刀放回刀盒中；3、禁止随处放置刀，并将刀刃朝上，禁止尝试接下落过程中的刃；4、在夹紧刀或者刀片之前，务必将样本包块夹紧；5、在处理刀或样本夹子，更换样本包块之前，以及所有的操作间隙时，务必锁定手轮，并且用护刀器将刀刃覆盖；6、在样本的回收过程中，如果样本被重新放置，那么在下次切割之前，切割的距离将会在所选择厚度上增加所移动的距离，这有可能使样本和刀片发生碰撞；7、在自动切割模式下，手轮的手柄应该始终位于中间位置，当手轮在运行时，禁止触摸手轮-----这有可能被手轮打伤；。
脂肪组织切片方法的改良及应用体会
脂肪组织切片方法的改良及应用体会张椽;陈志涛;蒲章学;唐二松;石磊【摘要】目的:探讨脂肪组织的改良制片方法,提高制片质量.方法:选取60例脂肪瘤及脂肪含量较高的组织经常规固定,取材时切取相同规格大小的2个组织块,用传统方法和新改良方法进行脱水、透明、浸蜡、包埋、切片.结果:传统制片法无优质片,中等片10张(16.6％),次等片30张(50％),不合格片20张(33.3％);改良法优质片40张(66.6％)、中等片20张(33.3％)、无次等片及不合格片.结论:改良法通过延长脂肪组织浸蜡时间,可增加组织硬度,有助于提高脂肪组织的制片质量,值得推广应用.【期刊名称】《甘肃医药》【年(卷),期】2017(036)012【总页数】3页(P1055-1057)【关键词】脂肪组织;制片;改良法【作者】张椽;陈志涛;蒲章学;唐二松;石磊【作者单位】贵州医科大学第二附属医院,贵州凯里556000;贵州医科大学第二附属医院,贵州凯里556000;贵州医科大学第二附属医院,贵州凯里556000;贵州医科大学第二附属医院,贵州凯里556000;贵州医科大学第二附属医院,贵州凯里556000【正文语种】中文【中图分类】R446.8脂肪组织的制片问题长期以来一直困扰着病理技术人员［1-2］。
由于脂肪组织含有大量的脂质，脂质不溶于水，只溶于酒精等有机溶剂。
若按照传统制片程序制片，脂质很难完全置换出来，切片的时候会出现组织挤压成一堆或者形成破碎的空洞等，很难制既平整又完整的切片，严重影响切片质量，给病理医师的诊断带来很大的困难。
如果单独进行脱水、透明、浸蜡处理又给病理技术员带来很大的不便。
为解决这一难题，本研究团队在工作中经过较长时间的探索及经验总结，对传统的制片方法作了相应改进，做出完整而优良的脂肪组织切片，既给病理技术人员工作带来便利，又有利于病理诊断，现报告如下。
1 材料与方法1.1 材料选取2016年1月至2017年6月从我院临床科室及外院送检的人体各个部位的脂肪组织标本中选取60例进行对比试验。
切片机的技术参数如下
一、切片机的技术参数如下：1、封闭罩壳；手动式轮转控制；2、样品夹可任意调节，样品最大值不少于3×5CM（高×宽）。
3★可加配钢刀刀座，并能一次性刀片和钢刀同时使用。
4、切片厚度能达到1—60um，并可在此范围内任意调节。
二、恒温摊片烤片机的技术参数如下：1摊片机设有水底透光装置，方便观察切片拉直、摊展状态；2★烤片时，载物片能呈600C斜插角盛放，烘片托盘能随距离而逐渐升温，保证烘片时的温度均匀；3、摊片水温：30——850C内任意调节；4、烘片温度：30——850C内任意调节；5、烤片温度：30——850C内任意调节；6★必须具有两组定时报警功能。
7、电源：220V.三、生物组织自动脱水机的技术参数如下：1大屏幕液晶显示，全中文菜单；2、可预存10——12套程序，供选择；3、机器内安置空气内循环过滤系统，消除有害气体；4★标本保护系统，无论何种情况，都能确保标本盛放篮进入液缸保护，杜绝吊篮悬于空中，使标本风干，出现卡缸等机械故障时，标本都能回到试剂缸；5、可自由选择编程系统，可使标本从任意缸开始，到任意缸结束；6、液缸数量：不少于12个，最后3个缸必须为石蜡缸；7、延时起缸时间：1——10天内任意设定；8、每缸处理时间：1分钟——240小时内任意设定；9、温度：室温——990C内任意设定；10★起缸停留滴漏时间：1——200秒可调，减少试剂浪费；11、抖动搅拌：抖动次数可调，不少于15秒一次；12★停电后石蜡能保持融化，继续工作8个小时以上；13、15个工作日内交货；14★必须是水浴加温，加温安全可靠;15、保修一年，终身维修。
带★内容为设备先进性体现必须满足，如有一项不满足视为谈判无效，三种设备必须为同一厂家产品，方便售后服务。
非★号技术条件每条负偏离增加谈判最终总报价的20 ℅，非★号技术条件负偏离2条以上，相当于一条★号不响应即谈判无效。
大庆市中医医院2005年10月19日。
皮肤病理石蜡切片
省二院：
厂地：上海懿洋仪器有限公司
伊红（曙红Y） EosinY
配制伊红，有许多种方法，根据各单位的情况，使用不同 种类的伊红。 市售的伊红有两种：一是水溶性伊红，二是醇溶性伊红， 在我们的实践中，水溶性伊红用低浓度的酒精来配制，只要配 制得当，其效果非常好。 伊红 1g 70-75%酒精 100ml 先将伊红用蒸馏水(少许)调成浆糊状，再加入酒精，边加 边搅拌，直到彻底溶解，此时试剂有些混浊，取少许冰醋酸， 加入到试剂中去，试剂逐渐转变为清亮，呈鲜红色，染出切片， 效果很好。
目的，否则不易染色！（石蜡不与染液结合）
脱苯（水）→蒸馏水
无水乙醇 95%乙醇 80%乙醇 2min 2min 数秒
70%乙醇
流水冲过
反 酒 精 梯 度
比较：
我们没有反酒精梯度脱水， 只用了95%乙醇进行脱苯1min。
功能：脱去组织上多余的苯，使组织梯度进水水，进而染色。 注意：如果组织进入95%乙醇中有云雾状现象，说明二甲苯没有脱彻底或乙醇
3-4h
①我们95%乙醇采用两步脱水， 以减小收缩力。
无水乙醇Ⅰ ≧1.5h 无水乙醇Ⅱ ≧1.5h
功能：
②无水乙醇的脱水时间不超过 2h，与此相比较，相差将近2倍。
脱去组织中的水分，以便石蜡浸入。
注意：①水和石蜡不相容，需脱水彻底，以便制备出好的切片。
②无水乙醇同样具有使组织收缩变硬的影响，故不能时间过 长。 议：无水乙醇脱水3-4h皮肤组织会不会变硬？
透明
二甲苯Ⅰ 20min
比较：
20min
透明时间都相同，但我们用 的是松节油进行组织透明。
二甲苯Ⅱ
功能:
二甲苯是酒精和石蜡的共同溶剂（媒剂）目 的是为石蜡的浸入作媒介。
Leica RM 2235 轮转式切片机 说明书
4.2
安装场地要求 ..........................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................13
4.4
ห้องสมุดไป่ตู้
插入通用盒式夹 ...................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................15
2.3
小鼠早期胚发育的全程组织切片观察
小鼠早期胚发育的全程组织切片观察杨媛媛;夏羽;李静;陈姗姗;吴琼琼;卿素珠【摘要】[目的]对小鼠早期胚发育全程进行系统的石蜡切片观察,为小鼠胚胎工程研究提供详细资料.[方法]通过体内受精方法获得小鼠早期胚胎,利用大体解剖及石蜡切片技术,观察受精卵至扩张囊胚的早期胚发育全程,用数码显微镜系统拍照.[结果]利用石蜡切片-HE染色方法观察受精卵至扩张囊胚的形态结构,图像色彩对比度适当,可以准确生动地显示胚胎结构及在输卵管与子宫中的分布情况.[结论]获得了小鼠受精卵至扩张囊胚早期胚胎发育全程图谱.【期刊名称】《西北农林科技大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2011(039)004【总页数】5页(P14-18)【关键词】时程;早期胚胎发育;小鼠;石蜡切片【作者】杨媛媛;夏羽;李静;陈姗姗;吴琼琼;卿素珠【作者单位】西北农林科技大学,动物医学院,陕西,杨凌,712100;西北农林科技大学,动物医学院,陕西,杨凌,712100;西北农林科技大学,动物医学院,陕西,杨凌,712100;西北农林科技大学,动物医学院,陕西,杨凌,712100;西北农林科技大学,动物医学院,陕西,杨凌,712100;西北农林科技大学,动物医学院,陕西,杨凌,712100【正文语种】中文【中图分类】S814.6近年来，现代生物技术对国民经济持续发展产生了重要影响，已成为各国研究开发的重点和科技竞争的热点，而建立在动物胚胎学基础上的胚胎工程的相关理论与技术，则是现代生物技术的重要组成部分，其中运用哺乳动物的模式生物——小鼠开展的一系列胚胎工程研究，如转基因小鼠、基因敲除鼠、克隆小鼠及小鼠胚胎干细胞工程等，已经成为常用的研究手段，这些技术又均是建立在小鼠早期胚胎发育观察与操作基础上的，因此，掌握小鼠早期胚胎发育全程尤为重要。
目前，有关小鼠早期胚胎发育全程的研究国内外报道较少，观察结果也不尽相同[1-2]，这一方面与小鼠品系有关，另一方面与操作和观察方法也有直接关系。
徕卡切片机RM系列使用维护经验分享
徕卡切片机使用维护经验分享虽然现在已经有半自动切片机面世，但因为操作方便性及价格等方面影响，各病理室仍然普遍使用手动切片机。
切片机精密性要求非常高，其制作出来的病理组织切片厚度大约在4微米左右，比普通纸张还要薄几十倍，要想在每天的工作中让机器保持良好的工作状态，就必须进行非常细致的维护与保养。
下面主要针对徕卡RM2235切片机的维护与保养做一下介绍，与大家做一探讨。
切片机从结构上分为封闭在仪器内部的齿轮部件及暴露在仪器外面的蜡块夹、刀架部分。
对于齿轮部分，因处于封闭状态，建议由专业工程师进行维护，日常工作中是不需要维护的，某病理室有一台切片机从98年使用至今，十余年时间里齿轮部分一直没有进行过维护，仍然使用正常，足以表明它是非常经久耐用的，当然在较长时间使用后还是应由有经验的工程师上点润滑油等，以延长切片机的使用寿命。
接下来我们重点要讲的就是在外面的蜡块夹和刀架部分的保养维护。
一、刀架的保养与维护。
能否切出平整、厚薄均匀的优质组织切片，关键看切片刀是否放置平稳，如果刀架不稳或者刀架因碰撞等出现凹凸不平的情况，是制作不出优质切片的。
在平时的使用中，最好将刀架座固定在基座某个位置，推荐固定在基座从外往里2.5个刻度处，既可以防止因蜡块夹伸出太长导致蜡块不稳的情况又可以防止经常挪动刀架导致仪器磨损。
在日常清洁工作中，一定要注意保护好刀架，避免碰撞，特别是放置刀片的部位。
在切片时更要注意避免蜡块夹与刀架进行碰撞，以免刀架出现轻微的变形影响切片。
二、蜡块夹的保养与维护。
首先要做好日常清洁工作，方便蜡块的安放；其次是要保持切面的垂直水平角度，以保证每一个蜡块的切片角度都是一致的，这样在蜡块重切时就不需要调整蜡块夹角度了。
我们建议每使用一段时间就做一下调整，始终让蜡块夹切面保持上下垂直、左右水平状态。
三、切片厚度指示刻度的设置。
在切片机上有个刻度盘，标明从0-10之间的刻度，该刻度大致对应实际切片的厚度，指示刻度越小，切片会相对薄一些，刻度越大，则切片会相对厚一些。
常规HE染色不同染色系统的评分分析
常规HE染色不同染色系统的评分分析近年来，随着科技的发展，我国常规病理诊断中HE染色技术得到不断的改良，滴染式染色方法的出现对传统浸染模式提出挑战，与此同时，对于步骤繁琐的浸染程序进行精简的改良浸染模式也应运而生。
我们从染色结果、染色均一性及有无交叉污染等方面，探讨3种染色体系的差异。
一、材料与方法1.材料收集北京协和医院2014年5—12月经4%中性缓冲甲醛液固定的手术标本10例，分别来源于皮肤、乳腺、胃、肠、肺、肝、肾、脑、淋巴结和甲状腺的常规病理组织。
本组病例的入选标准是（必须符合所有标准）：（1）病理学确诊为正常或肿瘤组织；（2）能够获得足够组织标本；（3）样本是外检诊断后剩余的组织样本；（4）样本采用4%中性甲醛固定液，且符合临床试验相关要求。
每例经石蜡包埋后，获得4 μm连续切片22张，分为11个染色单元，每个染色单元含10张不同组织来源的切片。
2.仪器及试剂VIP6全自动组织脱水机（购自日本樱花公司），RM2235轮转式石蜡切片机（购自德国徕卡公司），传统浸染法使用染色仪器为Autostainer XL自动染色机（购自德国徕卡公司），染色试剂为环保染色套液（北京九州柏林生物科技有限公司）；改良浸染法使用Coverstainer全自动HE染色封片机，染色试剂为机型推荐试剂（购自丹麦Dako公司）；滴染法使用Symphony全自动高清晰单独滴染式HE 染色平台，染色试剂为机型推荐试剂（购自瑞士Roche公司）。
其余试剂均为国产分析纯。
3.分组按照不同染色方法对染色切片分组，其中A 组为改良浸染法＋进行性染色，“浸泡”染色，在整个染色过程中所有试剂循环流动＋Mayer苏木精；B组使用传统浸染法＋退行性染色，“浸泡”染色，在整个染色过程中除水以外的所有试剂静止＋Harris苏木精；C组使用单张切片每次使用新鲜试剂的滴染法＋Harris苏木精。
根据机型选择推荐染色程序。
根据不同仪器推荐的最大染色切片负荷量，A 组切片染色数量为3 000张，B组为1 500张，C组为700张。
石蜡切片技术的体会
石蜡切片技术的体会刘彤华院士也曾指出:“一张优质病理切片是病理医生作出正确诊断的前提。
”[1]病理技术工作是病理诊断工作的基础。
因此,确保病理切片工作的质量又显得尤为重要。
切片制作是一个连续复杂的过程,各个环节都至关重要。
高质量的切片,要在每个环节上下功夫。
为此笔者在石蜡切片的技术上的一点体会与大家分享，目的是提高切片质量，共同进步。
1 材料与方法1.1材料石蜡组织包埋块Leica RM 2235型石蜡切片机，羽毛牌一次性刀片型号A35。
1.1.1预备切片应用轮转式切片机装上旧的一次性刀片操作，将蜡块表面多余的石蜡及不平整的组织先粗修至组织暴露最大面，用毛刷刷净，重新冷冻以备正式切片。
遇有钙化或硬化组织可用5N盐酸对蜡块表面进行软化处理,冷水冲洗，然后重新冷冻。
[2]在正式切片前将放有组织的冰盘里加点冷水，将组织面稍微浸泡于水面。
1.1.2正式切片用毛刷将切片机打扫干净，换上新的羽毛牌一次性刀片型号A35准备切片。
切片厚度通常设定为4μm，优质切片的要求切片组织完整，厚薄均匀，平整无皱，无刀痕。
1.1.3选取平整光滑无污染的切片铺入水面，用纱布将载玻片擦拭干净，捞取切片时使切片与载玻片沿长轴方向平行。
1.1.4漂片仪的温水须每日更换，保持清洁，水温范围设在42℃～45℃之间。
在载玻片上写上正确的病理号码后迅速放入烘片箱内，烘片箱温度设置为80℃左右。
通常烘烤15min～20min即可染色。
1.1.5染色时选用Gill改良苏木素染色，醇溶性伊红染色，脱水透明，中性树胶封固。
2 结果与讨论用此方法切出来的切片具有组织完整，厚薄均匀，平整无皱，无刀痕的优点，完全达到优秀病理切片质量的要求。
此方法原理是使包埋组织能更全面地接触冰面，在冰盘里加水是为了增加其冷却面积，使组织更易于切片，正式切片时采用连续匀速切片，选取平整光滑无污染的切片置入水面，用纱布将载玻片擦拭干净，捞取切片时使切片与载玻片沿长轴方向平行。
04_切片技术流程(主要内容根据中华医学会资料整理_打印给学生)
一、组织切片的制备1. 取材：厚度0.3cm（不应大于0.5cm），面积（1－1.5）cm×（1－1.5）cm。
2. 固定：4%中性甲醛（10％中性福尔马林）固定4－6h。
标本大时18－24h或更长。
3. 水洗用流水冲洗已经固定的组织块30min。
4. 脱水（常温下）（1）乙醇－甲醛（AF）液固定：60－120min （2）80％乙醇：60－120min（3）95％乙醇I：60－120min （4）95％乙醇II：60－120min（5）无水乙醇I：30－60min （6）无水乙醇II：30－60min（7）无水乙醇III：30－60min5. 透明：（1）二甲苯I：20min （2）二甲苯II：20min （3）二甲苯III：20min6. 浸蜡：（1）石蜡I（45－50℃）：60min （2）石蜡II（56－58℃）：60min（3）石蜡III（56－58℃）：60min7. 包埋：8. 切片：4μm9. 展片：45℃10. 贴片：11. 烤片：60~62℃，30~60min）二、苏木精－伊红（HE）染色（一）染色程序（1）二甲苯I：5－10min （2）二甲苯II ：5－10min （3）无水酒精I：1－3min（4）无水酒精II：1－3min （5）95% 酒精I：1－3min （6）95% 酒精II：1－3min（7）80% 酒精：1min （8）蒸馏水：1min （9）苏木素液染色：5－10min （10）流水洗去苏木精液：1min （11）1%盐酸－乙醇分化：1－3s（12）稍水洗：1－2s （13）返蓝（用温水或1％氨水等）：5－10s上述（12）和（13）项可省去，但（14）的冲水时间须延长至10－15min（细胞核显示更清晰）。
（14）流水冲洗：1－2min （15）蒸馏水洗：1－2min （16）0.5％伊红液染色：1－3min （17）蒸馏水稍洗：1－2s （18）80％酒精：1－2s （19）95%酒精I：2－3min（20）95%酒精II：2－3min （21）无水酒精I：3－5min （22）无水酒精II：3－5min （23）石炭酸－二甲苯：3－5min 该项可用无水乙醇代替，北方地区可省略。
苏木精-伊红染色制作骨骼肌组织教学切片的方法优化
苏木精-伊红染色制作骨骼肌组织教学切片的方法优化Wu Yixian;Dong Juanjuan;Ma Yire ·Tuerhong;Li Qin;Xu Peng;Li Xiumei【摘要】目的优化骨骼肌教学切片的制作方法,以期提高制片效率与切片质量.方法石蜡包埋、苏木精-伊红染色,比较不同物种之间骨骼肌组织以及不用厚度的骨骼肌组织切片横纹结构的差别.结果人与狗的骨骼肌肌原纤维及横纹结构典型,厚度4～5μm的切片中肌原纤维及横纹结构较其他厚度更易分辨.结论狗的骨骼肌更适合替代人的骨骼肌用于组织教学切片的制作,4～5μm的切片厚度易于显示横纹结构.【期刊名称】《中国组织化学与细胞化学杂志》【年(卷),期】2019(028)002【总页数】4页(P167-169,166)【关键词】骨骼肌;横纹;苏木精-伊红染色【作者】Wu Yixian;Dong Juanjuan;Ma Yire ·Tuerhong;Li Qin;Xu Peng;Li Xiumei【作者单位】;;;;;【正文语种】中文【中图分类】R329.4骨骼肌组织形态观察是组织学实验教学中的一项重要内容。
在骨骼肌的肌原纤维上明暗相间的横纹结构是本科教学大纲中必须要求掌握的内容，也是形态学科研和临床病理重要的观察内容。
实验教学中骨骼肌通常采用常规的苏木精-伊红染色法（HE染色法）。
在HE染色中，横纹结构在不同种属以及切片厚度之间是否有差异，目前报道不多。
我们将人、兔、狗的骨骼肌结构在光学显微镜下做了比较，并对狗的骨骼肌组织在不同切片厚度的情况下横纹结构的差异进行筛选，为获得合格的骨骼肌组织教学切片提供指导。
材料与方法1 材料和试剂骨骼肌组织分别来源于人、兔子及狗的四肢，苏木素染液、伊红染液均购自珠海贝索生物技术有限公司。
2 石蜡切片制备骨骼肌组织置于4%甲醛水溶液内固定，24h后更换新鲜固定液，继续固定1～2d 后，将组织块置于自来水下冲洗，采用梯度乙醇溶液脱水、二甲苯透明、石蜡（60℃）浸润2h后包埋成蜡块。
蛆症异蚤蝇幼期石蜡切片的制备
蛆症异蚤蝇幼期石蜡切片的制备冯典兴;关明慧;贾志红;杜新丽;岳国华;肖顺圆【摘要】探讨适合蛆症异蚤蝇幼期的石蜡切片制作方法,并对其幼期内部主要组织结构进行了观察.结果显示,Carnoy固定液(V(无水乙醇)∶V(氯仿)∶V(冰醋酸)=6∶3∶1)适于蛆症异蚤蝇幼期的固定.将蛹头部或整体蛹壳剥离,有利于固定、脱水和包埋,蛹需过夜浸蜡.在切片上可清楚的显示3龄幼虫的口器、唾液腺、脂肪体、中肠以及36h蛹的脑组织、复眼、卵巢和腹部肌肉等主要内部结构.【期刊名称】《沈阳大学学报》【年(卷),期】2017(029)003【总页数】3页(P189-191)【关键词】蛆症异蚤蝇;石蜡切片;幼期【作者】冯典兴;关明慧;贾志红;杜新丽;岳国华;肖顺圆【作者单位】沈阳大学生命科学与工程学院,辽宁沈阳 110044;沈阳大学生命科学与工程学院,辽宁沈阳 110044;沈阳大学生命科学与工程学院,辽宁沈阳110044;沈阳大学生命科学与工程学院,辽宁沈阳 110044;沈阳大学生命科学与工程学院,辽宁沈阳 110044;沈阳大学生命科学与工程学院,辽宁沈阳 110044【正文语种】中文【中图分类】D919蛆症异蚤蝇Megaselia scalaris(Loew)隶属于双翅目Diptera、蚤蝇科Phoridae、裂蚤蝇亚科Metopininae、异蚤蝇属Megaselia Rondani.该物种主要生活于热带和亚热带,也分布于温带地区;随着人类的经济活动, 已遍布世界各大区[1].它是一种重要的法医昆虫,通常是第一批次出现在相对密闭空间人尸体上的蝇类[2-5].Reibe 和Madea认为在密闭的室内条件下,利用蛆症异蚤蝇Megaselia scalaris(Loew)估计死亡时间(post-mortem interval,PMI)要比丽蝇更准确,因为丽蝇很难进入到密闭的室内.在丽蝇活动能力迟缓的温度下,蛆症异蚤蝇也是一个很好的选择[6].目前,蛆症异蚤蝇已建立发育历期、基于外部形态的幼虫发育速率和蛹发育资料[7-9].但对于一些外部形态变化不明显的时期,如幼虫的离食期、蛹早期、蛹黄眼期等,推断日龄还有困难,但在这些时期其内部组织器官可能存在明显变化,常规解剖会破坏标本内部结构造成无法观察,而利用组织切片技术可实现对内部组织器官连续观察,鉴于此,本研究旨在建立适于症异蚤蝇幼期组织切片的制作方法,为后续开展蛆症异蚤蝇幼期内部结构发育形态随时间的变化规律奠定基础.1.1 材料蛆症异蚤蝇Megaselia scalaris(Loew)为沈阳大学辽宁省城市有害生物治理与生态安全重点实验室饲养的种群.在24 ℃,相对湿度75%条件下,利用猪肉饲养蛆症异蚤蝇Megaseliascalaris(Loew),收集3龄幼虫和发育至36h的蛹作为试材,蛹去除头部或整体的蛹壳.1.2 方法参考了褚梦颖的方法[10],并作一定修改.(1) 固定:按V(无水乙醇)∶V(氯仿)∶V(冰醋酸)=6∶3∶1或V(无水乙醇)∶V(冰醋酸)=3∶1制成Carnoy固定液,固定试材12 h以上.固定后可退回70%乙醇内保存.(2) 脱水:体积分数分别为70%、80%、90%、95%、100%(二次)的乙醇依次进行脱水,70%～95%乙醇分别脱水30 min,100%乙醇脱水15 min.(3) 透明:体积分数分别分别在二甲苯与乙醇体积比为1∶2、1∶1和2∶1的试剂中依次进行30 min透明处理,再放入纯二甲苯中进行10 min两次透明处理.(4) 浸蜡:将透明后的试材放入Leica EG1150H包埋机内,温度为60 ℃,先放入石蜡与二甲苯体积比为1∶1混合的左箱浸蜡2 h,再将其取出放入纯石蜡右箱中浸蜡4 h,蛹需过夜.(5) 包埋:将试材取出,用包埋盒包埋,转移至Leica EG1150C冷却台(-6 ℃)上,待其完全冷却凝固后,即可进行切片制作.(6) 切片:将凝固好的蜡块放在Leica RM2235切片机上,先将提前在体积分数为70%乙醇浸泡过夜的载玻片预热,再用蛋清、甘油与水杨酸钠按50 mL∶50 mL∶1 g的比例制成的贴片剂的均匀地涂在载玻片上,然后将连续切片贴在其上.切片厚度7～8 μm.(7) 干燥:将切片在37 ℃干燥箱中干燥12 h.(8) 染色:将干燥好的切片依次用纯二甲苯Ⅰ、纯二甲苯Ⅱ、纯二甲苯Ⅲ、体积分数分别为100%乙醇Ⅰ、100%乙醇Ⅱ、95%乙醇、90%乙醇、80%乙醇、70%乙醇、蒸馏水浸泡切片各5 min;之后是苏木精染液5 min,返蓝液1 min,分化液1 min,伊红染液2 min进行染色;其次是蒸馏水、体积分数分别为70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇、95%乙醇、100%乙醇Ⅰ、100%乙醇Ⅱ、纯二甲苯Ⅰ、纯二甲苯Ⅱ、纯二甲苯Ⅲ浸泡各5 min.(9) 封片与干燥:切片染色完成,用树胶将盖玻片粘于载玻片上,完成封片.将封好的切片放在室温条件下干燥24 h以上.(10) 镜检观察:将干燥好的组织切片放在Olympus BX41显微镜下进行观察,并利用Olympus DP71成像系统拍照.本研究在褚梦颖的方法基础上作了一定的修改,通过比较发现Carnoy固定液采用V(无水乙醇)∶V(氯仿)∶V(冰醋酸)=6∶3∶1,效果好于V(无水乙醇)∶V(冰醋酸)=3∶1,固定迅速.样本经二甲苯与乙醇按1∶2,1∶1和2∶1比例配制成的溶液依次进行透明,通过延长浸蜡时间,特别是蛹浸蜡过夜,可有效防止脱片.通过上述方法的改进制备了干净、清晰的幼虫和蛹早期切片.对于3龄取食期的幼虫,可观察到一对唾液腺、大量的脂肪体、肌肉、表皮和中肠等主要结构(见图1),也可以观察到口器,如图1插图箭头所示.对发育至36 h雌蛹的切片进行观察,可见腹部分层,如图2a箭头所示,脑组织逐渐形成,形状已不同于幼虫阶段的神经节,可见复眼(见图2b),气管贯穿整个虫体(见图2c);在腹部可见一对较大的卵巢(见图2d),腹部两侧出现肌肉(见图2e).蝇类幼虫和蛹是案发现场经常发现的虫态,建立其详细的发育资料将会使利用其发育规律推断PMI更为准确.对于蛆症异蚤蝇目前缺乏幼期内部发育资料.石蜡切片技术可实现对幼期内部组织结构的观察.由于蚤蝇幼虫表皮和蛹壳的阻隔,对固定、透明、浸蜡这些步骤都会产生一定的影响,常会导致脱片现象的发生,所以制作切片难度要大于成虫.本研究参考了褚梦颖的方法[10],并在固定、透明、浸蜡步骤作了修改,Carnoy固定液采用V(无水乙醇)∶V(氯仿)∶V(冰醋酸)=6∶3∶1,效果好于V(无水乙醇)∶V(冰醋酸)=3∶1,固定迅速,短时间内即可起到固定的作用,否则蛹还可以继续发育.对于大型蝇类,往往需要将整体切割成2～3段再制片[11].而蚤蝇个体较小,可实现对其整体进行切片研究.但为了取得较好的切片,对于蛹,特别是呼吸角伸出后的蛹,将头部或整体蛹壳剥离,有利于后续的实验操作.为了使蜡能进入组织,幼虫和蛹浸蜡的时间较长,特别是蛹,需过夜. 3龄幼虫阶段内部结构变化不明显,未发现性腺,但在36 h雌蛹内可见一对发育较成熟的卵巢,其经历了由0～36 h不断变大的过程,可作为蛹早期日龄推断的指标.蛹脑组织的形状也不同于幼虫,它的改变也可以作为一个时间节点用于日龄的推断.此外,腹部肌肉的出现也是一个很好的指标. [ 1 ] DISNEY R H. Natural history of the scuttle fly, Megaselia scalaris[J]. Annual Review of Entomology, 2008,53(53):39-60.[ 2 ] SMITH K G V. A manual of forensic entomology[J]. American Journalof Archaeology, 1986,92(2):287.[ 3 ] GREENBERG B,WELLS J D. Forensic use of Megaselia abdita and M. scalaris (Phoridae: Diptera): case studies, development rates, and egg structure[J]. Journal of Medical Entomology, 1998,35(3):205-209.[ 4 ] SUKONTASON K,SUKONTASON K,VICHAIRAT K,et al. The first documented forensic entomology case in Thailand[J]. Journal of Medical Entomology, 2015,38(5):746-748.[ 5 ] OLIVA A. Insects of forensic interest in Buenos Aires (Argentina)[J]. Addenda et corrigenda, 2004,1:43-50.[ 6 ] REIBE S,MADEA B. Use of Megaselia scalaris(Diptera: Phoridae), for post-mortem interval estimation indoors[J]. Parasitology Research, 2010,106(3):637-640.[ 7 ] 冯典兴,刘广纯. 尸食性蚤蝇幼虫活体测量的新方法[J]. 沈阳大学学报(自然科学版), 2012,24(2):23-25. (FEGN D X,LIU G C. A new method of measuring living body length during growth of carrion-breeding phorid flies larvae[J]. Shenyang University(Natural Science), 2012,24(2):23-25.)[ 8 ] ZUHA R M,RAZAK T A,AHMAD N W,et al. Interaction effects of temperature and food on the development of forensically important fly, Megaselia scalaris(Loew)(Diptera: Phoridae)[J]. Parasitology Research, 2012,111(5):2179-2187.[ 9 ] FENG D X,LIU G C. Pupal age estimation of forensically important Megaselia scalaris(Loew) (Diptera: Phoridae)[J]. Forensic Science International, 2014,236(3):133-137.【相关文献】[10] 褚梦颖. 蚤蝇内部解剖结构研究[D]. 沈阳:沈阳大学, 2016. (CHU M Y. Study on internal anatomy of fleas[D]. Shenyang: Shenyang University, 2016.)[11] DAVIES K,HARVEY M L. Internal morphological analysis for age estimation of blow fly pupae (Diptera: Calliphoridae) in postmortem interval estimation[J]. Journal of Forensic Sciences, 2013,58(1):79-84.。
切片机技术参数
切片机技术参数
▲1、半自动石蜡切片机。
进样方式：步进电机进样
2、样品尺寸要求：最大可达到50X60X4Omn1
3、具有样品回缩功能，5T00um可调，以5μm递进，可开关
4、样品水平进样距离230mm
5、垂直移动距皆27Omm
6、切片厚度范围：0.5Uin〜IOOUm可调
7、样品修块厚度设定范围：1-600Um
▲8、双控修片模式:2种（手动小手轮和控制面板按键半自动模式）
9、电动粗进：20um∖s点动和IOOOUm∖s
10、样本调节方向水平，垂直8度可调，水平8度可调
11、快速样品夹可横向、纵向二个方向固定蜡块
12、具有0。
精确定位系统
13、配备一次性窄刀片刀架，刀架可方便左右、前后移动，切片时无需移动刀片，刀片全长可用，刀架可通过简便操作使刀架旋转，表面易清洁
14、刀架底座前后移动距离土24mm
15、具有大容量磁力废物槽
16、机器具有自动休眠功能，任意键或转动大手轮一圈唤醒唤醒
17、标本夹前后行程即时显示，极限位置有声音提醒
18、具备小手轮快速复位功能
▲19、个性化小手轮转动方向可调，可选择顺时针或逆时针进样20、液晶显示，具有切片计数和累计厚度功能，实时显示
▲21、具有自动注油系统
22、具有可折叠把手，方便搬动机器。
三种小鼠眼球组织石蜡切片固定液固定效果的比较
三种小鼠眼球组织石蜡切片固定液固定效果的比较孙良; 徐林【期刊名称】《《中国组织工程研究》》【年(卷),期】2019(023)034【总页数】5页(P5492-5496)【关键词】小鼠眼球; 石蜡切片; 苏木精-伊红染色; 甲醛-戊二醛混合固定液; Davidson固定液; 10％甲醛溶液; 角膜; 晶状体【作者】孙良; 徐林【作者单位】山东省立第三医院重症医学科山东省济南市250000; 山东省立第三医院中心实验室山东省济南市250000【正文语种】中文【中图分类】R459.9; R329-33; R-3310 引言 Introduction小鼠眼球组织的石蜡切片被广泛用于眼科相关疾病的实验研究[1-8]，角膜为眼球重要的组织结构，是较为致密的组织，每一层之间的连接不是非常紧密，常规方法制作切片过程极易出现眼球变形、角膜各层次结构分离等问题[9-10]。
在固定脱水的过程中，由于高度分化的视网膜层与外部的纤维血管膜对固定液的渗透程度不同，引起组织收缩程度不同，导致视网膜各层的分离脱落，最易发生脱离的是视网膜神经上皮层和色素上皮层[11-15]。
小鼠晶状体由晶状体囊、晶状体上皮、晶状体纤维和悬韧带组成，各结构软硬度不同，在石蜡切片标本制作过程中极易发生组织碎裂、细胞变形、组织皱缩及脱水不完全，甚至出现裂隙，导致晶状体石蜡切片质量欠佳，不利于后期的组织学研究[16]。
在病理制片过程中，由于标本需要经过一系列的化学试剂处理，角膜、晶状体、视网膜等组织的形态学结构将不可避免的产生一些变化，导致各层次之间结构分离、移位等，给组织病理学的诊断带来很大的阻碍。
这主要是由于眼球各部分组织软硬度相差较大，各层次之间对固定液的收缩率和收缩方向不同所致，说明固定液是影响病理制片质量的关键因素之一，因此在石蜡切片制作过程中需要选择合适的固定液并做特殊处理。
此次实验采用几种不同的固定液固定小鼠眼球组织，观察比较相同制片条件下不同固定液对小鼠眼球组织切片的影响。
小白鼠组织石蜡切片制备法的探讨
小白鼠组织石蜡切片制备法的探讨［摘要］目的探讨小白鼠全身主要组织器官石蜡切片制备。
方法将固定好的各类组织按脱水透明的时间分为五个实验组分别进行脱水透明实验，得到最适合每种每种组织器官最脱水透明时间与方法。
结果：小白鼠组织块的最佳脱水时间是在浓度梯度分别 60 %、75 %、80%、95 %Ⅰ、95 %Ⅱ的各级乙醇中脑、肺为30min，肝、脾为 40min，心、肾 60 min，皮肤为75min，在浓度100 %Ⅰ、100 %Ⅱ乙醇中各 30 min。
透明时间脑、肺在二甲苯Ⅰ和Ⅱ中各20min,肝、脾在二甲苯Ⅰ和Ⅱ中各30min，心、肾在二甲苯Ⅰ和Ⅱ中各40min，皮肤在二甲苯Ⅰ和Ⅱ中50min。
结论：按本实验得出的各组织器官最佳脱水透明时间所制备的小白鼠组织切片蜡带连续，切片平整均匀，经HE染色后观察组织形态完整，染色对比鲜明，很好的满足科研工作的需要。
［关键词］石蜡切片脱水透明浸蜡［中图分类号］ R 331 ［文献标识码］A ［文章编号］小白鼠是最常使用的实验动物之一，其作为实验载体广泛应用于医药和生命科学领域，但因为其组织结构柔软小，纤维组织又较少，所以使用常规方法制作的切片往往达不到很好的效果，本课题组通过对制片过程中的关键步骤--脱水透明处理时间上的反复实践与摸索，得到适合小白鼠全身主要组织器官切片的制备方法。
[1]1材料与方法：1.1材料与仪器：（1)实验动物：清洁级健康雄鼠40只，鼠龄在4-6个月，体重290-350克，由井冈山大学动物实验室提供。
（2）试剂：10%福尔马林液(北京雷根生物有限公司），无水乙醇（无锡佳妮化工有限公司）、二甲苯（天津致远化学试剂有限公司），切片石蜡，旋转式切片机（德国莱卡），苏木素-伊红（HE）染色液(北京雷根生物有限公司）。
1.2方法; 小白鼠用颈椎脱臼法处死，取其大脑，肝脏，脾脏，心脏，肺脏，肾脏，皮肤等七种组织，切取的组织块厚度一般为 0.4 cm -0.8 cm，大小 1.0 cm-1.5 cm。
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Leica RM2235 石蜡切片机
性能特点
1、0位指示的精准定位系统，X/Y轴调节精确、方便
2、结构紧凑，整机符合人体工程学设计
3、整机体现用户安全概念
4、粗进轮位置符合人体工程学设计，无疲劳操作
5、基于专利的力补偿系统，手轮极其平滑
6、手轮有两个安全锁定系统
7、精准的刀架侧向移动功能，确保刀片全长使用
8、单手操作的通用样本夹
9、通用刀架底座适配所有刀架
10、刀片刀架内置护手
11、宽大的磁力废物槽
12、一体化、易于清理的外壳
技术参数
切片厚度：1至60µm
1至10µm以1µm步进
10至20µm以2µm步进
20至60µm以5µm步进
样品臂前后推动：手动式轮转控制
样品臂前后移动：30mm
样品臂上下移动：特大70mm
样品回缩：60µm
最大样品：50mmx66mmx30mm
样品对位：8°(X,Y,Z)
机身大小（长/深/高）：413X618X305mm
机身重量（无配件）：34kg。