第五章 薄层色谱 .pptx
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薄层色谱讲义ppt课件
氧化铝、离子交换纤维素、硅藻土、乙酰 化纤维素及聚酰胺等。
2〕薄层板的制备
将1份吸附剂加3份左右的粘合剂 〔0.2%-0.5%羧甲基纤维素钠〕在研钵中向 一个方向充分研磨，使成均匀的糊状物， 然后再倒入已预备好的涂布器中，在玻璃 板上平稳地以直线方向挪动涂布器，使硅 胶浆均匀平整地涂布。室温枯燥后置烘箱 活化，普通在105-110℃加热30min，置枯 燥器中备用。薄层厚度普通为0.2-0.3mm
增修订工程
项目 类别
鉴别
检查
含量测定
特征
或指
纹图
显微
TLC
HP LC
GC
理化
通则
重金属 有害元
素
毒性 成分
其 他
谱
HPLC
TL CS
UV GC
其 他
10版 新增
259
1818
25
9
54 426
8
中成药
05版 收载
2811144ຫໍສະໝຸດ 1116102 627
8
提取物
10版 新增
05版 收载
21
3
2
5
1
11
16
2〕溶解样品的溶剂均有不同程度的洗 脱力，所以在上样的同时，样品在原位置 就呈环形展开，原点直径的分散促进了这 种展开，即所谓“上样环形色谱效应〞。 如样品在溶剂中溶解度很大，原点将变成 空心圈，这种效应对随后的线性展开呵斥 不利的影响，因此应选择样品在溶剂中溶 解度不宜太大的溶剂。
3〕供试液的溶剂在原点的残留，也会 改动展开的选择性，特别是供试液的溶剂 极性与展开剂的溶剂极性相差较大时更为 明显；因此，上样时同步枯燥或上样后枯 燥以除去原点残存的溶剂。如甲醇点后， 有残存甲醇时，就参与了流动相。所以应 该枯燥除去甲醇。
2〕薄层板的制备
将1份吸附剂加3份左右的粘合剂 〔0.2%-0.5%羧甲基纤维素钠〕在研钵中向 一个方向充分研磨，使成均匀的糊状物， 然后再倒入已预备好的涂布器中，在玻璃 板上平稳地以直线方向挪动涂布器，使硅 胶浆均匀平整地涂布。室温枯燥后置烘箱 活化，普通在105-110℃加热30min，置枯 燥器中备用。薄层厚度普通为0.2-0.3mm
增修订工程
项目 类别
鉴别
检查
含量测定
特征
或指
纹图
显微
TLC
HP LC
GC
理化
通则
重金属 有害元
素
毒性 成分
其 他
谱
HPLC
TL CS
UV GC
其 他
10版 新增
259
1818
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54 426
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中成药
05版 收载
2811144ຫໍສະໝຸດ 1116102 627
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提取物
10版 新增
05版 收载
21
3
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2〕溶解样品的溶剂均有不同程度的洗 脱力，所以在上样的同时，样品在原位置 就呈环形展开，原点直径的分散促进了这 种展开，即所谓“上样环形色谱效应〞。 如样品在溶剂中溶解度很大，原点将变成 空心圈，这种效应对随后的线性展开呵斥 不利的影响，因此应选择样品在溶剂中溶 解度不宜太大的溶剂。
3〕供试液的溶剂在原点的残留，也会 改动展开的选择性，特别是供试液的溶剂 极性与展开剂的溶剂极性相差较大时更为 明显；因此，上样时同步枯燥或上样后枯 燥以除去原点残存的溶剂。如甲醇点后， 有残存甲醇时，就参与了流动相。所以应 该枯燥除去甲醇。
色谱基本知识--薄层色谱ppt课件
薄层色谱法
将固定相于玻璃或铝箔等载板上涂布成 均匀的薄层。展开剂（流动相）借助毛细作 用从薄层板点样的一端展开到另一端时使不 同物质得到分离。 分离原理随固定相不同而 异，可分为吸附薄层、分配薄层、离子交换 薄层 以及凝胶薄层等。
电泳法
电泳：带电粒子在直流电场作用下向异性 电极移动。
电泳法:带电荷的被分离物质在纸、醋酸 纤维素、聚丙烯酰胺凝胶等惰性支持介质上 ，由于粒子的大小不同以及所带的电荷种类 、 数量不同，在一定电场的作用下，向电荷 相反的电极方向以不同速度迁移而得到分 离 。
— — —
。
∆
若加热至1100 C ，则结合水全失，完全失 去吸附能力。 若通过化学反应，将有机分子以共价键 连接到硅醇基上，则称为化学键合相。按键 合到有机硅烷的官能团不同，又可以分为极 性键合相和非极性键合相。
。
—
—
—
—
—
—
2
Si
—
OH
-H2O
Si
—
O
Si
—
氧化铝
氧化铝由氢氧化铝高温脱水而成。按制备方法不 同，氧化铝可分为三种：
平面色谱独有的优点:
a. 操作简单，价格便宜，应用范围广; b. 样品预处理简单，且不会造成检测失落，对未 知试样的分析很有利; c. 可同时平行分离多个试样; d. 对成份复杂的试样可采用不同类型的流动相双 向展开，提高分离效能.
2.2滤纸及薄层板
2.2.1滤纸
纸色谱中所用的滤纸性质对分离效果有很大影响。 对滤纸的要求是： 1. 物理性质均匀、 质地均一、厚薄一致，否则斑 点畸形，Rf值改变; 2. 具有一定的机械强度; 3. 纤维松紧程度适当; 4. 具有一定的纯度; 5. 纸面洁净，不含有溶于水及有机溶剂的物质。
教学资料ppt电子教案课件薄层色谱法
10
微量圆环技术
将试样溶液点于已准备 好的薄层上，点成同样大小 的圆点，用毛细管吸取各种 经初步选择认为可能应用的 展开剂，加到试样点中心， 让展开剂自毛细管中慢慢流 出进行展开。
微量圆环技术
1 用环己烷展开 2用苯展开 3用氯仿展开
11
(四) 点 样
1.样品溶液
一般用甲醇、乙醇、丙酮、氯仿等挥发性有机 溶剂，最好用与展开剂极性相似的溶剂溶解试样， 配成0.5%~1%的试液。
有色物质经展开后呈现明显的色斑，很易判断。
对于无色物质，可根据化合物的性质，用物理检 出法、化学检出法、酶与生物检出法和放射性检出法进
行显色。
23
1 物理检出法
1 .紫外光 一般来说，对于未知化合物，展开后在用显色剂以前，都应先
在紫外灯下进行察看。紫外光常用两种波254nm与365nm。 如果化合物能吸收紫外光同时放出荧光，可用此荧光定位。
吸附剂的选择 薄层板的制作 展开剂的选择 点样 展开 定位与显色 薄层层析的定量测定
4
(一) 薄层层析用的吸附剂
常用的薄层层析吸附剂有硅胶、氧化铝、纤 维素、聚酰胺等。
吸附剂的选择：首先决定于样品成分的性质， 即它们的溶解性、酸碱性、极性以及是否与 吸附剂起化学反应等；
其次要考虑吸附剂、载体是否容易得到及其 价格等。
5
(二) 薄层板的制作
层析板是用专门的涂布器把浆状的吸附剂（纸浆、纤维素、硅胶、 中性氧化物、聚酰胺、多孔性玻璃粉，硅烷化键合硅胶等）均匀 地涂在在薄层板（玻璃板、金属板或弹性塑料板）上，干燥 （110℃活化）后即可使用。
6
(三)薄层层析中展开剂的选择
主要根据极性的不同来选择流动相展开剂。 各种展开剂按其极性不同排序为：
微量圆环技术
将试样溶液点于已准备 好的薄层上，点成同样大小 的圆点，用毛细管吸取各种 经初步选择认为可能应用的 展开剂，加到试样点中心， 让展开剂自毛细管中慢慢流 出进行展开。
微量圆环技术
1 用环己烷展开 2用苯展开 3用氯仿展开
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(四) 点 样
1.样品溶液
一般用甲醇、乙醇、丙酮、氯仿等挥发性有机 溶剂，最好用与展开剂极性相似的溶剂溶解试样， 配成0.5%~1%的试液。
有色物质经展开后呈现明显的色斑，很易判断。
对于无色物质，可根据化合物的性质，用物理检 出法、化学检出法、酶与生物检出法和放射性检出法进
行显色。
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1 物理检出法
1 .紫外光 一般来说，对于未知化合物，展开后在用显色剂以前，都应先
在紫外灯下进行察看。紫外光常用两种波254nm与365nm。 如果化合物能吸收紫外光同时放出荧光，可用此荧光定位。
吸附剂的选择 薄层板的制作 展开剂的选择 点样 展开 定位与显色 薄层层析的定量测定
4
(一) 薄层层析用的吸附剂
常用的薄层层析吸附剂有硅胶、氧化铝、纤 维素、聚酰胺等。
吸附剂的选择：首先决定于样品成分的性质， 即它们的溶解性、酸碱性、极性以及是否与 吸附剂起化学反应等；
其次要考虑吸附剂、载体是否容易得到及其 价格等。
5
(二) 薄层板的制作
层析板是用专门的涂布器把浆状的吸附剂（纸浆、纤维素、硅胶、 中性氧化物、聚酰胺、多孔性玻璃粉，硅烷化键合硅胶等）均匀 地涂在在薄层板（玻璃板、金属板或弹性塑料板）上，干燥 （110℃活化）后即可使用。
6
(三)薄层层析中展开剂的选择
主要根据极性的不同来选择流动相展开剂。 各种展开剂按其极性不同排序为：
薄层色谱鉴别介绍 ppt课件
不稳定的脂和内酯等化合物
氧化铝的活度与其含水量有关，含水量大，则吸 附能力小。
活性级别 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ
含水量% - 3 6 10 15
PPT课件
33
纤维素
纤维素分子中带有许多羟基，亲水性 强，分离原理与纸色谱相似，但分离效果 和分离速度均比纸色谱佳，可以代替纸色 谱.
PPT课件
34
纤维素的种类有：
O [-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-C-N-]n
H
酰胺中心的酰胺基可与酚类、酸类、硝基类等 化合物形成氢键而对这些物质产生吸附作用。
应用：蛋白质、肽、多糖、核苷酸等的分离。
PPT课件
36
葡聚糖
葡聚糖是一种由葡萄糖残基构成的多糖物质。 葡聚糖凝胶是由一定分子量的葡聚糖悬浮于有
机相中，加入交联剂交联聚合而成。 在葡聚糖分子上引入有机基团，则可成为亲脂性
溶剂的洗脱能力随溶剂的极性增大而增强
在当一块 种薄 溶层 剂板不上能进很行好试地验展： 开各组分时，常选择用混合溶剂作为展开剂。先 性用过 一若强 种所； 极选性展较开小剂的使溶混剂合为物基中础所溶有剂的展组开分混点合都物移，到若了展溶开剂不前好沿，，用此极溶性剂较的大极 的若溶所剂选与展前开一剂溶几剂乎混不合能，使调混整合极物性中，的再组次分试点验移，动直，到留选在出了合原适点的上展，开此剂溶组 剂合的 。极性过弱。
17
影响展开的因素 A 相对湿度的影响
B 溶剂系统的影响 C 溶剂蒸汽的影响 D 薄层板类型的影响 E 温度的影响 F 展距的影响
PPT课件
18
A 相对湿度的影响
吸附剂的活度随相对湿度的增大而降低。
20cm×20cm的硅胶薄层板在50%的相对湿度中： 放置3分钟 失去活性一半 放置15分钟 吸附水分达最大值 薄层在相对湿度为1-80%的情况下展开，Rf值可 以相差3倍。 最佳相对湿度范围决定于溶质和溶剂的极性，极 性越大，相对湿度范围也相应增大。
氧化铝的活度与其含水量有关，含水量大，则吸 附能力小。
活性级别 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ
含水量% - 3 6 10 15
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33
纤维素
纤维素分子中带有许多羟基，亲水性 强，分离原理与纸色谱相似，但分离效果 和分离速度均比纸色谱佳，可以代替纸色 谱.
PPT课件
34
纤维素的种类有：
O [-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-C-N-]n
H
酰胺中心的酰胺基可与酚类、酸类、硝基类等 化合物形成氢键而对这些物质产生吸附作用。
应用：蛋白质、肽、多糖、核苷酸等的分离。
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36
葡聚糖
葡聚糖是一种由葡萄糖残基构成的多糖物质。 葡聚糖凝胶是由一定分子量的葡聚糖悬浮于有
机相中，加入交联剂交联聚合而成。 在葡聚糖分子上引入有机基团，则可成为亲脂性
溶剂的洗脱能力随溶剂的极性增大而增强
在当一块 种薄 溶层 剂板不上能进很行好试地验展： 开各组分时，常选择用混合溶剂作为展开剂。先 性用过 一若强 种所； 极选性展较开小剂的使溶混剂合为物基中础所溶有剂的展组开分混点合都物移，到若了展溶开剂不前好沿，，用此极溶性剂较的大极 的若溶所剂选与展前开一剂溶几剂乎混不合能，使调混整合极物性中，的再组次分试点验移，动直，到留选在出了合原适点的上展，开此剂溶组 剂合的 。极性过弱。
17
影响展开的因素 A 相对湿度的影响
B 溶剂系统的影响 C 溶剂蒸汽的影响 D 薄层板类型的影响 E 温度的影响 F 展距的影响
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18
A 相对湿度的影响
吸附剂的活度随相对湿度的增大而降低。
20cm×20cm的硅胶薄层板在50%的相对湿度中： 放置3分钟 失去活性一半 放置15分钟 吸附水分达最大值 薄层在相对湿度为1-80%的情况下展开，Rf值可 以相差3倍。 最佳相对湿度范围决定于溶质和溶剂的极性，极 性越大，相对湿度范围也相应增大。
第五章 薄层色谱法(共84张PPT)
荧光;银激活的ZnS和CdS, ZnS• CdS •Ag在366nm
的紫外线照射下能够产生荧光。 硅胶即可以进行吸附层析，又可以进行分配层
析，主要的区别是在于活化程度不同，前者活化程 度高，后者活化程度低。 （3）纤维素
可在实验室制备，取脱脂棉或滤纸剪成小
11/20/2022
12
块加适量的5％的盐酸，加热煮沸3小时，冷却
要于150－160度干燥1－3小时，备用。
（3）薄层板的活化
硅胶、氧化铝的活性与其含水量有关，
11/20/2022
25
含水量越低，吸附能力越强，其活度越高。 因此层析板在使用之前必须经过活化。对于硅胶 薄层其活化温度为105~110°C，氧化铝薄层的活
化温度为150~200°C，活化后的薄层板在使用 之前应放在干燥器中备用。
薄层层析中的吸附剂和柱层析相似，首先 应该考虑应如何层析，一般的讲，非极性或弱极 性的组分的分离用吸附层析，水溶性组分的分离 用分配层析。
常用的吸附剂：
（1） 氧化铝
氧化铝铺层时一般不加粘合剂，直接用干
11/20/2022
8
粉铺层，得到的层析板称为“干板” 或“软 板”，但也可以加煅石膏作粘合剂，这种混有 煅石膏的吸附剂称为氧化铝G，用氧化铝G加水，
3.各种特制薄层
由于工作需要，各种特制薄层相继出现，
这里介绍数种：
11/20/2022
29
（1）混合薄层 有两种吸附剂混合制成。例如，
为了降低硅胶的活度，可在其中加入一定量的硅藻
土铺层，也可以用硅胶：氧化铝（1：1）铺层，
对糖和醇具有较好的分离效果。 （2）酸碱薄层和pH缓冲薄层 在分离生物碱和氨基酸时，为了得到更好的
(2) 1958年斯塔尔对薄层层析的吸附剂和 涂铺工具进行了改革并使之标准化，克服了 技术上的困难，从此以后，薄层层析法得到 了迅速的发展。
的紫外线照射下能够产生荧光。 硅胶即可以进行吸附层析，又可以进行分配层
析，主要的区别是在于活化程度不同，前者活化程 度高，后者活化程度低。 （3）纤维素
可在实验室制备，取脱脂棉或滤纸剪成小
11/20/2022
12
块加适量的5％的盐酸，加热煮沸3小时，冷却
要于150－160度干燥1－3小时，备用。
（3）薄层板的活化
硅胶、氧化铝的活性与其含水量有关，
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含水量越低，吸附能力越强，其活度越高。 因此层析板在使用之前必须经过活化。对于硅胶 薄层其活化温度为105~110°C，氧化铝薄层的活
化温度为150~200°C，活化后的薄层板在使用 之前应放在干燥器中备用。
薄层层析中的吸附剂和柱层析相似，首先 应该考虑应如何层析，一般的讲，非极性或弱极 性的组分的分离用吸附层析，水溶性组分的分离 用分配层析。
常用的吸附剂：
（1） 氧化铝
氧化铝铺层时一般不加粘合剂，直接用干
11/20/2022
8
粉铺层，得到的层析板称为“干板” 或“软 板”，但也可以加煅石膏作粘合剂，这种混有 煅石膏的吸附剂称为氧化铝G，用氧化铝G加水，
3.各种特制薄层
由于工作需要，各种特制薄层相继出现，
这里介绍数种：
11/20/2022
29
（1）混合薄层 有两种吸附剂混合制成。例如，
为了降低硅胶的活度，可在其中加入一定量的硅藻
土铺层，也可以用硅胶：氧化铝（1：1）铺层，
对糖和醇具有较好的分离效果。 （2）酸碱薄层和pH缓冲薄层 在分离生物碱和氨基酸时，为了得到更好的
(2) 1958年斯塔尔对薄层层析的吸附剂和 涂铺工具进行了改革并使之标准化，克服了 技术上的困难，从此以后，薄层层析法得到 了迅速的发展。
薄层色谱应用课件.pptx
一、 实 验 目 的
❖ 了解薄层色谱的应用原理 ❖ 掌握薄层色谱的应用方法
二、实 验 原 理
二、实 验 原 理
应用薄层色谱检验、鉴定化合物的原理：
图1 365 nm下观察的结果
图2 硫酸乙醇显色结果
注：两边的是标准品，中间的是样品
二、实 验 原 理
➢ 固定相：硅胶，氧化铝，等。 ➢ 支持板：玻璃板，涤纶布，等。 ➢ 展开剂：根据样品的极性及溶解度选择，可采用单一溶剂，但更常用的
四、实 验 过 程
比移值（ Rf 值）的计算：
五、 注 意 事 项
1. 制作薄层所用玻璃板要平滑、干净。 研磨要充分，保证所制的薄层面应平整均匀 存放薄层板时要注意保持干燥及避免污染。
五、 注 意 事 项
2. 样品浓度（浓度为0.01-0.1%）： 太大，容易出现拖尾；
太小则会导致斑点不明显，难以观察。
五、 注 意 事 项
5. 标记斑点时：要轻轻勾画，避免铅笔将斑点处的硅胶碰掉，从而 影响后续显色结果的观察。
是混合溶剂。
三、实 验 试 剂 与 仪 器
点样样品 香草醛
间苯二酚
展开剂 石油醚 丙酮
四、实 验 过 程
薄层板 的制备
点样
展开
显色、定位
UV灯、显色剂
测定比移值
（Rf 值）
四、实 验 过 程
显色和定位 一般包括：一看、二照、三碘和四显四步。
❖ 一看：指先在自然光下观察 ❖ 二照：指分别在 254 nm 和 365 nm 下观察有无暗斑或荧光斑点 ❖ 三碘：对在自然光和紫外下均无斑点的物质可以用碘蒸汽显色 ❖ 四显：用显色剂显色 ➢ 实际操作中根据需要选择其中的两到三步。
五、 注 意 事 项
薄层色谱鉴别介绍课件
薄层色谱法用于药物成分的分析和鉴别， 可分离和鉴定药物中的有效成分和杂质。
食品安全
环境监测
薄层色谱法用于食品中农药残留、添加剂 、毒素等的检测和鉴定，保障食品安全。
薄层色谱法用于环境样品中污染物的分离 和鉴定，如水体、土壤、空气中的有害物 质等。
02
薄层色谱法的实验操作
实验材料准备
薄层板
选择合适规格的薄层板 ，确保其质量可靠且无
定量分析
通过测量斑点的大小或使用紫 外可见光谱等方法，计算待测
物质的质量或浓度。
03
薄层色谱法的优缺点
优点
快速分离
薄层色谱法可以在短时间内完成样品的分离 ，特别适合于大量样品的快速分析。
操作简便
薄层色谱法的操作相对简单，不需要复杂的 设备，容易掌握。
高分离效能
薄层色谱法具有较高的分离效能，可以分离 复杂混合物中的各个组分。
改进方向
提高重现性和定量精度
联用技术
通过改进操作方法和技术手段，提高 薄层色谱法的重现性和定量精度。
将薄层色谱法与其他分析技术联用， 如质谱、光谱等，以提高分析效果和 分离效能。
拓展应用范围
研究和发展适用于大分子和极性物质 分离的薄层色谱技术，谱法的实际应用 案例
绿色环保
采用环保型溶剂和低毒性的分离 材料，降低对环境的负面影响。
感谢您的观看
THANKS
薄层色谱鉴别介绍课件
目录 CONTENT
• 薄层色谱法简介 • 薄层色谱法的实验操作 • 薄层色谱法的优缺点 • 薄层色谱法的实际应用案例 • 薄层色谱法的未来发展与展望
01
薄层色谱法简介
定义与原理
定义
薄层色谱法是一种常用的分离和 分析技术，用于分离和鉴定混合 物中的化合物。
薄层色谱方法课件
38
3、试剂显色法分离后的化合物在紫外光或可见光下不能显示斑点，可根据被检出化合物的理化性质选择适当的显 色剂使之生成颜色或荧光稳定、轮廓清楚、灵敏度 高、专属性强的斑点。这种方法是通过一种或几种试剂与被检物质产生化学反应，生成有色物质，是平面色谱广泛应用的 定位方法。
39
喷雾显色法务必在通风柜中进行。自动喷雾器适用于定 量。手动喷雾器用于定量 分析时可能因喷雾不均匀 而产生较大误差。
5
三、薄层色谱法的基本操作
薄层板的准备
定性与定量
样品处理
定位
展开
6Leabharlann ( 一) 薄层板 制备薄层板的载板包括有：玻璃板、塑 为制了薄使层薄板 定附相着有在在：： 上化便铝 素素，，、需聚要酰时胺 凝定胶相等中中，， 色的谱粘法 需在固定相中加入某些添加剂。
2
薄层色谱
高效液相色谱
色谱系统
开放式
闭路
展开方式
展开
洗脱
流速控制
吸附剂的毛细管作用
由泵调节
平衡时间
短
不定
分析样品
可同时分析多个样品
每次一个样品
样品量
高
低
板高 ( μm)
30
2~5
有效板数
<600
~5000
检测方式
静态
动态
溶剂用量
少
多
溶剂更换
易
难
固定相
一次弃去
反复使用
3
(二) 薄层色谱与高效液相色谱的比较
28
溶剂分成6类：第Ⅰ类为电子授受体溶剂；第Ⅱ类为质子给予体溶剂；第Ⅲ类为强质子给予体溶剂；第Ⅳ类为质子受体溶剂；第Ⅴ类为偶极作用力溶剂；第Ⅵ类为惰性溶剂 (即非极性溶剂)。
第五章 薄层色谱法141205
标之一。
塔片理论
理论塔片数
理论塔片数 (n) 是反映组分在固定相和 流动相中动力学特性的色谱技术参数，是 代表色谱板或柱分离效能的指标，柱效 (n) 以下式表示：
Rf L LS 2 n=16( W ) =16( W S S
)
理论塔片数的影响因素： 主要取决于色谱系统物理特性，如吸 附剂的粒度、均匀度、活度以及展开剂的 流速及展开方式等。
图5—2 薄层色谱示意图
由于参比物的Rf 值或移动距离可大于或小 于被分离物质的 Rf值移动距离，因此相对比移 值可大于或小于 1 ，但其重复性及可比性均优 于Rf值。相对比移值可用下式表示：
Ris=
Rf Rf
(i ) (s)
环形展开比移值
在环形展开时的比移值，以Rfe或Rf表
示， ffe 值为被分离物质由原点移动的半 径与展开剂由原点移动至前沿半径的比 值，由于在直线展开时的距离与环形展 开的半径的平方根相当，因此：
图5—1 薄层色谱毛细管模型图
薄层由各种粗细不同的毛细管构成，各毛细管之间又由
毛细管连接沟通。开始时薄层是干燥的，当薄层一端浸入
展开剂中时，由于表面张力，展开剂从薄层一端吸人细毛 细管中，使毛细管首先充满，展开剂前沿开始土升。接着
展开剂进入较粗的毛细管，由于毛细管之间是相通的，因
而展开剂又从粗毛细管流人细毛细管。结果是细毛细管中 溶剂前沿流动较快，粗毛细管中流动较慢。毛细管的粗细
表5-1 高效薄层色谱和高效液相色谱方法的比较 比较项目 高效薄层色谱 高效液相色谱 准确度 相当 相当 重复性 相当 相当 灵敏度 相当 相当 特效性 相当 相当 有效分析时间 _ _ 少量样品 较长 较短 大量样品 较短 较长 流动相流动控制 不是关键 是关键 在检测波长下溶剂的影响 无 大 对全部被分离组分的检测 方便 局限性大
薄层色谱法PPT参考课件
17
②点样 除另有规定外，在洁净干燥的环境下，用点样用的微
升毛细管（或其他符合要求的点样工具）点样与薄层板 上。一般为圆点状或窄细的条带状，点样基线与底边的 距离，视所用板的大小而定，如采用长度为10cm的板， 点样距离底边以10-15mm为宜，高效板一般8-10mm。 圆点状点样直径一般不大于4mm，高效板不大于2mm。 如样品容量较大，或为了改善分离度，也可点成的条带 状，条带状宽度一般为5-10mm，高效板条带宽度一般 为4-8mm。点间距离可视斑点扩散情况以相邻斑点互不 干扰为宜。点样时须注意尽量不要损害薄层表面。一般 的自制硅胶G薄层板，板面的牢度不够，定量测定时需特 别注意小心点样，不要使原点部分的板面破损。
18
③展开 点样后的薄层板置入加有展开剂的薄层展开箱中，密闭，一般采用上行展
开，薄层板浸入展开剂深度一般要求溶剂最初的前沿距原点约5mm，展开至规 定展开距后立即将薄层权取出，晾干，以备检测。展开距离为8-15cm为宜，高 效板5-8cm为宜。
如规定需用展开剂或其他溶剂的蒸气预平衡者可在双槽展开箱的一侧加入 适量的溶剂，密闭，一般保持15-30分钟。溶剂蒸汽预平衡后，应迅速放入载有 供品的薄层板，立即密闭。如需达到饱和状态，可在展开箱内壁贴一被溶剂湿 润的滤纸使展开箱易于被蒸气平衡。如规定薄层板需要同时预平衡者，应将薄 层板放入箱内没有溶剂的一侧槽中，平衡后再将溶剂倾入此糟中展开（如图）。
365nm紫外光检视例图
254nm紫外光检视例图 15
⑥薄层色谱扫描仪
系指用一定波长的光对薄层板上有吸收的斑点，或经激发后能发射出荧 光的斑点，进行扫描，将扫描得到的谱图和积分数据用于物质定性或定 量的分析仪器。 薄层扫描仪不仅可以进行原位定量，薄层扫描全图谱对定性鉴别也能提 供有用的信息。
②点样 除另有规定外，在洁净干燥的环境下，用点样用的微
升毛细管（或其他符合要求的点样工具）点样与薄层板 上。一般为圆点状或窄细的条带状，点样基线与底边的 距离，视所用板的大小而定，如采用长度为10cm的板， 点样距离底边以10-15mm为宜，高效板一般8-10mm。 圆点状点样直径一般不大于4mm，高效板不大于2mm。 如样品容量较大，或为了改善分离度，也可点成的条带 状，条带状宽度一般为5-10mm，高效板条带宽度一般 为4-8mm。点间距离可视斑点扩散情况以相邻斑点互不 干扰为宜。点样时须注意尽量不要损害薄层表面。一般 的自制硅胶G薄层板，板面的牢度不够，定量测定时需特 别注意小心点样，不要使原点部分的板面破损。
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③展开 点样后的薄层板置入加有展开剂的薄层展开箱中，密闭，一般采用上行展
开，薄层板浸入展开剂深度一般要求溶剂最初的前沿距原点约5mm，展开至规 定展开距后立即将薄层权取出，晾干，以备检测。展开距离为8-15cm为宜，高 效板5-8cm为宜。
如规定需用展开剂或其他溶剂的蒸气预平衡者可在双槽展开箱的一侧加入 适量的溶剂，密闭，一般保持15-30分钟。溶剂蒸汽预平衡后，应迅速放入载有 供品的薄层板，立即密闭。如需达到饱和状态，可在展开箱内壁贴一被溶剂湿 润的滤纸使展开箱易于被蒸气平衡。如规定薄层板需要同时预平衡者，应将薄 层板放入箱内没有溶剂的一侧槽中，平衡后再将溶剂倾入此糟中展开（如图）。
365nm紫外光检视例图
254nm紫外光检视例图 15
⑥薄层色谱扫描仪
系指用一定波长的光对薄层板上有吸收的斑点，或经激发后能发射出荧 光的斑点，进行扫描，将扫描得到的谱图和积分数据用于物质定性或定 量的分析仪器。 薄层扫描仪不仅可以进行原位定量，薄层扫描全图谱对定性鉴别也能提 供有用的信息。
薄层色谱和柱层析ppt课件
氧化铝呈碱性，适用于碱性和中性物质的分离。
硅胶和氧化铝1：1量掺和使用，得中性吸附剂，或在制板 时加入稀酸或稀碱使其变性，或用酸性或碱性展开剂展开， 以改变硅胶或氧化铝原来的性质。
2021/8/9
最新
课件
9
（Ⅲ）样品的极性
物质的极性愈大，氧化铝和硅胶吸附愈牢，物质极性大小 如下：
饱和烃 < 不饱和烃 < 醚 < 酯 < 醛 < 酮 < 胺< 羟基化合物 < 酸和碱
性炭因吸附性太强和黑色，使应用受到限制。
（2）分配色谱对载体的要求
（Ⅰ）表面积大
（Ⅱ）在展开剂中不溶，与展开剂和样品组分不起化学反应或 分解作用
（Ⅲ）对样品组分无吸附性或吸附性弱
（Ⅳ）对固定液是惰性的
2021/8/9
最新
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8
常用的有纤维素和硅藻土。
实际工作中，吸附剂、载体等的选择，首先决定于样品成
（c）酸碱薄层板和pH缓冲薄层板：有些化合物在普通板上分 离不好时，可通过改变原来吸附剂的酸碱性，改善分离效果。 如在铺层时用稀酸（一般用1～4%的盐酸或0.1～0.25mol/L草 酸溶液）代替水制成酸性板，使生物碱形成离子对而分离。
（d）混合薄层板：两种不同吸附剂按一定比例混合，制板， 也可分段铺板，前段预处理，以吸附杂质，后段分离。
2021/8/9
最新
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14
（e）径向薄层板：径向板铺法与一般板不同，点样前按下法 处理：
刮去
刮去
用此板展开，可使Rf值相近的化合物得到较好的分离，且 灵敏度高。 （f）梯度薄层板：梯度是指由一种性质到另一种性质的变化。 梯度薄层与常规薄层不同，它显示出具有渐变的分离性能，如
薄 层 色 谱 ppt课件
ppt课件
19
溶剂前沿 分离的组分
8
实验步骤
1. 薄层板的制备与活化
将1.5g硅胶G在搅拌下加入到盛有5ml去离子水的小烧杯中， 调成有粘稠度的浆料(5-10min)立即倒在玻璃板上，用手指夹 住两边，沿水平方向轻轻振荡，使浆状物表面光滑且均匀地附 在载玻片上，水平放置。用同样的方法再制一块。要求薄层板 的厚度为0.25mm。
前沿线起始线薄层色谱示意图原样点吸附剂薄层溶剂前沿分离的组分将15g硅胶g在搅拌下加入到盛有5ml去离子水的小烧杯中调成有粘稠度的浆料510min立即倒在玻璃板上用手指夹住两边沿水平方向轻轻振荡使浆状物表面光滑且均匀地附在载玻片上水平放置
薄层色谱
ppt课件
1
实验原理
利用混合物中各组份的物理化学性质的差别，在层析过 程中，在不相溶的两个相中分布的不同，达到分离目的。
ppt课件
15
1. 展开剂如果过多，会有何后果？( B )
A.会使点样里的组份分不开 B.可能会淹没所划出来的细线,从而溶解所
点的样 C.展开剂会挥发出来 D.展开剂与硅胶G发生反应
ppt课件
16
2.如果斑点出现拖尾现象,这可能是什么原因?
A.所点的试样的样点的圈太大 B.铺的薄板不均匀 C.薄板放的不平衡 D.薄板老化时间不够
两个相:一个是涂布在薄层板上的吸附剂，叫固定相 (吸附剂最常用的是氧化铝和硅胶) ，另一个是在展开过 程中流过固定相的展开剂（有机溶剂），叫流动相。
ppt课件
2
由于吸附剂对混合物中不同物质的吸附力不同，对极性 大的物质吸附力强，对极性小的物质吸附力弱。因此当溶剂 流过时，不同物质在吸附剂和溶剂之间发生连续不断地吸附、 解吸附、再吸附、再解吸附。
薄层色谱法概述PPT课件【共52张PPT】
*
k 反映了两种溶质的平均迁移速度，其由流动相溶剂强度 决定 I0 -（ IR + IT ）=差为被介质吸收并转换为热的光强 4 丙酮 0. 氧化铝—有碱性、中性、酸性 放置时间不宜太长，否则背景吸附剂也吸附碘，使信噪比降低。 硅胶G——将硅胶置研钵中，加入少量水，研磨均匀，至无结块和气泡，再加入比例量的水(一般为1份固定相与3份水)，迅速研磨均匀，立即涂铺。 薄层色谱定量测定的光学方法是基于测量斑点和薄层空白处光学响应信号的差值。 归一化法、内标法、外标法 这种影响一般使分配系数变小。 此外还有：化学键合相反相展开、化学键合相正相展开、离子交换、离子对色谱、凝胶、胶束、手性展开。 这类扫描仪技术上一些问题还未解决。 51 / 二氧六环 0. 展开距离一般为10-15cm。 单光束双波长——对背景不均匀引起的干扰有补偿作用，选择的两个波长应接近些。 HPLC一次只能分离一个样品，通常采用反相色谱，色谱后衍生化受限制。
*
*
点样 要求配制样品的溶剂高度挥发性和尽可能非极性，否则易使斑点扩展。 采用多次点加法，第二次点加时应待前一次点加的溶剂挥发后再进行。 点样量应适中，过载会引起斑点拖尾，分离度变差，以最小检测量的几倍～几十倍为宜。 手工点样工具：定容玻璃毛细管（1 –5ul），微量注射器。
*
*
自动点样 Limomat IV 喷样仪——样品溶液通过气流成雾状喷向薄层，移动板台，使在薄层上流下样品条带。 特点：适合于大量稀样品溶液的喷加；条带宽度不超过2mm，有利于改善分辨率；便于狭缝式光密度计扫描；要求薄层板强度高。 自动薄层色谱点样仪——由计算机控制。 药典规定：点样基线距底边2.0cm, 样点直径2-4mm, 点间距离约为cm。
*
薄层色谱参数
保留参数（Rf值） 用来表征斑点位置的基本参数是保留因子，通常称作比移值，用Rf表示。 Rf=Ls/L。，
色谱概论及薄层色谱法PPT课件
操作技巧要求高
薄层色谱法的实验操作技巧要求较高， 需要经验丰富的实验员进行操作。
对环境条件敏感
薄层色谱法的分离效果易受环境温度、 湿度等因素的影响。
薄层色谱法的展望
优化实验条件
发展新型薄层板
未来可以通过优化实验条件，提高薄层色 谱法的分离效果和定量分析精度。
研究开发新型的薄层板材料和制备方法， 提高薄层色谱法的分离速度和分辨率。
色谱概论及薄层色谱 法ppt课件
contents
目录
• 色谱概论 • 薄层色谱法 • 薄层色谱法的实验技术 • 薄层色谱法的实验结果分析 • 薄层色谱法的优缺点及展望
01
色谱概论
色谱法的定义与分类
定义
色谱法是一种分离和分析复杂混 合物中各组分的方法，基于不同 组分在固定相和流动相之间的分 配平衡原理。
分类
按分离原理可分为吸附色谱、分 配色谱、离子交换色谱和凝胶色 谱等；按操作方式可分为柱色谱 、纸色谱和薄层色谱等。
色谱法的原理
固定相
选择合适的固体或液体作为固定 相，与流动相相对静止，使混合 物中各组分在固定相中产生吸附、
溶解或分配作用。
流动相
选择合适的液体或气体作为流动 相，使混合物中的组分随流动相 通过固定相，实现各组分的分离。
合于实验室和现场分析。
分离速度快
薄层色谱法的分离时间相对较 短，可以快速得到分离结果。
适用范围广
薄层色谱法适用于各种不同性 质的混合物，如有机物、无机
物、高分子化合物等。
薄层色谱法的缺点
定量分析精度不高
由于薄层色谱法的分离原理和操作方 法的限制，其定量分析的精度相对较 低。
对样品要求较高
薄层色谱法要求样品具有一定的挥发 性、稳定性和溶解性，对于某些特殊 样品可能不太适用。
色谱概论及薄层色谱法PPT幻灯片
活化：100℃左右（除水）
11
常用的吸附剂——聚酰胺
流 动 相
固定相
聚酰胺色谱分离原理：氢键 12
分配色谱法
固定液 （固定相）
流 动 相
载体 支持作用（如硅胶）
➢分离机制：不同组分溶解度差异 正相色谱：流动相极性＜固定相极性
反相色谱：流动相极性＞固定相极性
13
离子交换色谱
m
树脂骨架
1
2
1.固定离子； 2.可交换离子
32
A．三氯化铁 B.硫酸 C.茚三酮 D.碘化铋钾
B 11.属于通用型显示剂的是（ ） A 12.用于检测含有酚羟基化合物的显色剂（ ） C 13.用于检测氨基酸类化合物的显示剂（ ）
有关薄层操作方法以下说法正确的是（AB）CD
A．展开之前将斑点晾干
B. 展开之前进行饱和
C．展开后记录溶剂前沿
D. 制备好薄层板后降其活化
29
展开操作应注意的问题
1
检查层析 缸密闭性
2
展开前——先饱和 ，防止边缘效应
3
展开时，注意展开 剂不要浸到点样线
v
v
v
v
v
v
v
v
30
观察
日光 灯 紫外灯 (365或254nm)
荧光板上在 紫外灯下观察暗斑
硫酸
通用显色剂
碘
物理 化学 检出 显色
法法
茚三 酮
FeCl3
专属显色剂
31
同步测试
1. 甲乙两化合物，经用一薄层色谱系统展开后，它们的Rf
分配系数
组分在固定相 (s) 与流动相 (m) 中的浓度 (C) 之
比。
K = Cs Cm
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第五章 薄层色谱法
纸层析和薄层层析也属于色谱分析法。但与其它色谱方 法不同的是在分离过程中一般不使用动力源,流动相的移动
是依靠毛细作用。将试样点在色谱滤纸或层析板的一端，并
将该端浸在作为流动相的溶剂（常称之为展开剂）中，随着 溶剂向上的移动，经过试样点时，带动试样向上运动。
第一节 薄层色谱法的基本原理
六味地黄丸中牡丹皮的薄层图谱
1.丹皮酚； 2～5.六味地黄丸
二、醋酸可的松中其他甾体的检查
取本品，加氯仿-甲醇(9︰1) 制成每1ml 中含10mg的溶 液，作为供试品溶液；精密量取适量，加氯仿-甲醇(9︰ 1) 稀释成每1ml 中含0.10mg的溶液，作为对照溶液。照薄层 色谱法（附录Ⅴ B）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别
时，可用外标一点法定量。
此法要求点样量准确相同。
第四节
应用实例
一、六味地黄丸中丹皮酚的薄层鉴别
取本品水蜜丸6g，研碎，或取小蜜丸或大蜜丸9g，切碎，加 硅藻土4g，研匀。加乙醚40ml，低温回流1小时，滤过，滤液挥 去乙醚，残渣加丙酮1ml使溶解，作为供试品溶液。另取丹皮酚 对照品，加丙酮制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄
荧光指示剂
2、点样
（1）样品溶液的制备： 怎样选择溶剂？ 水可以用吗？
点样基线：距底边2.0cm 样点直径：2-4mm 点间距离：1.5-2.0cm
（2）点样量： 与薄层板的关系 太多太少的影响
（3）点样方法：
划线、样品记号点、点样
注：动作要轻， 毛细管或点样器不能混用， 斑点大小适当，可多次点样。
3.橡皮膏
4.橡皮管
（2）硬板的制备
硬板：吸附剂加粘合剂制成的板
粘结剂作用：加强固定相颗粒的附着力，增加薄层板润湿性， 改善色谱分离。
常用的粘合剂： 无机粘结剂：煅石膏（Ｇ）
机械强度差，易脱落，但不易腐蚀
硅胶G--，含13-15%煅石膏 制备硅胶G--，含30%煅石膏
有机粘结剂：羧甲基纤维素钠
（二）杂质检查（杂质限量检查）
2、自身稀释对比法（杂质结构不明或无杂质对照品）
样品溶液稀释制成一定浓度的溶液
样品制成一定浓度溶液
按相同的点样量点样
展开后观察斑点颜色深浅和大小
如地西泮中有关物质的检查： 取本品的细粉适量（约相当于地西泮200mg），加丙酮5ml,振 摇，使地西泮溶解，滤过，取滤液作为供试品溶液；精密量取适量， 加丙酮稀释成每1ml中含地西泮0.20mg的溶液，作为对照溶液。点 样展开后，供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较， 不得更深。
（CMC-Na）
机械强度好，不易脱落，但易 腐蚀，不适于浓硫酸显色
氧化铝G—含9%煅石膏
a、倾注法：
硅胶G或氧化铝G，直接加水调成糊状
硅胶或氧化铝，加羧甲基纤维素钠水溶液调成糊状
倒在玻璃板上
均匀铺开、振荡、晾干、活化、置干燥器中备用。
b、平铺法：
过程：制板→振荡→晾干→活化→备用 优点：一次铺多块薄层板，简单易行。
将样品溶解，按照分光光度法测定溶液浓度
（三）含量测定 3、薄层扫描法
（1）外标法 用待测组分的纯品作对照物质，以对照物质和样品中待
测组分的响应信号相比较进行定量的方法称为外标法。此法可分为工
作曲线法及外标一点法等。工作曲线法是用对照物质配制一系列浓度
的对照品溶液确定工作曲线，求出斜率、截距。在完全相同的条件下， 准确进样与对照品溶液相同体积的样品溶液，根据待测组分的信号， 从标准曲线上查出其浓度，工作曲线法也可以用外标二点法代替。通 常截距应为零，若不等于零说明存在系统误差。工作曲线的截距为零
硅胶和氧化铝含水量越高，吸附活性越弱。 只要在110℃左右加热，这些“自由水” 就能被可逆性
地除去。利用这一原理可以对吸附剂进行活化（去水）和脱
活化（加水）处理，以控制吸附剂的活性。
硅胶、氧化铝薄层：被分离物质的极性越大，越易被吸附。一般规律： （1）官能团极性越大，整个分子的极性越大，越易被吸附；
（1）硅胶：极性吸附剂，应用范围广 物理吸附为主，氢键吸附为辅
微酸性，不直接用于碱性成分的分离
机械强度好，适用于薄层色谱 吸附容量大，与羟基数目有关 常用硅胶的规格：硅胶H，硅胶G，硅胶GF254等
（2）氧化铝： a 极性吸附剂，较硅胶强。
b 物理吸附为主，氢键吸附为辅。
C. 微碱性，不直接用于酸类物质的分离。
碱性氧化铝：适用于碳氢化合物、生物碱及其它碱性化合 物的分离。 中性氧化铝：应用最广，适用于醛、酮、醌及酯类的分离
酸性氧化铝：适用于有机酸的分离。
硅胶、氧化铝的含水量与活性级别
活性等级 氧化铝加水量 /% 硅胶加水量 /% I 0 0 II 3 5 III 6 15 IV 10 25 V 15 38
层色谱法(附录Ⅵ B)试验，吸取上述两种溶液各10μl,分别点于
同一硅胶Ｇ薄层板上，以环己烷－醋酸乙酯(3:1) 为展开剂，展 开，取出，晾干，喷以盐酸酸性 5％三氯化铁乙醇溶液，加热至 斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上， 显相同的蓝褐色斑点。
（2005年版《中国药典》一部 401页）
硅胶薄层色谱规律总结
被分离组分极性 展开剂极性 大 小 大 小 吸附剂活性 弱 强 Rf 小 大 洗脱顺序 后洗脱 先洗脱
第二节
薄层色谱系统简介
略：在操作方法中部分介绍
第三节
操作方法及注意事项
2、点样
1、薄层板的制备
3、展开
4、显色和定位
5、薄层扫描仪对斑点扫描
1、薄层板的制备
载板要求：具有一定的机械强度、化学惰性，耐一定温度、
点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以二氯甲烷-乙醚-甲醇-水(385
︰60︰15︰2) 为展开剂，展开后，晾干，在105 ℃干燥10分 钟，放冷，喷以碱性四氮唑蓝试液，立即检视。供试品溶液 如显杂质斑点，不得多于3 个，其颜色与对照溶液的主斑点 比较，不得更深。
三、硫酸长春碱中杂质的限量检查
《中国药典》(2005年版)规定硫酸长春碱中其他生物碱的检 查方法如下：取本品，加甲醇制成10mg/ml溶液作为供试溶 液。精密吸取适量加甲醇制成0.02mg/ml溶液作为对照液。 取上述两溶液各5μl点于同一硅胶GF254薄板上，展开，检识；
c、机械涂布法：
优点：简单方便、薄 板厚度均匀、分离效 果好。
1. 吸附剂薄层 2. 涂布器 4. 玻璃板 5. 玻璃夹板
3. 玻璃夹板
手动涂布器
全自动涂布器
常用的薄层板：
软板：硅胶H板、氧化铝H板 硬板：常用的有硅胶G板、氧化铝G板、硅胶CMC-Na板、氧 化铝CMC-Na板、硅胶GF<[254]> 、硅胶GF<[356]>
平头50ul微量点样器 全自动点样仪
3、展开
展开缸（色谱缸）
（1）展开方式： a、近水平展开 特点：速度快、适用于软板的展开。
b、上行展开
过程：预饱和（滤纸贴于展开槽内侧）、展开、标记 溶剂前沿
3、展开
（1）展开方式：
萜烯类 c、单向二次展开 极 d、双向二次展开 性 较 小 的 展 开 剂
供试溶液中的杂质斑点不得超过两个，且颜色不得深于对照
溶液主斑点的颜色。
薄层色谱在化合物合成中的应用：
确定反应程度 目标物的确定 为样品过柱分离提供分离依据
含氧衍生物
萜的各类含 氧衍生物
原点：含氧衍生物
极性较大的展开剂
（2）注意事项： a、色谱槽需密闭良好
b、注意防止边缘效应
4、显色和定位
一般规律：日光下观察、紫外灯下观察、加显色剂
加显色剂：多喷雾，软板使用浸渍显色法
紫外灯观察
喷显色剂观察
5、薄层扫描仪对色谱斑点进行扫描
用一束长宽可以调节的一定波长、一定强度的光照 射到薄层斑点上进行整个斑点的扫描，用仪器测量通过 斑点或被斑点反射的光束强度的变化从而达到定量的目 的。
一、 基本原理 （一）吸附色谱分离原理 利用吸附剂对不同组分吸附力的大小及展开剂解吸附作用 的差异进行分离。 吸附牢的组分随展开剂的移动慢，吸附弱的组分随展开剂 移动快，一段时间后，组分被分离。
固定相：固体吸附剂 流动相：液体展开剂
（二）比移值和相对比移值 （1） 比移值
Rf 是薄层色谱的定性参数，一定条件下Rf为定值，在0—1之间，
（2）形成分子内氢键是，被吸附力减弱；
（3）同系物中，分子量越大，极性越小，被吸附力越弱。
（二）展开剂（流动相）的选择
选择原则： 被分离成分极性大展开剂极性大
被分离成分极性小展开剂极性小
硅胶、氧化铝薄层：展开剂的极性越大，其展开能力越强，
化合物在色谱中移动的速度就越快，表现为Rf 增大。
常用溶剂极性大小 石油醚＜环已烷＜四氯化碳＜苯＜甲苯 ＜乙醚＜三氯甲烷（ 氯仿）＜乙酸乙酯＜正丁醇＜丙酮＜乙醇＜甲醇＜水
表面平整、价格便宜
薄层板分类和制法
软板的制备 硬板的制备 倾注法
平铺法
机械涂布法
（1）软板的制备
软板：直接将吸附剂铺在玻璃板上制成，不加粘合剂
要求：厚度→随分离要求而定，一般0.25～0.5mm
玻璃棒推动速度不宜过快、也不应停顿→影响厚度均一性 优点：方法简便、随用随铺、展开速度快。 缺点：吸附剂易脱落、只能用近水平展开，效果差。
按相同的点样量点样
展开后观察斑点颜色深浅和大小
如异烟肼中游离肼的检查： 肼是一种诱变剂和致癌物质，中国药典对异烟肼原料和注射用异烟 肼中游离肼的检查均采用薄层色谱法。 检查方法 取本品，加水制成每1ml中含50mg的溶液，作为供试品 溶液。另取硫酸肼加水制成每1ml中含0.20mg（相当于游离肼50μg）的 溶液，作为对照溶液。吸取供试液10μl 与对照溶液2μl，分别点于同 一硅胶薄层板（用羧甲基纤维素钠溶液制备）上，以异丙醇－丙酮 （3:2）为展开剂，展开后，晾干，喷以乙醇制对二甲氨基苯甲醛试液， 15min后检视，在供试品主斑点前方与硫酸肼斑点相应的位置上，不得 显黄色斑点。
纸层析和薄层层析也属于色谱分析法。但与其它色谱方 法不同的是在分离过程中一般不使用动力源,流动相的移动
是依靠毛细作用。将试样点在色谱滤纸或层析板的一端，并
将该端浸在作为流动相的溶剂（常称之为展开剂）中，随着 溶剂向上的移动，经过试样点时，带动试样向上运动。
第一节 薄层色谱法的基本原理
六味地黄丸中牡丹皮的薄层图谱
1.丹皮酚； 2～5.六味地黄丸
二、醋酸可的松中其他甾体的检查
取本品，加氯仿-甲醇(9︰1) 制成每1ml 中含10mg的溶 液，作为供试品溶液；精密量取适量，加氯仿-甲醇(9︰ 1) 稀释成每1ml 中含0.10mg的溶液，作为对照溶液。照薄层 色谱法（附录Ⅴ B）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别
时，可用外标一点法定量。
此法要求点样量准确相同。
第四节
应用实例
一、六味地黄丸中丹皮酚的薄层鉴别
取本品水蜜丸6g，研碎，或取小蜜丸或大蜜丸9g，切碎，加 硅藻土4g，研匀。加乙醚40ml，低温回流1小时，滤过，滤液挥 去乙醚，残渣加丙酮1ml使溶解，作为供试品溶液。另取丹皮酚 对照品，加丙酮制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄
荧光指示剂
2、点样
（1）样品溶液的制备： 怎样选择溶剂？ 水可以用吗？
点样基线：距底边2.0cm 样点直径：2-4mm 点间距离：1.5-2.0cm
（2）点样量： 与薄层板的关系 太多太少的影响
（3）点样方法：
划线、样品记号点、点样
注：动作要轻， 毛细管或点样器不能混用， 斑点大小适当，可多次点样。
3.橡皮膏
4.橡皮管
（2）硬板的制备
硬板：吸附剂加粘合剂制成的板
粘结剂作用：加强固定相颗粒的附着力，增加薄层板润湿性， 改善色谱分离。
常用的粘合剂： 无机粘结剂：煅石膏（Ｇ）
机械强度差，易脱落，但不易腐蚀
硅胶G--，含13-15%煅石膏 制备硅胶G--，含30%煅石膏
有机粘结剂：羧甲基纤维素钠
（二）杂质检查（杂质限量检查）
2、自身稀释对比法（杂质结构不明或无杂质对照品）
样品溶液稀释制成一定浓度的溶液
样品制成一定浓度溶液
按相同的点样量点样
展开后观察斑点颜色深浅和大小
如地西泮中有关物质的检查： 取本品的细粉适量（约相当于地西泮200mg），加丙酮5ml,振 摇，使地西泮溶解，滤过，取滤液作为供试品溶液；精密量取适量， 加丙酮稀释成每1ml中含地西泮0.20mg的溶液，作为对照溶液。点 样展开后，供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较， 不得更深。
（CMC-Na）
机械强度好，不易脱落，但易 腐蚀，不适于浓硫酸显色
氧化铝G—含9%煅石膏
a、倾注法：
硅胶G或氧化铝G，直接加水调成糊状
硅胶或氧化铝，加羧甲基纤维素钠水溶液调成糊状
倒在玻璃板上
均匀铺开、振荡、晾干、活化、置干燥器中备用。
b、平铺法：
过程：制板→振荡→晾干→活化→备用 优点：一次铺多块薄层板，简单易行。
将样品溶解，按照分光光度法测定溶液浓度
（三）含量测定 3、薄层扫描法
（1）外标法 用待测组分的纯品作对照物质，以对照物质和样品中待
测组分的响应信号相比较进行定量的方法称为外标法。此法可分为工
作曲线法及外标一点法等。工作曲线法是用对照物质配制一系列浓度
的对照品溶液确定工作曲线，求出斜率、截距。在完全相同的条件下， 准确进样与对照品溶液相同体积的样品溶液，根据待测组分的信号， 从标准曲线上查出其浓度，工作曲线法也可以用外标二点法代替。通 常截距应为零，若不等于零说明存在系统误差。工作曲线的截距为零
硅胶和氧化铝含水量越高，吸附活性越弱。 只要在110℃左右加热，这些“自由水” 就能被可逆性
地除去。利用这一原理可以对吸附剂进行活化（去水）和脱
活化（加水）处理，以控制吸附剂的活性。
硅胶、氧化铝薄层：被分离物质的极性越大，越易被吸附。一般规律： （1）官能团极性越大，整个分子的极性越大，越易被吸附；
（1）硅胶：极性吸附剂，应用范围广 物理吸附为主，氢键吸附为辅
微酸性，不直接用于碱性成分的分离
机械强度好，适用于薄层色谱 吸附容量大，与羟基数目有关 常用硅胶的规格：硅胶H，硅胶G，硅胶GF254等
（2）氧化铝： a 极性吸附剂，较硅胶强。
b 物理吸附为主，氢键吸附为辅。
C. 微碱性，不直接用于酸类物质的分离。
碱性氧化铝：适用于碳氢化合物、生物碱及其它碱性化合 物的分离。 中性氧化铝：应用最广，适用于醛、酮、醌及酯类的分离
酸性氧化铝：适用于有机酸的分离。
硅胶、氧化铝的含水量与活性级别
活性等级 氧化铝加水量 /% 硅胶加水量 /% I 0 0 II 3 5 III 6 15 IV 10 25 V 15 38
层色谱法(附录Ⅵ B)试验，吸取上述两种溶液各10μl,分别点于
同一硅胶Ｇ薄层板上，以环己烷－醋酸乙酯(3:1) 为展开剂，展 开，取出，晾干，喷以盐酸酸性 5％三氯化铁乙醇溶液，加热至 斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上， 显相同的蓝褐色斑点。
（2005年版《中国药典》一部 401页）
硅胶薄层色谱规律总结
被分离组分极性 展开剂极性 大 小 大 小 吸附剂活性 弱 强 Rf 小 大 洗脱顺序 后洗脱 先洗脱
第二节
薄层色谱系统简介
略：在操作方法中部分介绍
第三节
操作方法及注意事项
2、点样
1、薄层板的制备
3、展开
4、显色和定位
5、薄层扫描仪对斑点扫描
1、薄层板的制备
载板要求：具有一定的机械强度、化学惰性，耐一定温度、
点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以二氯甲烷-乙醚-甲醇-水(385
︰60︰15︰2) 为展开剂，展开后，晾干，在105 ℃干燥10分 钟，放冷，喷以碱性四氮唑蓝试液，立即检视。供试品溶液 如显杂质斑点，不得多于3 个，其颜色与对照溶液的主斑点 比较，不得更深。
三、硫酸长春碱中杂质的限量检查
《中国药典》(2005年版)规定硫酸长春碱中其他生物碱的检 查方法如下：取本品，加甲醇制成10mg/ml溶液作为供试溶 液。精密吸取适量加甲醇制成0.02mg/ml溶液作为对照液。 取上述两溶液各5μl点于同一硅胶GF254薄板上，展开，检识；
c、机械涂布法：
优点：简单方便、薄 板厚度均匀、分离效 果好。
1. 吸附剂薄层 2. 涂布器 4. 玻璃板 5. 玻璃夹板
3. 玻璃夹板
手动涂布器
全自动涂布器
常用的薄层板：
软板：硅胶H板、氧化铝H板 硬板：常用的有硅胶G板、氧化铝G板、硅胶CMC-Na板、氧 化铝CMC-Na板、硅胶GF<[254]> 、硅胶GF<[356]>
平头50ul微量点样器 全自动点样仪
3、展开
展开缸（色谱缸）
（1）展开方式： a、近水平展开 特点：速度快、适用于软板的展开。
b、上行展开
过程：预饱和（滤纸贴于展开槽内侧）、展开、标记 溶剂前沿
3、展开
（1）展开方式：
萜烯类 c、单向二次展开 极 d、双向二次展开 性 较 小 的 展 开 剂
供试溶液中的杂质斑点不得超过两个，且颜色不得深于对照
溶液主斑点的颜色。
薄层色谱在化合物合成中的应用：
确定反应程度 目标物的确定 为样品过柱分离提供分离依据
含氧衍生物
萜的各类含 氧衍生物
原点：含氧衍生物
极性较大的展开剂
（2）注意事项： a、色谱槽需密闭良好
b、注意防止边缘效应
4、显色和定位
一般规律：日光下观察、紫外灯下观察、加显色剂
加显色剂：多喷雾，软板使用浸渍显色法
紫外灯观察
喷显色剂观察
5、薄层扫描仪对色谱斑点进行扫描
用一束长宽可以调节的一定波长、一定强度的光照 射到薄层斑点上进行整个斑点的扫描，用仪器测量通过 斑点或被斑点反射的光束强度的变化从而达到定量的目 的。
一、 基本原理 （一）吸附色谱分离原理 利用吸附剂对不同组分吸附力的大小及展开剂解吸附作用 的差异进行分离。 吸附牢的组分随展开剂的移动慢，吸附弱的组分随展开剂 移动快，一段时间后，组分被分离。
固定相：固体吸附剂 流动相：液体展开剂
（二）比移值和相对比移值 （1） 比移值
Rf 是薄层色谱的定性参数，一定条件下Rf为定值，在0—1之间，
（2）形成分子内氢键是，被吸附力减弱；
（3）同系物中，分子量越大，极性越小，被吸附力越弱。
（二）展开剂（流动相）的选择
选择原则： 被分离成分极性大展开剂极性大
被分离成分极性小展开剂极性小
硅胶、氧化铝薄层：展开剂的极性越大，其展开能力越强，
化合物在色谱中移动的速度就越快，表现为Rf 增大。
常用溶剂极性大小 石油醚＜环已烷＜四氯化碳＜苯＜甲苯 ＜乙醚＜三氯甲烷（ 氯仿）＜乙酸乙酯＜正丁醇＜丙酮＜乙醇＜甲醇＜水
表面平整、价格便宜
薄层板分类和制法
软板的制备 硬板的制备 倾注法
平铺法
机械涂布法
（1）软板的制备
软板：直接将吸附剂铺在玻璃板上制成，不加粘合剂
要求：厚度→随分离要求而定，一般0.25～0.5mm
玻璃棒推动速度不宜过快、也不应停顿→影响厚度均一性 优点：方法简便、随用随铺、展开速度快。 缺点：吸附剂易脱落、只能用近水平展开，效果差。
按相同的点样量点样
展开后观察斑点颜色深浅和大小
如异烟肼中游离肼的检查： 肼是一种诱变剂和致癌物质，中国药典对异烟肼原料和注射用异烟 肼中游离肼的检查均采用薄层色谱法。 检查方法 取本品，加水制成每1ml中含50mg的溶液，作为供试品 溶液。另取硫酸肼加水制成每1ml中含0.20mg（相当于游离肼50μg）的 溶液，作为对照溶液。吸取供试液10μl 与对照溶液2μl，分别点于同 一硅胶薄层板（用羧甲基纤维素钠溶液制备）上，以异丙醇－丙酮 （3:2）为展开剂，展开后，晾干，喷以乙醇制对二甲氨基苯甲醛试液， 15min后检视，在供试品主斑点前方与硫酸肼斑点相应的位置上，不得 显黄色斑点。